Name: היבט טכני של סינתזה אוטומטי הערכה בזמן אמת קינטי של 11ג הצמד-7941 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: חקור סינתזה אוטומטית של תרכובות מסומנות בפחמן-11 לדימות PET בזמן אמת. שיטה זו מאפשרת הערכת קינטיקת קישור לקולטנים בתאים מבטאי P-gp ולא מבטאים, ומסייעת בפיתוח תרופות רדיופרמצבטיות לחקר מחלות מטבוליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו הייתה נתמכת על ידי הקרן האוסטרית למדע (FWF P26502-B24, מ. מיטטרהאוזר). אנו אסירי תודה על התמיכה הטכנית של T. Zenz ו-A. Krcal. יתרה מזאת, אנו מודים לג פלטיץ ' על הכנת ההאגוtf ו-ה. ספרצר להפצת הקודמן.

<ol><li>Saito, Y., Maruyama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+melanin-concentrating+hormone+receptor+and+its+impact+on+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Identification of melanin-concentrating hormone receptor and its impact on drug discovery.</a> Journal of Experimental Zoology. 305, 761-768 (2006).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+in+vitro+%26+in+vivo+evaluation+of+%5B11C%5DSNAP-7941+-+the+first+PET+tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Preclinical in vitro & in vivo evaluation of [11C]SNAP-7941 - the first PET tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1.</a> Nuclear Medicine and Biology. 40, 919-925 (2013).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosynthesis+of+%5B+11C%5DSNAP-7941-the+first+PET-tracer+for+the+melanin+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied.+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Radiosynthesis of [ 11C]SNAP-7941-the first PET-tracer for the melanin concentrating hormone receptor 1 (MCHR1).</a> Applied. Radiation and Isotopes. 70, 2287-2294 (2012).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNAPshots+of+the+MCHR1%E2%80%AF%3A+a+Comparison+Between+the+PET-Tracers+%5B+18+F+%5D+FE+%40+SNAP+and+%5B+11+C+%5D+SNAP-7941%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+Biology%22%5BJournal%5D)">SNAPshots of the MCHR1 : a Comparison Between the PET-Tracers [ 18 F ] FE @ SNAP and [ 11 C ] SNAP-7941.</a> Molecular Imaging Biology. , 1-12 (2018).</li>
<li>Schirmer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses+of+precursors+and+reference+compounds+of+the+melanin-+concentrating+hormone+receptor+1+%28MCHR1%29+Tracers+%5B11C%5DSNAP-7941+and+%5B18F%5DFE%40SNAP+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Syntheses of precursors and reference compounds of the melanin- concentrating hormone receptor 1 (MCHR1) Tracers [11C]SNAP-7941 and [18F]FE@SNAP for positron emission tomography.</a> Molecules. 18, 12119-12143 (2013).</li>
<li>Miller, P. W., Long, N. J., Vilar, R., Gee, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthese+von+11C-%2C+18F-%2C+15O-+und+13N-Radiotracern+f%C3%BCr+die+Positronenemissionstomographie%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie%22%5BJournal%5D)">Synthese von 11C-, 18F-, 15O- und 13N-Radiotracern für die Positronenemissionstomographie.</a> Angewandte Chemie. 120, 9136-9172 (2008).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+PET+radiochemistry%3A+part+1+-+covalent+labels+-+18+F%2C+11+C%2C+and+13+N%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">An overview on PET radiochemistry: part 1 - covalent labels - 18 F, 11 C, and 13 N.</a> Journal of Nuclear Medicine. 59, 1350-1354 (2018).</li>
<li>Pichler, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molar+activity+-+The+keystone+in+11C-radiochemistry%3A+An+explorative+study+using+the+gas+phase+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Molar activity - The keystone in 11C-radiochemistry: An explorative study using the gas phase method.</a> Nuclear Medicine and Biology. 67, 21-26 (2018).</li>
<li>Larsen, P., Ulin, J., Dahlstrøm, K., Jensen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%5B11C%5Diodomethane+by+iodination+of+%5B11C%5Dmethane%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Radiation+and+Isotopes%22%5BJournal%5D)">Synthesis of [11C]iodomethane by iodination of [11C]methane.</a> Applied Radiation and Isotopes. 48, 153-157 (1997).</li>
<li>Dahl, K., Halldin, C., Schou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+methodologies+for+the+preparation+of+carbon-11+labeled+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Translational+Imaging%22%5BJournal%5D)">New methodologies for the preparation of carbon-11 labeled radiopharmaceuticals.</a> Clinical and Translational Imaging. 5, 275-289 (2017).</li>
<li>Raaphorst, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiopharmaceuticals+for+assessing+ABC+transporters+at+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical.+Pharmacollogy+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Radiopharmaceuticals for assessing ABC transporters at the blood-brain barrier.</a> Clinical. Pharmacollogy & Therapeutics. 97, 362-371 (2015).</li>
<li>Nics, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Speed+matters+to+raise+molar+radioactivity%3A+Fast+HPLC+shortens+the+quality+control+of+C-11+PET-tracers%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Speed matters to raise molar radioactivity: Fast HPLC shortens the quality control of C-11 PET-tracers.</a> Nuclear Medicine and Biology. 57, 28-33 (2018).</li>
<li>Zeilinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+for+the+reliable+in+vitro+assessment+of+binding+affinity+based+on+high-resolution+real-time+data+acquisition+of+radioligand-receptor+binding+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging+%28Research%29%22%5BJournal%5D)">New approaches for the reliable in vitro assessment of binding affinity based on high-resolution real-time data acquisition of radioligand-receptor binding kinetics.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging (Research). 7, 22(2017).</li>
</ol>

