עיצוב אוטומטי, תפוקה גבוהה, ניסויים בגידול תאים רציפים באמצעות הפיתוח

eVOLVER מעניק לחוקרים חופש ניסיוני, היכולת להגדיר ניסויי צמיחה תרבותיים משלהם עם משוב אוטומטי על פרמטרים מרובים ולקנה המידה שלו לכל גודל שהם צריכים. eVOLVER גמיש יותר מהתקנים אחרים. משתמשים יכולים להתאים אישית בקלות תוכנה פייתון, כמו גם את החומרה, על ידי שינוי שרוולים חכמים להחזיק חיישנים עבור כל תרבות.

המערכת יכולה להיראות מסובכת במבט ראשון עם רכיבים וחיבורים מרובים. מדריך חזותי מעניק למשתמשים בפעם הראשונה ביטחון רב יותר בהפעלת ניסויים בעצמם. התקנה נכונה היא קריטית.

הקפד להבין מה כל רכיב עושה. אז אתה יכול לאשר שהם עובדים. ודא שהכל מנותב כראוי ומחובר היטב.

בעוד מיועד culturing אירובי של חיידקים ושמרים בתנאים משתנים, eVOLVER יכול גם להיות שונה עבור תסיסה אנאירובית או לשמור על תאים יונקים בהשעיה. סרטון וידאו זה ידגים כיצד להגדיר, לאתחל ולהפעיל ניסוי תרבות רציפה בתפוקה גבוהה באמצעות פלטפורמת eVOLVER. יום לפני הניסוי, הכינו מדיה, בקבוקונים ובלתי-קולום על פי כתב היד.

בשלושה מקורים גדולים, הכינו שתי מקורים של 10% אקונומיקה וסקילר אחד של 70% אתנול. באמצעות המתגים בהתקן eVOLVER, הפעל את ספק הכוח של חמישה וולט ב- eVOLVER, המתן חמש שניות ולאחר מכן הפעל את ספק הכוח של 12 וולט. אם אתה מפעיל מספר בקבוקונים מאותו בקבוק מדיה, חבר קווי קלט מדיה מרובים באמצעות מפצלי צינורות.

ניתן לבנות מפצלי צינורות מותאמים אישית עם רכיבים נמוכים יותר. להטביע את קווי קלט התקשורת במקקר האקונומיקה הראשון ואת קווי eflux התקשורת בסקילר אקונומיקה השני. חבר את הקצה במורד הזרם של קווי קלט המדיה לקווי ה- eflux השניים.

שים קווי פסולת לתוך נער מכוניות פסולת. הוסף אחד עד שני ליטרים של אקונומיקה לתוך carboy פסולת כדי לעקר פסולת שנוצרה במהלך הניסוי. באמצעות מסך המגע ב- eVOLVER, נווט אל מקטע ההתקנה והפעל את כל המשאבות למשך 20 שניות כדי למלא את קווי הנוזלים ב- 10%bleach.

אפשר אקונומיקה לשבת על הקווים לפחות 30 דקות כדי לעקר. הפעל את המשאבות שוב באמצעות מסך המגע עד הקווים כבר לא שקועים, דוחף אוויר דרך הקווים כדי לקבל כמה שיותר אקונומיקה החוצה ככל האפשר. מניחים קווי קלט מדיה במק מקור האתנול, ממלאים את הקווים באתנול, שוטפים אותם באוויר.

לאחר מכן, צרף קווי קלט מדיה לבקבוקי המדיה עם המחברים התחתונים והפעל את המשאבות עד שהמדיה תרוץ במלואה דרך הקווים ויוריד את כל האתנול השיורי. הכנס חלקית בקבוקונים מעוקרים לתוך השרוולים החכמים eVOLVER וחבר את קווי הקלט לקש הזרם הקצר ולקווי הפסולת לקש eflux הארוך בהתאם לצבע הקידוד. כוונן את מסך המגע eVOLVER כדי להפעיל את כל המשאבות במרווחים של 10 שניות כדי למלא את הבקבוקונים במדיה.

