Name: ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: למד ניתוח miRNA קומבינטורי לוויסות מחזור התא ואנגיוגנזה בתאי סרטן ריאה. השיטה משתמשת ב-transfection, RNA extraction ו-qPCR כדי לחקור את השפעת miR-143 ו-miR-506 על התמותה הסרטנית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אין ניגודי עניינים מוצהרים.

<ol><li>Schafer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+cycle%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Veternary+Pathology%22%5BJournal%5D)">The cell cycle: a review.</a> Veternary Pathology. 35 (6), 461-478 (1998).</li>
<li>Barnum, K. J., O'Connell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+regulation+by+checkpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell cycle regulation by checkpoints.</a> Methods in Molecular Biology. 1170, 29-40 (2014).</li>
<li>Malumbres, M., Barbacid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle%2C+CDKs+and+cancer%3A+a+changing+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cell cycle, CDKs and cancer: a changing paradigm.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (3), 153-166 (2009).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+CDK+inhibitor+dinaciclib+suppresses+neuroblastoma+growth+via+inhibiting+CDK2+and+CDK9+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Repository%22%5BJournal%5D)">Multiple CDK inhibitor dinaciclib suppresses neuroblastoma growth via inhibiting CDK2 and CDK9 activity.</a> Science Repository. 6, 29090(2016).</li>
<li>Brown, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CDK1+structures+reveal+conserved+and+unique+features+of+the+essential+cell+cycle+CDK%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">CDK1 structures reveal conserved and unique features of the essential cell cycle CDK.</a> Nature Communications. 6, 6769(2015).</li>
<li>Sanchez-Martinez, C., Gelbert, L. M., Lallena, M. J., de Dios, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclin+dependent+kinase+%28CDK%29+inhibitors+as+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Cyclin dependent kinase (CDK) inhibitors as anticancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 25 (17), 3420-3435 (2015).</li>
<li>Shah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval%3A+Ribociclib+for+the+Treatment+of+Postmenopausal+Women+with+Hormone+Receptor-Positive%2C+HER2-Negative+Advanced+or+Metastatic+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">FDA Approval: Ribociclib for the Treatment of Postmenopausal Women with Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Advanced or Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li>
<li>Asghar, U., Witkiewicz, A. K., Turner, N. C., Knudsen, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+history+and+future+of+targeting+cyclin-dependent+kinases+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">The history and future of targeting cyclin-dependent kinases in cancer therapy.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (2), 130-146 (2015).</li>
<li>Mullard, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+approves+Novartis%27s+CDK4%2F6+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">FDA approves Novartis's CDK4/6 inhibitor.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (4), 229(2017).</li>
<li>Walker, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval+of+Palbociclib+in+Combination+with+Fulvestrant+for+the+Treatment+of+Hormone+Receptor-Positive%2C+HER2-Negative+Metastatic+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">FDA Approval of Palbociclib in Combination with Fulvestrant for the Treatment of Hormone Receptor-Positive, HER2-Negative Metastatic Breast Cancer.</a> Clinical Cancer Research. 22 (20), 4968-4972 (2016).</li>
<li>Hossian, A., Sajib, M. S., Tullar, P. E., Mikelis, C. M., Mattheolabakis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipronged+activity+of+combinatorial+miR-143+and+miR-506+inhibits+Lung+Cancer+cell+cycle+progression+and+angiogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Repository%22%5BJournal%5D)">Multipronged activity of combinatorial miR-143 and miR-506 inhibits Lung Cancer cell cycle progression and angiogenesis in vitro.</a> Science Repository. 8 (1), 10495(2018).</li>
<li>Inamura, K., Ishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+In+Lung+Cancer%3A+Novel+Biomarkers+and+Potential+Tools+for+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA In Lung Cancer: Novel Biomarkers and Potential Tools for Treatment.</a> Journal of Clinical Medicine. 5 (3), (2016).</li>
<li>Mizuno, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microRNA+expression+signature+of+small+cell+lung+cancer%3A+tumor+suppressors+of+miR-27a-5p+and+miR-34b-3p+and+their+targeted+oncogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">The microRNA expression signature of small cell lung cancer: tumor suppressors of miR-27a-5p and miR-34b-3p and their targeted oncogenes.</a> Journal of Human Genetics. 62 (7), 671-678 (2017).</li>
<li>Zhang, B., Pan, X., Cobb, G. P., Anderson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((microRNAs+as+oncogenes+and+tumor+suppressors%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">microRNAs as oncogenes and tumor suppressors.</a> Developmental Biology. 302 (1), 1-12 (2007).</li>
<li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+MicroRNAs+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduction+and+Targeted+Therapy%22%5BJournal%5D)">The role of MicroRNAs in human cancer.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 1, 15004(2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+recurrence+in+early+stage+non-small+cell+lung+cancer+using+computer+extracted+nuclear+features+from+digital+H%26E+images%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Repository%22%5BJournal%5D)">Prediction of recurrence in early stage non-small cell lung cancer using computer extracted nuclear features from digital H&E images.</a> Science Repository. 7 (1), 13543(2017).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSiegel%2C+RL+%22Cancer+Statistics%2C+2017.+CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22">Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians</a>. 67 (1), 7-30 (2017).</li>
<li>Saxon, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p52+expression+enhances+lung+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Repository%22%5BJournal%5D)">p52 expression enhances lung cancer progression.</a> Science Repository. 8 (1), 6078(2018).</li>
<li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+Analyzer+for+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22ImageJ+User+and+Developer+Conference%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis Analyzer for ImageJ.</a> ImageJ User and Developer Conference. , (2012).</li>
<li>Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((edgeR%3A+a+Bioconductor+package+for+differential+expression+analysis+of+digital+gene+expression+data%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data.</a> Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).</li>
<li>Robinson, M. D., Oshlack, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+scaling+normalization+method+for+differential+expression+analysis+of+RNA-seq+data%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">A scaling normalization method for differential expression analysis of RNA-seq data.</a> Genome Biology. 11 (3), R25(2010).</li>
<li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312(2014).</li>
<li>Kong, D. H., Kim, M. R., Jang, J. H., Na, H. J., Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Review+of+Anti-Angiogenic+Targets+for+Monoclonal+Antibody+Cancer+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">A Review of Anti-Angiogenic Targets for Monoclonal Antibody Cancer Therapy.</a> International Journal of Molecular Science. 18 (8), (2017).</li>
<li>Wong, P. P., Bodrug, N., Hodivala-Dilke, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+Novel+Methods+for+Modulating+Tumor+Blood+Vessels+in+Cancer+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Exploring Novel Methods for Modulating Tumor Blood Vessels in Cancer Treatment.</a> Current Biology. 26 (21), R1161-R1166 (2016).</li>
<li>Evan, G. I., Brown, L., Whyte, M., Harrington, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and the cell cycle.</a> Current Opinion in Cell Biology. 7 (6), 825-834 (1995).</li>
<li>Haab, B. B., Dunham, M. J., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+microarrays+for+highly+parallel+detection+and+quantitation+of+specific+proteins+and+antibodies+in+complex+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions.</a> Genome Biology. 2 (2), RESEARCH0004(2001).</li>
<li>Sutandy, F. X., Qian, J., Chen, C. S., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+protein+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Currrent+Protocols+in+Protein+Science%22%5BJournal%5D)">Overview of protein microarrays.</a> Currrent Protocols in Protein Science. 27, Chapter 27, Unit 27 21(2013).</li>
<li>St-Pierre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+sequencing+of+neonatal+thymic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Repository%22%5BJournal%5D)">Transcriptome sequencing of neonatal thymic epithelial cells.</a> Science Repository. 3, 1860(2013).</li>
</ol>