. אין לנו מה לגלות

הרדיוסינתזה של [11ג] SNAP-7941 הוקמה על מודול סינתזה מסחרית. בשל האפשרות להפוך את הליך ההכנה לאוטומטי לחלוטין, יש לאפשר את הרדיוסינתזה להיות אמינה, ושיפורים לגבי הגנת הקרינה של המפעיל הושגו. להכנת הסינתיסייזר יש השפעה עצומה על איכות מכשיר הרדיו, במיוחד במונחים של פעילות טוחנת. כך, חיוני לעבוד כל הזמן תחת תנאים אינרטי (למשל, אווירת הליום), ולרוקן את כל הקווים הממוקמים לפני כלי התגובה (קו היעד, [11ג] CH3אני מחזור הייצור והכור (ראה איור 2)). יתר על כן, חימום המלכודות והתנורים המתאימים לפני תחילת הסינתזה להסיר לחות הפחמן אטמוספרי מגביר את הפעילות הטוחנת יתרון. במיוחד העמודה agotf, ספוג עם פחמן גרפיט חשמליים הוא רגיש מאוד לחות. אפילו כמויות זעירות של כל מקור לחות להפריע ההמרה של [11ג] ch3אני ל [11ג] ch3otf. לפני שמתחילים את הסינתזה, את המלכודת [11ג] CO2 ו-[11ג] CH3אני צריך להיות מקורר לטמפרטורת החדר שוב כדי לאפשר השמנה הבאים. יתר על כן, מומלץ לפזר את הקודמן זמן קצר לפני התחלת סינתזה להוסיף את הבסיס ישירות לתוך הפתרון מקודמן.
בקרת איכות עבור מכשירי הרדיו פחמן -11 צריך להיות מתוכנן באופן רציונלי עבור זרימת עבודה רציפה ומהירה. עם זאת, הפרמטרים החשובים ביותר עבור לימודי תרבות התא הם טוהר רדיוכימיקלים ופעילות טוחנת כדי להשיג תוצאות חוקיות. הערכה נכונה של פעילות הטוחנת דורשת שיטת אבחון אנליטית איתנה ועקומת הכיול צריכה לכסות את טווח הריכוז של המוצר הסופי. החלק המאתגר לרדיומשדרים הוא להשיג ריכוז מעל גבול הכמת (LOQ) בשל כמויות קטנות, המיוצרים במהלך הרדיוסינתזה. מכאן, האמנות היא למצוא את האיזון בין פעילויות הטוחנת גבוהה כדי למנוע רוויית קולטן וריכוזים גבוהים מספיק כדי עדיין להיות מסוגל לכמת את האות הלא רדיואקטיבי.
[11ג] SNAP-7941 אושרה להיות מצע חזק של הטרנספורטר P-gp האנושי, כמו הצטברות לא נצפתה הטיפול מטופל או הרכב MDCKII-hMDR1 בתאים בשל מהיר מאוד. לעומת זאת, שניהם מערכת ניסיונית ups (MDCKII-WT או טרום חסם MDCKII-hMDR1 תאים) סיפק תוצאות דומות (הצטברות של [11ג] SNAP-7941), תמיכה הצדדיות של זה בתוך שיטת מבחנה. MDCKII-hMDR1 תאים מתאימים מאוד עבור ניסויים ליגאנדנותב בשל ההתפתחות היציבה שלהם, צמיחה מהירה ומתמשך נגד הטיית מתח הנגרמת על ידי צלחת התרבות מסתובבת התא. העדר [11ג] הצמדה-7941 ספיגת במוח עכברוש ועכברים עלול אפוא להתרחש כתוצאה מכך על ידי לאחר מוביל P-gp. בשל העברה של תאים כליות הכלב עם החלבון האנושי רב התנגדות התרופה 1 (hMDR-1, P-gp), את הערך החזוי של שיטה זו לכריכה טרנספורטר מוביל בבני אדם הוא גבוה, אשר מבחינה חיובית במונחים של יישום קליני עתידי. עם זאת, עד כה, הסלקטיביות נגד טרנספורטר אחרים לא אומתה. לכן, קווי תאים אחרים ניתן להשתמש, ביטוי שונים מובילים בולטים של מובילי כמו סרטן השד התנגדות חלבון (BCRP) או התנגדות מרובים חלבון -1 (MRP-1), כדי ללמוד אינטראקציות כלפי מובילים אלה. השיטה הינה בהשוואה להצטברות קלאסית או להובלה מאוד פשוטה ומעניקה תוצאות איכותיות באופן מיידי. יתר על כן, היתרון הגדול ביותר הוא כי טכנולוגיה זו מאפשרת הערכה של אינטראקציה ישירה של מעקב PET ואת המטרה בזמן אמת, בניגוד לניסוי קונבנציונאלי באמצעות כימות עקיפה (בעיקר עקירה). בנוסף, התוכנה בזמן אמת מספקת את הגמישות הניסיונית (למשל, תיקון ריקבון נוקליד, מדידת זמן ומיקומים, וכו ') ולכן, חופש גבוה עבור משתמשים. בצד השני, מגבלות השיטה כוללות תפוקת דגימה נמוכה, כאשר ניתן למדוד רק צלחת תא אחת בכל פעם. יתרה מזאת, יש לקחת בחשבון עוד כמה סוגיות טכניות ומבצעיות: הטכנולוגיה המתוארת רגישה מאוד לקרינת הרקע; לפיכך, יש לשמור על מקורות קרינה במרחק ודגש על מדידת הרקע לפני הניסוי. בעיה נוספת בנוגע לניסויים בטמפרטורות גבוהות יותר מטמפרטורת החדר, היא החימום של התמיכה הנוטה: התאיידות של מדיום התרבות התאית עשויה להשפיע על הגלאי. במקום חימום, המכשיר כולו רצוי ממוקם לתוך החממה. כמו-כן, השיטה מוגבלת לקווי תאים מחסיד. דרך הסיבוב של הצלחת תרבות התא, להטות את הלחץ תאים רגישים יכול להתנתק ממנה, אשר יכול להוביל לתוצאות לא חוקיות.
אף על פי כן, אם הניסיונית מקדיש תשומת לב לחסרונות אלה קטין השיטה מספקת תוצאות מהירות ואמינות לניתוח של התנהגות קינטית של מנותבים לחיות מחמד טרום קלינית.

