Name: מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-20T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למד כיצד להקים מודלי PDX למלנומה באמצעות השתלת רקמת גידול בעכברים. שיטה זו משפרת את היכולת לחזות תגובות לטיפול ולהבין מנגנוני התנגדות בביולוגיה של הגידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים למכון החיות של מכון וויסטאר, למתקן המיקרוסקופיה, למתקן היסטולטכנולוגי ולמרכז לאספקת מחקר. מחקר זה מומן בחלקו על ידי מענקים U54 (CA224070-01), נבג (CA174523), P01 (CA114046-07), ד ר מרים ושלדון ג. אדלסון הקרן למחקר רפואי, ואת קרן המחקר מלנומה.

פרוטוקולי החיות הבאים מתבקשים לבצע את ההנחיות של ועדת האתיקה ההומאנית של מכון וויסטאר והנחיות לטיפול בבעלי חיים.
1. רקמת הגידול מלנומה אוסף
<ol><li>לאסוף רקמת הגידול (כינה מעבר 0) מחולים מלנומה על ידי אחד הניתוחים הבאים או שיטות ביופסיה.<ol>
<li>עבור רקמת כריתה כירורגית, לשמור על מינימום של 1 גרם של רקמה (לכרות גרורות ונגעים ראשוניים) באמצעי אחסון התחבורה (RPMI 1640 + 0.1% fungizone + 0.2% gentamicin) ב 4 ° c או על קרח.</li>
		<li>עבור רקמת ביופסיה כירורגית, לשמור פחות מ 1 גרם של רקמה (לעתים קרובות אגרוף ביופסיות של תת עורית [ספורטינג ראגה] גרורות הלימפה [in] גרורות) באמצעי אחסון התחבורה ב 4 ° צ' או על קרח.</li>
		<li>עבור רקמת ביופסיה ליבה, לשטוף את גליל (ליבה) של רקמות של כ 10 מ"מ x 1 מ"מ (לעתים קרובות, ביופסיות כבד) לתוך שפופרת 15 mL המכילה 5 מ ל של אמצעי אחסון התחבורה ב 4 ° c או על קרח.</li>
		<li>עבור המחט העדינה לחות (FNAs) רקמות, לשמור על כמות קטנה מאוד של רקמה (פחות מ 1 מ ' בגודל) נלקח ישירות מהמטופל במחט ומזרק ב 4 ° צ' או על קרח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להעביר את הרקמה באמצעי אחסון הובלה ב -4 ° צ' או על קרח באותו יום או עם משלוח לילה לאחר כריתה כירורגית או ביופסיה. לעבד את הרקמה בתוך 1-2 h של משלוח.</li>
</ol>2. עיבוד רקמת הגידול להשתלת עכבר
<ol><li>כריתה כירורגית או עיבוד רקמה ביופסיה כירורגית<ol>
<li>להעביר את הרקמה צלחת פטרי סטרילית ולהפריד את רקמת הגידול מפני רקמות נורמלי מסביב ככל האפשר.</li>
		<li>הסרת רקמת נקרוטיק (מזוהה בדרך כלל בצבע חיוור-לבנבן הממוקם במיקום מרכזי בתוך הגידול) מן הגידול הנותר ככל האפשר.</li>
		<li>השתמש אזמל כדי לחלק את נתח הגידול הראשוני לתוך חתיכות שוות ערך (~ 3 מ"מ x 3 מ"מ) עבור השתלת עכבר כירורגית (איור 2).</li>
		<li>באופן אופציונלי, אם רקמת הגידול מספיק זמין, הצמד להקפיא את הרקמה עבור במורד הזרם (RNA ברצף [RNASeq], רצף exome שלם [ווס], וכו ').</li>
		<li>להפוך את הגידול להשתהות על ידי מינילו את רקמת הגידול באמצעות טכניקה להב צלב עם שני להבים אזמל. האוהב את נתחי הגידול דק ככל האפשר כדי ליצור שאיפה, אשר כעת מוכן השתלת העכבר הכירורגית.</li>
		<li>לחילופין, אם רקמת הגידול קשה מדי עבור דיסוציאציה מכנית, השתמש בהליך דיסוציאציה של העיכול כדי ליצור ג'ל כמו שומן ו תא בודד השעיית השרשה ו/או הזרקה.<ol>
<li>האוהב את גושי הגידול דק ככל האפשר כדי ליצור שאיפה.</li>
			<li>שים את המים בשפופרת 50 mL עם תמיסת מלח מאוזנת קר של האנק (HBSS)-/- (ללא Ca+ + ו-Mg+ +); אז, צנטריפוגה ואת הגלולה ב 220 x g עבור 4 דקות ב 4 ° c.</li>
			<li>השהה מחדש את העישון ב-10 מ ל של מדיה לתקציר מחומם (200 U/mL מתוצרת הרביעי + 5 מ"מ CaCl2 + 50 U/Ml DNase ב HBSS-/-) עבור 1 גרם של רקמת הגידול.</li>
			<li>מניחים את הצינור באמבט מים בגודל 37 ° c במשך 20 דקות ומערבבים במרץ כל 5 דקות עם פיפטה חד פעמי.</li>
			<li>רוחצים עם עד 50 mL של HBSS-/-; לאחר מכן, צנטריפוגה ב 220 x g עבור 4 דקות ב 4 ° c.</li>
			<li>להוסיף 5 מ ל של prewarmed TEG (0.025% טריפסין + 40 μg/mL אתילן גליקול-bis (β-עמינח אתר)-N, N, N ', N'-טטראצטט חומצה [EGTA] +10 10 μg/mL פוליוויניל אלכוהול [PVA]) עבור 1 g של רקמת הגידול, בעדינות להשהות/לנער, ולמקם את הצינור ב 37 ° c עבור 2 דקות ללא ערבוב.</li>
			<li>להוסיף לפחות 1 כמות שווה של מדיה בצביעת קר (1% בסרום שיסמין [BSA] + 10 מ"מ 4-(2-הידרוקסיל) -1-חומצה piperazinefonic [HEPES] + 1x פניצילין-סטרפטומיצין ב L15 media) כדי להרוות את טריפסין ואת צנטריפוגה ב 220 x g עבור 4 דקות ב 4 ° C.</li>