המחברים, הייתי רוצה להכיר את ג'ון Caskey באוניברסיטת לואיזיאנה סטייט לסיוע שלו על ניתוח מסלול של הנתונים רצפי RNA, של אוניברסיטת טקסס Southwestern Medical Center, מק'דרמט הבא הדור רצף הליבה המרכזית עבור מבצע את רצפי RNA וניתוח נתונים. מחקר זה נתמך על ידי המכללה לרוקחות, אוניברסיטת לואיזיאנה מונרו סטארט-אפ מימון במכון הלאומי של בריאות (NIH) דרך המכון הלאומי של כללי רפואי מדעי מענקים 5 P20 GM103424-15, GM103424 P20 3-15S1....

miRNAs יכול לפעול טיפולים ממוקדים לטיפול בסרטן, לזהות את dysregulation של רמות ביטוי נגועים לעומת רקמות רגילה. מחקר זה שמטרתה לקבוע miRNAs זה פוטנציאל לעצור את מחזור התא התקדמות בשלבים מרובים. זה זוהה 143-מיר ומיר-506 לעצור את מחזור התא של תאים סרטניים, ואת הפרוטוקולים הציג שמטרתם להבין את הפעילות של טיפול זה miRNA קומבינטורית.
למתודולוגיות שתואר לספק הבנה העל על תפקיד miRNAs. האתגרים של הלומדים miRNAs משויכות היכולת שלהם היעד גנים מרובים, ובכך להשפיע על נתיבים מרובים. הניתוח מתואר qPCR מאפשר ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.
One of the authors&#39; names was corrected from:
George Matthaiolampakis
to:
George Mattheolabakis

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/59460/analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle">Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis</a>.&#160; An author name was updated.