[11ג] SNAP-7941 התפתח כטומוגרפיה פליטת פוזיטרון הראשון (PET)-מעקב מיקוד המלנין-ריכוז קולטן הורמון 1 (MCHR1)-קולטן מעורב בעיקר בוויסות המרכזי של תיאבון וצריכת מזון1. פחמן -11 תוויות של SNAP-7941, יריב מאופיין היטב MCHR1, הניב את מעקב המחמד אותנטי2,3,4,5. עם זאת, רדיוסינתזה אוטומטית לחלוטין הוא מאוד מאתגר במונחים של יעילות הזמן והשדועות עם הפחמן הקצר החיים הרדיו -11 מציע מחצית חיים של 20 דקות6. זמן סינתזה הכולל צריך להישמר למינימום, וככלל האגודל לא צריך לחרוג 2-3 מחצית חיים (כלומר, סביב 40-60 דקות עבור פחמן -11)7. במיוחד, הליכי סינתזה עבור רדיומשדרים לפילוח מערכות הקולטן עם צפיפויות ביטוי נמוך חייב להיות ממוטב בהרחבה כדי לקבל תשואות מספיקות וכתוצאה מכך פעילות טוחנת גבוהה8. האסטרטגיה הסינתטית מלווה לעתים קרובות את ייצור רדיונוקלידה בתוך ציקלוטרון ושחרורו של [11ג] CO2 לסינתיסייזר. שם, [11ג] CO2 מופחת לראשונה ל[11ג]ch 4 ולאחר מכן הגיב עם יוד כדי להיכנע [11ג] ch3אני דרך השיטה בשלב הגז9,10. טיפול נוסף עם תשואות triflate כסף [11ג] CH3otf ישירות מקוון. לאחר מכן, זה הפחמן התגובתי-11 ביניים המסומנת מוצג פתרון המכיל את המולקולה הקודמן. רדיוסינתזה אוטומטית בנוסף כרוך תהליך טיהור עם למחצה המוכן RP-כולל הניסוח הבאים של המוצר מתאים למחקרים פרה-קליניים וקליניים.
ללא קשר למחצית החיים של רדיונוקלידה ומאמץ הזמן של הרדיוסינתזה, הפרמקוקינטיות של radiopharmaceutical הוא החלק הקריטי ביותר להיות מוערך במהלך פיתוח מעקב PET. במונחים של דימות מוחי, כניסת המוח של מעקב PET היא תנאי הקדם העיקרי. עם זאת, מכשול המוח בדם (BBB), "גבול אבטחה" של המוח, מבטא במבטא מאוד מובילים שיכולים לפרוק מולקולות קטנות (כגון מחסומי PET) ולעכב ביעילות את הישימות שלהם.
חיסרון ענק במהלך הערכה טרום קלינית הם אינטראקציות בלתי צפויות לקראת מובילי האפלוקס האלה, אשר לעתים קרובות לא מוכרים בניסויים בתחום החוץ ומובילים לכישלון של מעקב PET ב vivo, כפי שנצפתה עבור [11ג] הצמד-7941. μPET הדמיה בחולדות הפגינו הצטברות המוח נמוך, אשר גדל באופן דרמטי לאחר הממשל של P-gp מעכבי מעכב11. נתונים אלה הראו כי [11ג] הצמד-7941 הוא מצע של מערכת טרנספורטר זה מחזיק לפני ליגקס וקשירה למרכז MCHR1. למרבה הצער, יש עדיין היעדר מספיק מודלים מחוץ לתחום המאפשר חיזוי החדירה BBB בשלב מוקדם של פיתוח מעקב.
כאן, אנו מתארים את הסינתזה האוטומטית של [11ג] הצמד-7941 באמצעות סינתיסייזר עבור מתיכי פחמן -11. הדגש של עבודה זו הוא לתת סקירה על איך לארגן גישה ניסיונית רציפה כולל סינתזה האוטומטי, בקרת איכות, כמו גם הערכה מחוץ למבחנה עם הפחמן הקצר מאוד החיים-11.
ראשית, מתוארים צעדי המפתח לרדיוסינתזה מוצלחת עם הוצאות זמן מינימליות ותשואה מירבית. לאחר מכן, הליך אמין בקרת איכות מוגדר להפוך את מעקב הרדיוזמין למחקרים קליניים פוטנציאליים לפגוש את הקריטריונים של הפרמקופיאה האירופית12. קוונפיקציה של ריכוז מולרי וחישוב של פעילות טוחנת המתאימים היא דרישה חיונית עבור מדידות קינטית רצופים.
לבסוף, מוצג חדש וישיר בשיטת הפריה חוץ גופית [11ג] SNAP-7941's האינטראקציה כלפי המשלח המעלוקס, P-Gp (hMDR1). מודל קינטי המוצע משתמש קל לטפל המכשיר המאפשר פרשנות נתונים מיידית ודורש תרבות התא מינימלי מאמץ13.

