Name: כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: למדו כיצד ליצור כלי ביתיים פשוטים להעברה, הקפאה והריגה של זבובי פירות Drosophila melanogaster במעבדה. השיטות מייעלות טיפול בזבובים למחקר ולימודים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. הכנת כלים ועזרים
<ol><li>פקקים/משפך
	<ol>
<li>השג שני אטמי ספוג (קוטר התקעים חייב להיות מעט גדול יותר מהקוטר הפנימי של הבקבוקונים המשמשים להעברת זבובים). בצע חור במרכזי של אטמי ספוג עם ברזל מחומם להלחמה חשמלית.</li>
		<li>השיגו שני טיפים של הפיפטה, חותכים אחד לחצי בצורה מחוסרת עם סכין חדה, וזורקים את הקצה המחודד. ואז, לחתוך 1.5 ס מ של הקצה המחודד מהקצה השני של הצינורות. הדבק את השרידים של שני הפיפטה ביחד עם דבק לכל מטרה כדי ליצור קצה מוארך של פיפטה (איור 1A).</li>
		<li>הכנס משפך ואת הקצה הצינור מוארך לתוך אטמי ספוג כדי ליצור טיפ משפך פקק (להלן המכונה T-ו-F הפקקים) וכיפה את העצה הפיפטה עם צינור מיקרוצנטריפוגה 100 μL (איור 1A). הערה: אורך גבעול המשפך חייב להיות גדול מגובה התקע. אם הוא קצר יותר או שווה לגובה של התקע, אז הזבובים יברחו מפתח הגבעול. סוף גבעול המשפך צריך להיות ממוקם לפחות 2 ס מ מעל פני השטח של המדיום התרבותי או התחתון של בקבוקון ריק. Funnels קטנים (למשל, בקוטר הדיסק < 60 מ"מ) עם קטרים קטנים של פתיחת גזע פנימי (< 5 מ"מ) עדיפים. ניתן להשתמש בזכוכית או במשפך פלסטיק כדי ליצור פקק F. עם זאת, funnels פלסטיק עדיפים על שיעורי ביולוגיה, כפי שהם שוברים פחות בקלות מfunnels זכוכית.</li>
	</ol></li>
	<li>מחטים מיקרובתר
	<ol>
<li>השיגו עפרונות מכניים החשים בנוח ביד ובסיכות החרקים התואמים את הקטרים (למשל, 0.5 מ"מ, 0.7 מ"מ) של מילוי העופרת שלהם.</li>
		<li>חותכים את הקצוות הרחבים של סיכות החרק עם זוג צבת ולתייק את החלק השטוח. החלף את ההפניה עם הפינים (איור 1B). לחץ על לחצן הלחיצה והזנה של 0.5 – 1 ס מ של סיכה כדי לבצע ניתוח. נקו את הסיכה ודחפו אותו לגמרי חזרה לפיר העיפרון לאחר פעילות הניתוח כדי להפוך אותו לבטוח עבור כל אדם לטפל. הערה: מחטים מיקרוספירה שימושיות לא רק בניתוח איברים כגון זחל בלוטות הרוק אלא גם בספירה ומיון זבובים מבוגרים מת.</li>
	</ol></li>
	<li>ליוקס קשוחים
	<ol>
<li>להשיג מספר refreezable icepacks קשה (icepacks בגודל גדול עדיפים). איור 1C מראה icepacks זה עבד היטב, אשר מודד 26.5 ס"מ x 14.5 ס"מ x 2.5 ס"מ יש הצדדים העליון והתחתון כי הם שטוחים לחלוטין.</li>
		<li>גזור גזה רפואי (לא סטרילי) לחתיכות כי הם מעט קטנים יותר מאשר המשטחים הקרים של icepacks הם מכסים. לדוגמה, פיסת גזה רפואית מעט קטן יותר מ 26.5 ס"מ x 14.5 ס"מ עדיף לכסות מסכה המוצג באיור 1c. הערה: האביזרים הדרושים עבור אלה כלים מצמררת כוללים: תיבת קרח (השתמשנו 25 ס"מ x 15 ס"מ x 15 ס מ תיבת קצף לאדם אחד ו-37 ס"מ x 28 ס"מ x 20 ס מ תיבת עבור יותר מאדם אחד), המשמש לאחסון קרח כתוש; זוג מלקחיים דקים, המשמשים לתפוס זבובים צוננים על ידי כנפיהם ולהעבירם לבקבוקון; זוג כפפות עבודה הגנה, אשר משמשות כדי לקחת מקורר החוצה של a-20 ° c מקפיא; וסרט פלסטיק, המשמש לכיסוי השלב של stereomicroscope.</li>
	</ol></li>
	<li>כלוב איסוף ביצת דרוזוהילה הערה: מוכנות מראש אוספים כלובים אוסף ביצים זמינים מחברות ביוטכנולוגיה רבות11. המתואר כאן הוא בקבוק אקרילי קטן בצורת ביצה כלוב איסוף עבור 60 מ"מ מנות פטרי (איור 1D שמאל; עיצוב הכלוב מוצג באמצע). ניתן להתאים אותו למידות אחרות של כלי פטרי (לדוגמה, 100 מ"מ, 35 מ"מ). זה מאפשר העברת זבובים לתוך או מחוץ לכלוב בקלות. כלוב פשוט יכול להיות מוכן כדלקמן.<ol>
<li>השתמש בחותך הצמד כדי לגזור בקבוק משקה פלסטי רך (500 mL, קוטר פנימי ca. 65 מ"מ) לתוך 2:1 משוער (קצה מחודד: בקצה קהה) היחס ולמחוק את הקצה הקהה.</li>
		<li>עטוף רצועה של נייר כרטיס סביב צלחת מיץ תפוחים (קוטר פנימי 60 מ"מ) עם סרט דביק [צלחת מיץ תפוחים משמש כדי לאסוף ביצים (איור 1E, נכון)].</li>
	</ol></li>
	<li>נהג מברשת שפופרת אלחוטי
	<ol>
