היבט טכני של סינתזה אוטומטי הערכה בזמן אמת קינטי של [¹¹ג] הצמד-7941

פחמן-11 radiolabeling מאפשר תרכובות קטנות לשמש טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים או PET מבלי לשנות את המולקולה. זה חיוני עבור חקירת רמות ביטוי הקולטן. היתרון של פחמן-11 radiolabeling הוא שאנחנו יכולים להשתמש PET כדי להעריך ישירות קינטיקה כריכות של SNAP כלפי קולטן הורמון ריכוז מלנין בזמן אמת.

SNAP כמו אנטגוניסט קולטן הורמון ריכוז מלנין יתרום הבנה טובה יותר של קולטן זה ואת הקשר שלה עם תנאים מטבוליים כמו השמנת יתר וסוכרת. מובילי Efflux לידי ביטוי במחסום הדם - מוח יכול לעכב באופן משמעותי את השימוש radiopharmaceuticals עבור הדמיה ביטוי קולטן מרכזי. לכן חשוב להעריך עקבות במבחנה.

radiosynthesis אוטומטית של SNAP ישים באופן נרחב radiolabeled תרכובות משקל מולקולרי נמוך עם קבוצת מתיל ניתן להערכת בקלות. לאחר שנקבע הליך זה ניתן להתאים עבור תרכובות אחרות. בהפגנה יהיו תלמידי הדוקטורט הבכירים שרה פאף ותרזה באלבר.

כדי להתחיל סינתזת פחמן-11 SNAP להגדיר מודול סינתזה אוטומטית פחמן-11 נקי עם reagents וחומרים המתאימים. הפעל את תהליך סינתזת SNAP במחשב המודול אשר יתחיל עם בדיקות מערכת ומיזוג. בערך 30 עד 40 דקות לפני המודול יהיה מוכן למסירה C-11, בחר את היעד C-11 פחמן דו חמצני על הציקלוטרון ולהתחיל את הקרן ב 65 מיקרואמפר.

לאחר המודול מוכן למסירה לסגור את החלון הפנימי ואת הדלת החיצונית. ודאו שמלכודת ה-CO2 התקררה ל-40 מעלות לפחות ושמלכודת המתאן החלה להתקרר. לאחר הציקלוטרון הפיק כ 120 gigabecquerels של C-11 CO2 לחץ על אישור בתוכנת המודול כדי לפתוח את הנתיב מהמטרה דרך מלכודת CO2.

במחשב cyclotron להתחיל לספק C-11 CO2 למודול. נטר את העברת הפעילות במחשב המודול וודא שהיא ממשיכה להפחתת CO2 למתאן לאחר שלוש דקות. לפקח על התהליך כמו מתאן וכתוצאה מכך הוא סמוק למלכודת מתאן והוסב מתיל יודיד על ידי זרימת הדם דרך תנור יוד.

בסוף רצף ההמרה לחכות כמו תוצרי לוואי הם סמוקים ממלכודת מתיל יודיד כדי למצות ולאחר מכן לאשר כי הכור מוכן לקבל פעילות על ידי לחיצה על אישור. לפקח על המערכת כמו מתיל יודיד הוא שוחרר מהמלכודת, סמוק דרך תנור טריפלאט מתיל לכוד בכור. כאשר הפעילות במישור הכור מאשרת שההשמנה הושלמה. המתן בזמן שתערובת התגובה מגיבה ב-75 מעלות צלזיוס במשך שלוש דקות.

לאחר מכן לפקח על המערכת כמו תערובת התגובה מקורר מתחת 35 מעלות צלזיוס ומרווה עם 1.5 מיליליטר של מים. נטר את המערכת כאשר תערובת התגובה נטענת לתוך לולאת ההזרקה של HPLC ומוזרקת לעמוד HPLC ההכנה למחצה. צפה עקבות גלאי UV וגמא כמו כרומטוגרפיה ממשיכה.

כאשר שיא המוצר מתחיל להופיע באופן ידני להתחיל לאסוף את המוצר בבקבוק האיסוף התחתון העגול במודול. סיים את האיסוף באופן ידני כאשר אות הגמא יורד מתחת ל- 400 ספירות לשנייה. צפה ברמת הנוזל בבקבוק התחתון העגול כאשר המוצר נטען על מחסנית מיצוי פאזה מוצקה בלחץ הליום.

לאחר הבקבוק ריק הנוזל עבר דרך מחסנית SPE, לחץ על אישור כדי להתחיל לשטוף את המוצרים לכודים על המחסנית. לאחר מכן לפקח על הפעילות בבקבוקון איסוף המוצרים כמו המוצר הוא תחילה eluted מן המחסנית לתוך הבקבוקון ולאחר מכן מדולל עם 0.9% תמיסת מלח. צפה כמו פתרון המוצר מועבר בקבוקון המוצר באמצעות מסנן סטרילי תחת לחץ הליום.

כאשר ההעברה הושלמה לסגור את שסתום פלט המוצר. כאשר הרדיוטרטר מגיע לבקבוקון המוצר למדוד את התשואה הרדיואקטיבית המוחלטת. לאחר מכן השתמש במזרק מוגן עופרת כדי להעביר 100 מיקרוליטרים של המעקב לבקבוקון קטן לבקרת איכות.