Erratum: Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

מחזור התא הוא שילוב של מספר אירועים רגולטוריות לאפשר כפילות של התפשטות ה-DNA של תאים דרך תהליך mitotic1. תלויי-cyclin kinases (CDKs) להסדיר ולקדם את מחזור התא2. ביניהם, mitotic CDK (CDK1) CDKs לאטמוספרה (CDK2, CDK4 ו CDK6) יש תפקיד מרכזי מחזור התא התקדמות3. חלבון רטינובלסטומה (Rb) הוא phosphorylated על ידי CDK4/CDK6 מורכבים כדי לאפשר התקדמות מחזור התא4, CDK1 הפעלה הוא חיוני עבור חלוקת התא מוצלחת5. יש רבים CDK מעכבי פותחה, הערכה בניסויים קליניים לאורך העשורים האחרונים, המציין את הפוטנציאל של פילוח CDKs בטיפול בסרטן. למעשה, שלושה מעכבי CDK אושרו לטיפול בסרטן השד לאחרונה6,7,8,9,10. לפיכך, CDKs, בפרט, CDK1 ו- CDK4/6, הם עניין רב בוויסות התקדמות תאי הסרטן.
miRNAs (מירס) הם קטנים, ללא קידוד RNAs הרגולטורים post-transcriptional של ביטוי גנים, ויסות כ-30% גנים אנושיים כל11. הפעילות שלהם מבוסס על הדחקה translational או השפלה של RNAs שליח (mRNAs)12. המחשה חשיבות הביולוגי שלהם, יותר מ-5,000 miRNAs זוהו, מולקולה בודדת miRNA ניתן לווסת גנים מרובים11,13. חשוב מכך, miRNA הביטוי נמצא קשור מחלות שונות ומצבים המחלה, כולל סרטן13. למעשה, miRNAs כבר שאפיינו גם oncogenic או מדכאי הגידול, להיות מסוגל לקדם או לדכא גידול פיתוח והתקדמות14,15. הביטוי יחסי תפקיד miRNAs בהתפתחות לרקמות החולות של יכול לווסת את התקדמות המחלה; לפיכך, משלוח אקסוגני של miRNAs יש הפוטנציאל הטיפולי.
סרטן הריאות הוא הגורם המוביל של מקרי מוות מסרטן, גדול יותר מאשר 60% של כל ממאירות ריאות שאינם קטנים התא ריאות סרטן16,17, עם שיעור הישרדות 5 שנים של פחות מ-20%18. השימוש של מיר-143-3 p ומיר-506-3 p הוערך לאחרונה הכוונת את מחזורי תאים תאים של סרטן ריאות11. 143-מיר ומיר-506 יש רצפי כי הם משלימים את החסר CDK1, CDK4/CDK6, ההשפעות של מירס שני אלה על תאים A549 נותחו. הפרטים ניסיוניים שהוצגו, המתוארים במסמך זה. ביטוי גנים, התקדמות מחזור התא, אפופטוזיס הוערכו באמצעות עיצובים מוטוריים שונים ו- timepoints בעקבות תרביות תאים. השתמשנו בשיטות PCR (RT-qPCR) כמותית בזמן אמת יחד עם ניתוח microarray למדוד ביטוי גנים ספציפיים, הדור הבא רצפי RNA שימשו לקביעת הכללית ג'ין dysregulation11. השיטה השנייה מזהה שפע יחסי התעתיק של ג'ין כל עם רגישות גבוהה, הפארמצבטית, בעוד אלפי גנים ניתן לנתח מתוך ניתוח ניסיוני יחיד. בנוסף, ניתוח אפופטוטיים להיפגע עקב טיפול miRNA בוצעה, מתואר כאן. ביואינפורמטיקה מצורפים ניתוח מסלול. המוצג כאן הפרוטוקולים משמשים לניתוח של טיפולית פוטנציאל של 143-מיר קומבינטורית, מיר-506.
המטרה העיקרית של פרוטוקול זה הוא לזהות את ההשפעות של miRNAs בתאים, עם דגש על מחזור התא. מגוון רחב של טכניקות המובאת כאן span החל מפענוח הביטוי מראש (באמצעות qPCR) לפרט ותרגום הרומן טכניקות מפענוח ברמת חלבון, כגון ניתוח microarray. יש לקוות כי דו ח זה שימושי עבור חוקרים מעונינת לעבוד עם miRNAs. בנוסף, מוצגת מתודולוגיה ניתוח תזרים cytometric של מחזור התא, אפופטוזיס של תאים.