<li>השג מנהל מקדחה אלחוטי (מהירות מקסימלית = 500 rpm).</li>
		<li>השיגו מברשת שפופרת עם זיפים לאורך הצדדים, כמו גם החזית שלה. באופן אידיאלי, קוטרו של המברשת צריך להיות גדול מעט יותר מקוטר של בבחנות התרבות שיש לנקות. חותכים את קצה הידית שלה כך שניתן להוסיף אותו לתוך המקדחה (איור 1D). הערה: האביזרים הדרושים עבור כלי ניקוי אלה כוללים ספוגים מפלדת אל-חלד וכפפות גומי ארוך השרוול.</li>
	</ol></li>
</ol>2. העברת זבובים למבוגרים ממבחנה A כדי בקבוקון B
הערה: העברת זבובים של מבוגרים ממבחנה אחת לאחרת היא הפרקטיקה השכיחה ביותר בניסויים בדרוזוהילה [למשל, העברת זבובים מהתרבות הישנה (א) לתרבות טרייה (b) או מבקבוקון צלב (א) לבקבוקון ריק (ב). הפרוטוקול המתואר כאן יכול לשמש עבור כל מבוגר לטוס העברת פעילויות. אלא אם נכתב אחרת, פרוטוקול זה משמש כדי להעביר זבובים ממבחנה A כדי בקבוקון B לאורך הנייר הזה.
<ol><li>בדוק את הגבעול של המשפך של פקק F ואת קצה הפיפטה של פקק T בזהירות, ולאחר מכן נקה את כל הזבובים שנשארו בפקקים עם מפוח אוויר מגומי. שלב זה הוא בעל חשיבות עליונה, במיוחד כאשר מדובר בקבוצה אחת של מטוסי T ו-F המשמשים להעברה רציפה של קווי דרוזוהילה שונים.</li>
	<li>להקיש את הזבובים במבחנה A ולהחליף את התקע שלה עם פקק T, ואז לחבר בקבוקון B עם פקק F.</li>
	<li>היפוך בקבוקון A מעל בקבוקון B, להכניס את קצה החריץ של הפקק לתוך פתיחת המשפך של מעצור F, להפיל את הקצה של בקבוקון הפוכה A כדי לאפשר זבובים לחמוק מתוך הקצה של הצינורות ודרך גבעול המשפך, וירידה לתוך בקבוקון B. אם כל האוכל הישן במבחנה A הופך פחות קומפקטי, זה עלול לרדת כאשר בקבוקון A הוא הפוך ודפק. במצב כזה, להפוך בקבוקון B מעל בקבוקון A ולאפשר זבובים לזחול לתוך בקבוקון B.</li>
	<li>. הפרידו את הפקק מפקק האף המכסה את קצה הפיפטה של מעצור ה-T עם שפופרת מיקרוצנטריפוגה של 200 μL, אם הזבובים הנותרים במבחנה יש צורך להעביר לבקבוקונים אחרים בכל רגע; אחרת, להסיר את הפקק ולחבר מחדש את המבחנה א. הסר את הפקק F וחבר מחדש בקבוקון B.</li>
</ol>3. לשתק את הזבובים על ידי צינון
<ol><li>לשמור על refreezable icepacks קשה ב-20 ° c מקפיא לפחות 24 שעות לפני השימוש.</li>
	<li>מניחים מקורר, קשה מסכה בטמפרטורת החדר (RT) עבור 20 דקות. מעט מויסטן פיסת גזה רפואי שאינה אספספיגה עם כמה מים זורמים ולאפשר לו להיאחז היטב את פני השטח של מסכה. גזה רפואי ניתן לעשות שימוש חוזר הזבוב הבא מצמרר. באותו זמן, לצנן בקבוקון ריק בקרח כתוש.</li>
	<li>העבר זבובים מבוגרים כי צריך להיות מקיבוע לתוך הבקבוקון הריק מקורר (CEV). כאשר שני מבחנות העברה מופרדים, לכסות את CEV עם צלחת פטרי או תקע ולהפיל את CEV נגד קרח כתוש כדי להקיש על כל הזבובים CEV למטה לתחתית. חזור על תהליך זה מספר פעמים עד שכל הזבובים יהיו ללא תנועה. . הזבובים יהיו ללא קיבוע בתוך 30 שנות לאחר מכן, הצב את ה-CEV בקרח במשך 1 דקות. לא מומלץ להעביר יותר מדי זבובים בבת אחת בשביל להיות מורדם.</li>
	<li>יוצקים את הזבובים מקורר אל גזה רפואי שמכסה את חבילת קרח. מורחים את הזבובים חופפים עם מכחול ולוודא כי כל זבוב יכול להיות מקורר על ידי המשטח הקר של icepack. אם מצוננים מצונן מתנפח מעט, מניחים אותו על מגבת ועובדים על הצד השטוח.</li>
	<li>להסיר את הסרטונים מstereomicroscope, לכסות את הבמה עם פיסת סרט פלסטיק, ולשים את מסכה על הבמה. הפעל את האור העליון (מקור אור קר רצוי), למקד את stereomicroscope ולהעביר את מסכה עד זבובים מקורר ניתן לראות בבהירות.</li>
</ol>4. הריגת זבובים למבוגרים לספירה, מיון או השמטה
<ol><li>להעביר מבוגרים זבובים לתוך בקבוקון ריק ולכסות אותו עם צלחת פטרי.</li>
	<li>להפוך את המבחנה, לחמם אותו עבור 1 דקות + 20 במיקרוגל, ולאפשר זבובים מתים לרדת לתוך צלחת פטרי.</li>
	<li>תלבש כפפות מגן ותוציא. את הבקבוקון מהמייקרוגל יוצקים זבובים מתים על כרטיס נייר לבן, לספור או לבחון את הזבובים עם מחט מיקרוסקופ מתחת stereomicroscope, ולהיפטר הגופות לעוף בפח אשפה לאחר התבוננות.</li>