<table><tbody><tr><td><חזק>טבלה 1: רשימת החומרים והמכשור של הרדיוסינתזה האוטומטית לחלוטין של [11C]SNAP-7941</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ni</td><td>זרז Shimadzu, קיוטו, יפן</td><td></td><td>Shimalilte Ni מופחת, 80/100 רשת</td></tr><tr><td>יוד</td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>1.04761.0100</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>לסינתזת DNA, < 10 חל"מ H2O</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td></td> אמוניום אצטט <td>בדרגת HPLC</td></tr><tr><td></td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>אתנול קרחוני</td></tr><tr><td></td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>96%</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>B. Braun, Melsungen, גרמניה</td><td></td><td>0.9% </td></tr><tr><td>Tetrabutylammonium hydroxide</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td></td> מחסנית SPE <td>בדרגת HPLC</td></tr><tr><td></td><td>Waters, מילפורד, MA, ארה"ב</td><td></td><td>SepPak C18plus</td></tr><tr><td>עמודה RP-HPLC חצי הכנה</td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>Chromolith SemiPrep RP-18e, 100-10 מ"מ</td></tr><tr><td>Precolumn</td><td>Merck, דרמשטדט, גרמניה</td><td></td><td>Chromolith Guard RP-18e, 5-4.6 מ"מ</td></tr><tr><td>Precursor</td><td>אוניברסיטת וינה, אוסטריה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תרכובת ייחוס</td> SNAP-acid <td>אוניברסיטת וינה, אוסטריה</td><td></td><td>SNAP-7941</td></tr><tr><td>כסף trifluoromethanesulfonate</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graphpa GC</td><td>Alltech, דירפילד, אילינוי, ארה"ב</td><td></td><td>80/100 רשת</td></tr><tr><td>PET trace 860 cyclotron</td><td>GE Healthcare, אופסלה, שוודיה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>[11C]CO2 יעד לחץ גבוה</td><td>Air Liquide, וינה, אוסטריה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRACERlabFX2 C</td><td>GE Healthcare, אופסלה, שוודיה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N2 + 1% O2</td><td>Air Liquide, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>יעד גז</td></tr><tr><td>שם</td><td>חברה</td><td>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>טבלה 2: רשימת החומרים והמכשור של בקרת האיכות של [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Merck Hitachi LaChrom, L-7100</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (וינה, אוסטריה)</td><td></td><td>משאבת HPLC</td></tr><tr><td>Merck Hitachi, L7400</td><td>Hitachi Vantara Austria GmbH (טוקיו, יפן)</td><td></td><td>גלאי UV</td></tr><tr><td>NaI-radiodetector</td><td>Raytest (Straubenhardt, גרמניה)</td><td></td><td>NaI-radiodetector</td></tr><tr><td>Chromolith Performance RP-18e, 100-4.6 מ"מ</td><td>Merck (דרמשטדט, גרמניה)</td><td></td><td>עמודת HPLC</td></tr><tr><td>430-GC</td><td>ברוקר (ברמן, גרמניה)</td><td></td><td>כרומטוגרף גז</td></tr><tr><td>עמודה נימית ID-BP20; 12 mx0.22 mmx0.25 מ"מ</td><td>SGE Ananlytical Science Pty. Ltd. (ויקטוריה, אוסטרליה)</td><td></td><td>נימי גז</td></tr><tr><td>Wesco, אוסמומטר Vapro 5600</td><td>Sanoya Medical Systems (וינה, אוסטריה)</td><td></td><td>אוסמומטר</td></tr><tr><td>g-ספקטרומטר</td><td></td><td></td><td>g-ספקטרומטר</td></tr><tr><td>תוכנה לבקרת כרומטוגרפיה של גז</td><td>VARIAN (פאלו אלטו, קליפורניה, ארה"ב)</td><td></td><td>גלקסיה גרסה 1.9.302.952</td></tr><tr><td>תוכנת בקרת ספקטרומטר גמא</td><td>ORTEC (אוק רידג', טנסי, ארה"ב)</td><td></td><td>Maestro for Windows גרסה 6.06</td></tr><tr><td>תוכנת אחזור ספקטרום גמא</td><td>ORTEC (אוק רידג', טנסי, ארה"ב)</td><td></td><td>Winplots גרסה 3.21</td></tr><tr><td>תוכנת בקרת HPLC</td><td>Raytest (Straubenhardt, גרמניה)</td><td></td><td>ג'ינה סטאר גרסה 5.9</td></tr><tr><td>inolab 740</td><td>WTW (Weilheim, גרמניה)</td><td></td><td>מד pH</td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td><חזק>טבלה 3: רשימת חומרים ומכשור להערכת ההתנהגות הקינטית בזמן אמת של [11C]SNAP-7941.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Madin-Darby קו תאי כליה של כלבים (MDCKII-hMDR1)</td><td>מכון הסרטן ההולנדי (NKI, אמסטרדם, הולנד)</td><td></td><td>מבטא את ה-P-גליקופרוטאין האנושי (hMDR1)</td></tr><tr><td>קו תאי הכליה של כלבי Madin-Darby (MDCKII-WT)</td><td>המכון ההולנדי לסרטן (NKI, אמסטרדם, הולנד)</td><td></td><td>Wildtype (WT)</td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Gibco 10270-106</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Gibco 15140</td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, גרמניה</td><td></td><td>Cellstar 100 מ"מ x 20 מ"מ, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>in vitro ניסויים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM GlutaMAX</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Gibco 61965-026</td></tr><tr><td>(&plusmn;)-Verapamil hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)</td><td></td><td>276855-100 מ"ל</td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, גרמניה</td><td></td><td>Cellstar 100 מ"מ x 20 מ"מ, Mfr.No. 664160</td></tr><tr><td>פיפטות פלסטיק חד פעמיות סטריליות</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Sterilin, 5 מ"ל &ndash; 25 mL</td></tr><tr><td>קצות פיפטה סטריליות</td><td>VWR International GmbH, וינה, אוסטריה</td><td></td><td>Eppendorf epT.I.P.S. Biopur 20 ומיקרו; L &ndash; 200 ומיקרו; </td></tr><tr><td>צלוחיות תרבית תאים</td><td>L Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, גרמניה</td><td></td><td>Cellstar 250 מ"ל, מכסה בורג מסנן 75 ס"מ2 red, Mfr.No.658175</td></tr><tr><td>בקרת LigandTracer גרסה 2.2.2</td><td>Ridgeview Instruments AB, אופסלה, שוודיה.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LigandTracer Yellow</td><td>Ridgeview Instruments AB, אופסלה, שבדיה.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LigandTracer White</td><td>Ridgeview Instruments AB, אופסלה, שוודיה.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad פריזמה 6.0</td><td>תוכנת GraphPad, בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מונה סלולרי אוטומטי כף יד</td><td>Millipore Corporation Billerica MA01821</td><td></td><td>Scepter (Cat.No. PHC00000)</td></tr> <tr><td>חיישני מונה תאים</td><td>Millipore Corporation Billerica MA01821</td><td></td><td>חיישן שרביט 60 ומיקרו; מ (Cat.No. PHCC60050)</td></tr></tbody></table>