<table><tbody><tr><td>-80 מעלות; C מקפיא</td><td>VWR</td><td>VWR40086A</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות צלחת</td><td>CELLTREAT Scientific&nbsp;</td><td>50-607-511</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות Microwell צלחות &nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>A549 תאי סרטן ריאה של תאים לא קטנים</td><td>ATCC</td><td>ATCC&nbsp; CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>VWR</td><td>0710-25G</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2938c</td><td></td></tr><tr><td>משתיק אמביון שליטה שלילית מס' 1 siRNA</td><td>Ambion</td><td>AM4611</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה אנטיביוטית-אנטי-פטרייתית (100x)</td><td>Gibco</td><td>15240-062&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת מערך נוגדנים, 2 תגובות</td><td>Full Moon Bio</td><td>KAS02</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שדה בהיר&nbsp; &nbsp;</td><td>מיקרוסקופטיקה&nbsp;</td><td>IV-900</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שדה בהיר&nbsp; &nbsp;</td><td>New Star Environment LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell Cycle Antibody Array, 2 שקופיות</td><td>Full Moon Bio</td><td>ACC058</td><td></td></tr><tr><td>Cell Logic+ Biosafety Cabinate</td><td>Labconco</td><td>342391100</td><td></td></tr><tr><td>Cellquest Pro</td><td>BD bioscience</td><td>שלבים 5.14; 6.13: משמש לחישוב התפלגות האוכלוסייה לפי מחזור התא &nbsp; שלב ועבור&nbsp; חישוב התפלגות האוכלוסייה לניתוח אפופטוזיס&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CFX96 מערכת זמן אמת</td><td>BioRad</td><td>CFX96 מודול</td><td></td>אופטיקה</tr><tr><td>Chemidoc מערכת הדמיה מגע</td><td>BioRad</td><td>Chemidoc מערכת הדמיה</td><td></td></tr><tr><td>מגע חממת CO2</td><td>Thermo Scientific</td><td>HERAcell 150i</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex גורם גדילה מופחת מטריצת ממברנת מרתף</td><td>Trevigen</td><td>3433-010-01</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה דיגיטלית</td><td>AmScope&nbsp;</td><td>FMA050</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 4.5 גרם/ליטר גלוקוז, עם נתרן פירובט, עם L-גלוטמין</td><td>VWR</td><td>VWRL0100-0500</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Zymo Research</td><td>E1010</td><td></td></tr><tr><td>תוסף צמיחת תאי אנדותל (ECGS)</td><td>BD Biosciences</td><td>356006</td><td></td></tr><tr><td>ערכות Eppendorf Pipette Pick-A-Pack</td><td>Eppendrof</td><td>05-403-152</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט (200 הוכחה), מולקולרי כיתה בביולוגיה,&nbsp;</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Ethidium bromide</td><td>Alfa acar</td><td>L07462</td><td></td></tr><tr><td>F-12K תערובת נוטריינטים (Kaighn's Mod.) עם L-גלוטמין, קורנינג</td><td>קורנינג</td><td>45000-354</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur Flowcytometer</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי - פרימיום</td><td>אנטלנטה ביולוגית</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>עוברי סרום בקר (FBS)</td> <td>פישר סיינטיפיק</td><td>10438026</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד באסיקס צינורות מיקרוצנטריפוגה עם כובעי הצמד סטנדרטיים</td><td>פישרברנד באסיקס</td><td>02-682-002</td><td></td></tr><tr><td>פורמה סדרה II מעיל מים חממת CO2</td><td>תרמו מדעי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תמיסת הפרין (5000 U/mL)</td> <td>Hospira</td><td>NDC#63739-920-11</td><td></td></tr><tr><td>מערכת אלקטרופורזה הוריקסונטלית</td><td>ספסל מערכת מעבדה</td><td>BT102</td><td></td></tr><tr><td>has-miR-143-3p miRNA Mimic</td><td>ABM</td><td>MCH01315</td><td></td></tr><tr><td>has-miR-506-3p miRNA Mimic</td><td>ABM</td><td>MCH02824</td><td></td></tr><tr><td>Human Recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)</td><td>Thermo Scientific</td><td>PHC9394&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תאי אנדותל וריד טבורי אנושי (HUVEC)</td><td>תורמים בודדים</td><td>IRB# A15-3891</td><td></td></tr><tr><td>HyClone Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30256FS</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מסלול המצאה</td> תוצאות <td>Qiagen</td><td>: משמש לניתוח</td><td></td>מסלול ביואינפורמטיקה</tr><tr><td>Invitrogen UltraPure DNase/RNase ללא מים מזוקקים</td><td>Invitrogen</td><td>10-977-015</td><td></td></tr><tr><td>ליפופקטמין 2000&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>11-668-027</td><td></td></tr><tr><td>טוען צבע 10X</td><td>מדע המחלקה +</td> <td>470024-814</td><td></td></tr><tr><td>בינוני M199 (עם Earle&prime; מלחי s, L-גלוטמין ונתרן ביקרבונט)</td>מצלמה דיגיטלית <td>מיקרוסקופ סיגמא אולדריץ'</td><td>M4530</td><td></td></tr><tr><td></td><td>AmScope&nbsp;</td><td>MU130</td><td></td></tr><tr><td>Modfit LT</td><td>Verity תוכנה</td><td>שלב 5.15: תוכנה חלופית לניתוח התפלגות</td><td></td>אוכלוסיית מחזור התא</tr><tr><td>Nanodrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>NanoDrop one C</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco by life technologies</td><td>31985-070</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין 10/10</td><td>אנטלנטה ביולוגית</td><td>B21210</td><td></td></tr><tr><td>Power UP sybr גרין מאסטר מיקס</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>A25780</td><td></td></tr><tr><td>פרופידיום יודיד</td><td>MP ביוכימיקלים LLC</td><td>IC19545825</td><td></td></tr><tr><td>Proscanarray HT סורק Microarray</td><td>Perkin elmer</td><td>ASCNPHRG. השתמשנו באורך גל לייזר עירור ב-543 ננומטר.</td><td></td></tr><tr><td>q PCR כיסוי דבק אופטי</td><td>Applied Biosystems</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>ערכות Quick-RNA Zymo</td><td>Research</td><td>R1055</td><td></td></tr><tr><td>Ribonuclease A מלבלב בקר</td><td>Sigma</td><td>R6513-50MG</td><td></td></tr><tr><td>ScanArray Express</td><td>PerkinElmer</td><td>שלב 7.33: תוכנת</td><td></td>ניתוח מיקרו-מערך</tr><tr><td>Shaker</td><td>Thermo Scientific</td><td>2314</td><td></td></tr><tr><td>SimpliAmp Thermal Cycler</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SpectraTube צינורות צנטריפוגה 15 מ"ל</td><td>VWR</td><td>470224-998</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה SpectraTube 50 מ"ל</td><td>VWR</td><td>470225-004</td><td></td></tr><tr><td>TBS מאגר, 20x נוזל</td><td>VWR</td><td>10791-796</td><td></td></tr><tr><td>בקרת טמפרטורה&nbsp; צנטריפוגה מאצ'ין</td><td>Thermo Scientific</td><td>ST16R</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו צנטריפוגה מבוקרת טמפרטורה מאצ'ין</td><td>Eppendrof</td><td>5415R</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific BioLite תרבית תאים מטופלת צלוחיות</td><td>Thermo Scientific</td><td>12-556-009</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Pierce BCA Protein Assay</td><td>Thermo Scientific</td><td>PI23225</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Pierce RIPA Buffer</td><td>Thermo Scientific</td><td>PI89900</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Thermo-Fast 96-Well צלחות חצאית מלאה</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB0800WL</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Verso cDNA ערכת סינתזה (100 ריצות)</td> <td>Thermo Scientific</td><td>AB1453B</td><td></td></tr><tr><td>סולם DNA בטווח נמוך במיוחד</td><td>Invitrogen</td><td>10597012</td><td></td></tr><tr><td>VWR מקרר מעבדה דלת מוצק סטנדרטי</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ניתוח של mirna קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