			<li>להשעות מחדש את המדגם ב 10 מ ל של הצביעת מדיה לכל 1 g של רקמת הגידול ולסנן אותו באמצעות מסננת תא 40 יקרומטר כדי לקבל השעיה תא יחיד עבור הזרקת העכבר (איור 2).</li>
			<li>שאיפה נותרת על גבי מסננת התא ניתן גם לאסוף עבור השתלת עכבר כירורגי.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>ג עפרת ביופסיה רקמת עיבוד
	<ol>
<li>יוצקים את רקמת צילינדר הליבה בצינור התחבורה רקמת לתוך 5 ס מ צלחת פטרי.</li>
		<li>להסיר את הנוזל העודף, לגרד את הרקמה לקצה של צלחת פטרי, בעדינות את רקמת הגידול, להוסיף ~ 100 – 150 μL של HBSS-/- על גבי רקמת הגידול, ובמהירות לצייר את hbss/הגידול רקמת הבולם לתוך מזרק 1 mL.</li>
		<li>להצמיד 23 גרם מחט ל 1 מזרק mL, להעביר את HBSS/הגידול רקמת הבולם דרך המחט לתוך שפופרת ספין 1.5 mL.</li>
		<li>רענון ההשעיה הגידול לתוך המזרק עם המחט עדיין על עד שהוא יכול לעבור בצורה חלקה דרך המחט.</li>
		<li>לבסוף למשוך את ההשעיה הגידול בחזרה לתוך המזרק ולנתק את המחט 23 G.</li>
		<li>לצרף a 27 המחט G ולצייר נפח שווה (~ 100-150 μL) של מטריצה מלאכותית (ראה טבלת חומרים) לתוך המזרק.</li>
		<li>הוסף נפח שווה של מטריצה מלאכותית באיטיות לתוך שפופרת ספין 1.5 mL עם הגידול/HBSS-/- השעיה, בזהירות הימנעות היווצרות של בועות.</li>
		<li>לצייר בפעם האחרונה חזרה לתוך המזרק ואת רקמת הסרטן ביופסיה הליבה כעת מוכן הזרקת העכבר.</li>
	</ol></li>
	<li>עיבוד רקמות FNA
	<ol>
<li>מניחים את המזרק המכיל את דגימות FNA (לכוד במחט) על הקרח.</li>
		<li>הפרד את המחט (המכילה רקמת FNA) מן המזרק ולהסיר את הבוכנה מן המזרק, להוסיף ~ 150 – 200 μL של HBSS-/- לחלק העליון של המזרק.</li>
		<li>הכנס מחדש את הבוכנה לתוך המזרק והמחט (המכילה את רקמת FNA), ודחף את HBSS-/- דרך המחט לתוך שפופרת ספין של 1.5 mL. שלב זה מסיר את הגידול FNA מן המחט.</li>
		<li>חזור על שלב 2.3.3 עם hbss-/-/FNA ההשעיה פעמיים באמצעות מזרק אותו כדי למקסם את האחזור של רקמת הגידול מן המחט.</li>
		<li>הוספת אמצעי אחסון שווה (~ 100-150 μL) של מטריצה מלאכותית מלאכותי לצינור הספין 1.5 mL המכיל את HBSS/FNA השעיה.</li>
		<li>לערבב כראוי על ידי לשרטט לאט את מטריקס מלאכותית/hbss-/-/FNA בחזרה לתוך המחט 23 G וחוזר פעמיים.</li>
		<li>לצייר את כל החילוץ מלאכותי מטריקס/hbss-/-/FNA נפח בחזרה לתוך המזרק, להחליף את המחט 23 g עם מחט 27 g, ואת המדגם FNA כעת מוכן הזרקת העכבר.</li>
	</ol></li>
</ol>3. השתלת גידול והזרקה של עכברים
<ol><li>השרשה של כריתה כירורגית או רקמת ביופסיה כירורגית הערה: להבטיח את כל המכשירים כירורגי סטרילי על ידי אוטוקלינג או השימוש טרום מעוקר מכשירים חד פעמיים.<ol>
<li>לגלח שיער מהגב התחתון של NSG 6-8 שבוע גברים או עכברים נקבה עוזב בקירוב כ 1.5 ס"מ x 3 ס מ שטח ללא שיער. השתמשו בעכברים באמצעות isofלבנה, ומאשרים על ידי סחיטה עדינה של כף הרגל כמבחן של תגובתיות. השתמש משחה וטרינר על עיניהם כדי למנוע יובש.</li>
		<li>מניחים עכברים בודדים על משטח החום בחרוט האף של מכונת ההרדמה, לקרצף את האזור מגולח עם כלורקסאידין. לאחר מכן כבו עם 70% אתנול והניחו להתאדות.</li>
		<li>הכנת גושים או לחלק שאיפה הגידול בצלחת פטרי לתוך תלי בודדים עבור השרשה כירורגית (כלומר, לתוך שלושה תילים שווים אם להיות מושתל ל 3 עכברים).</li>
		<li>באמצעות להב האזמל, לעשות חתך של כ 5 מ"מ אורך במרכז האחורי של העכבר, לקחת זוג אחד של מלקחיים ולהרים את העור בצד של החתך הפוך של המפעיל.</li>
		<li>לקחת את המספריים לעומת זאת ולהפריד את העור משכבת השריר על ידי חיתוך בעדינות קרום הפנים עם חתכים מספריים קטנים, ובכך ליצור "כיס" עבור רקמת הגידול.</li>
		<li>להרים קטע גידול אחד או תלולית אחת בודדת של רקמת הגידול עם להב האזמל בעדינות למקם את הרקמה לתוך הכיס שנוצר.</li>
		<li>ניהול 100 μL של מטריצה מלאכותית על תל רקמת הגידול בכיס.</li>
		<li>באמצעות שני זוגות של מלקחיים, למשוך את החתך בשני הקצוות כך את קצות הפצע להתקרב יחד, ולסגור את הפצע על ידי החלת אחד או שני מחסניות הפצע.</li>
		<li>תת עורית להזריק 1-5 מ"ג/ק"ג מלוקסיאם כאבים בעכברים לאחר הניתוח.</li>
		<li>לקחת את העכבר מתוך חרוט האף ולמקם אותו בחזרה לכלוב המקורי שלו, להתבונן בעכבר תוך כדי התעוררות. אל תחזרו לכלוב עד שהחלמת לחלוטין.</li>
