Name: הזרמת כדוריות הדם של מיני חמצן מיטוכונדריאלי מורטין בגזע ובתאי מחולל ולוקמיה מונחה AF9 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: למד זרימה ציטומטרית לזיהוי ROS מיטוכונדריאלי בתאי גזע המטופויטיים ובתאי לוקמיה בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכת השפעת שינויים גנטיים על רמות ROS ומספקת תובנות לגבי מטבוליזם תאי ואסטרטגיות טיפול בלוקמיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו היתה נתמכת על ידי הדירקטוריון פוקס מרדף מרכז מנהלים (DDM), האגודה האמריקנית להמטולוגיה פרס המלומד (SMS), האגודה האמריקנית לסרטן RSG (SMS) ומשרד ההגנה (הפרס: W81XWH-18-1-0472).

כל ההליכים בעלי החיים המתוארים בפרוטוקול זה אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) במרכז הסרטן של פוקס צ'ייס.
הערה: תהליך העבודה של הפרוטוקול מחולק ל -4 חלקים כפי שמוצג באיור 1 והריאגנטים הנדרש מפורטים בטבלת החומרים.
1. מח עצם (BM) בידוד
הערה: MLL-AF9 עכברים לוקמיה נוצרו כמתואר בעבר11.
<ol><li>שחזור מונו-גרעיני מח עצם בתאי, כפי שמתואר בעבר12,13,14,15, מסוג פראי C57. Bl6 עכברים (אשר לבטא את התקליטור 45.2 congenic) כמו גם מ C57. עכברים Bl6-SJL (אשר מבטאים את סמן CD 45.1 congenic) כי כבר מושתלים עם MLL-AF9-ביטוי תאים לוקמיה (CD 45.2+). הערה: BM ניתן לשחזר מעכברים או על ידי ריסוק12,13 או על ידישטיפה עצמות 14,15. עבור הניסויים המוצגים כאן, BM התאושש משני עכברים בריאים ולוקמיה דרך השטיפה.</li>
</ol>2. מיטוכונדריאלי רוס Fluorogenic צביעת כתמים
<ol><li>ברגע מונו-גרעיני מוח העצם התאים התגלו מעכברים בריאים ו/או לוקמיה, כתם סדרת מחלקים של תאים עם טריקון כחול ולספור באמצעות הומוציטוטומטר כדי לקבוע את המספר ההתחלתי של התאים BM סך.</li>
	<li>צנטריפוגה את התאים ב 300 x g עבור 5 דקות. ומריף את הסופרנטאנט ולהשעות את הגלולה ב-F-PBS (PBS בתוספת 2% סרום העוברי העובר ו 1% פניצילין/סטרפטומיצין קוקטייל) לריכוז של 2 x 106 תאים/mL.</li>
	<li>Aliquot 200 μL של השעיית תא לצינור לתוך 9 בודד צינורות בקרת צבע המסומנים כדלקמן: אין כתם, B220-Cy5-PE, cKit-Cy7-APC, Sca1-PacBlue, CD150-APC (עבור HSPCs בריא בלבד), תקליטור 45.2-APC (עבור תאים לוקמיה בלבד), CD34-FITC, לצבוע מיטוכונדריאלי ולחיות/תא המתים כתם. הערה: אופציונלי שליטה חיובית אינדוקציה ROS מיטוכונדריאלי יכול להיות מוכן על ידי טיפול 2 x 105 תאים ב 200 μl עם 20 Μm של נתרן ביסולפיט (msb) עבור 1 h ב 37 ° צ' ב 5% CO2 חממה. פקד שני כדי להפוך את האינדוקציה MSB-בתיווך של מיטוכונדריאלי יכול להיות מוכן על ידי בטיפול 2 x 105 תאים ב 200 μl עם 20 ΜM של msb פלוס 100 Μm N-מרחקסיל-L-cysteine (nac) עבור 1 h ב 37 ° c ב 5% שיתוף2 אינקובטור.</li>
	<li>מחבר את התאים הנותרים בצינור (צינור ניסיוני) ו צנטריפוגה ב 300 x g עבור 5 דקות.</li>
	<li>השהה מחדש את התאים ב-F-PBS עם כתם חי/מת בהתאם להוראות היצרן. מודקון על הקרח 30 דקות. הקפד להוסיף כתם חי/מת לצינור הבקרה בצבע יחיד.</li>