Analysis of Combinatorial miRNA Treatments to Regulate Cell Cycle and Angiogenesis

סרטן הריאות (LC) הוא הגורם המוביל למוות מסרטן ברחבי העולם. בדומה לתאים אחרים סרטן, מאפיין מהותי של תאים LC היא התפשטות ללא פיקוח חלוקת התא. עיכוב של התפשטות בעת עצירת התקדמות מחזור התא הוכח להיות גישה מבטיחה לטיפול בסרטן, כולל LC.
miRNA הרפוי הופיעו כמבקרי ג'ין post-transcriptional חשוב, הם יותר ויותר נחקר לשימוש בטיפול בסרטן. העבודה האחרונה, אנחנו מנוצל miRNAs שני, 143-מיר ומיר-506, כדי לווסת את התקדמות מחזור התא. תאים סרטניים (NSCLC) ריאות שאינם קטנים התא A549 היו transfected שינויים בביטוי הגנים נותחו, פעילות אפופטוטיים להיפגע עקב הטיפול ניתחנו את סוף סוף. Downregulation של kinases תלויי-cyclin (CDKs) אותרו (קרי, CDK1, CDK4 ו CDK6), והפסיקה מחזור התא על המעברים שלב G1/S ו G2/M. ניתוח מסלול הצביעו על פעילות אנטי-אנגיוגנטי פוטנציאלי של הטיפול, אשר מעניק את הגישה עם רבת פעילות. המתוארים להלן למתודולוגיות המשמש לזיהוי פעילות miRNA בדבר עיכוב מחזור התא, אינדוקציה של אפופטוזיס, ואת ההשפעות של טיפול בתאי אנדותל על ידי עיכוב של אנגיוגנזה. יש לקוות כי השיטות המובאות כאן יתמוך למחקר עתידי על miRNA הרפוי ובפעילות המתאים, כי נציג הנתונים ינחה חוקרים אחרים במהלך ניתוח ניסיוני.

ניתוח ביטוי גנטי באמצעות RT-qPCR וג'ל אלקטרופורזה
ניתוח ביטוי גנטי דיפרנציאלי באמצעות RT-qPCR הפגינו משמעותית downregulation של גנים יישוב CDK1, CDK4 ו- CDK6. CDK1 ו- CDK4/6 הראו להם להיות אינסטרומנטלי G2/M ומעברים G1/S, בהתאמה. בביצוע ניתוח מותר השוואה ישירה בין מירס בודדים ופעילות מיר קומבינטורית. השימוש של siRNA לטרוף עם הסוכן transfecting מותר הערכה של הפרעות ההליך ב זוהה הגן downregulation, אשר היה מינימלי....

miRNA הרפוי יש פוטנציאל משמעותי בוויסות התקדמות סרטן. המודגמות כאן גישות אנליטיות משמשים לצורך זיהוי הפעילות של טיפול miRNA קומבינטורית להפסקת מחזור התא, אנגיוגנזה.

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

Lung cancer (LC) is the leading cause of cancer-related deaths worldwide. Similar to other cancer cells, a fundamental characteristic of LC cells is ...

