זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים
11 ביולי 2019
אדיפוציטים קיימות במחסנים נפרדים ויש להם תפקידים מגוונים בתוך המיקרו-סביבות הייחודיות שלהם. כמו הבדלים אזוריים אופי ותפקוד הפונקציה נחשפים, זיהוי סטנדרטית בידוד של מחסני חיוני לקידום השדה. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לגבי כריתה של מחסני שומן בעכבר.
מתודולוגיה סטנדרטית לזיהוי ניתוח מחסני שומן בכל הגוף היא קריטית לחקירת הבדלים באופיים ותפקודם של אדיפוזיטים בתוך נישות אנטומיות דיסקרטיות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו שיטה אמינה ומדויקת לזיהוי וגירוש מחסנים נפוצים ופחות נחקרים של שומן מכרסמים. לזיהוי ובידוד של BAT בין-שרירי, השתמש במספריים איריס לחתוך אופקית לאורך הקצה התחתון של הרקמה התת עורית לפני של עכבר המתת דם בעקבות הגבול הטבעי של המחסן.
בצע שני חתכים אנכיים לאורך הקצוות הצדדיים של המחסן בעקבות הגבולות הטבעיים של הרקמה. השתמש במקלפים כדי להפוך בזהירות את המחסן כדי לחשוף את רקמת השומן הבין-שרירית בצורת פרפר המוטמעת ברקמת השומן הלבנה. ואז בזהירות לנתח את BAT מן WAT שמסביב.
לאחסן רקמות שומן במיכלים המתאימים לניתוח במורד הזרם. לזיהוי ובידוד של WAT תת עורי אחורי, מניחים את העכבר בתקורת השופים ומאבטחים את גפי החיה. השתמש במדפים כדי להרים את העור בבסיס עצם החזה ולעשות חתך עור מילימטר אחד.
הכנס להב אחד של מספרי הקשתית לתוך החתך ולעשות חתך בעור קו האמצע ארבעה עד חמישה סנטימטרים החל בבסיס עצם החזה ועולה לבסיס הזנב. לאחר מכן, בצע שני חתכים אופקיים של סנטימטר אחד בחלק העליון של החתך האנכי הראשוני המשתרע באופן משני מהקיים. השתמש במקלפים כדי לקלף בזהירות את העור מן החלל צפי, להשתמש ברגל כדי לאתר את WAT תת עורי האחורי אשר צריך להישאר קשור עם העור.
הצמד את העור המושט לחלוטין excise את מחסן WAT מפשעתי משולש מבסיס הישנבת ventrally על פני המפשעה. לזיהוי ובידוד של מחסן WAT הקרביים, השתמש במלקחיים כדי להרים את קיר חלל הציציוני הדק בבסיס עצם החזה ולעשות חתך של מילימטר אחד ברקמת האוהל. הכנס להב אחד של מספרי הקשתית לתוך החתך ולעשות חתך אנכי יורד ארבעה עד חמישה סנטימטרים מהחלק העליון של חלל הצפק לפי הטבעת.
בצע שני חתכים אופקיים של סנטימטר אחד בחלק העליון והתחתון של החתך האנכי המשתרע באופן משני מקו האמצע ולהשתמש במטליות כדי לקלף בחזרה את צפק כדי לחשוף את תכולת חלל הבטן. לאחר מכן הצמד את הצביטה המושטת למחבת הניתוח כדי לקצור את מחסני WAT הכלולים בחלל הצפי. לזיהוי ובידוד של WAT gonadal הקרביים, לאתר את הקניונים ולהשתמש מלקחים כדי להרים את WAT gonadal הקשורים, ולאחר מכן להשתמש מספריים איריס כדי בזהירות excise WAT מן הקניונים.
כדי להפוך את המחסן perirenal, לאתר את הכליה ולהשתמש מלקחיים כדי להרים את רקמת הכליה. משוך את הכליה אל קו האמצע כדי לראות חלוקה ברורה בין המחסנים perirenal ו retroperitoneal ובלות WAT הקשורים ישירות עם הכליות. לאחר מכן להסיר את בלוטות יותרת הכליה הממוקם מעל הכליות מן WAT.