		<li>להסיר תפסי פצע לאחר כ 7 ימים. אם ההחלמה אינה מלאה לאחר 7 ימים, השאירו את מחסנית הפצע בעוד יום או יומיים. הערה: אם באמצעות השעיית תא בודד מתוך כריתה כירורגית או עיבוד רקמה ביופסיה כירורגית, זה יהיה לערבב עם מטריצה מלאכותית (ב 1:1 יחס) עבור הזרקת עכברים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הזרקה של FNA או רקמת ביופסיה ליבה<ol>
<li>המקום עכבר NSG על מתלה רשת פלדה, להחזיק את העכבר בחוזקה על ידי הזנב, ובעדינות למשוך את העכבר לאחור. זה יהיה לתפוס את הרשת עם הרגליים הקדמיות שלה בחוזקה. לחילופין, רסן עכבר ביד הלא-דומיננטית והרשה לאזור האגף להיראות.</li>
		<li>לחטא את העור של האגף עם דגימות אלכוהול, לאט ובהתמדה להזריק את התוכן של המזרק מתחת לעור של העכבר.</li>
		<li>להוציא את המחט ולמקם את העכבר בחזרה לכלוב שלו.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ניטור צמיחת הגידול
<ol><li>לנטר עכברים פעם שבועית כדי לבדוק גידולים ממשית.</li>
	<li>לאחר גידולים נמצאים בגודל מדיד (כ 50 מ"מ3), השתמש קליבר כדי להקליט את ממדי הגידול. השתמש בנוסחה הבאה כדי לחשב אמצעי אחסון לגידול: (רוחב x רוחב x אורך)/2.</li>
	<li>הגידול בקציר פעם נפח הגידול מגיע סביב 1.5 ס"מ3 (כ 4 – 10 שבועות). הגידול נקרא כעת מעבר העכבר 1 (MP1).</li>
</ol>5. גידול בקציר לרקמות בנקאיות, השרשה, וניסוי/אפיון
<ol><li>להרוג את העכבר בחדר CO2 , לבדוק סימנים חיוניים כדי לאשר את המוות, ולאחר מכן להטביע את העכבר בתמיסה virkon כדי לעקר את העור עבור 30 s בביו-הקבינט.</li>
	<li>השתמש מספריים מעוקל מלקחיים כירורגי כדי להרים את העור הסמוך לגידול ולעשות חתך אופקי.</li>
	<li>השתמש טכניקת הפרדה קהה להניע את העור משני צידי הגידול ועל הגידול, חשיפת הגידול.</li>
	<li>להשתמש במספריים או להב אזמל כדי להפריד את הגידול מfascia.</li>
	<li>לכרות את הגידול ולהעביר את הגידול צלחת פטרי סטרילי, לחתוך את הגידול לחתיכות קטנות להסיר רקמה נקרוטית מן הגידול.</li>
	<li>. רקמת גידול בנקים להשתלה עתידית<ol>
<li>לקחת 2-3 חתיכות גידול קטן קטן יותר ~ 10 מ"מ x 10 מ"מ ו הממס אותם לחתיכות קטנות יותר ~ 1 מ"מ x 1 מ"מ.</li>
		<li>העבר את כל הרקמה טחון 2 מ ל בקבוקון קריוגני, להוסיף 1 מ ל של הקפאת מדיה (10% DMSO + 90% FBS).</li>
		<li>ערבב היטב ומניחים מבחנות קריוגניים לתוך מיכל מקורר לקירור מבוסס תאים בקרח יבש.</li>
		<li>לאחסן את המיכל ב-80 ° c מקפיא בלילה ולאחר מכן להעביר בצלוחיות חנקן נוזלי (LN2) אחסון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הקפאת רקמות עבור במורד הזרם (RNASeq, ווס, וכו ').<ol>
<li>מניחים חתיכות רקמת הגידול (~ 3 מ"מ x 3 מ"מ) לתוך בקבוקון קריוגני ולשים את בקבוקון קריוגני ב LN2 באופן מיידי. חנות בבקבוקונים ב-80 מקפיא ° c.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. PDX טיפול בניסויים
הערה: זה ייקח שני שלבי הרחבה לגדול רקמת הגידול מספיק כדי להפיק את המספר הדרוש של עכברים הנושאת PDX לניסוי הטיפול.
<ol><li>תרימי בקבוקון קריוזה המכיל את רקמת PDX הפקדה מ-LN2, ומניחים את הקריובקבוקון באמבט מים 37 ° c עד הקפאת התקשורת המכילה את רקמת הגידול הוא רק מתחיל להמיס.</li>
	<li>רוקן את התוכן של הקריובקבוקון לתוך מחומם מראש HBSS-/- בצינור 50 mL, ולשטוף את הרקמה.</li>
	<li>הרקמה גלולה על ידי צנטריפוגה עבור 5 דקות ב 1,200 סל ד.</li>
	<li>הסר HBSS-/- ממדגם הגידול על ידי שאיפה ואקום עם Pipet פסטר.</li>
	<li>החלק את רקמת PDX מצינור 50 mL לתוך 5 ס"מ או 10 ס"מ צלחת פטרי ומקום על קרח רטוב.</li>
	<li>בצע את פרוטוקול השרשה לעיל כדי השתל רקמת הפקדה מתוך בקבוקון קריוגני לתוך 5 NSG עכברים לסיבוב הראשון של הרחבת הגידול PDX.</li>
	<li>לאחר גידולים להגיע ~ 600 – 800 מ"מ3, קציר 1-2 גידולים כדי לקבל השעיה תא בודד עם הפרוטוקול הנ ל עיבוד רקמות הגידול: דיסוציאציה מכנית, קולגן הליך העיכול תהליך הדיסוציאציה.</li>
	<li>גלולה תאים ולהשעות מחדש 6 מ ל של hbss-/-/מטריצה מלאכותית (1:1 יחס), תת עורית הכנסה ~ 50 nsg עכברים, עם 100 μl של תערובת התא לכל עכבר עבור הסיבוב השני של הרחבת הגידול pdx.</li>
	<li>למדוד את גודל הגידול עם מדידת שבועי.</li>
	<li>המתן לגודל הגידול של ~ 100 mm3 ב 3-5 שבועות, אקראי עכברים לקבוצות, ולהתחיל טיפול.</li>
	<li>כאשר גודל הגידול מגיע המרבי מאושר IACUC נפח, להפסיק את הטיפול.</li>
	<li>בצע את פרוטוקול גידול לעיל הקציר לאסוף חתיכות הגידול קפואים הצמד, הגידול חתיכות עבור פרפין בלוקים.</li>
</ol>