	<li>הוסף 1.0 mL של טמפרטורת החדר (RT) F-PBS לצינורות בצבע יחיד וניסיוני מוכתם עם צבע חי/מת. צנטריפוגה 5 דקות ב 300 x g ב RT.</li>
	<li>השהה מחדש 50 μg של הצבע המודריאלי של רוס ב -13 μL של diמתיל סולפוקסיד (DMSO) כדי לקבל פתרון מניות של 5 מ"מ.</li>
	<li>לדלל את הצבע מיטוכונדריאלי לריכוז הסופי של 5 μM ב RT F-PBS עם או בלי Verapamil (50 μM).</li>
	<li>מוריד את הכתמים. מכתם התא החי/מת הוסף 200 μL של כתם מיטוכונדריאלי של צבע רוס המכיל Verapamil לכל שפופרת ניסיוני, כמו גם את הצינור מיטוכונדריאלי צבע יחיד בקרת שליטה.</li>
	<li>מערבולת לערבב ו הדגירה עבור 10 דקות ב 37 ° c בחושך.</li>
	<li>הוסף 1.0 מ ל של RT F-PBS כדי מיטוכונדריאלי רוס המוכתמת שליטה בצבע יחיד ושפופרות ניסיוני. צנטריפוגה 5 דקות ב 300 x g ב RT.</li>
	<li>ושטוף את התאים עם 1.0 מ ל של RT F-PBS. צנטריפוגה 5 דקות ב 300 x g ב RT.</li>
</ol>3. נוגדן השושלת כתמים
<ol><li>הכינו את משקאות הנוגדן המפורטים בטבלה 1. הערה: אלה קוקטיילים נוגדנים כבר אופטימיזציה בעבר14,15,16.</li>
	<li>מטפי את supernatant מן האחרון מיטוכונדריאלי לשטוף לצבוע של צינורות ניסיוני המכיל BM בריא ולהוסיף 200 μL של קוקטייל הנוגדן #1 לכל צינור. . מערבולת לערבב גם להכין את צינורות בקרת צבע אחד. דגירה של 60 דקות על קרח בחושך.</li>
	<li>מטפי את supernatant משטיפת מיטוכונדריאלי הסופי של הצינורות הניסיוניים המכילים לוקמיה BM ולהוסיף 200 μL של קוקטייל הנוגדן #2 לכל צינור. . מערבולת לערבב דגירה של 60 דקות על קרח בחושך.</li>
	<li>לשטוף עם 1.0 mL של קר F-PBS ו צנטריפוגה 5 דקות ב 300 x g ב RT.</li>
	<li>להשעות את התאים ב500 μl של קר F-PBS ולסנן את התאים בצינור cytometer זרימה באמצעות מסנן 40 יקרומטר כדי לכלול את האגרגטים.</li>
</ol>4. הזרמת הרכש והניתוח
הערה: מספר מערכות המשנה של גזע ומין המטפאות הן נדירות, כגון תאי גזע המטפאות לטווח ארוך. כך, באופן אידיאלי 3-5 מיליון אירועים יש לאסוף עבור כל צינור ניסיוני במהלך הרכישה cy, לנסות ניתוח מספיק של רוס מיטוכונדריאלי בקבוצות משנה HSPC שונים.
<ol><li>השתמש בצינור הבקרה ללא כתם כדי להגדיר את מחלקות הפיזור הפורוורד (FSC-A) והצד (האס-אס), המבוססות על הגודל והמורכבות של אוכלוסיית התאים שנותחה.</li>
	<li>השתמש בצינורות בקרת הכתמים והצבע היחיד כדי לפצות על הזרימה של cytometer.</li>
	<li>שער החוצה שרידים זרים מתוך החלקה קדימה ופיזור בצד (איור 2A, B, הפאנל הראשון משמאל).</li>
	<li>השער החוצה כפולה באמצעות מבדיל כפול כגון מבדיל קדימה (איור 2א, ב, הפאנל השני משמאל).</li>
	<li>בצע את אסטרטגיית השידור המוצעת באיור 2A,B כדי לבחור תאים חיים, השושלת הנמוכה תאים וערכות המשנה hspc ולוקמיה שונים.</li>
	<li>עבור כל אוכלוסיית עניין, לנתח את עוצמת הקרינה החציוני (MFI) של ערוץ TRPE (x-ציר) בעלילה היסטוגרמה כדי להעריך את ההבדלים באות רוס מיטוכונדריאלי (איור 3a-C, שמאל חלוניות). רמות של מיטוכונדריאני יכול להיות מוערך ברמה תא יחיד על ידי השוואת כתמים ROS מיטוכונדריאלי לעומת סמנים ספציפיים השושלת בעלילה פיזור.</li>
</ol>