	<li>כדי להרוג זבובים לא רצויים, לחמם את הזבובים 2 – 3 דקות במיקרוגל, ואז להקיש על הגוויות לתוך פח אשפה. הערה: לא מומלץ להרוג כמה זנים של מוטציות כנף (למשל, המוטנטים אורך הכנף) לבדיקה, כי קשה לשפוט מן הגוויות אם הכנפיים להאריך מעבר לקצה הבטן, אשר נראה זבובים מסוג פראי.</li>
</ol>5. העברת זבובים פנימה/החוצה של בקבוקים בצורת כלוב אוסף ביצים
הערה: כפי שהוזכר לעיל, הפקקים T ו-F משמשים כדי להעביר זבובים לתוך ומחוץ לכלוב אוסף ביצים. זבובים לא צריכים להיות מורדם במהלך תהליך זה. פרטים נוספים, כגון הכנת מדיום מיץ התפוחים, אוסף הביציות והדבורנון, ניתן למצוא בספרות12.
<ol><li>הכנס את הכלוב אוסף ביצים לתוך צלחת מיץ תפוחים או להר את צלחת מיץ התפוחים לכלוב עשוי בקבוק משקה רך. לאטום את המפרק סביב שני המרכיבים עם רצועת סרט הפרפין.</li>
	<li>מניחים כמו זבובים רבים ככל האפשר לתוך הכלוב ולחבר מחדש את הכלוב עם פקק קצף לאחר העברת הזבובים.</li>
	<li>כדי לשנות את המזון עבור זבובים בכלוב, להעביר את הזבובים בכלוב לבקבוקון ריק.</li>
	<li>להחליף את הצלחת מיץ תפוחים לאטום אותו, ואז להעביר את הזבובים מן המבחנה בחזרה לכלוב.</li>
	<li>כאשר אוסף הביצים מסתיים, להעביר את הזבובים לתוך בקבוקון ריק ולהעביר אותם לתוך בבקבוקונים התרבות.</li>
</ol>6. ניקוי תרבית ומבחנות
הערה: באופן כללי, בקבוקון תרבות ישן מכיל זבובים חיים. בפרוטוקול המתואר כאן, זבובים אלה לא צריך להיהרג לפני הניקוי אלא אם כן הם זבובים הטרנסגניים.
<ol><li>הסירו את כל דיו הסמן הקבוע מתוך מבחנות של תרבות זכוכית עם ספוגים רטוב נירוסטה.</li>
	<li>
משרים את מבחנות התרבות במים זורמים.
	<ol>
<li>ממלאים כיור מעבדה עם מים, מוסיפים סבון נוזלי כלים למים ומערבבים.</li>
		<li>לטבול את מבחנות התרבות לתוך המים, ולאחר מכן להסיר את התקע, המאפשר למים לרוץ לתוך הבקבוקון. אבקת הכלים במים תגרום לשאר הזבובים הבוגרים לשקוע לתחתית ולטבוע במים.</li>
		<li>משרים את מבחנות התרבות הישנות במים לפחות 30 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>שחרר את הצ של התרגיל, הכנס את מברשת שפופרת הבדיקה והretighten את הצ. בדוק את כיוון בורר הסיבוב וודא שהתרגיל מסתובב בכיוון השעון. כוונן את הגורם המפעיל המהיר וודא שהמהירות המירבית נמוכה מ-500 סל ד.</li>
	<li>
. נקה את בבחנות התרבות
	<ol>
<li>נקה את מבחנות התרבות בערך.<ol>
<li>שים כפפת גומי ארוכה על היד הלא דומיננטית והחזק את הבקבוקון במים.</li>
			<li>החזיקו את נהג מברשת השפופרת האלחוטי עם היד הדומיננטית החשופה, מחצי את המברשת לתוך בקבוקון התרבות וסוחטים את ההדק. הערה: אל טבול את הסוללה במים. המברשת המסתובבת תשבור את האוכל הישן, הגולם וכדומה, ותסיר יותר מ-95% מהפסולת.</li>
			<li>השליכו את הפסולת. לתוך פח אשפה נפרד חזור על תהליך זה עד שרוב הפסולת בכל בקבוקון נוקה.</li>
		</ol>
</li>
		<li>נקו את מבחנות התרבות ביסודיות.<ol>
<li>נקו את מברשת הצינורית, רוקנו ונקו את הכיור, וממלאים אותו במים נקיים.</li>
			<li>הסר את הפסולת הנותרת מכל בקבוקון תרבות כמתואר בסעיף 6.4.1.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Jennings, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+%E2%80%93+a+versatile+model+in+biology+%26+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Today%22%5BJournal%5D)">Drosophila – a versatile model in biology & medicine.</a> Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).</li>
<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biology+I%3A+yeast%2C+Drosophila+and+C.+elegans.+An+Introduction+to+Drosophila+melanogaster%22">Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).</li>
<li>Ashburner, M., Roote, J. Laboratory Culture of Drosophila. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila+Protocols%22">Drosophila Protocols</a>. Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Ch. 585-599 (2000).</li>