שיטה זו תסייע להבין ולבצע טכניקות מעבדה הדרושות כדי לזהות את הפעילות של שני microRNA בתאי סרטן ריאות במבחנה. סרטן ריאות הוא הגורם המוביל למוות מסרטן ברחבי העולם. כאן, אנו מציגים טכניקות המשתרעות ממתודולוגיות מעבדה בסיסיות לפרוטוקולים מורכבים יותר, כגון ניתוח ביטוי גנים ומיקרו-רנ"א של חלבון נוגדנים, המשמשות במיוחד לזיהוי ההשפעה של פעולות microRNA.השיטות הבאות יעזרו לנו לענות על שאלות מפתח לגבי ההשפעה של שני microRNAs, microRNA 143 ו microRNA 506, על ויסות מחזור התא בתאי סרטן ריאות. אנו מציגים טכניקות מעבדה שונות, כמו transfection תאים, מיצוי RNA, PCR בזמן אמת כמותי וניתוח microRNA. אנו מקווים שהמצגת שלנו תתרום להשלמת ניתוחים אלה בהצלחה.ראשית, מושב התאים המתורבתים בבקבוק המתאים מספיק עבור RNA והפקת חלבון, כדי לבצע ביטוי גנים באמצעות ניתוח qPCR או מיקרו מערך. ואז לדגר לילה עם מדיה בתוספת 10 אחוז FBS ו 1 אחוז פניצילין סטרפטומיצין. למחרת, להכין את מדגם microRNA עבור transfection על ידי דילול microRNA 143 ו microRNA 506 במדיה בריכוז של 100 nanomolar כל אחד.מוציאים את הבקבוק מהאספה ומסירים את התקשורת. לשטוף עם 1x PBS. כל הפקדים שאינם מטופלים יכילו רק מדיה לא שלמה עם תאים.להחגירה את התאים עם מדיה transfection במשך שש שעות באינקובטור. לאחר שש שעות, להסיר את התקשורת ולהחליף עם ארבעה מיליליטר של מדיה טרייה, מלאה. לקצור את התאים לאחר 24 שעות ו 48 שעות על ידי טריפסיניזציה.לאחר מכן, לשטוף פעמיים עם 1x PBS בכל צינור ולהסיר על טבעי. על מנת לבצע מיצוי RNA במועד מאוחר יותר, להקפיא את התאים במינוס 80 מעלות צלזיוס. מיצוי RNA בוצע באמצעות ערכת RNA, בהתאם להוראות היצרן.ראשית, להסיר את הצינורות ממינוס 80 מעלות צלזיוס ולאפשר להפשיר. הוסף 300 מיקרוליטרים של מאגר תיזה ופיגט למעלה ולמטה כדי לשבור את קרום התא. הוסף נפח שווה של 100 אחוז אתנול טהור במיוחד.לאחר מכן מערבבים היטב וממקום בעמודה מופרדת. צנטריפוגה ולהסיר את הזרימה דרך. הוסף 400 מיקרוליטרים של שטיפה וחוצץ וצנטריפוגה כדי להסיר את המאגר.הוסף 5 microliters של DNAse 1 עם 75 מיקרוליטר VNA חיץ עיכול בכל מדגם, דגירה במשך 15 דקות. לאחר מכן לשטוף את המדגם עם 400 מאגר הכנה RNA microliter. לאחר מכן, לשטוף פעמיים עם חיץ לשטוף RNA.עכשיו, להוסיף מים ללא גרעין לעמוד, צנטריפוגה ולאחר מכן לאסוף את RNA. למדוד את ריכוז RNA. בשלב זה, שני מיקרוגרם של דגימת RNA ניתן לשלוח עבור רצף RNA.הכן את ה- cDNA בהתאם לפרוטוקול המתואר במקטע הטקסט, באמצעות התרמוצ'ילר. הכן פתרונות פריימר קדימה ואחרץ עם מים נטולי DNAse RNAse לריכוז של 10 מיקרומולרים. הכינו תערובת ראשית לכל גן לגילוי בהתאם למספר הדגימות.עבור כל דגימת cDNA, כמות התגובה היא בהתאם לטבלה המתוארת בטקסט. מניחים כל דגימה ל בארות שלהם. עבור qPCR, זה תמיד טוב להכין מסמך Excel עם פריסת לוח 96 היטב, על מנת לעקוב אחר הדוגמאות.עבור כל מדגם ותותח גן, בצע את תגובתם ב- triplicates, או לפחות כפילויות. לאטום את צלחת הפלסטיק עם איטום פלסטיק שקוף וברור אופטית. הימנע מנגיעה בשכבה הדקה והפלסטית באצבעות, מכיוון שזה יכול לייצר אות שווא.