<ol><li>Dröse, S., Brandt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+superoxide+production+by+the+mitochondrial+respiratory+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of superoxide production by the mitochondrial respiratory chain.</a> Advances in experimental medicine and biology. 748, 145-169 (2012).</li>
<li>Gerber, P. A., Rutter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Oxidative+Stress+and+Hypoxia+in+Pancreatic+Beta-Cell+Dysfunction+in+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidant+%26+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">The Role of Oxidative Stress and Hypoxia in Pancreatic Beta-Cell Dysfunction in Diabetes Mellitus.</a> Antioxidant & Redox Signaling. 26 (10), 501-518 (2017).</li>
<li>Höhn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Happily+%28n%29ever+after%3A+Aging+in+the+context+of+oxidative+stress%2C+proteostasis+loss+and+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biology%22%5BJournal%5D)">Happily (n)ever after: Aging in the context of oxidative stress, proteostasis loss and cellular senescence.</a> Redox Biology. 11, 482-501 (2017).</li>
<li>Reuter, S., Gupta, S. C., Chaturvedi, M. M., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress%2C+inflammation%2C+and+cancer%3A+how+are+they+linked%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress, inflammation, and cancer: how are they linked.</a> Free Radical Biology & Medicine. 49 (11), 1603-1616 (2010).</li>
<li>Lee, B. W. L., Ghode, P., Ong, D. S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+regulation+of+cell+state+and+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biology%22%5BJournal%5D)">Redox regulation of cell state and fate.</a> Redox Biology. 2213-2317 (18), 30899(2018).</li>
<li>Harris, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+metabolism+impacts+the+spatiotemporal+onset+and+magnitude+of+HSC+induction+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glucose metabolism impacts the spatiotemporal onset and magnitude of HSC induction in vivo.</a> Blood. 121, 2483-2493 (2013).</li>
<li>Hole, P. S., Darley, R. L., Tonks, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+reactive+oxygen+species+play+a+role+in+myeloid+leukemias%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Do reactive oxygen species play a role in myeloid leukemias.</a> Blood. 117, 5816-5826 (2011).</li>
<li>Lagadinou, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BCL-2+inhibition+targets+oxidative+phosphorylation+and+selectively+eradicates+quiescent+human+leukemia+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">BCL-2 inhibition targets oxidative phosphorylation and selectively eradicates quiescent human leukemia stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (3), 329-341 (2013).</li>
<li>Di Marcantonio, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Kinase+C+Epsilon+Is+a+Key+Regulator+of+Mitochondrial+Redox+Homeostasis+in+Acute+Myeloid+Leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Protein Kinase C Epsilon Is a Key Regulator of Mitochondrial Redox Homeostasis in Acute Myeloid Leukemia.</a> Clinical Cancer Research. 24 (3), 608-618 (2018).</li>
<li>Glasauer, A., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+antioxidants+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Targeting antioxidants for cancer therapy.</a> Biochemical Pharmacology. 92 (1), 90-101 (2014).</li>
<li>Krivtsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+from+committed+progenitor+to+leukaemia+stem+cell+initiated+by+MLL-AF9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transformation from committed progenitor to leukaemia stem cell initiated by MLL-AF9.</a> Nature. 442 (7104), 818-822 (2006).</li>
<li>Frascoli, M., Proietti, M., Grassi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+analysis+and+isolation+of+murine+hematopoietic+stem+cells+and+lineage-committed+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Phenotypic analysis and isolation of murine hematopoietic stem cells and lineage-committed progenitors.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).</li>
<li>Lo Celso, C., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+transplantation+of+hematopoietic+stem+cells+%28HSCs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and transplantation of hematopoietic stem cells (HSCs).</a> Journal of Visualized Experiments. (157), (2007).</li>
<li>Kalaitzidis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR+complex+1+plays+critical+roles+in+hematopoiesis+and+Pten-loss-evoked+leukemogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">mTOR complex 1 plays critical roles in hematopoiesis and Pten-loss-evoked leukemogenesis.</a> Cell Stem Cell. 11 (3), 429-439 (2012).</li>
<li>Sykes, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AKT%2FFOXO+signaling+enforces+reversible+differentiation+blockade+in+myeloid+leukemias%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">AKT/FOXO signaling enforces reversible differentiation blockade in myeloid leukemias.</a> Cell. 146 (5), 697-708 (2011).</li>
<li>Kalaitzidis, D., Neel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-cytometric+phosphoprotein+analysis+reveals+agonist+and+temporal+differences+in+responses+of+murine+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Flow-cytometric phosphoprotein analysis reveals agonist and temporal differences in responses of murine hematopoietic stem/progenitor cells.</a> PLoS One. 3 (11), 3776(2008).</li>
<li>Kiel, M. J., Yilmaz, O. H., Iwashita, T., Yilmaz, O. H., Terhorst, C., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLAM+family+receptors+distinguish+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+and+reveal+endothelial+niches+for+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells.</a> Cell. 121 (7), 1109-1121 (2005).</li>
<li>Mooney, C. J., Cunningham, A., Tsapogas, P., Toellner, K. M., Brown, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+expression+of+flt3+within+the+mouse+hematopoietic+stem+cell+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Selective expression of flt3 within the mouse hematopoietic stem cell compartment.</a> International Journal Molecular Sciences. 18 (5), (2017).</li>
<li>Oguro, H., Ding, L., Morrison, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLAM+family+markers+resolve+functional+distinct+sub-populations+of+hematopoietic+stem+cells+and+multipotent+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">SLAM family markers resolve functional distinct sub-populations of hematopoietic stem cells and multipotent progenitors.</a> Cell Stem Cell. 13 (1), 102-116 (2013).</li>
<li>Osawa, M., Hanada, K., Hamada, H., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+lymphohematopoietic+reconstitution+by+a+single+CD34-low%2Fnegative+hematopoietic+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Long-term lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34-low/negative hematopoietic stem cell.</a> Science. 273 (5272), 242-245 (1996).</li>
<li>Morita, Y., Ema, H., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+and+hierarchy+within+the+most+primitive+hematopoietic+stem+cell+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity and hierarchy within the most primitive hematopoietic stem cell compartment.</a> Journal of Experimental Medicine. 207 (6), 1173-1178 (2010).</li>
<li>Mukhopadhyay, P., Rajesh, M., Haskó, G., Hawkins, B. J., Madesh, M., Pacher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+detection+of+apoptosis+and+mitochondrial+superoxide+production+in+live+cells+by+flow+cytometry+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.</a> Nature Protocols. 2 (9), 2295-2301 (2007).</li>
<li>Camargo, F. D., Chambers, S. M., Drew, E., McNagny, K. M., Goodell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cells+do+not+engraft+with+absolute+efficiencies%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cells do not engraft with absolute efficiencies.</a> Blood. 107 (2), 501-507 (2006).</li>
<li>Morita, Y., Ema, H., Yamazaki, S., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-side-population+hematopoietic+stem+cells+in+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Non-side-population hematopoietic stem cells in mouse bone marrow.</a> Blood. 108 (8), 2850-2856 (2006).</li>
<li>de Almeida, M. J., Luchsinger, L. L., Corrigan, D. J., Williams, L. J., Snoeck, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dye-Independent+Methods+Reveal+Elevated+Mitochondrial+Mass+in+Hematopoietic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Dye-Independent Methods Reveal Elevated Mitochondrial Mass in Hematopoietic Stem Cells.</a> Cell Stem Cell. 21 (6), 725-729 (2017).</li>
<li>Bonora, M., Ito, K., Morganti, C., Pinton, P., Ito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane-potential+compensation+reveals+mitochondrial+volume+expansion+during+HSC+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">Membrane-potential compensation reveals mitochondrial volume expansion during HSC commitment.</a> Experimental Hematology. 68, 30-37 (2018).</li>
<li>Somervaille, T. C., Cleary, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+leukemia+stem+cells+in+murine+MLL-AF9+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of leukemia stem cells in murine MLL-AF9 acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 10 (4), 257-268 (2006).</li>
<li>Hao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+Imaging+Reveals+a+Unique+Preference+of+Symmetric+Cell+Division+and+Homing+of+Leukemia-Initiating+Cells+in+an+Endosteal+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic Imaging Reveals a Unique Preference of Symmetric Cell Division and Homing of Leukemia-Initiating Cells in an Endosteal Niche.</a> Cell Metabolism. 29 (4), 950-965 (2019).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