לזיהוי ובידוד של WAT רטרופריטוניאלי, הרימו שוב את הכליה עד קו האמצע ולהשתמש במספריים של הקשתית כדי לנתח בזהירות את ה- WAT הרטרופריטוניאלי מהקיר הקרדיוני האחורי. כדי לבודד את WAT popliteal, מניחים את פתלה נגד מחבת הניתוח דואג כי פוסה popliteal בחלק האחורי של הברך פונה כלפי מעלה. השתמש במספריים הקשתית כדי להסיר בזהירות את העור מבסיס hindlimb לרגל.
השתמש מספריים איריס לעשות חתך בגבול נחות של ראשי המדיאלית והצלבי של שריר gastrocnemius, להשתמש במלקחים כדי להרים את השריר כדי לחשוף את המחסן פופוליטלי משולש. לאחר מכן השתמש מספריים איריס כדי למלמל את המחסן לאורך גבולות הרקמה הטבעית. כאן מוצגים המיקומים האנטומיים הגולמיים של מחסני עכבר תת עוריים, חומים, קרביים ופופליטיים.
המאפיינים ההיסטולוגיים של מחסני הדם התת עוריים, החומים, הקרביים, הפופליטיים, המכוננים והוסדרים, המחסנים התוך שריריים והבלתי-פתילים יכולים להיות מוערכים על ידי פרוטוקולי הכתמת המטוקסילין ואאוסין סטנדרטיים. רקמות השומן המבודדות באמצעות פרוטוקול זה יכולות לשמש למגוון רחב של נקודות קצה ניסיוניות כולל ניתוח היסטולוגי, מחקרים מולקולריים וניתוח ביטויי גנים וחלבונים. סטנדרטיזציה שדה רחב של זיהוי מחסני שומן מגוונים ללא ספק יעזור לנו לקדם את ההבנה שלנו של המאפיינים המולקולריים והמטבוליים שלהם ואת תרומתם דיפרנציאלית הן מצבים פתולוגיים מקומיים ושיטתיים.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מחקר זה עוסק בצורך בשיטות סטנדרטיות לזיהוי ובידוד של מאגרי שומן שונים בעכבר. הבנת ההבדלים האזוריים בתפקוד האדיפוקיטים היא קריטית לקידום המחקר בתחום הבריאות המטבולית. הפרוטוקול המתואר מספק גישה מהימנה להסרה של סוגי רקמת שומן נפוצים ופחות מוכרים כאחד.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום מחקר
- אפיון רקמה שומנית
- מחקר בריאות מטבולית
- טכניקות ביולוגיה מולקולרית
רקע
- שונות בתפקודי האדיפוציטים במאגרים שונים
- חשיבות ההקשר האנטומי במחקר אדיפוציטים
- צורך בפרוטוקולים סטנדרטיים לשיפור השחזוריות
שיטות שנעשה בהן שימוש
- נתיחה של מאגרי שומן שונים בעכברים
- מערכת מודל של עכברים
- שימוש במספרי איריס ובפינצטות לבידוד כירורגי
תוצאות עיקריות
- זיהוי והוצאה מוצלחים של מספר מאגרי שומן
- הפרוטוקול מקל על ביצוע ניתוחים המשכיים, כגון היסטולוגיה ומחקרי ביטוי גנים
- סטנדרטיזציה מסייעת להבהרת ההבדלים במאפייני המאגרים ובתפקודיהם
מסקנות
- מחקר זה מדגים מתודולוגיה יעילה לבידוד מאגרי רקמת שומן בעכברים.
- הממצאים תורמים להבנה טובה יותר של הביולוגיה של האדיפוציטים והשפעותיה על הבריאות.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למסמך ניהולי
זיהוי ודיסקציה סטנדרטיים של מאגרי שומן בעכברים מאפשרים השוואה חסונה של פרופילים מולקולריים ומטבוליים ספציפיים למאגר, ובכך תומכים ישירות במחקר של מחלות מטבוליות בשלבים מוקדמים. יכולת שחזור זו היא קריטית לתיקוף מטרות (target validation) ולהפחתת סיכונים מכניסטיים בגילוי תרופות למחלות מטבוליות ולהשמנה. דגימה אנטומית עקבית מהווה בסיס להמשכיות תרגומית (translational continuity) משלב הגילוי ועד לפיתוח מודלים פרה-קליניים.