<ol><li>Garman, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+Genomic+Characterization+of+462+Melanoma+Patient-Derived+Xenografts%2C+Tumor+Biopsies%2C+and+Cell+Lines%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Genetic and Genomic Characterization of 462 Melanoma Patient-Derived Xenografts, Tumor Biopsies, and Cell Lines.</a> Cell Reports. 21 (7), 1936-1952 (2017).</li>
<li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li>
<li>Davies, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+of+the+BRAF+gene+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations of the BRAF gene in human cancer.</a> Nature. 417 (6892), 949-954 (2002).</li>
<li>Paraiso, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+phospho-ERK+activity+allows+melanoma+cells+to+escape+from+BRAF+inhibitor+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+Of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Recovery of phospho-ERK activity allows melanoma cells to escape from BRAF inhibitor therapy.</a> British Journal Of Cancer. 102 (12), 1724-1730 (2010).</li>
<li>Long, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Outcomes+in+Patients+With+BRAF+V600-Mutant+Metastatic+Melanoma+Who+Received+Dabrafenib+Combined+With+Trametinib%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long-Term Outcomes in Patients With BRAF V600-Mutant Metastatic Melanoma Who Received Dabrafenib Combined With Trametinib.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (7), 667-673 (2018).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).</li>
<li>Hausser, H. J., Brenner, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+instability+of+Saos-2+cells+in+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Phenotypic instability of Saos-2 cells in long-term culture.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 333 (1), 216-222 (2005).</li>
<li>Fiebig, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+three+human+small+cell+lung+cancer+models+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Results+In+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of three human small cell lung cancer models in nude mice.</a> Recent Results In Cancer Research. 97, 77-86 (1985).</li>
<li>Izumchenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+effectively+capture+responses+to+oncology+therapy+in+a+heterogeneous+cohort+of+patients+with+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts effectively capture responses to oncology therapy in a heterogeneous cohort of patients with solid tumors.</a> Annals of Oncology. 28 (10), 2595-2605 (2017).</li>
<li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+resistance+and+clonal+evolution+in+melanoma+during+BRAF+inhibitor+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Acquired resistance and clonal evolution in melanoma during BRAF inhibitor therapy.</a> Cancer Discovery. 4 (1), 80-93 (2014).</li>
<li>Monsma, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoma+patient+derived+xenografts+acquire+distinct+Vemurafenib+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Melanoma patient derived xenografts acquire distinct Vemurafenib resistance mechanisms.</a> American Journal of Cancer Research. 5 (4), 1507-1518 (2015).</li>
<li>Das Thakur, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+vemurafenib+resistance+in+melanoma+reveals+a+strategy+to+forestall+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modelling vemurafenib resistance in melanoma reveals a strategy to forestall drug resistance.</a> Nature. 494 (7436), 251-255 (2013).</li>
<li>Meehan, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDX-MI%3A+Minimal+Information+for+Patient-Derived+Tumor+Xenograft+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">PDX-MI: Minimal Information for Patient-Derived Tumor Xenograft Models.</a> Cancer Research. 77 (21), 62-66 (2017).</li>
<li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li>
<li>De La Rochere, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mice+for+the+Study+of+Immuno-Oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized Mice for the Study of Immuno-Oncology.</a> Trends in Immunology. 39 (9), 748-763 (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