צבעים fluorogenic כי פותחו לאיתור של ROS מוערכים לעתים קרובות בתאים קבועים על ידי מיקרוסקופ או בתאים חיים על ידי הזרימה cy, try22. הערכת הערכה לזרימה של רוס מיטוכונדריאלי בתאי BM באמצעות צבעי fluorogenic מיטוכונדריאלי יש שני יתרונות עיקריים: 1) זוהי טכניקה מהירה ופשוטה המתאימה לניתוח תאים חיים 2) זה מאפשר להבחין וניתוח נדיר אוכלוסיות ברמת התא היחיד ב-BM באמצעות כתמים של סמן פני השטח. הפרוטוקול צעד אחר צעד הציג כאן פותחה כדי ללמוד את הסטטוס vivo חמצון-חיזור לשעבר של גזע המטבית ואוכלוסיות מ...

מינים חמצן תגובתי (ROS) הם מולקולות תגובתי מאוד הנגזרות חמצן מולקולרי. המיקום הסלולארי המוגדר ביותר של הייצור של ROS הוא המיטוגיה, שם אלקטרונים העוברים דרך שרשרת התחבורה אלקטרון (וכו ') במהלך זירחון חמצוני (OXPHOS) נספגים על ידי חמצן מולקולרי המוביל היווצרות של מסוים סוג של רוס שנקרא סופרתחמוצות1. באמצעות הפעולות של סדרה של אנזימים, שנקרא סופראוקסיד dismutases או sods, סופראוקסיד מומרים לתוך מימן, אשר מנוטרלים לאחר מכן לתוך מים על ידי אנזימים כגון קטלאז או peroxidases גלוטתיון (gpx). רטבאליות במנגנונים ROS-רגולטוריות יכול להוביל לייצור עודף של ROS, המכונה לעתים קרובות לחץ חמצוני, אשר יש תוצאות מזיקות וקטלניות פוטנציאל הסלולר כגון נזק מקרומולקולה (כלומר, DNA, חלבון, שומנים). יתר על כן, לחץ חמצוני קשורה מספר פתווגיות, כגון סוכרת, מחלות דלקתיות, הזדקנות וגידולים2,3,4. כדי לשמור על הומאוסטזיס מחדש ולמנוע לחץ חמצוני, התאים בעלי מגוון של מנגנונים ROS-ויסות5.
רמות פיסיולוגיים של ROS מסוימים נחוצים עבור המטפיאה המתאימה ומבוגרים6. עם זאת, העודפים ROS קשורה עם נזק DNA, בידול הסלולר ותשישות של גזע המטפאות ובריכת מחולל קדמון. יש גם ראיות כי שינויים בביולוגיה החמצון עשוי להיות שונה בין לוקמיה ותאים בריאים. לדוגמה, רמות ROS נוטים להיות גבוהים יותר בלוקמיה של לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) ביחס לעמיתיהם הבריאים שלהם ומחקרים אחרים הציעו כי תאי גזע לוקמיה לשמור על רמה נמוכה יציבה המדינה של רוס להישרדות7,8. חשוב מכך, אסטרטגיות לקבלת הבדלי מחלות מבחינה רפואית בהבדלים הללו הראו הבטחה במספר הגדרות סרטןהאדם 9,10. לכן, בחני אומר כי לאפשר הערכה של רמות ROS בדגמי העכבר עשוי לשפר את ההבנה שלנו איך מינים אלה תורמים לפיזיולוגיה הסלולר מחלות פתוגנזה, כמו גם פוטנציאל לספק פלטפורמה להערכת האפקטיביות של הרומן נגד חמצון-מיקוד טיפולים נגד סרטן.