היבט טכני של סינתזה אוטומטי הערכה בזמן אמת קינטי של [11ג] הצמד-7941

Technical Aspect of the Automated Synthesis and Real-Time Kinetic Evaluation of [11C]SNAP-7941

טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים (PET) היא טכניקת דימות מולקולרי חיוני המספקת תובנות למסלולים ושימוש ברדיולירים ממוקדים ספציפיים עבור חקירות vivo. בתוך פרוטוקול זה, חזק ואמין מרחוק מבוקרת רדיוסינתזה של [11ג] הצמד-7941, היריב הורמון ריכוז מלנין ההורמון 1, מתואר. הרדיוסינתזה מתחיל עם ציקלוטרון המיוצר [11ג] CO2 כי מאוחר יותר הגיב באמצעות מעבר שלב הגז ל [11ג] CH3otf. אז, זה ביניים תגובתי הוא הציג את הפתרון הקודמן וצורות מעקב הרדיו המתאים. כימיקלים, כמו גם הטוהר הרדיוכימית נקבעים באמצעות מכשירי הradiopharmaceutical, המיושמת באופן שגרתי בתהליך השליטה באיכות מעולה. בנוסף, הפעילות הטוחנת מחושבת כפי שהוא הכרח עבור החקירות הבאות בזמן אמת הקינטי. יתר על כן, [11ג] SNAP-7941 מוחל על MDCKII-WT ו Mdckii-hMDR1 תאים להערכת ההשפעה של p-גליקופרוטאין (p-gp) הביטוי על הצטברות תאים. מסיבה זו, P-gp ביטוי קו התאים (MDCKII-hMDR1) הוא משמש ללא או עם חסימה לפני ניסויים באמצעות המצע P-gp (±)-verapamil ואת התוצאות מושווה אלה שנצפו על התאים wildtype. הגישה הניסיונית הכוללת ממחיש את החשיבות של ניהול זמן מדויק, כי הוא חיוני עבור כל מחקר טרום קליני וקליני באמצעות המשדרים לחיות מחמד רדיאולבטיים עם nuclides קצר, כגון פחמן -11 (מחצית חיים: 20 דקות).

רדיוסינתזה האוטומטי המלא של [11ג] הצמד-7941 הניב 5.7 ± 2.5 GBq (4.6 ± 2.0% ב eob, 14.9 ± 5.9% מבוסס על [11ג] CH3otf; n = 10) של מוצר ניסח. הסינתזה הכללית נמשכה סביב 40 דקות, שם 15 דקות נדרשו להכנה של [11ג] CH3otf דרך השיטה בשלב הגז, עוד 5 דקות היו נחוצים עבור רדיויניום של הקודמן, ואחריו 10 דקות של חצי ההכנה הוצאת מחסנית מוצקה לסי18 וניסוח מוצק. לאחר מכן, a קטן (100-200 μL) נמסר לאדם האחראי על בקרת האיכות, בעוד בקבוקון המוצר המקורי המכיל את מעקב מוכן לשימוש הועבר לניסויים של ניתוח קינטי בזמן אמת.
בקרת איכות הושלמה בתוך 10 דקות לאחר סוף הסינתזה. הפעילות הטוחנת היתה בטווח של 72 ± 41 GBq/μמול (n = 10) וטוהר רדיוכימיקלים תמיד &gt; 95%. כל הפרמטרים האחרים (pH, אוסמאליות, שיורית ממיסים) מילאו את קריטריוני השחרור. עבור הטיפול הקינטי בזמן אמת, שלושה הגדרות ניסוי שונות נבחרו: (א) טיפל ולא טופלו (רכב) MDCKII-WT תאים, (ב) לא מטופלים או מטופלים עם רכב MDCKII-hMDR1 תאים ו (ג) קו התא האחרון עם חסימת לפני זמן אמת השיטה הקינטית של הטרנספורטר באמצעות (±)-verapamil. החלת [11ג] הצמד-7941 אל קו wildtype מסוג MDCKII-WT (p-gp לא ביטוי) ו Mdckii-HMDR1 (p-gp ביטוי) מראה התנהגות קינטית שונה, כמו יש הצטברות מהירה קו התאים wildtype, בעוד שאין הצטברות נצפתה עבור התאים MDCKII-hMDR1. עם זאת, חסימת P-gp המשלח inMDCKII-hMDR1 תאים עם (±)-verapamil הוביל לקינטי בזמן אמת דומה כפי שכבר נראה עבור קו התאים wildtype (איור 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig1.jpg"> איור 1: מבט כולל על זרימת העבודה. זרימת עבודה של רדיוסינתזה, בקרת איכות, וביצועים של מדידה קינטית בזמן אמת של [11ג] הצמד-7941. החיצים השחורים מציינים את. דרך ההובלה של הרדיואקטיביות <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig2.jpg"> איור 2: ערכה רדיוסינתטית של הסינתיסייזר האוטומטי. החלפת מעגל של הסינתיסייזר האוטומטי, החל ביחידת המחזור עבור [11ג] ch3I/[11ג] ch3הפקה otf, הכור למבוא של הפעילות לתוך הפתרון הקודמן וטיהור (spe = הפקת פאזה מוצקה; PCV = בקבוקון אוסף המוצרים). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig3.jpg"> איור 3: כרומטוגרמות מייצגים של רדיוסינתזה אוטומטית לחלוטין של [11ג] הצמד-7841. מומחש למחצה-RP-כרומאטוגרם מאוירים בחלק העליון והאנליטי לאחר טיהור בתחתית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig4.jpg"> איור 4: הכנת תבשיל תרבות התא לניסויים בזמן אמת. שלב 1 כולל את הזריעה של 2.5 x 105 עד 1 x 106 בהתאם לסוג התא ואת קצב הצמיחה שלהם. לאחר מכן, תבשיל התרבות ממוקם במישור אלכסוני (כ 30-45 °). לכן, מכשיר מתכת שסופקו או מכסה של צלחת תרבות התא ניתן להשתמש בחממה כדי לייצב את המיקום הנוטה של המנה. יום לאחר (24 שעות) המנה מותאמת אופקית, ומדיום תרבות התא הטרי מתווסף לחלוטין לכסות את משטח התא. ביום הניסוי, הכדאיות והמפגש של התאים נבדקים. על פי הפרוטוקול הניסיוני, התאים נשטפים עם DPBS, המדיום מוחלף על ידי סרום ללא מדיום (2 מ ל), ואת הצלחת התרבות הוא ממקם מיקום אלכסוני עד תחילת ניסויים. מעתה ואילך, ניתן לטפל בתאים בעזרת המעכב או הרכב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59557/59557fig5.jpg"> איור 5: בזמן אמת מדידות קינטית של [11ג] הצמד-7941. מייצג קינטיקה בזמן אמת של [11ג] הצמד-7941 מוצגים בשלושה מערכת ups שונים: באמצעות תאים MDCKII-WT; MDCKII-hMDR1 תאים מראש חסומים עם (±)-verapamil כמו P-gp מעכבי ו MDCKII-hMDR1 תאים ללא חסימה. ציר y ממחיש את שיעור הגידול של התאים הטרום חסומים MDCKII-hMDR1 ו WT בהשוואה לתוצאות של תאים מטופלים או טיפול MDCKII-MDR1, בהתאמה (לא ספיגה, 0%). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59557/59557fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