הבא את דוגמת בקרת האיכות לאזור עבודה מוגן של בקרת איכות. ציירו 40 מיקרוליטרים של דגימת QC למזרק אטום לגז, העמיסו אותו לתוך מכשיר HPLC מוכן המצויד בעמודה אנליטית והזריקו את המוצר. בצע מדידות בקרת איכות אחרות במהלך הפעלת HPLC.

לאחר שהפעלת HPLC סיימה לשלב את כל הפסגות בכרומטוגרמה מגלאי הרדיואקטיביות כדי לקבוע אם הטוהר הכימי של רדיו SNAP גדול מ- 95% שלב את הפסגות בכרומטוגרמת UV כדי לקבוע את הטוהר הכימי של המוצר. השתמש באזור תחת שיא המוצר UV כדי לחשב את הפעילות הספציפית. לאחר שהמוצר אושר כדי לעמוד בדרישות לשימוש לשחרר את מעקב הרדיו למעבדת הניסוי הקינטי בזמן אמת.

לפחות 30 דקות לפני הניסוי לשטוף את סוג הבר מוכן או תאים מנודים עם DPBS ולהוסיף שני מיליליטר של מדיום צמיחה ללא סרום. כדי לחסום תאים שעברו חילוף להוסיף 0.98 microliters של פתרון 20.4 מילימולרית של גזע verapamil הידרוכלוריד ב דימתיל סולפוקסיד. דגירה התאים במישור אלכסוני במשך 30 דקות.

לאחר מכן הפעל את מכשיר ההתרגם בזמן אמת ואת המחשב המשויך. פתח את תוכנת הבקרה ובחר יעד אחד. הגדר את מספר המיקומים לשתיים, את זמן הזיהוי לשלוש שניות, את זמן השהיית הזיהוי לשתי שניות ואת שם השלב הראשון לקו הבסיס.

הכנס את צלחת תרבות התאים לתמיכה נוטה של המכשיר עם מוט התא בצד התחתון. ודא כי עמוד התא מכוסה בינוני תרבות התא. התחל מדידת רקע של 10 דקות והגדר את שם הקובץ והנתיב.

הגדר את סרגל הזמן לפרוטוקול ואת אוסף הנקלידים לפחמן-11. קבע את תצורת הגרף כך שיראה את נתוני היעד של הרקע, היעד והרקע. לאחר מעקב הרדיו נמסר ואושר לשימוש, לקחת מדגם קטן עבור הראיה.

לחשב את עוצמת הקול הדרושה של פתרון מעקב רדיו ולהכין פיפטה. בתוכנת המכשיר להשהות את הריצה ולחכות סיבוב המנה להפסיק. פתח את המכסה של המכשיר, להפוך את התמיכה 90 מעלות שמאלה, להוסיף את מעקב רדיו עם פיפטה מוכן ולהחזיר את המכשיר למיקום הראשוני שלה.

סגור את מכסה ההתקן וחדש מיד את הניסוי. תן לניסוי לפעול במשך 20 דקות לפני סיום הניסוי. לעבד ולנתח את הנתונים כדי להעריך את ספיגת SNAP בתאים.

כעת ניתן לחזור על ההליך עבור צלחת תרבות תאי הבקרה שטופלה על-ידי DMSO וקו התאים של סוג הפרא. בדיקות קינטיות בזמן אמת בוצעו עם תאים שאינם PGP המבטאים תאים מסוג פראי, תאים מבטאים PGP חסומים מראש עם verapamil כמעכב PGP, ותאי PGP לא חסומים. לא נצפה הבדל משמעותי בין תאים שאינם מטופלים לבין תאים שטופלו ברכב.

פחמן-11 SNAP הצטבר במהירות בתאי סוג הבר בעוד לא נצפתה הצטברות בתאים מבטאים PGP. חסימה מראש של טרנספורטר EFFLUX PGP עם verapamil הביאה להצטברות SNAP בתאי PGP דומים לאלה של תאים מסוג בר. בשילוב עם מדידות קינטיות בזמן אמת, הגדרה זו מאפשרת הבנה רחבה של הפרמקוקינטיקה של תרכובות משקל מולקולריות נמוכות ולכן חשובה מאוד לפיתוח פרה-קליני של רדיופארמה.

תזמון וארגון הם המרכיבים העיקריים עבור רדיוסינתזה פחמן-11 מוצלח עם ניסויים קינטיים בזמן אמת הבאים כמו זמן מחצית החיים של פחמן-11 הוא רק 20 דקות. בשל זמן מחצית חיים קצר של פחמן-11 חלקים רבים של הליך זה מבוצעים בו זמנית. חשוב לכל המעורבים להבין את היקף ותזמנת תפקידם.

הן בטיחות המוצר והן הגנה מפני קרינה הם המפתח להכנת radiopharmaceuticals. כל הניסויים חייבים לעקוב אחר נמוך ככל סביר בר השגה או ALARA עיקרון להגביל את החשיפה לקרינה של המפעיל.