<table><tbody><tr><td>FBS VWR</td><td>Seradigm מושבת בחום מדעי החיים</td><td>97068-085</td><td>מדיה</td></tr><tr><td>פניצילין סטרפטומיצין</td><td>קורנינג</td><td>30-002-CI</td><td>מדיה</td></tr><tr><td>PBS</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP399-20</td><td>מאגר</td></tr><tr><td>15 מ"ל צינור חרוטי</td><td>BD בז</td><td>352096</td><td>אספקת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי</td><td>BD בז</td><td>352098</td><td>רקמה אספקת תרבות</td></tr><tr><td>40 &mu; m מסנני תאים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-363-547</td><td>אספקת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>RBC מאגר ליזה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-112-9751</td><td>אספקת תרבית רקמות</td></tr><tr><td>מנדיון נתרן ביסולפיט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M5750</td><td>פרו-אוקסידנט</td></tr><tr><td>NAC</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>A7250</td><td>אנטי-אוקסידנט</td></tr><tr><td>CD3 PE-Cy5 שיבוט 145-2c11</td><td>Biolegend</td><td>100310</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>שיבוט CD4 PE-Cy5 RM4-5</td><td>eBioscience</td><td>15-0041-81</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD8 שיבוט PE-Cy5 53-6.7</td><td>eBioscience</td><td>15-0081-81</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD19 שיבוט PE-Cy5 6D5</td><td>Biolegend</td><td>115510</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>B220 שיבוט PE-Cy5 RA3-6B2</td><td>Biolegend</td><td>103210</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Gr1 PE-Cy5 שיבוט RB6-8C5</td><td>Biolegend</td><td>108410</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>שיבוט Ter119 PE-Cy5 Ter-119</td><td>Biolegend</td><td>116210</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD48 שיבוט PE-Cy5 HM48-1</td><td>Biolegend</td><td>103420</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD117&nbsp; שיבוט APC-Cy7 2B8</td><td>Biolegend</td><td>105825</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Sca1 שיבוט כחול D7</td><td>Biolegend</td><td>108120</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD150 שיבוט APC TC15-12F12.2</td><td>נוגדן Biolegend</td><td>115909</td><td>שיבוט</td></tr><tr><td>FITC RAM34</td><td>BD Bioscience</td><td>553733</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>CD45.2 שיבוט APC 104</td><td>Biolegend</td><td>1098313</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>MitoSOX אדום</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M36008</td><td>צבע</td></tr><tr><td>Mitotracker ירוק</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>M7514</td><td>צבע</td></tr><tr><td>חי/מת צהוב</td><td>צבע ThermoFisher Scientific</td><td>L34967</td><td>צבע</td></tr></tbody></table>

הזרמת כדוריות הדם של מיני חמצן מיטוכונדריאלי מורטין בגזע ובתאי מחולל ולוקמיה מונחה af9

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

אנו מציגים את הגישה cytometric הזרימה עבור ניתוח מיטוכונדריאלי של רוס החיים שונים מח עצם (BM)-גזע נגזר ואוכלוסיות תאים מחולל שונות עכברים בריאים, כמו גם עכברים עם AML מונע על ידי MLL-AF9. באופן ספציפי, אנו מתארים תהליך מכתים של שני שלבים, לפיו תאים בריאים או לוקמיה מוכתמים הראשון עם צבע פלואורוגנטי המזהה על-ידי מיטוכונדריאלי, ואחריו כתמים עם נוגדנים monoochrome מקושרים המקושרים המשמשים כדי להבחין בין אוכלוסיות שונות בריאות וממאירות של המטפאות. כמו כן, אנו מספקים אסטרטגיה לרכישת וניתוח הדגימות על-ידי הזרמת cy, try. הפרוטוקול כולו יכול להתבצע בתוך פרק זמן קצר כמו 3-4 h. אנו גם להדגיש את המשתנים מפתח לשקול, כמו גם את היתרונות ואת המגבלות של ניטור הייצור של ROS בתוך תא מיטוכונדריאלי של לחיות המטפאות לוקמיה גזע ומתת באמצעות צבעים fluorogenic על ידי הזרמת cy, . יתר על כן, אנו מציגים נתונים כי השפע מיטוכונדריאלי משתנה בין אוכלוסיות משנה בריאה HSPC בריא ו לוקמיה ושלתי ולדון ביישומים האפשריים של טכניקה זו במחקר המטקולוגי.

הציג הוא שיטה לניתוח ROS ב המיטו, בריאות מרובות ו-MLL-AF9-ביטוי של אוכלוסיות לוקמיה. איור 1 מציג תצוגה סכמטית של זרימת העבודה של הפרוטוקול, המורכבת מ-4 שלבים עיקריים: 1) בידוד מעכברים; 2) צביעת תאי מוניטור עם צבע פלואורוגנטי המזהה ROS מיטוכונדריאלי, במיוחד סופרתחמוצות; 3) לסמן את הנוגדן כתמים כדי להתוות אוכלוסיות שונות בריאות ולוקמיה המטפאות; ו -4) הזרימה הציקיפית לרכישת וניתוח.
איור 2 A, B מתאר את התוכנית הנציגה לעבו...