יש לנו במסמך זה תיאר הפקת מודלים PDX של מלנומה עם רקמת החולה נגזר גידולים ראשוניים וגרורתי, ביופסיות ליבה, ו FNAs. כאשר העפילו ישירות לתוך עכברי NSG, הגידולים מציגים את המאפיינים המיורפולוגיים הדומים, גנומית ותכונות ביולוגיים לאלה שנצפו בחולה. במקרה כאשר רק כמות קטנה של רקמות זמין לחוקרים, כפי שקורה לעתים קרובות עם FNAs, טכניקת PDX מאפשר הרחבה של רקמת הגידול עבור DNA, RNA, ואפיון חלבונים, כמו גם עבור ניסויים תרפיה כדי לאפשר תרופות פרה-קליניים פיתוח.
ביקורת על ההצלחה של העפיב PDX היא איכות החוק...

מודלים preclinical הם קריטיים עבור כל ההיבטים של מחקר הסרטן translational, כולל אפיון המחלה, גילוי של פגיעויות שימושי ייחודי לסרטן לעומת תאים נורמליים, ופיתוח של טיפולים יעיל לנצל פגיעויות אלה כדי להגביר את ההישרדות הכוללת של חולים. בשדה מלנומה, עשרות אלפי דגמים של קו התא כבר מנוצל בכבדות עבור הקרנת סמים, עם > 4000 תרמה על ידי הקבוצה שלנו לבד (סדרת WMXXX). אלה מודלים קו התא נגזר מחולי מלנומה עם צורות שונות של מלנומה עורית (כלומר, acral, uveal, ו התפשטות שטחית) ו גנוסוגים מגוונים (כלומר, BrafV600-מוטציה ו נוירובלסטומה RAS ויראלי אונאוולוג הומולוג [ מיכל הנברס Q61R-מוטציה]), אשר תוחלת את הספקטרום של המחלה הנוכחית בקליניקה1,2.
חד-משמעית, המוצלח ביותר, טיפול ממוקד האסטרטגיה בשדה מלנומה התפתחה מ 1) האפיון גנומית של גידולים של חולים לזיהוי מוטציות Braf ב ~ 50% של מלנומה3 ו מ 2) חקירה פרה-קלינית מינוף קו מלנומה תא מודלים4. שילוב BRAF/מק מעכב היה מזון ותרופות מינהל (FDA)-אושרה ב 2014 לטיפול בחולים אשר הנמל מלנומה הפעלת brafV600E/K מוטציות ומתגאה > 75% תגובה שיעור5. למרות היעילות הראשונית הזאת, ההתנגדות מתעוררת במהירות כמעט בכל מקרה בשל מנגנונים מהותיים ושנרכשו מנגנוני ההתנגדות טרוגניות. למרבה הצער, מודלים של קו התא אינם מטרוגניות ביולוגי נציג מייצג כאשר גדל בתרבות דו-ממדית בכלי פלסטיק, אשר מסכות הפוטנציאל החזוי הקליני שלהם כאשר חוקרים מנסים לקבוע את טיפולים שעשויים להיות יעילים בחולים עם טופס מסוים או גנוטיפ של מלנומה6. הבנת כיצד החולה המודל הטוב ביותר intratumoral טרוגניות יאפשר לחוקרים לפתח בצורה טובה יותר שיטות טיפוליות שיכולות להרוג אוכלוסיות משנה עמידים לטיפול כי כישלון לתקן הנוכחי של טיפול טיפולים.
פרמאונט לערך ניבוי מוגבל של דגמי קו התא הוא כיצד הם הוקמו בתחילה. שינויים בלתי הפיכה להתרחש בנוף שבטיים הגידול כאשר השעיה תא יחיד של הגידול של החולים גדל על דו מימדי, רקמה פלסטית כלי התרבות, כולל שינויים בפוטנציאל מתרבים ופולשני, חיסול של ספציפי אוכלוסיות משנה, ושינוי של מידע גנטי7. Xenografts לתוך עכברים אלה קו מלנומה תא מודלים לייצג את הנפוץ ביותר בפלטפורמת vivo עבור מחקרים קדם קלינית; עם זאת, אסטרטגיה זו גם סובלת לכידה המסכן של גידול מורכב טרוגניות נצפתה קלינית. כדי להתגבר על זה מגיע, יש כבר עניין גדל והולך שילוב מודלים פרה מתוחכמים יותר של מלנומה, כולל מודל pdx. PDX מודלים כבר מנוצל עבור > 30 שנים, עם מחקרים הזרע בחולי סרטן ריאות הפגינו הקונקורדנציה בין התגובה של המטופלים לסוכני ציטוטוקסיים ואת התגובה של מודל PDX נגזר מאותו מטופל8. לאחרונה, יש כבר כונן להשתמש במודלים PDX ככלי הבחירה לחקירות קדם קלינית הן בתעשייה והן במרכזים אקדמיים. PDX מודלים, בגלל לכידה מעולה שלהם של טרוגניות הגידול בחולים אנושיים, הם רלוונטיים יותר קלינית לשימוש במאמצי אופטימיזציה טיפול מאשר קו התאים xenografts תלי9. ב מלנומה, יש מכשולים עצומים כי בוטה הניהול הטיפולית של מחלה מתקדמת10. מודלים קלינית רלוונטיים pdx שימשו למודל עמידות קלינית לזהות אסטרטגיות טיפוליות עם סוכנים זמינים קלינית לטיפול בגידולים עמידים בפני11,12. בקצרה, הפרוטוקול המוצג כאן כדי ליצור מודלים PDX דורש השרטת תת עורית של רקמה טרייה של מלנומה הראשי או גרורתי (שנאסף על ידי ביופסיה או ניתוח) לתוך בנוד/scid/IL2-לקולטן null (NSG) עכברים. וריאציות שונות בגישה מתודולוגי משמשות קבוצות שונות; עם זאת, ליבת יסוד קיימת13.

<table><tbody><tr><td>1 מ 'Hepes</td><td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td><td>CAT # H0887-100ML</td><td></td></tr><tr><td>100x PenStrep&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>Cat # 15140163</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS-/- (w/o Ca++ או Mg++)</td><td>MED</td><td>Cat # MT21-023-CV</td><td></td></tr><tr><td>2.5% טריפסין&nbsp;</td><td>תאגיד סיגמא-אולדריץ'</td><td>חתול # T4549-100 מ"ל</td><td>10 מ"ל אליקוטים מאוחסנים ב &ndash; 20oC</td></tr><tr><td>BSA</td><td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td><td>חתול # A9418-500G</td><td></td></tr><tr><td>כלורהקסידין</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>חתול # 50-118-0313</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז IV (2,000 u/mL)</td><td>וורת'ינגטון&nbsp;</td><td>Cat #4189</td><td>מפצה ב-HBSS-/- ממלאי אבקת קולגנאז IV (Worthington #4189, u/mg מצוין על הבקבוק ומשתנה עם כל אצווה); להקפיא 1</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td><td>Cat # C6295-50ML</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td><td>Cat # D4527</td><td></td></tr><tr><td>EGTA (אתילן גליקול ביס(2-אתר אמינואתיל)-N,N,N' חומצה N'-טטראצטית)</td><td>Merck</td><td>Cat # 324626.25</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td><td>Cat # 16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES</td><td>Cat # 15290-018</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>FISHER SCIENTIFIC</td><td>CAT # BW17518Z</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים</td><td>חתול # 050031</td><td></td></tr><tr><td>מדיית L15 של לייבוביץ&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>Cat # 21083027</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>Cat # 354230</td><td>מטריצה חוץ-תאית מלאכותית</td></tr><tr><td>מלוקסיקם</td><td>HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTHRequisition # ::Henry Schein</td><td>Cat # 025115</td><td>1-5 מ"ג/ק"ג, כמשכך כאבים</td></tr><tr><td>NOD/SCID/IL2-קולטן null (NSG) עכברים מכון</td><td>וויסטאר, גידול PVA</td><td></td>(אלכוהול פוליוויניל) במתקן <td></td> לבעלי חיים</tr><tr><td>.</td><td>SIGMA-ALDRICH CORPORATION</td><td>CAT # P8136-250G</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני (מוד) 1X עם L-גלוטמין</td><td>פישר מדעי</td><td>חתול# MT10041CM</td><td></td></tr><tr><td>חתול נוצות</td><td>אזמל</td><td># 2976-22</td><td></td></tr><tr><td>Virkon</td><td>GALLARD-SCHLESINGER IND</td><td>Cat # 222-01-06</td><td></td></tr><tr><td>קליפים לפצעים</td><td>MikRon</td><td>Cat #427631</td><td></td></tr></tbody></table>