כאן, אנו מייצגים פרוטוקול עבור הרדיו האוטומטי לחלוטין של [11ג] הצמד-7941 וניתוח של קינטיקה בזמן אמת של זה PET-מעקב על P-gp הבעת תאים שאינם ביטוי.

Positron emission tomography (PET) is an essential molecular imaging technique providing insights into pathways and using specific targeted radioligands ...

פחמן-11 radiolabeling מאפשר תרכובות קטנות לשמש טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים או PET מבלי לשנות את המולקולה. זה חיוני עבור חקירת רמות ביטוי הקולטן. היתרון של פחמן-11 radiolabeling הוא שאנחנו יכולים להשתמש PET כדי להעריך ישירות קינטיקה כריכות של SNAP כלפי קולטן הורמון ריכוז מלנין בזמן אמת.SNAP כמו אנטגוניסט קולטן הורמון ריכוז מלנין יתרום הבנה טובה יותר של קולטן זה ואת הקשר שלה עם תנאים מטבוליים כמו השמנת יתר וסוכרת. מובילי Efflux לידי ביטוי במחסום הדם - מוח יכול לעכב באופן משמעותי את השימוש radiopharmaceuticals עבור הדמיה ביטוי קולטן מרכזי. לכן חשוב להעריך עקבות במבחנה.radiosynthesis אוטומטית של SNAP ישים באופן נרחב radiolabeled תרכובות משקל מולקולרי נמוך עם קבוצת מתיל ניתן להערכת בקלות. לאחר שנקבע הליך זה ניתן להתאים עבור תרכובות אחרות. בהפגנה יהיו תלמידי הדוקטורט הבכירים שרה פאף ותרזה באלבר.כדי להתחיל סינתזת פחמן-11 SNAP להגדיר מודול סינתזה אוטומטית פחמן-11 נקי עם reagents וחומרים המתאימים. הפעל את תהליך סינתזת SNAP במחשב המודול אשר יתחיל עם בדיקות מערכת ומיזוג. בערך 30 עד 40 דקות לפני המודול יהיה מוכן למסירה C-11, בחר את היעד C-11 פחמן דו חמצני על הציקלוטרון ולהתחיל את הקרן ב 65 מיקרואמפר.לאחר המודול מוכן למסירה לסגור את החלון הפנימי ואת הדלת החיצונית. ודאו שמלכודת ה-CO2 התקררה ל-40 מעלות לפחות ושמלכודת המתאן החלה להתקרר. לאחר הציקלוטרון הפיק כ 120 gigabecquerels של C-11 CO2 לחץ על אישור בתוכנת המודול כדי לפתוח את הנתיב מהמטרה דרך מלכודת CO2.במחשב cyclotron להתחיל לספק C-11 CO2 למודול. נטר את העברת הפעילות במחשב המודול וודא שהיא ממשיכה להפחתת CO2 למתאן לאחר שלוש דקות. לפקח על התהליך כמו מתאן וכתוצאה מכך הוא סמוק למלכודת מתאן והוסב מתיל יודיד על ידי זרימת הדם דרך תנור יוד.בסוף רצף ההמרה לחכות כמו תוצרי לוואי הם סמוקים ממלכודת מתיל יודיד כדי למצות ולאחר מכן לאשר כי הכור מוכן לקבל פעילות על ידי לחיצה על אישור. לפקח על המערכת כמו מתיל יודיד הוא שוחרר מהמלכודת, סמוק דרך תנור טריפלאט מתיל לכוד בכור. כאשר הפעילות במישור הכור מאשרת שההשמנה הושלמה. המתן בזמן שתערובת התגובה מגיבה ב-75 מעלות צלזיוס במשך שלוש דקות.לאחר מכן לפקח על המערכת כמו תערובת התגובה מקורר מתחת 35 מעלות צלזיוס ומרווה עם 1.5 מיליליטר של מים. נטר את המערכת כאשר תערובת התגובה נטענת לתוך לולאת ההזרקה של HPLC ומוזרקת לעמוד HPLC ההכנה למחצה. צפה עקבות גלאי UV וגמא כמו כרומטוגרפיה ממשיכה.כאשר שיא המוצר מתחיל להופיע באופן ידני להתחיל לאסוף את המוצר בבקבוק האיסוף התחתון העגול במודול. סיים את האיסוף באופן ידני כאשר אות הגמא יורד מתחת ל- 400 ספירות לשנייה. צפה ברמת הנוזל בבקבוק התחתון העגול כאשר המוצר נטען על מחסנית מיצוי פאזה מוצקה בלחץ הליום.לאחר הבקבוק ריק הנוזל עבר דרך מחסנית SPE, לחץ על אישור כדי להתחיל לשטוף את המוצרים לכודים על המחסנית. לאחר מכן לפקח על הפעילות בבקבוקון איסוף המוצרים כמו המוצר הוא תחילה eluted מן המחסנית לתוך הבקבוקון ולאחר מכן מדולל עם 0.9% תמיסת מלח. צפה כמו פתרון המוצר מועבר בקבוקון המוצר באמצעות מסנן סטרילי תחת לחץ הליום.כאשר ההעברה הושלמה לסגור את שסתום פלט המוצר. כאשר הרדיוטרטר מגיע לבקבוקון המוצר למדוד את התשואה הרדיואקטיבית המוחלטת. לאחר מכן השתמש במזרק מוגן עופרת כדי להעביר 100 מיקרוליטרים של המעקב לבקבוקון קטן לבקרת איכות.