אנו מתארים שיטה עבור שימוש בזרימה רב פרמטרים cy, לנסות לזהות מיני מיטוכונדריאלי מינים חמצן (ROS) ב מורטין גזע בריא המטבית ובתאי מחולל (HSPCs) ותאי לוקמיה ממודל העכבר של לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) מונע על ידי MLL-AF9.

הזרמת כדוריות הדם של מיני חמצן מיטוכונדריאלי מורטין בגזע ובתאי מחולל ולוקמיה מונחה AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

מיני חמצן תגובתי או ROS, הם מיני חמצן תגובתי מאוד המיוצרים על ידי תאים, ומשפיע על התנהגותם. למרות עודף ROS יכול גם לגרום הרס תאי נרחב, במקרים חמורים, מוות תאי. לכן, התחזוקה של הוקמפוס ROS היא בעלת חשיבות בסיסית לתפקוד הסלולר והישרדות.הפרוטוקול המוצג כאן, מתמקד במדידת סוג מסוים של ROS, שנוצר על ידי מיטוכונדריה, בעיקר כמוצר משנה מטבולי בגזע חי, נורמלי, או בריא hematopoietic גזע אוכלוסיות תאים אבי, כמו גם בתאי לוקמיה ממודל העכבר של סרטן הדם, לוקמיה מיאלואידית חריפה או AML. פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי להעריך כיצד מניפולציה גנטית, כגון מחיקת גנים או לחץ יתר, משפיעה על ROS המיטוכונדריאלי במספר אוכלוסיות hematopoietic בריאים ממאירים. וכתוצאה מכך, פוטנציאל לספק מידע תובנה על מצב redux ואולי חילוף החומרים של התאים.טכניקה זו מאשרת ניתוח מטרי של גשוש פרוטוגניים כדי לפקח על ייצור ROS מיטוכונדריאלי בגזע ההמוטופיאטי בריא וממאאיר חי ותת-אוכלוסיות של צאצאים. פרוטוקול זה הוא פשוט ו ניתן להשלים אותו בעוד מספר שעות. יתר על כן, הוא מתאים לניתוח תאים חיים ומאפשר להבחין ולנתח ROS מיטוכונדריאלי באוכלוסיית תאי גזע במח העצם, באמצעות סימן פני השטח של כתמים.לאחר איסוף תאי מח עצם מונונוקליריים מעכברים הדוקים פראיים ועכברי MLL-AF9 לויקמיים, על פי כתב היד, aliquot 200 microliters של ההשעיה התא לתוך כל אחד מתשעה צינורות בקרת צבע יחיד. עלה על התאים הנותרים לצינורות ניסוי אחרים, 200 מיקרוליטרים כל אחד. לאחר מכן מניחים לתוך צנטריפוגה שני צינורות ניסיוניים המכילים תאי מח עצם ותאים לויקמיים בהתאמה, וצינור בקרה אחד.צנטריפוגה ב 300 פעמים G במשך חמש דקות. לאחר מכן, decant supernatant, ולהשעות מחדש את התאים בטמפרטורת החדר F-PBS עם כתם תא חי / מת, על פי הוראות היצרן. דגירה על קרח במשך 30 דקות.לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר של טמפרטורת החדר F-PBS לשלושת הצינורות המוכתמים חיים/מתים, וצינור בקרה אחד בצבע יחיד להכתמת צבע ROS מיטוכונדריאלי. מניחים את הצינורות לתוך הצנטריפוגה ב 300 פעמים G במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להשיג 5 מילימולרי פתרון מלאי צבע ROS מיטוכונדריאלי על ידי השעיה מחדש 50 מיקרוגרם של צבע ROS מיטוכונדריאלי ב 13 microliters של DMSO.לאחר מכן הוסיפו 13 מיליליטר של טמפרטורת החדר F-PBS לצבע ROS המיטוכונדריאלי 13 מיקרוליטר כדי לדלל לריכוז סופי של חמישה מיקרומולרים. במידת הצורך, להוסיף 13 microliters של 50 מילימול Verapamil לפתרון כדי לעכב משאבות efflux מיטוכונדריאלי. להשיג את הצינורות מן הצנטריפוגה ולשאוף את לשטוף את הכתם תא חי / מת.הוסף 200 microliters של F-PBS בבקרת הכתמים חיים / מתים ולשמור אותו בקרח עד מוכן להתחיל את הניתוח. הוסף 200 microliters של כתם צבע ROS המיטוכונדריאלי המכיל Verapamil, לכל צינור ניסיוני, כמו גם את צינור בקרת הכתמים ROS המיטוכונדריאלי. מערבולת לערבב דגירה במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס בחושך.