<li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fly+pushing%3A+The+theory+and+practice+of+Drosophila+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Laboratory+Press%22%5BJournal%5D)">Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics.</a> Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).</li>
<li>Ashburner, M., Thompson, J. The laboratory culture of Drosophila. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22The+genetics+and+biology+of+Drosophila%22">The genetics and biology of Drosophila</a>. Ashburner, M., Wright, T. R. F. 2a, Academic Press. 1-109 (1978).</li>
<li>Ratterman, D. M. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRatterman%2C+DM+%22Tested+Studies+For+Laboratory+Teaching%22">Tested Studies For Laboratory Teaching</a>. O'Donnell, M. A. , 259-265 (2003).</li>
<li>Culturing techniques for Drosophila . , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf">https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf</a> (2019).</li>
<li>Markow, T. A., O'Grady, P. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkow%2C+TA+%22Drosophila%3A+A+Guide+to+Species+Identification+and+Use%22">Drosophila: A Guide to Species Identification and Use</a>. , Academic Press. (2006).</li>
<li>Artiss, T., Hughes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+the+Headaches+Out+of+Anesthetizing+Drosophila%3A+A+Cheap+%26+Easy+Method+of+Constructing+Carbon+Dioxide+Staging%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging.</a> The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).</li>
<li>Qu, W. -H., Zhu, T. -B., Yang, D. -X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modified+Cooling+Method+and+its+Application+in+Drosophila+Experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Biological+Education%22%5BJournal%5D)">A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments.</a> Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).</li>
<li>Egg-laying cages for drosophila. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17">https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17</a> (2018).</li>
<li>Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoberts%2C+DB+%22Drosophila%3A+a+practical+approach%22">Drosophila: a practical approach</a>. , 2nd edn, Oxford University Press. (1998).</li>
<li>Tang, M., Peng, Q. -F., Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+devices+for+Drosophila+experiments+%28in+Chinese%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Biology%22%5BJournal%5D)">Two devices for Drosophila experiments (in Chinese).</a> Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).</li>
<li>Zhou, T. -y, Gan, J., Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+sponge+plug+and+sponge+plug+based+fly+transferring+device+for+Drosophila+experiments+%28in+Chinese%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese).</a> Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).</li>
<li>Yang, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYang%2C+D+%22Genetics+laboratory+investigation%22">Genetics laboratory investigation</a>. , 3rd edn, Science Press. (2016).</li>
<li>Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carnivory+in+the+larvae+of+Drosophila+melanogaster+and+other+Drosophila+species%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species.</a> Scientific Reports. 8, (2018).</li>
<li>Stocker, H., Gallant, P. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStocker%2C+H+%22Drosophila%3A+Methods+and+Protocols%22">Drosophila: Methods and Protocols</a>. Dahmann, C. , Humana Press. (2008).</li>
</ol>