במהירות לסובב את הצלחת כדי לערבב את כל reagents לתחתית בארות שלהם. לאחר מכן, הפעל את לוחית הדגימה באמצעות מכונת PCR כמותית בזמן אמת. קבל את ערכי ה- CT שנוצרו על-ידי מכונת qPCR ונתח עבור ביטוי גנים יחסי.התבסוף בתאים כמתואר בסעיף הקודם של סרטון וידאו זה. קציר תאים מכל מדגם בצינורות סטריליים נפרדים, 15 מיליליטר עבור טריפסיניזציה. לאחר מכן, לשטוף את התאים פעמיים עם 1x PBS, על ידי צנטריפוגה ב 751G במשך חמש דקות, ולאחר מכן להסיר את supernatant.להשעות מחדש ולשבור את הצבעים על ידי הוספת 200 מיקרוליטר קר כקרח 1x PBS דרך פיפטה. הוסף שני מיליליטר של 70 אחוז אתנול קר כקרח, טיפה חכם לצינור, תוך מערבולת הצינור בעדינות כדי לתקן את התאים. צינורות דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר ומ מניחים אותם בארבע מעלות צלזיוס במשך שעה אחת.מוציאים את הצינורות מארבע מעלות צלזיוס וצנטריפוגה. מוסיפים 2 מ"ל PBS קר כקרח ומערבולת, ולאחר מכן להסיר את העל טבעי על ידי צנטריפוגה. הוסף 500 microliters של 1x PBS המכיל פרופידיום יודיד ריבונוקלאז A עם ריכוז 50 ו 200 מיקרוגרם למיליליטר, בהתאמה, בכל מדגם, ודגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.להעביר דגימות לתוך צינורות מתאימים, הגנה מפני אור, ולהפעיל על ציטומטר זרימה. ניסוי זה הוא לזהות את כל החלבונים של מסלול מחזור התא שהשתנה על ידי טיפול microRNA. לאסוף דגימות חלבון על פי ההליך המתואר בסעיף transfection, לכמת עם הבדיקה BCA.הסר את השקופיות ממינוס ארבע מעלות צלזיוס שעה אחת לפני הניסוי כדי להביא לטמפרטורת החדר ולהסיר לחות. קח 70 מיקרוגרם של דגימות חלבון והכן שקופיות מדגם בהתאם להוראות היצרן, אשר מתואר גם צעד אחר צעד בסעיף הטקסט. כאן כדי לציין, שטיפה נכונה של מגלשות עם מים deionized טהור במיוחד הוא צעד חשוב נוסף, כמו זה יעזור להפחית את הרקע של המגלשות.בנוסף, זה מאוד קריטי בניסוי זה לא לייבש את שקופיות המדגם עד השלב הסופי. לבסוף, סרוק את השקופית באמצעות מכונת מיקרו-מערך ונתח את הנתונים. ניתוח qPCR של הדגימות שטופלו במיקרו-רנ"א התקיים כדי לקבוע את ביטוי הגנים של CDK1, CDK4 ו- CDK6.גנים אלה לווסת את מחזור התאים של תאים נורמליים וסרטניים, כבר ממוקד כאמצעי לעיכוב התקדמות הגידול. הנתונים הראו את ההשפעה downregulatory של גנים אלה עקב הטיפול עם microRNA 143 ו 506. נתוני התפלגות מחזור התאים ממחזור הזרימה הדגימו גידול באוכלוסייה בשלב G0 ו- G1, וירידה באוכלוסייה בשלב S עקב השפעת הטיפול הקומבינטורי של microRNA 143 ו- 506.ניתוח המיקרו-מערך הספציפי של מחזור התא זיהה שינויים בביטוי החלבון של כ-60 גנים. מפת החום המיוצגת הצביעה על ירידה ברמת החלבון של מספר גנים הדרושים להתקדמות מחזור התא והתפשטותו, כגון CDK2, הלן 1 ו- 3, RE2F1. לעומת זאת, חלבונים המוכרים בדרך כלל על ידי ההשפעה המעכבת הבוגרת שלהם היו מוסדרים.למרות שהתוצאות הן כמותיות למחצה ונדרש ניתוח נוסף, ניתוח המיקרו-מערך מספק סקירה מהירה של פעילות המסלול. אנו מאמינים, לאחר צפייה בסרטון זה, תוכל לבצע ניסויי מעבדה בסיסיים ומורכבים שיסייעו לך בזיהוי פעילות microRNA בתאים.