לאחר מכן הוסיפו מיליליטר של טמפרטורת החדר F-PBS לבקרה ולצינורות הניסוי. צנטריפוגה חמש דקות ב 300 פעמים G בטמפרטורת החדר. שאפו את העל-טבעי ושטפו את התאים במיליליטר נוסף של טמפרטורת החדר F-PBS.צנטריפוגה שוב במשך חמש דקות ב 300 פעמים G, בטמפרטורת החדר. ראשית, להכין שני קוקטיילים נוגדנים לתאי מח עצם בריאים לוקמיה. שאפו את העל-טבעי מהצינור הניסיוני המכיל תאי מח עצם בריאים, והוסיפו לצינור 200 מיקרוליטרים של קוקטייל הנוגדנים מספר אחת.וורטקס לערבב. כמו כן להכין את צינורות בקרת צבע יחיד על ידי הוספת 200 microliters של F-PBS ומיקרוליטר אחד של הנוגדן המתאים. דגירה במשך 60 דקות על קרח בחושך.שאפו את העל-טבעי מהצינור הניסיוני המכיל מח עצם לוקמיה, והוסיפו לצינור 200 מיקרוליטרים של קוקטייל הנוגדנים מספר שתיים. וורטקס לערבב. דגירה במשך 60 דקות על קרח בחושך.לאחר מכן, לשטוף את כל הצינורות עם 1 מיליליטר של F-PBS קר צנטריפוגה במשך חמש דקות ב 300 פעמים G בטמפרטורת החדר. להשעות מחדש את התאים ב 500 microliters של F-PBS קר. העבר את מתלי התא לתוך כל צינור ציטומטר זרימה עם מסנן 40 מיקרומטר עבור אי הכללת אגרגטים.ראשית, להכניס אחד אין צינור בקרת כתם לתוך מכונת cytometry זרימה ולהתחיל את הרכישה כדי לפצות על מכונת cytometry זרימה. חזור על הפעולה עבור צינורות בקרה אחרים. לאחר מכן, קרא את צינורות הניסוי כדי להקים את השערים.כדי לנתח את הגודל והמורכבות של אוכלוסיית התאים, תחילה עבור HSPC בריא, הגדר את אזור פיזור קדימה ואת אזור פיזור הצד חלקות אוכלוסיות. לחץ על כפתור השער המרובע, כדי לשער פסולת מיותרת מהמגרש של פיזור קדימה וצד. לאחר מכן, באזור פיזור קדמי ובמגרש גובה, השתמש במבדיל כפול כדי לתפוז כפילים.בחר תאים חיים, תאים נמוכים שושלת, ואת HSPC בריא שונים. עבור כל אוכלוסייה של עניין, לנתח את עוצמת הפלואורסצנטיות החציונית של ערוץ TRPE בעלילת היסטגרם, כדי להעריך את ההבדלים באות ROS המיטוכונדריאלי. חזור על אותו הליך של ניתוח גודל, gating והיסטוגרמה התוויית עבור אוכלוסיות לוקמיה.תאי מח עצם מבודדים מעכברים בריאים היו מוכתמים בצבע חי/מת וצבע ROS מיטוכונדריאלי, ולאחר מכן מוכתמים בנוגדנים המכירים סמני שושלת:בתוספת CD48, C-kit, Sca-1, CD34 ו- CD150. בנוסף, תאי מח עצם מעכברי לוקמיה היו מוכתמים גם ב- CD45.2 כדי להפלות בין תאי לוקמיה MLL-AF9 מתאים בריאים למח העצם מוכתמים ב- CD45.1. השוואה של כתמי ROS מיטוכונדריאליים, בין LSK שלילי CD48 בריא, לבין מיאלואידים, מראה כי מיאלואידים progenitors להציג רמות גבוהות באופן משמעותי של כתמי ROS מיטוכונדריאלי.יתר על כן, c-Kit לויקמיה גבוהה progenitors להציג רמות גבוהות באופן משמעותי של כתמי ROS מיטוכונדריאלי, לעומת c-Kit בינוני תאים לוקמיה נמוכה, LSK שלילי CD48 בריא, מיאלואידים. C-Kit ביניים תאי לוקמיה נמוכה, גם הציג ערך גבוה משמעותית בהשוואה לתאי LSK שליליים CD48, אבל לא לאב מיאלואידים. צבעי ROS מיטוכונדריאלי מגיבים מאוד ויש צורך בצעדי שטיפה מתאימים כדי להבטיח שכל עודף של הצבע הוסר לפני תחילת השלבים הבאים.ישנם מספר צבעים פלואורוגניים ROS ברור מבחינה כימית שניתן להשתמש בהם בפרוטוקול זה, כדי להשיג קצת ידע על מצב redux בתאים hematopoietic חיים. טכניקה זו שימשה בהרחבה בספרות, ועשויה לספק תובנות שימושיות על מסלולי חילוף החומרים ואיתות כי הם מוסדרים באופן דיפרנציאלי בתאי לוקמיה, אם בהשוואה לעמיתיהם הרגילים.