מלנומה מטופלת-נגזר מודל xenograft

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

צבירת ראיות עולה כי תכונות מולקולריות וביולוגיות שונות בתאי מלנומה גדל בתוך כלי התרבות המסורתית דו מימדי רקמות לעומת בvivo בחולים אנושיים. זה בשל בחירת צוואר הבקבוק של אוכלוסיות שבטים של תאים מלנומה שיכול לצמוח ברוטי בחוץ בהעדר מצבים פיזיולוגיים. עוד, התגובות טיפול בתרבויות דו מימדי רקמות הכולל לא בנאמנות לשקף התגובות טיפול בחולי מלנומה, עם רוב הניסויים הקליניים נכשל להראות את היעילות של שילובים טיפוליים המוצג להיות יעיל ב מבחנה. למרות שתלה שתלה של תאים מלנומה לתוך עכברים מספק את הפיסיולוגיים בהקשר vivo נעדר משני מימדי התרבות רקמה, התאים מלנומה המשמשים לחרט כבר עברו בחירת צוואר בקבוק עבור תאים שיכולים לצמוח תחת תנאים דו-ממדיים כאשר קו התא הוקם. השינויים הבלתי הפיכה המתרחשים כתוצאה של צוואר הבקבוק כוללים שינויים במאפייני הצמיחה והפלישה, כמו גם הפסד של אוכלוסיות משנה ספציפיות. לכן, מודלים כי טוב יותר ללכוד את המצב האנושי vivo אולי טוב יותר לנבא אסטרטגיות טיפוליות המגבירים ביעילות את ההישרדות הכוללת של חולים עם מלנומה גרורתית. המטופל נגזר מבע (pdx) טכניקה כרוכה השרשה ישירה של תאים סרטניים מהמטופל האנושי לנמען העכבר. באופן זה, תאים סרטניים גדלים בעקביות תחת מתחים פיזיולוגיים בvivo ולעולם לא לעבור בקבוק דו מימדי, אשר שומר על המאפיינים המולקולריים והביולוגיים נוכח כאשר הגידול היה החולה האנושי. הבולטים, PDX מודלים נגזר מאתרי איברים של גרורות (כלומר, המוח) להציג קיבולת גרורתית דומה, בעוד מודלים PDX נגזר מחולים תמימים תרפיה וחולים עם עמידות לטיפול (כלומר, BRAF/מעכב מעכבי טיפול) להציג רגישות דומה לטיפול.

רקמת הגידול עבור מלנומה PDX מודלים יכול לבוא ממגוון של מקורות שונים, יכול גם להיות מעובד לפי הדינמיקה הצמיחה של מודלים בודדים את השימוש הרצוי של רקמת PDX. העדיפות בעת יצירת מודל PDX היא לקבל חומר מספיק לבנק לשימוש עתידי DNA לאפיון (איור 1).
פעם מספיק חומר הוא הפקידה, רקמת הגידול ניתן להרחיב באחת משלוש שיטות עיקריות כדי לגדול גידול מספיק כדי לבצע מחקר טיפול פורמלי (איור 2א). כל אחת מהשיטות המתוארות במסמך זה תאפשר הרחבת...

המטופל נגזר מבע (pdx) דגמים נוספים ביותר בסדר מלנומה מולקולרית תכונות ביולוגיות, הם ניבוי יותר של תגובת הטיפול לעומת רקמה פלסטית מסורתית התרבות מבוסס assays. כאן אנו מתארים את פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטית שלנו להקמת דגמי PDX חדשים ואפיון/ניסויים של דגמי PDX קיימים.