יישומים אסטרטגיים במו"פ של הביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר בחינה מדויקת של ביולוגיה של אדיפוקיטים במאגרים ספציפיים לצורך מחקר מונחה-היפותזה.
- תומך בתיקוף תפקודי של מטרות על ידי בידוד רקמות שומן נפרדות לניתוח מולקולרי.
- מסייע בהפחתת סיכונים מכניסטיים על ידי מתן אפשרות להשוואה ישירה של תרומת מאגרים שונים לפנוטיפים מטבוליים.
סקרינג ופיתוח בדיקות (Assay Development)
- מספק דגימות רקמה סטנדרטיות עבור בדיקות המשך הניתנות לשחזור ופרופילים מולקולריים.
- משפר את מהימנות הבדיקה על ידי הבטחת עקביות אנטומית בין קבוצות ניסוי.
- מאפשר ניתוח כמותי של ביטוי גנים וחלבונים במאגרי שומן מוגדרים.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתאימה מודלים פרה-קליניים למחלות מטבוליות בבני אדם על ידי לכידה של פתופיזיולוגיה ספציפית למאגר שומן.
- תומך בגילוי סמנים ביולוגיים באמצעות ניתוח השוואתי של חתימות מולקולריות של מאגרים (depots).
- מאפשר קידום מותאם סיכונים על ידי הבהרת התרומות של מאגרי רקמה למצבים מטבוליים סיסטמיים.
שילוב תהליכי עבודה ומסלולי עיבוד
פרוטוקול זה משתלב בממשק שבין שלבי הגילוי המוקדמים למחקר פרה-קליני, ומספק בסיס למחקרים מולקולריים, היסטולוגיים ותפקודיים של גיוון רקמת השומן.
- ביולוגיה גילויית: נתיחה סטנדרטית תומכת בבדיקת היפותזות על תפקוד אדיפוציטים ספציפיים למאגרים ועל ויסות מטבולי.
- סריקה: בידוד רקמה עקבי מאפשר בדיקות כמותיות הניתנות לשחזור ומחקרים השוואתיים.
- אנליטיקה: מאפשרת מדידה חזקה של נקודות קצה גנטית, חלבונית והיסטולוגית במאגרים השונים.
- מחקר תרגומי: משפר את ההלימה של מודלי עכברים למחלות מטבוליות בבני אדם על ידי מתן אפשרות לניתוח ברמת המאגר.
- שימוש חוזר ארגוני: סטנדרטיזציה של הפרוטוקול מאפשרת אימוץ נרחב בתוכניות מחקר מטבולי ובתחומים טיפוליים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי בתיקוף מטרות ספציפיות למאגר ובמחקרים מכניסטיים.
- ערך תפעולי: מקדם שחזור וסטנדרטיזציה בין צוותי מחקר ומחקרים שונים.
- ערך אסטרטגי: תומך בקבלת החלטות מושכלת של go/no-go על ידי הבהרת התרומות של המאגר למודלים של מחלות.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תיעוד בעדיפות מותאמת סיכון של מטרות ומסלולים מטבוליים.
שיקולי יישום
- נדרשת מומחיות אנטומית בזיהוי ובניתוח של רקמת שומן בעכברים.
- נדרשת גישה לכלי ניתוח סטנדרטיים ולתשתית לניתוח היסטולוגי.
- נדרשת הקפדה של כל הצוותים על פרוטוקולים סטנדרטיים להבטחת הדירות.
- עשוי לדרוש התאמה עבור זני עכברים שונים או תנאים ניסיוניים שונים.
- תלוי בטיפול קפדני ברקמה כדי לשמור על השלמות המולקולרית לצורך ניתוחים עתידיים.
שאלות נפוצות בנושא ביו-פרמה
Chapters in this video
0:04
Title
0:33
Interscapular Brown Adipose Tissue (BAT) and Posterior White Adipose Tissue (WAT) Identification and Isolation
2:38
Gonadal WAT Identification and Isolation
3:47
Perirenal and Retroperitoneal WAT Identification and Isolation
4:33
Other Adipose Depot Identification and Isolation
5:14
Results: Representative Gross Anatomical Identification and Histological Evaluation of Mouse Adipose Depots
6:02
Conclusion