flow-cytometric-analysis-mitochondrial-reactive-oxygen-species-murine

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

שיטה לנתח את התפלגות אבות היווצרות הדם במח העצם ב cytometry זרימה, כמו גם ביעילות לבודד מטוהרים מאוד בתאי גזע hematopoietic (HSCs) מתואר. הליך הבידוד מבוסס בעיקרו על העשרת המגנטי של כ-Kit תאים + תא מיון לטהר HSCs ללימודי תאית ומולקולרית.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

כתב יד זה מספק הליך טכני, שניתן להשתמש בהם כדי לאפיין בתרביות תאים C1498 במבחנה ואת לוקמיה חריפה הנגרמת בעכברים לאחר ההזרקה שלהם. פנוטיפי ניתוחים תפקודיים מבוצעים באמצעות זרימה cytometry, מיקרוסקופיה immunofluorescence, cytochemistry ומאי-גרונוולד מכתים Giemsa.

פרוטוקול מפורט לאפיון לקו הסלולרי Murine C1498 דגם Associated לוקמיה העכבר שלה

גילוי של מחלה שיורית מינימלית או מדיד (MRD) הוא סמן prognostic חשוב זיקוק הערכת סיכונים, חיזוי relapse ב לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). אלה מקיף הנחיות והמלצות עם שיטות עבודה מומלצות עבור זיהוי עקבי ומדויק וזיהוי של MRD, עשויים לסייע בקבלת החלטות לטיפול יעיל של AML.

פרוטוקולים מקיפה לדוגמה, מח עצם תהליך למדידת מחלה שיורית מדיד, לוקמיה בתאי גזע לוקמיה מיאלואידית חריפה

אנחנו חלוקה לרמות פרוטוקול לזהות ביטוי בו זמנית של סמנים תאי לוקמיה בתאי לוקמיה מיאלואידית חריפה הראשי על-ידי cytometry זרימה. אנו מראים כיצד ניתן לכמת שלוש אוכלוסיות קדמון, אוכלוסיה ה-LSC בשם עם הגדלת מידת ההבשלה. אנחנו אישרו הנוכחות של אוכלוסיות אלה ב המתאים לחולה-נגזר-xenografts.

Flow Cytometry להעריך לוקמיה תאי גזע ראשי לוקמיה מיאלואידית חריפה, החולה-נגזר-xenografts, אבחון, מעקב.

אנו מתארים את השימוש השתלת תא גזע hematopoietic (HSCT) כדי להעריך את פוטנציאל ממאיר של תאים מהונדסים גנטית hematopoietic. HSCT שימושית לצורך הערכת שונים תאים ממאירים hematopoietic ויוו , כמו גם יצירת קבוצה גדולה של עכברים עם תסמונות myelodysplastic (MDS) או לוקמיה להעריך טיפולים חדשניים.

השימוש השתלת תא גזע Hematopoietic להעריך את מקורם של התסמונת המיאלודיספלסטית

משאבות xenoביוטיקה פעילים מאוד בתאי גזע ומחולל קדמון (HSPCs) ולגרום שחול TMRM, קרום מיטוכונדריאלי פוטנציאל לצבוע פלורסנט. כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי למדוד במדויק פוטנציאל קרום מיטוכונדריאלי ב HSPCs על ידי TMRM בנוכחות Verapamil, מדכא משאבת משאבה.

שיפור הדיוק של הערכה להערכת הזרימה של הפוטנציאל לממברנה מיטוכונדריאלי בתאי המטפאות ובתאים באמצעות עיכוב של משאבות אפלוקס

מעבר ממצב השקט למצב בידול בשל הפלסטיות המטבולית שלהם במהלך היווצרות הדם. כאן, אנו מציגים שיטה ממוטבת למדידת נשימה מיטוכונדריאלי וגליקוליזיס של HSPCs.

ניתוח מטבוליזם התא של גזע המטפאות

כאן אנו מתארים שיטה אמינה למדוד מסה מיטוכונדריאלי פוטנציאל קרום בתאי גזע vivo המטפאות לשעבר תאים T.

מדידת מיסת מיטוכונדריאלי ופוטנציאל ממברנה בתאי גזע ותאי T-תאים על ידי זרימה Cy,

השיטה המוצגת כאן מסכמת פרוטוקולים ממוטבים להערכת ביו-אנרגיה תאית בגזע המטופויאטי של עכברים שאינם דבקים ובתאי אב פרימיטיביים (HSPCs) תוך שימוש במנתח השטף החוץ-תאי כדי למדוד את קצב ההחמצה החוץ-תאית (ECAR) ואת קצב צריכת החמצן (OCR) של HSPCs בזמן אמת.

הערכה של ביו-אנרגיה תאית בגזע המטופויאטי של עכברים ובתאי אב פרימיטיביים באמצעות מנתח השטף החוץ-תאי

כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט לבידוד והכתמה של תאי מח עצם מורין לפנוטיפ תאי גזע המופויטיים ותאי אב יחד עם תאי גזע אנדותל ומזנכימליים תומכים. כמו כן נכללת שיטה להעשרת תאים הממוקמים באזורי אנדוסטל ומח עצם מרכזי.

ניתוח ציטומטריית זרימה של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים של מח עצם מורין ותאי נישה סטרומליים

כאן מוצג פרוטוקול מפורט לבידוד ואפיון אוכלוסיות מיקרו-סביבתיות של מח עצם ממודלים של תסמונות מיאלודיספלסטיות ולוקמיה מיאלואידית חריפה. טכניקה זו מזהה שינויים בנישת מח העצם הלא המטופויטית, כולל תאי האנדותל והסטרומה המזנכימליים, עם התקדמות המחלה.

זיהוי אוכלוסיות מיקרו-סביבתיות של מח עצם בתסמונת מיאלודיספלסטית ובלוקמיה מיאלואידית חריפה

למד זרימה ציטומטרית לזיהוי ROS מיטוכונדריאלי בתאי גזע המטופויטיים ובתאי לוקמיה בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכת השפעת שינויים גנטיים על רמות ROS ומספקת תובנות לגבי מטבוליזם תאי ואסטרטגיות טיפול בלוקמיה.

הזרמת כדוריות הדם של מיני חמצן מיטוכונדריאלי מורטין בגזע ובתאי מחולל ולוקמיה מונחה AF9

גלה סרטונים נוספים