. לסופר אין מה לגלות

מספר כלים תוצרת בית לטיפול בפעילויות בסיסיות הכרוכות בגידול בדרוזוהילה ובניסויים מתוארים במאמר זה. כלים אלה פשוטים אך יעילים למדי. כמעט, כל מעבדה יכולה לעשות את הכלים האלה בקלות, ומחקר או מעבדה להוראה לא צריך למצוא חלופה מוכנה שהיא אולי לא זמינה באופן מקומי.
העברת טיסה היא הפרקטיקה השכיחה ביותר ומשימה קשה בניסויי דרוזוהילה . למרבה הצער, עד היום, לא תוארו כלים העברת3,4,12,<...

זבוב הפירות, דרוסופילה מלאנוסטר, הוא אורגניזם מודל המשמש רבות בחינוך ביולוגי ובביולוגיה לחקר מגוון רחב של נושאים1,2. הבעיות הבסיסיות בטיפול בדרוסופילה הן העברת מבוגרים ממבחנה לבקבוקון ולשתק את הזבובים כך שיהיה קל יותר לטפל בהם, כמו כל המבוגרים (למעט מוטציות מסוימות3,4) יכולים לעוף.
מקובל, חוקר מעביר זבובים ממבחנה אחת לאחרת על ידי החזקת שני מבחנות פה-לפה, הקשה על זבובים למטה או לאפשר זבובים לטוס לתוך בקבוקון אחר, ולאחר מכן הפרדת וחיבור מחדש שני מבחנות4. כמובן, הדבר דורש שפתיחת שני מבחנות בקוטר זהה, וקשה לשלוט בכמות הזבובים המועברים. בינתיים, זה דורש ידיים מהירות כדי לבצע את העבודה, ובריחה זבובים תועים יכול לגרום לבעיות עבור המעבדה או הכיתה. הוספת זבובים בתולין נוספים או זבובים זכרים לצלב כבר מוכן היא משימה שגרתית נוספת בניסויים דרוזוהילה . מקובל, זבובים חייב להיות מקיבוע במבחנה לפני תוספת של זבובים נוספים.
מבוגרים מרדימים באופן שגרתי על ידי אתר, CO2, או מצמרר5. לעומת החשיפה לאתר ושיתוף2 , מצמרר הוא הסוכן החסכוני ביותר עבור ששתק למבוגרים דרוסופילה ואת הפחות מזיק הן זבובים וחוקרים (בעיקר סטודנטים צעירים)6,7. עם זאת, מים העבים באופן רציף על פני השטח הקר או מרטיב את הזבובים. קשה לקבוע את פנוטיפים של זבובים רטובים, והם יכולים בקלות להיפגע במהלך מניפולציה8,9. זה שמר על שיטת הצינון. להיות מקובלת יותר
כלים עבור העברת הזבוב ושיטה לקירור מעופף כבר תוארו בעבר10. להלן, מדווחים שטכניקת הרדמה מצמררת ששונתה, הינה בטוחה, אמינה ואפשרית לניסויים בדרוזוהילה . מתואר גם במאמר זה 1) שיטות להרוג מבוגרים עבור ספירה, מיון, או השמטה, 2) התקנים לחסכון בעבודה ופרוטוקולים לניקוי מבחנות של תרבות זכוכית, ו 3) כלוב פשוט לאיסוף ביצים. הכלים תוכנן בקלות וחסכוני המתואר כאן יכול לשמש כדי לטפל בנושאים קשים של טיפול בזבוב, ושיטות אלה נבדקו והוכחו להיות חזקים, אמין, קל לטפל עבור חוקרים מנוסים ומתחילים.

<table><tbody><tr><td>זוג צבת</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקדחה</td><td></td><td></td> אלחוטית <td>מהירות מקסימלית: 500 סל"ד</td></tr><tr><td>ברזל</td><td></td><td></td><td></td>הלחמה חשמלי</tr><tr><td>קוטר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>משפך</td><td></td><td></td><td>קובץ של הדיסק< 60 מ"מ</td></tr><tr><td>קופסת</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרח סיכות</td><td></td><td></td><td></td>חרקים</tr><tr><td>מדחום</td><td></td><td></td> אינפרא אדום <td>HCIYET HT-830</td></tr><tr>כפפות <td></td><td></td><td></td><td>גומי שרוול ארוך</td></tr><tr><td>עפרונות מכניים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>גזה</td><td></td><td></td><td></td>רפואית</tr><tr><td>צינור</td><td></td><td></td> מיקרוצנטריפוגה <td>100 ul</td></tr><tr><td>תנור</td><td></td><td></td><td></td>מיקרוגל</tr><tr><td>Parafilm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peri צלחת</td><td></td><td></td><td>קוטר פנימי 60 מ"מ</td></tr><tr><td>קצות</td><td></td><td></td> פיפטה <td>1 מ"ל</td></tr><tr><td>סרט</td><td></td><td></td><td></td>פלסטיק</tr><tr><td>פלסטיק צלחת</td><td></td><td></td> פרי <td>פלסטיק ופי; 36 מ"מ משמש לכיסוי הבקבוקון הריק</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td></td><td></td><td></td>פוינט</tr><tr><td>כפפות</td><td></td><td></td><td></td>עבודה מגן</tr><tr><td>חבילות קרח קשות הניתנות להקפאה חוזרת</td><td></td><td></td><td>26.5 ופעמים; 14.5 ופעמים; 2.5 ס"מ ומעלה</td></tr><tr><td>מפוח</td><td></td><td></td><td></td>אוויר גומי</tr><tr><td>חותך</td><td></td><td></td><td></td>הצמד</tr><tr><td>בקבוק</td><td></td><td></td> שתייה קלה <td>500 מ"ל, קוטר פנימי c.a. 65 מ"מ</td></tr><tr><td>פקק</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספוג ספוגי נירוסטה מברשת</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td>צינור</tr><tr><td>בקבוקון</td><td></td><td></td><td>& פי; 34 מ"מ ופיתוים; 90 מ"מ</td></tr></tbody></table>

כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

הזבוב הפרי, דרוזופילה מלאנוסטר, משמש רבות גם בחינוך ביולוגי ובביולוגיה. טיפול בזבובים מבוגרים נפוץ אך קשה בפועל, כאשר זבובים מבוגרים עפים. הפגינו כאן היא איך לעשות כמה כלים פשוטים וחסכוניים כדי לטפל בבעיות קשות בטיפול Drosophila ילה. חורים בפקקים מוקצף נעשים ומfunnels ומוכנסים לתוך החורים. לאחר מכן, הזבובים זזים רק בכיוון אחד לתוך מכלול הפיפטה/משפך של הצינורות , ומאפשר שליטה יעילה על העברת הבוגרים לתוך או מתוך בקבוקון. הפרוטוקולים הקיימים שונו לזבובים מצננים על ידי התקררות בקרח כתוש והעברתם אל משטח קר, קשה מסכה. מסכה מכוסה פיסת גזה רפואי שמחזיק ללא קיבוע זבובים מהמים המרוכז כאשר נבדק תחת stereomicroscope. הזבובים מורדמים בסופו של דבר לספירה ולמיון או למחיקה על ידי המיקרוגל. הכלוב בצורת בקבוק פותחה גם עבור איסוף ביצים, כמו גם מכשיר לחסכון בעבודה וליווי פרוטוקול לניקוי בקבוקים של תרבות זכוכית.

T-ו-F הפקקים פותחו כקבוצה של כלים פשוטים שניתן להתאים ולהשתמש בכל לטוס העברת פעילויות. העברת זבובים מתרבות ישנה למספר תרבויות טריות כרוכה בהסרת אטמי הבקבוקונים הטריים, החלפתו בפקקים, ולאחר מכן הקשה על הזבובים בבקבוקון הישן, הסרת התקע במהירות והחלפתו בפקק T. אם האוכל הישן הוא קומפקטי, אז חשוב להפוך את הבקבוקון הישן להכניס את הקצה של הפקק T לתוך הפתיחה של מעצור F, ואז להקיש את הזבובים למטה לתוך בקבוקון טרי. לאחר מכן, החלפת הפקקים T ו-F וחיבור מחדש של הבקבוקונים מבוצעת. אם האוכל הישן הופך לה...

המתואר כאן הוא השימוש בכמה כלים תוצרת בית כדי להעביר, לצנן, ולהרוג מבוגרים Drosophila ילה, כמו גם לנקות את התרבות זכוכית מבחנות ולאסוף ביצים. כלים אלה קלים לעשות והם יעילים למדי בטיפול Drosophila ילה.

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...