הבא את דוגמת בקרת האיכות לאזור עבודה מוגן של בקרת איכות. ציירו 40 מיקרוליטרים של דגימת QC למזרק אטום לגז, העמיסו אותו לתוך מכשיר HPLC מוכן המצויד בעמודה אנליטית והזריקו את המוצר. בצע מדידות בקרת איכות אחרות במהלך הפעלת HPLC.לאחר שהפעלת HPLC סיימה לשלב את כל הפסגות בכרומטוגרמה מגלאי הרדיואקטיביות כדי לקבוע אם הטוהר הכימי של רדיו SNAP גדול מ- 95% שלב את הפסגות בכרומטוגרמת UV כדי לקבוע את הטוהר הכימי של המוצר. השתמש באזור תחת שיא המוצר UV כדי לחשב את הפעילות הספציפית. לאחר שהמוצר אושר כדי לעמוד בדרישות לשימוש לשחרר את מעקב הרדיו למעבדת הניסוי הקינטי בזמן אמת.לפחות 30 דקות לפני הניסוי לשטוף את סוג הבר מוכן או תאים מנודים עם DPBS ולהוסיף שני מיליליטר של מדיום צמיחה ללא סרום. כדי לחסום תאים שעברו חילוף להוסיף 0.98 microliters של פתרון 20.4 מילימולרית של גזע verapamil הידרוכלוריד ב דימתיל סולפוקסיד. דגירה התאים במישור אלכסוני במשך 30 דקות.לאחר מכן הפעל את מכשיר ההתרגם בזמן אמת ואת המחשב המשויך. פתח את תוכנת הבקרה ובחר יעד אחד. הגדר את מספר המיקומים לשתיים, את זמן הזיהוי לשלוש שניות, את זמן השהיית הזיהוי לשתי שניות ואת שם השלב הראשון לקו הבסיס.הכנס את צלחת תרבות התאים לתמיכה נוטה של המכשיר עם מוט התא בצד התחתון. ודא כי עמוד התא מכוסה בינוני תרבות התא. התחל מדידת רקע של 10 דקות והגדר את שם הקובץ והנתיב.הגדר את סרגל הזמן לפרוטוקול ואת אוסף הנקלידים לפחמן-11. קבע את תצורת הגרף כך שיראה את נתוני היעד של הרקע, היעד והרקע. לאחר מעקב הרדיו נמסר ואושר לשימוש, לקחת מדגם קטן עבור הראיה.לחשב את עוצמת הקול הדרושה של פתרון מעקב רדיו ולהכין פיפטה. בתוכנת המכשיר להשהות את הריצה ולחכות סיבוב המנה להפסיק. פתח את המכסה של המכשיר, להפוך את התמיכה 90 מעלות שמאלה, להוסיף את מעקב רדיו עם פיפטה מוכן ולהחזיר את המכשיר למיקום הראשוני שלה.סגור את מכסה ההתקן וחדש מיד את הניסוי. תן לניסוי לפעול במשך 20 דקות לפני סיום הניסוי. לעבד ולנתח את הנתונים כדי להעריך את ספיגת SNAP בתאים.כעת ניתן לחזור על ההליך עבור צלחת תרבות תאי הבקרה שטופלה על-ידי DMSO וקו התאים של סוג הפרא. בדיקות קינטיות בזמן אמת בוצעו עם תאים שאינם PGP המבטאים תאים מסוג פראי, תאים מבטאים PGP חסומים מראש עם verapamil כמעכב PGP, ותאי PGP לא חסומים. לא נצפה הבדל משמעותי בין תאים שאינם מטופלים לבין תאים שטופלו ברכב.פחמן-11 SNAP הצטבר במהירות בתאי סוג הבר בעוד לא נצפתה הצטברות בתאים מבטאים PGP. חסימה מראש של טרנספורטר EFFLUX PGP עם verapamil הביאה להצטברות SNAP בתאי PGP דומים לאלה של תאים מסוג בר. בשילוב עם מדידות קינטיות בזמן אמת, הגדרה זו מאפשרת הבנה רחבה של הפרמקוקינטיקה של תרכובות משקל מולקולריות נמוכות ולכן חשובה מאוד לפיתוח פרה-קליני של רדיופארמה.תזמון וארגון הם המרכיבים העיקריים עבור רדיוסינתזה פחמן-11 מוצלח עם ניסויים קינטיים בזמן אמת הבאים כמו זמן מחצית החיים של פחמן-11 הוא רק 20 דקות. בשל זמן מחצית חיים קצר של פחמן-11 חלקים רבים של הליך זה מבוצעים בו זמנית. חשוב לכל המעורבים להבין את היקף ותזמנת תפקידם.הן בטיחות המוצר והן הגנה מפני קרינה הם המפתח להכנת radiopharmaceuticals. כל הניסויים חייבים לעקוב אחר נמוך ככל סביר בר השגה או ALARA עיקרון להגביל את החשיפה לקרינה של המפעיל.

technical-aspect-automated-synthesis-real-time-kinetic-evaluation

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

התגובה אוגי הוכיחה להיות דרך נוחה במהירות ליצור ספריות מגוונת של תרכובות. היא כוללת את תגובת אמין, אלדהיד, חומצה carboxylic ו isonitrile בדרך כלל מתנול בטמפרטורת החדר. בסרטון הזה, אנו מנצלים 48-חריץ Mettler-טולדו MiniBlock מצויד צינורות סינון מטפל Mettler-טולדו MiniMapper נוזלי אוטומטי היה בשימוש, כדי לספק את ריאגנטים ממס. הפרמטרים של עניין היו ריכוז, הרכב הממס ואת עודף של כמה חומרים כימיים.