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

PDX חוללה מהפכה במחקרים הקדם-קליניים הניסיוניים לסרטן. עכשיו אנחנו יכולים לחקות, במעבדה, את מה שקורה בחולים. ועכשיו אנחנו יכולים לעבוד על איך להתגבר על ההתנגדות ואיך, על הקדנציה הארוכה, אנחנו יכולים להגדיל את ההישרדות של חולים.הדגמת ההליך תהיה מין שיאו. כדי להתחיל, להעביר רקמת מלנומה שנאספו בעבר לצלחת פטרי סטרילית. עבודה עם מספריים כירורגיים, להב אזמל, מדפים, תחילה להסיר רקמה נורמלית מן הרקמה הרגילה ככל האפשר.ואז להסיר את הרקמה הנקרוטית מזוהה על ידי רקמה לבנה חיוורת הממוקמת במרכז בתוך הגידול. לאחר מכן השתמש אזמל כדי subdivide נתח הגידול הראשוני לתוך חתיכות שוות בקירוב עבור השתלת עכבר כירורגית. אם רקמת הגידול קשה מדי עבור דיסוציאציה מכנית, להשתמש באזמל כדי לטחון את נתחי הגידול דק ככל האפשר כדי ליצור תרחיף.מעבירים את התבלינים לצינור של 50 מיליליטר עם תווי מלח מאוזנים קרים של האנק ללא יוני סידן ומגנזיום. צנטריפוגה ב 220 פעמים g במשך ארבע דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הסרת supernatant, להשעות מחדש את תרחיף ב 10 מיליליטר של מחומם, טרי לעכל מדיה לכל גרם אחד של רקמת הגידול.מניחים את הצינור באמבט מים 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות ומערבבים במרץ כל חמש דקות עם פיפטה חד פעמית. לשטוף את תרחיף באמצעות עד 50 מיליליטר של HBSS, צנטריפוגה ב 220 פעמים g במשך ארבע דקות בארבע מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להסיר את העל טבעי. מוסיפים חמישה מיליליטר של חיץ TEG מחומם מראש לגרם אחד של רקמת הגידול, לנער כדי להשעות מחדש בעדינות, ולמקום את הצינור ב 37 מעלות צלזיוס במשך שתי דקות, ללא ערבוב.כדי להתרווה טריפסין, להוסיף לפחות נפח שווה אחד של מדיה מכתים קר צנטריפוגה ב 220 פעמים g במשך ארבע דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הסרת supernatant, להוסיף 10 מיליליטר של מדיה מכתים לכל גרם אחד של רקמת הגידול, ולהשעות מחדש את גלולה על ידי צינור למעלה ולמטה. לסנן אותו דרך מסננת תא 40 מיקרומטר כדי לקבל השעיה תא יחיד להזרקת עכבר.כדי להשתיל כריתה כירורגית או רקמת ביופסיה כירורגית, ראשית לגלח את השיער מהגב התחתון של NSG שישה עד שמונה שבועות עכברים הרדמה, משאיר כ 1.5 ס"מ עד שלושה סנטימטרים שטח ללא שיער. הכינו נתחי גידול, וחלקו תרחיף גידולים בפטרי לתלים בודדים להשתלה כירורגית. באמצעות להב אזמל, לבצע חתך באורך כחמישה מילימטרים על מרכז החלק האחורי של העכבר.עם זוג אחד של מדפים, חיים את העור בצד החתך מול המפעיל. עם מספריים ביד השנייה, להפריד את העור משכבת השריר על ידי חיתוך בעדינות את קרום fascial עם חתכים מספריים קטנים, ובכך ליצור כיס עבור רקמת הגידול. השתמש בלהב אזמל להרים צ'אק גידול אחד, כמו גם תל אחד בודדים של רקמת תרחיף הגידול, בעדינות למקם את הרקמה לתוך הכיס שנוצר.לאחר מכן להוסיף 100 microliters של מטריצה חוץ תאית מלאכותית על התל רקמת הגידול בכיס. באמצעות שני זוגות של מעצורים, למשוך את החתך בשני הקצוות, כך קצוות הפצע להתקרב זה לזה. לאחר מכן להחיל אחד או שניים פצע קליפים כדי לסגור את הפצע.באופן תת עורי להזריק אחד עד חמישה מיליגרם לקילוגרם של משכך כאבים. כאשר הריפוי הוא לחלוטין, לאחר כשבעה ימים, להסיר את קליפים הפצע. לפקח על עכברים פעם בשבוע כדי לבדוק גידולים מוחשיים.לאחר גידולים להגיע לנפח הרצוי, להשתמש מדפים כירורגיים כדי להרים את העור סמוך לגידול של העכבר המתת דם ולעשות חתך אופקי באמצעות מספריים מעוקל. השתמש בטכניקת הפרדה בוטה כדי לגייס את העור משני צידי הגידול ועל הגידול, חושף את הגידול. השתמש מספריים להב אזמל כדי להפריד את הגידול מן fascia.חותכים את הגידול ומעבירים אותו לצלחת פטרי סטרילית. חותכים את הגידול לחתיכות קטנות ולהסיר רקמה נמקית מהגידול. כדי לבנק רקמת הגידול להשתלה עתידית, לקחת שתיים עד שלוש חתיכות גידול קטנות טחון אותם לחתיכות קטנות יותר מאחד על אחד מילימטר.מעבירים את כל הרקמה הטחון לתועבה קריוגנית של שני מיליליטר. מוסיפים מיליליטר אחד של מדיה קפואה ומערבבים היטב. מניחים את הבקבוקונים לתוך מיכל הקפאת תאים מקורר מראש על קרח יבש, מאחסנים את המיכל במקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס לילה, ולאחר מכן מעבירים את הבקבוקונים לאחסון חנקן נוזלי.כדי לשבור את רקמת ההקפאה עבור assays במורד הזרם, למקם את חתיכות רקמת הגידול לתוך בקבוקון קריוגני, לשים את הנתעב קריוגניים בחנקן נוזלי מיד, ולאחסן את הבקבוקונים במקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס. כאשר שלוש שיטות שונות של גידול רקמת הגידול הושוו, השעיה של תא יחיד של תאים סרטניים עם השימוש בעיכול אנזימטי היה מוצלח ביותר. מלבד מתן אפשרות לצמיחה מהירה יותר של הגידול, זה היה גם מספיק עבור גידול ראשוני אחד להיות מורחב לתוך 10 עד 20 עכברים, ואילו צ'אק הגידול שיטת תרחיף ניתן להרחיב רק לתוך חמישה עד 10 עכברים.מודלים קסנוגרפט שמקורם במלנומה המטופל לעתים קרובות משקפים את הרגישות לתרופות שהמטופל הפגין בעת הטיפול. קסנוגרפט שמקורו בחולה מלנומה שהגיב בתחילה למעכב BRAF, אך בסופו של דבר התדרדר, הפגין גם רגישות ראשונית לעיכוב חלבון BRAF, בתוספת מעכבי קינאז MEK, אך הגידולים בסופו של דבר התדרדרו. זה קריטי לטפל בעת הכנת רקמת PDX לבנקאות, כמו זה יבטיח הצלחה הרחבות PDX בעתיד, ניסויים טיפוליים, כמו גם אפיון.עם חומר PDX, רצף RNA של תא יחיד, רצף exome שלם, ואפיון פרוטומי, הם בין השיטות הרבות שהמעבדה שלנו ממנפת כדי לנתח התנגדות לטיפול. טכניקת PDX מאפשרת לחוקרים לחקור עמידות טיפולית באמצעות תאים סרטניים אשר טוב יותר לסכם את הביולוגיה הגידול בחולה אנושי יחסית מודלים סרטניים מסורתיים גדל על פלסטיק. יתרון זה מאפשר תובנות חזויות יותר.החוקרים צריכים תמיד לטפל ולהשתמש באבטחה ביולוגית רמה שני אמצעי זהירות בעת טיפול רקמת הגידול נגזר חולה אנושי.