זה יכול להיות מאתגר להעביר ולשתק זבובי פירות. באמצעות טכניקות וכלים אלה, אתה יכול לעשות העברת זבוב שגרתית קיבוע קל יותר. החומרים הדרושים כדי להפוך את הכלים האלה הם זולים וקל להשיג.ייעוץ והוראה או מעבדת מחקר יכולים לעשות אותם בקלות. לפני תחילת הליך זה, להשתמש בברזל sodlering חשמלי לעשות חור במרכזים של שני תקעי ספוג כי הם גדולים יותר מאשר הקוטר הפנימי של הבקבוקונים שישמש להעברת הזבובים. לאחר מכן, השתמש בסכין חדה כדי לחתוך קצה מיקרופיפט אחד מילימטר רוחבי לשניים לחתוך 1.5 ס"מ מהקצה של קצה מיקרופיפט מילימטר שני.הדבק את החלקים של שני טיפים פיפטה יחד עם דבק לכל מטרה. לאחר מכן הכנס את קצה המיקרופיפט המוארך לתקע ספוג אחד, והכנס משפך לתקע הספוג השני, וכסה את קצות הפיפט עם צינורות מיקרוצנטריפוגה בודדים של 100 מיקרוליטר. כדי להכין את מחטי המיקרו-דיסקטיקציה, בחר סיכות חרקים התואמות את קטרות מילוי העופרת של עפרונות מכניים ארגונומיים, ולהשתמש בזוג צבת כדי לחתוך את הקצוות חד העין של הפינים.לאחר מכן תגיש את החתכים שטוחים, והחלף את ההפניה בעפרונות בפינים שהשתנו. כדי להכין מארז איסוף ביצים Drosophila, להשתמש חותך הצמד לחתוך בקבוק משקה פלסטיק רך 500 מיליליטר כ 2/3 במורד הבקבוק, ולהשתמש בקלטת כדי לאבטח רצועה של נייר כרטיס סביב צלחת מיץ תפוחים בקוטר 60 מ"מ. כדי להעביר את זבובים הבוגרים בין בקבוקונים, בדקו היטב את גזע המשפך ב פקק המשפך ואת קצה הפיפסה ב פקק הקצה.הקישו על הזבובים בבקבוקון הראשון, והחליפו את התקע ב פקק קצה. חבר את הבקבוקון השני עם פקק משפך, והצב את הבקבוקון הראשון מעל הבקבוקון השני, כך קצה פיפטה קצה של פקק קצה מוכנס לתוך פתח משפך של פקק משפך. לדפוק את הקצה של הבקבוקון הראשון כדי לאפשר את הזבובים לחמוק מקצה פיפטה דרך הגבעול של המשפך לתוך הבקבוקון השני.אם כל מזון ישן בבקבוקון הראשון הופך פחות קומפקטי ויורד כאשר הבקבוקון הוא הפוך, להפוך את הבקבוקון השני על הבקבוקון הראשון, ולאפשר זבובים לזחול לתוך הבקבוקון השני. כאשר מספר הזבובים הרצוי הועבר, הפרד את פקק הקצה ממעצור המשפך והחלף את פקק הקצה בתקע המקורי. לאחר מכן החלף את פקק המשפך בבקבוקון השני בתקע מתאים.עבור קיבוע זבוב פירות למבוגרים על ידי מצמרר, מניחים חבילת קרח להקפאה, כי כבר מקורר במינוס 80 מעלות צלזיוס לפחות 24 שעות, בטמפרטורת החדר, ומצננים בקבוקון ריק בקרח כתוש. 20 דקות לאחר מכן, מעט לחות חתיכת גזה רפואית לא אספטית, כי הוא קצת יותר קטן מאשר חבילת קרח מקורר, עם מים זורמים. מניחים את הגזה על פני השטח של חבילת הקרח כך שהגאזה נצמדת קרוב לפני השטח של הלהקה.לאחר מכן השתמשו בפיסת נייר סופגת כדי לנגב את המים מהבקבוקון הצונן והריק, ולהעביר את הזבובים הבוגרים שצריכים להיות משותקים לתוך הבקבוקון. כאשר כל הזבובים הועברו, לכסות את הבקבוקון המצונן, ולהפיל את הבקבוקון על הקרח כתוש פעמיים עד שלוש פעמים כדי להקיש על כל הזבובים לתחתית הבקבוקון. הזבובים מיד יהיו משותקים.מניחים את הבקבוקון בחזרה על קרח במשך דקה אחת לפני שופכים את הזבובים על גזה מכסה את חבילת הקרח. לאחר מכן השתמש במברשת צבע כדי לפרוש את הזבובים החופפים. כדי לבחון את הזבובים משותקים תחת מיקרוסקופ סטריאו, להסיר את קליפי הבמה מן המיקרוסקופ לנתח, ולכסות את הבמה עם חתיכת סרט פלסטיק.מניחים את חבילת הקרח על הבמה, ומדליקים את מקור האור הקר של המיקרוסקופ כזמין. לאחר מכן מקד את מיקרוסקופ הסטריאו, והזז את חבילת הקרח עד שניתן יהיה לראות בבירור את הזבובים המצונן. לאחר צפייה זבובים, להעביר כל זבוב, על ידי הכנף, לתוך בקבוקון תרבות חדש.כדי להקריב במיקרוגל את זבובי המבוגרים לספירה, מיון או השלכה, מעבירים את זבובי המבוגרים בעלי עניין לבקבוקון ריק, ומכסים את הבקבוקון בצלחת פטרי. הבא להפוך את הבקבוקון בתוך מיקרוגל, לחמם את הבקבוקון בטמפרטורה סטנדרטית במשך 80 שניות. הזבובים המתים ייפולו לתוך צלחת פטרי.לובש כפפות עבודה מגן, לשפוך את הזבובים על לבן, כרטיס נייר, ולהעביר את הכרטיס תחת מיקרוסקופ סטריאו לבדיקה ו / או ספירה עם מחטי microdissection שהוכנו בעבר. ניתן להשליך את הזבובים בסוף הבדיקה. להעברת כלוב איסוף ביצים בצורת בקבוק, הכנס את בקבוק כלוב איסוף הביצים המתוקן לצלחת מיץ התפוחים.השתמש ברצועה של סרט פרפין כדי לאטום את המפרק סביב שני המרכיבים. לאחר מכן חבר את הכלוב עם פקק משפך, ולהפוך את בקבוקון התרבות על פקק. לאחר מכן מוסיפים את הזבובים לכלוב, דרך פקק המשפך, לפני חיבור הכלוב עם פקק הבקבוקון התרבותי.כדי לשנות את האוכל, להעביר את הזבובים לבקבוקון ריק לפני החלפת צלחת מיץ תפוחים עם צלחת חדשה. ואז להעביר את הזבובים מהבקבוקון בחזרה לכלוב. בסוף איסוף הביצים, מעבירים את הזבובים לבקבוקון ריק לפני העברת הזבובים למספר בקבוקונים תרבותיים חדשים.בשיטת הרדמה צוננת מותאמת זו, הזבובים נשמרים חסרי תנועה על חבילת הקרח, והגאזה הרפואית שסופגת את המים המתמצתים שומרת על הזבובים יבשים ומאפשרת פנוטיפים או טיפול בזבובים המצונן בקלות. בטמפרטורת החדר של 25 מעלות צלזיוס, טמפרטורת פני השטח של חבילת קרח מצוננת וקשה עולה באופן דרמטי, ממינוס 19 מעלות צלזיוס למינוס שתי מעלות צלזיוס, תוך 20 דקות, ומגיעה במהירות לרמה בטוחה עבור זבובים ישנים וגם זבובים שזה עתה בקעו. חימום דיאלקטרי במיקרוגל הוא סוכן מהיר ונוח יותר להריגת זבובים בוגרים בהשוואה לאיתור יתר או להקפאה עמוקה.בדומה לזבובים מאתרים יתר על כן, זבובים במיקרוגל מרחיבים את כנפיהם בזוויות ישרות מהגוף. בדרך כלל, חיידקים מעופפים שנהרגו על ידי microwaving הם משמעותית קל יותר במשקל מאשר אלה שנהרגו על ידי אתר או הקפאה, אבל החום אינו מעוות את צורת הגוף, ואת פקעות לא הופכים פריך או טורגיד. הקפד לסחוט כמה שיותר מים מתוך גזה לחה ככל האפשר לפני לחיצה עליו על חבילת הקרח, ולוודא כי גזה נצמד קרוב לחבילת הקרח.חשוב גם לנגב את המים המגובים מהבקבוקון הצונן והריק לפני שתעבירו זבובים לתוך הבקבוקון.