אופטימיזציה של התגובה אוגי באמצעות סינתזה במקביל וטיפול נוזלי אוטומטי

צבעי ציאנין עמידים לאור מחוברים לאוליגונוקלאוטידים כדי לנטר הכלאה על ידי העברת אנרגיה.

סינתזה של בדיקות הכלאה DNA הסטה אורך גל על ​​ידי שימוש photostable Cyanine צבעים

אנו מדגימים את הסינתזה הרדיו-כימית האוטומטית למחצה של [ 18 F] 3F4AP ונהלי בקרת איכות.

אוטומטי סינתזה Radiochemical של [<sup22</sup&gt; F] 3F4AP: עוקב PET חדשנית עבור הדמיה מחלות Demyelinating

פרוטוקול לסינתזה של 1, 2-dithiolane ששינה פפטיד ואפיון המבנים סופרא מולקולרית הנובע פפטיד הרכבה עצמית.

סינתזה ואפיון של 1, 2-Dithiolane ששינה פפטידים וההספק עצמית

טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) אתרים הדמיה המעורבים בניסויים מחקר קליני מוקדם מרובים צריך יכולות הייצור radiotracer חזקים ופסיביות. שימוש radiotracer את [18נ] Clofarabine כדוגמה, אנחנו להמחיש כיצד להפוך לאוטומטית את הסינתזה של radiotracer באמצעות radiosynthesizer גמיש, מבוססי קלטת ולאמת את הסינתזה לשימוש קליני.

אוטומציה של טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) Radiotracer סינתזה פרוטוקול לייצור קליני

אנו מדווחים על טכניקה יעילה פחמן-11 רדיויניום לייצר מדורים הרלוונטיים קלינית עבור פליטת פוזיטרון טומוגרפיה (PET) באמצעות מחסניות החילוץ שלב מלא. מיכל בן 11 C-מתילגדירוג הסוכן הוא עבר דרך מחסנית טעונה מטעון עם המבשר והחלף רצופים עם אתנול מימית מספק כימית וכימית לחיות מעוקב טהור בתשואות רדיוכימית גבוהה.

שלב מוצק 11ג-מתילציה, טיהור וניסוח לייצור מנותבים PET

כאן אנו מתארים בדיקה ביולוגית באמצעות 3-(4′,5′-דימתילתיאזול-2′-yl)-2,5- דיפנילטטרזוליום ברומיד (MTT) כדי לבחון אוקסימים ספירוציקליים שסונתזו בעבר.

סינתזה הטרוציקלית ספירוציקלית פונקציונלית ובדיקת ציטוטוקסיות

שיטה זו מתארת את השימוש במתודולוגיית תפוקה גבוהה חדשנית, המבוססת על תגובות כימיות טיפות, לאופטימיזציה מהירה וחסכונית של רדיופארמה באמצעות כמויות ננו-מול של ריאגנטים.

אופטימיזציה של תגובות רדיוכימיות באמצעות מערכי טיפות

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול לאופטימיזציה ופרמטריזציה של שאריות חומצות אמינו שהשתנו עם מיני קרבוניל תגובתי, הניתנים להתאמה למערכות חלבון. שלבי הפרוטוקול כוללים תכנון ואופטימיזציה של מבנה, הקצאות מטען, בניית פרמטרים והכנת מערכות חלבונים.

סינתזה של חומצות אמינו שהותאמו עם קרבונילים תגובתיים בסיליקו להערכת השפעות מבניות באמצעות סימולציות דינמיקה מולקולרית 

פרוטוקול זה מציג הליך מפורט להכנת ארבעה רדיוטרייסרים פחמן-11 באמצעות "שיטת הלולאה" [11C]מתילציה. אנו מתארים את הליך הסינתזה [11C]ER-176, עם נתונים עבור שלושה רדיוטרייסרים נוספים: [11C]MRB, [11C]mHED ו-[11C]PiB. שיטת הלולאה מספקת סינתזה יעילה עם תפוקות רדיוכימיות מוגברות כנגד כלי התגובה המסורתיים [11C]methylation.

שיפור היעילות ותפוקות התיוג הרדיואקטיבי של רדיוליגנדים פחמן-11 למחקר קליני בשיטת לולאה

מחקר זה מתאר את התהליך האוטומטי לייצור [68Ga]Ga-3BP-3940 עם סינתיסייזר GAIA V2, להדמיית PET של חלבון הפעלה פיברובלסטים. כמו כן מוצגות תוצאות בדיקות בקרת איכות שבוצעו בשלוש קבוצות בדיקה.

הכנה אוטומטית של [68Ga]Ga-3BP-3940 במודול סינתזה להדמיית PET של מיקרו-סביבת הגידול

חקור סינתזה אוטומטית של תרכובות מסומנות בפחמן-11 לדימות PET בזמן אמת. שיטה זו מאפשרת הערכת קינטיקת קישור לקולטנים בתאים מבטאי P-gp ולא מבטאים, ומסייעת בפיתוח תרופות רדיופרמצבטיות לחקר מחלות מטבוליות.

היבט טכני של סינתזה אוטומטי הערכה בזמן אמת קינטי של [¹¹ג] הצמד-7941

גלה סרטונים נוספים