ודאו על ידי בדיקה ויזואלית, משאבות eflux מסירה ביעילות את המדיה דרך קשיות eflux כדי למנוע הצפה. לאחר מכן, דחפו את הבקבוקונים כלפי מטה עד שהם עטופים במלואם בשרוול החכם. בדף ההגדרה האינטראקטיבית של מסך המגע eVOLVER, גרור אצבע לאורך מסך המגע או לחץ על לחצן בחר הכל כדי לבחור את כל הבקבוקונים ולהגדיר את התנאים הראשוניים של הטמפרטורה ב- 30 מעלות צלזיוס ואת ה- stir ל- 10.

במחשב, ציין את התקן eVOLVER שבו יופעל הניסוי. ודא שהגדרות הכיול הרצויות נבחרו. פתח את לוח המחוונים eVOLVER ונווט אל הדף מנהל הניסויים.

בחרו בניסוי הבסיס בחלונית 'נווט הניסויים' או בניסוי קיים כנקודת התחלה ולחצו על 'שכפול'. נווט אל הדף עורך הניסויים. השתמשו בלוחות בורר בקבוקון והגדרת פרמטרים להתאמת הטמפרטורה ל-30 מעלות צלזיוס ולהגדרת סף עליון ותחתון של OD לכל בקבוקון בהתאם לעיצוב הניסיוני.

שמור את הניסוי על-ידי לחיצה על שמור. לאחר מכן לחץ על החץ כדי לחזור לדף מנהל הניסויים ולחץ על לחצן הפעל כדי להפעיל. לאחר שהניסוי יוצא לדרך, נווט אל החלונית 'נתונים בזמן אמת' בלוח המחוונים האינטראקטיבי.

עבור כל בקבוקון, ודא כי ערכי OD מחזיקים באפס. דפדף בגרפי הטמפרטורה כדי לבדוק שהטמפרטורות נמצאות או מתקדמות לכיוון 30 מעלות צלזיוס. כדי להכין את inoculum, למדוד תחילה את OD של תרבויות לילה ולחשב את הדילול המלא הרצוי עבור תרבויות לילה בהנחה נפח בקבוקון של 25 מיליליטר הרצוי מתחיל OD של כ 0.05.

דרך יציאת הדגימה, פיפטה את הנפח המחושב של inoculum או תערובת של אינוקולה. בדוק את הגרפים בלוח המחוונים כדי לראות שה- OD גדל ל- 0.05. צמיחת תאים ותנאי בקבוקון ניתן לפקח בזמן אמת כמו הניסוי הוא מתמשך, המאפשר לחוקר להתערב אם בעיות כלשהן מתרחשות.

eVOLVER היא פלטפורמת תרבות רציפה אוטומטית המאפשרת שליטה רב-תכליתית בתנאי התרבות. הבדלים איכותיים הוצגו בין סוג הבר, רגישות לטמפרטורה וקבוצות רגישות למלח כאשר יחסי היומן הותוו מול דורות משולבים מנתוני קצב הצמיחה של eVOLVER. הצבע מציין את טמפרטורת הבחירה, בעוד מקפים מבחינים בין ריכוזי מלח.

מדרון מתאים דרך החלק ליניארי של כל חלקה באמצעות מינימום של שלוש נקודות, מניב ערך כושר כמותי המתאר כיצד זן הווריאציה מתחרה נגד זן הייחוס. ערכי כושר שליליים מצביעים על כך שזן הווריאציה מתחרה על ידי זן הייחוס. בדוק תמיד שכל המשאבות פועלות ביעילות ושקווי הנוזלים נקיים מכל כפכפים.

הצפה עלולה להרוס ניסוי ולנזק בשרוולים החכמים. דגימות שנלקחו eVOLVER ניתן לאחר מכן רצף כדי לבדוק שינויים גנומיים כתוצאה של הניסוי. מידע זה יכול לשמש להנדס זנים או מערכות חדשים.

עבור חוקרים המשתמשים באבולוציית מעבדה או בבחירת ספריה, קל ליישם לחצי בחירה ייחודיים בכל ניסוי eVOLVER. בקרת משוב וסביבות דינמיות נגישות כעת מאוד גם כן. נער הפסולת יכיל כמויות קטנות של אקונומיקה ואתנול לאחר ניסוי.

התייעץ עם מתאם בטיחות המעבדה שלך לסילוק נאות של פסולת.