analysis-combinatorial-mirna-treatments-to-regulate-cell-cycle

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

ספריית מזהה היעד הוא פלסמיד מבוסס, הגנום כולו אוסף של cDNA משובטים לשמש לזיהוי מטרות מירנה. כאן אנו מדגימים את השימוש והיישום.

הגנום כולו מסך עבור מטרות מירנה שימוש יעד המשימה ספריית מזהה

סרטון זה מתאר את פרוטוקול מיצוי ה-RNA מתאי סרטן ריאה נגועים ב-miRNA. גישה זו יכולה לשמש לזיהוי פעילות טיפול miRNA קומבינטורית בעצירת מחזור התא ואנגיוגנזה.

בדיקת מיצוי RNA: שיטה לחילוץ RNA מתאי סרטן ריאה נגועים miRNA

miRNA או microRNA הם מווסתי מפתח של התקדמות מחזור התא. סרטון זה מתאר ניתוח מחזור תאים מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי סרטן ריאות הנגועים ב-miRNA, כדי לחקור את ההשפעה של miRNA על ויסות מחזור התא. עיכוב התרבות על ידי עצירת התקדמות מחזור התא הראה פוטנציאל להיות גישה מבטיחה לטיפול בסרטן.

ניתוח מחזור התא: גישה לחקר ויסות מחזור התא של תאי סרטן ריאה נגועים ב- miRNA

סרטון זה מתאר את הטכניקה לחקר ביטוי החלבונים בתאי סרטן ריאה נגועים ב-miRNA באמצעות מיקרו-מערך נוגדנים למדידת ביטוי גנים ספציפיים. בפרוטוקול המוצג, אנו מבצעים מיקרו-מערך נוגדנים לזיהוי הפעילות של טיפול miRNA קומבינטורי בעצירת מחזור התא ואנגיוגנזה.

מיקרו-מערך נוגדנים: טכניקה לחקר ביטוי החלבונים של תאי סרטן ריאה שטופלו ב-miRNA

סרטון זה מדגים את העברת in vivo של מעכבי miRNA כסוכנים טיפוליים נגד צמיחת הגידול במודלים אורתוטופיים של עכברים. מתן תוך-גידולי של מעכבי miRNA סינתטיים או אנטגומירים מאפשר להם לקשור ולעכב miRNA אנדוגניים, ובכך לגרום להגברת הרגולציה של mRNA ולדיכוי צמיחת הגידול.

מידול טיפול תוך גידולי עם מעכבי miRNA: שיטה לניתוח ההשפעה של מעכבי miRNA על צמיחת הגידול במודל Murine

עבור במבחנה אינדוקציה של המעבר אנדותל-mesenchymal (EndMT), אשר הוא שימושי עבור חוקרים הסלולר איתות המסלולים מעורב EndMT, פרוטוקול המתואר. במודל זה ניסיוני, EndMT הנגרמת על ידי טיפול עם TGF-β בתאי האנדותל MS-1.

אנליזה מולקולרית של אנדותל-mesenchymal מעבר המושרה על ידי הפיכת גורם גידול-β איתות

דו ח זה מתאר שיטה מהירה ואמינה עבור אימות מטרות mRNA miRNAs הסלולר. משתמשת בשיטה biotinylated סינתטי מבוססת מגבר קדם חומצת גרעין נעול miRNA מחקה ללכידת המטרה mRNA. לאחר מכן, מצופים streptavidin beads מגנטי מועסקים הנפתח המטרה mRNA על כימות על ידי תגובת שרשרת של פולימראז qPCR.

הנועד מבוסס-ביוטין הנפתח Validate mRNA miRNAs מטרות של הסלולר

פרוטוקול זה משתמש ב-החללית מבוסס בזמן אמת בתגובת שרשרת פולימראז (PCR), שיטת sulforhodamine B (SRB), 3 ' אזורים לא מתורגמים (3 ' UTR) שיבוט, ושיטת לוציפראז לאמת את הגנים היעד של miRNA עניין ולהבין את הפונקציות של Mirna.

פרוטוקול מחוץ לגופית להערכת רמות מיקרוארנה, פונקציות, וגנים היעד הקשורים בתאי הגידול

המתואר כאן הוא פרוטוקול לאפיון מודולים של miRNAs ביולוגית מירסטים וההרכבה שלהם לתוך טרנסגנים קצרים, אשר מאפשר ביטוי יתר בו של טיפול גנטי יישומים.

אפיון של miRNAs הקשורים פונקציונלית ב גלינובלסטומה וההנדסה שלהם לאשכולות מלאכותיים עבור טיפול גנטי

פרוטוקול זה מתאר זרימת עבודה של עריכת גנים של גנים חוזרים פלינדרומיים קצרים (CRISPR) בתפוקה גבוהה, המקובצים באופן קבוע, עבור ניתוח רשת של אשכולות מיקרו-רנ"א, המאפשרת ייצור מהיר של פאנל של קווי תאים מהונדסים גנטית הנושאים שילובי מחיקה ייחודיים של חברי אשכול miRNA בגודל של עד 35 קילו-בתים בתוך ניסוי יחיד.

כלי עריכת גנים CRISPR לניתוח רשת אשכולות מיקרו-רנ"א

הפרוטוקול מתאר בדיקת הכלאה אימונופלואורסצנטית טנדם עם רקמה משובצת פרפין קבועה בפורמלין כדי לזהות ולכמת מיקרו-RNA וחלבונים מרובים בו זמנית.

הגברה וזיהוי של מיקרו-RNA באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה כשיטת זיהוי וכימות חדשה

למד ניתוח miRNA קומבינטורי לוויסות מחזור התא ואנגיוגנזה בתאי סרטן ריאה. השיטה משתמשת ב-transfection, RNA extraction ו-qPCR כדי לחקור את השפעת miR-143 ו-miR-506 על התמותה הסרטנית.

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

גלה סרטונים נוספים