a-melanoma-patient-derived-xenograft-model

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בסרטון זה, תאי מלנומה שמקורם בבני אדם מושתלים באופן תת-עורי באזור האגף של עכבר מדוכא חיסון. מודל PDX מאפשר חקירה פרה-קלינית של תאי מלנומה המשחזרים טוב יותר את ההטרוגניות של הגידול ואת אגרסיביות המלנומה שנצפתה בתנאי in vivo.

מידול Xenograft הנגזר מהמטופל: טכניקה ליצירת מודלים של עכברי מלנומה

סרטון זה מתאר את השיטה להשתלת תאי גידול ממודל דג הזברה התורם נושא המלנומה למושתל מדוכא חיסון דג זברה קספר. זה עוזר לדמיין קליטת הגידול והתפשטות בדגים הנמען.

בדיקת השתלה תת עורית: שיטה להשתלת תאי מלנומה מתורם למודל דג זברה מושתל

גרורות ממלאת תפקיד משמעותי באלימות הסרטן, ומהווה כ-90% ממקרי המוות.  אנו מדווחים על פרוטוקול למודל מלנומה גרורתית בעכברים השימושי לקביעת יעילותם של חומרים טיפוליים כנגד תופעה קלינית זו.

הזרקה של תאים syngeneic Murine מלנומה מנת לקבוע את פוטנציאל גרורתי שלהם בתוך הריאות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת 3D organotypic מלנומה ספרואיד העור מודל recapitulates הן את הארכיטקטורה ואת multicellular המורכבות של איברים/גידול של ויוו , אבל באותו זמן מסתגלת שיטתית ניסיוני התערבות.

מודל העור מלנומה Organotypic 3D ספרואיד

אורתופון האדם גרורות הכבד uveal מלנומה מבע מודלים העכבר נוצרו באמצעות שיטות כירורגי אורתוקפית עם קטע הגידול המטופל נגזר וטכניקות הזרקת מחט עם הגוף האנושי תרבותי שורות מלנומה.

הדור של מלנומה האדם Uveal האנושי פלטפורמת Xהשתל בעכברים חיסוני

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לבדוק את היעילות של טיפולים ייעודיים שנבחרו על בסיס האיפור גנומית של הגידול. הפרוטוקול מתאר זיהוי ואימות של הסדרים מבניים של ה-DNA, חרט גידולים של חולים לתוך עכברים והתגובות בדיקה לתרופות המתאימות.

בדיקת טיפולים ייעודיים בסרטן באמצעות ניתוח שינוי DNA מבנית והמטופל נגזר Xenografts

אנו מציגים פרוטוקול מפורט כדי ליצור מודל קסנוגרפט murine של מום ורדי. מודל זה מבוסס על הזרקה תת עורית של תאים אנדותל נגזר המטופל המכיל HYPER-activating TIE2 ו / או מוטציות גן PIK3CA. נגעים Xenograft מקרוב לסיכום התכונות ההיסטופתולוגיות של רקמת חולה VM.

מודל קסנוגרפט נגזר ממטופל למום ורדי

גרורות במערכת העצבים המרכזית מודלים PDX מייצגים את המאפיינים הפנוטיפיים והמולקולריים של גרורות אנושיות, מה שהופך אותם למודלים מצוינים למחקרים פרה-קליניים. מתואר כאן כיצד לבסס מודלים PDX ואת מסלולי החיסון המשמשים בצורה הטובה ביותר למחקרים פרה-קליניים.

הקמה וניצול של מודלים Xenograft נגזר המטופל של גרורות במערכת העצבים המרכזית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתיל עור אנושי בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD)-scid interleukin-2 קולטן שרשרת גמא (NSG). בדו"ח נכללים תיאור מפורט של הכנת עור אדם להשתלה, הכנת עכברים להשתלה, השתלת עור אדם בעובי מפוצל והליך התאוששות לאחר ההשתלה.

מודל Xenograft לעור למניפולציה של תגובות חיסוניות אנושיות in vivo

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השיטה לביסוס מודל עכבר קסנוגרפט (PDX) הנגזר ממטופל באמצעות רקמת אוסטאוסרקומה אנושית.

הקמת מודל עכבר Xenograft שמקורו במטופל עם רקמות אוסטאוסרקומה אנושיות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה על ידי תרבית תרחיפים של תאים מנותקים מרקמות מלנומה טרייה. אורגנואידים אלה משחזרים בנאמנות גידולים ספציפיים למטופל במבחנה, ומציעים גישה חדשנית לחקר מנגנוני דיכוי החיסון של הגידול, בדיקות סקר לתרופות, מנגנוני עמידות לתרופות וגישות מעקב אחר סרטן.

חשיפת הזדמנויות טיפוליות עם מודלים אורגנואידים שמקורם בחולה מלנומה

למד כיצד להקים מודלי PDX למלנומה באמצעות השתלת רקמת גידול בעכברים. שיטה זו משפרת את היכולת לחזות תגובות לטיפול ולהבין מנגנוני התנגדות בביולוגיה של הגידול.

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

גלה סרטונים נוספים