simple-homemade-tools-to-handle-fruit-fliesdrosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

לימוד תוקפנות תסיסנית (זבובי פירות)

כתב יד זה מדווח על פרוטוקול מפורט לתרבית, על בסיס קבוע, אוכלוסייה של דרוזופילה מלנוגסטר באמצעות כלוב אוכלוסיית זבובים.

תחזוקה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; אוכלוסיית קייג

שיטה לגידול תסיסנית בתנאי axenic ו gnotobiotic מוצגת. עוברי זבובים הם dechorionated ב חומצת נתרן, הועברו בסביבה נקיה מחיידקים לתזונה סטרילי, וגדלו במיכלים סגורים. ייחסתי דיאטה ועובר עם חיידקים מובילים עמותות gnotobiotic, ונוכחות חיידקים אושר על ידי ציפוי homogenates תסיסנית הגוף כולו.

גידול זבוב הפירות<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתנאי Axenic ו Gnotobiotic

בנייר זה, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור חשיפת מינים של הסוג דרוזופילה לחומרים מזהמים עם המטרה של הלומדים את ההשפעה של חשיפה על מגוון של תפוקות פנוטיפי בשלבים התפתחותיים שונים, יותר מאשר דור אחד.

נסיוני באמצעות דרוזופילה כמערכת מודל הגעה לבדיקת רעילות במעבדה

פרוטוקול זה מתאר וזמינותו של phagocytosis ויוו ב מבוגרים דרוזופילה melanogaster לכמת פגוציט הכרה ואישור של זיהומים חיידקים.

הערכת התגובה החיסונית הסלולר של זבוב הפירות, דרוזופילה melanogaster, שימוש ב Vivo Phagocytosis Assay

פרוטוקול זה נועד להעריך את הכדאיות של דרוסופילה בכל שלב התפתחותי, מעובר למבוגר. ניתן להשתמש בשיטה כדי לקבוע ולהשוות בין הכדאיות של גנוסוגים שונים או תנאי גדילה.

שיטה ישירה ופשוטה להערכת דרוזופילה מלאנוגסטרהכדאיות מעובר למבוגר

כאן, אנו מפרטים כיצד לסנכרן את דרוסופילה ליום ביולוגי. זהו הצעד הראשון והחשוב ביותר הנחוץ ללימוד מקצבים ביולוגיים ותרונוביולוגיה.

היממה של דרוסופילה מלנוגסטר

Ganaspis brasiliensis - טפיל זחל של Drosophila suzukii (מזיק גידולי פירות פולש עולמי) - אושר או נחשב להכנסתו לאירופה ולארצות הברית להדברה ביולוגית של מזיק זה. מאמר זה מספק פרוטוקולים הן לגידול בקנה מידה קטן והן בקנה מידה גדול של טפיל זה.

שיטות לגידול ה-Ganaspis brasiliensis הטפילי, חומר הדברה ביולוגי מבטיח לסוזוקי דרוזופילה הפולשני

שימוש Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) לפתח כלים לאבחון

Mutagenesis האתר בבימויו של פלסמידים כולה היא דרך פשוטה ליצור וריאציות שונות במקצת של הפלסמיד המקורי. כאן אנו מדגימים דרך יעילה קל עלות להציג החלפות בסיס לתוך ריאגנטים באמצעות פלסמיד רגיל.

Mutagenesis האתר ביתי בימוי של פלסמידים שלמים

למדו כיצד ליצור כלי ביתיים פשוטים להעברה, הקפאה והריגה של זבובי פירות Drosophila melanogaster במעבדה. השיטות מייעלות טיפול בזבובים למחקר ולימודים.

כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר

גלה סרטונים נוספים