שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

הפרוטוקול שלנו הוא משמעותי כי הוא מספק את שיטת האקס ויוו הכמותית הראשונה להערכת תנועתיות ספונטנית של רחם שלם. גישה חדשנית זו מספקת חלופה קלה ופחות יקרה לבדיקת הפוטנציאל הרפה של תרופות המתרחשות באופן טבעי בתרכובות סינתטיות. יתרון מרכזי של טכניקה זו הוא כי כל האינטראקציות התאיות תוך רחמי להישאר שלם לאורך כל הניסוי.

על התכווצות הרחם קשורה דיסמניוריאה, אשר מרגיעי הרחם עשוי להיות שימושי לטיפול. שיטה זו מספקת דרך קלה לבדוק מרגיעים חדשים. לאחר אישור שלב מחזור estrous, מניחים את העכבר בתצב supine, ולהפיץ את גפיים כדי לחשוף את אזור האגן הבטן.

הרטב את הבטן עם 70% אתנול, ולהשתמש מדפים כדי להרים בזהירות את העור מעולה הדגדגן. בצע חתכים רוחביים קטנים על ההיבטים הרוחבים של אזור הבטן התחתונה עד גפיים העליונות כדי לחשוף את peritoneum. בזהירות לחתוך דרך peritoneum לחשוף את מערכת העיכול מבלי לפגוע בקרני הרחם, ולהשתמש מדפים כדי להסיר את fascia ואת רקמת השומן המכסה את מערכת העיכול.

הסר את התריסודן, ג'ג'ונום, ileum, cecum, ואת המעי הגס העולה וה רוחבי. אתר את שלפוחית השתן כדי לאתר את הנרתיק שנמצא ישירות מתחת לשלפוחית השתן. אתר את סימפיזת הערווה בהתכנסות של עצמות הערווה, caudal לשלפוחית השתן, ולהשתמש במספריים כדי לבצע בזהירות חתך בצדדים הצדדיים של סימפיזת הערווה דרך הרקמה הבין-גולגולתית fibrocartilaginous כדי לקבל גישה ולספק מסלול לחילוץ הנרתיק.

חותכים דרך הנקבים הממוקמים בין פי הטבעת לחלק התחתון של הפות, ולהשתמש במלקחיים כדי להרים את הנרתיק כדי לאפשר כריתה איטית של פי הטבעת. לזהות את שתי קרני הרחם כי bifurcate לתוך מזלג rostrally לתוך הנרתיק ולאתר oviduct מפותל השחלה בסוף כל קרן. זיהוי נכון של קרני הרחם הוא קריטי להליך כדי להבטיח שהרקמות לא ייפגעו.

השתמש מספריים ניתוח קטן כדי להסיר את כל הרצועות להתחבר ולתמוך קרניים, oviducts ושחלות בתוך חלל הבטן, ולהסיר את הנרתיק, הרחם, oviducts ושחלות. מעבירים את כל מערכת הרבייה המבודדת לצלחת פטרי 100 מילימטר המכילה 10 מיליליטר של PBS של דולבקו. השתמש מדפים ומספריים כירורגיים כדי להסיר כל רקמת חיבור ושומן המקיפה את קרני הרחם ואת הנרתיק, כמו גם כל פרווה באזור הערווה שיכול לעכב את איכות התמונה.

הסר את הרצועה הרחבה כדי לאפשר תנועתיות של קרני הרחם ולשטוף את הרקמה פעמיים עם PBS טרי של Dulbecco לכל לשטוף לפני העברת מערכת הרבייה מבודדת לתוך צלחת פטרי 35 מילימטר המכיל שלושה מיליליטר של פתרון קרבס מחומצן. להדמיית תנועתיות ספונטנית, מניחים את צלחת פטרי על משטח שחור בטמפרטורת החדר, ומאפשרים 15 עד 30 דקות להתחלת התכווצויות ספונטניות. כאשר ניתן לצפות בתנועה, להקליט את תנועתיות הרחם ספונטנית במשך 10 דקות ממטוס אקסיאלי באמצעות כל סוג של ציוד וידאו דיגיטלי.

לאחר מכן, להעביר את ההכנה לתוך צלחת פטרי המכיל חיץ קרבס מחומצן בתוספת תרכובת הבדיקה ולתזמן את תנועתיות הרחם ספונטנית במשך 10 דקות נוספות באותו אופן. בסוף תקופת ההקלטה, לשטוף את כל מערכת הרבייה ב 10 מיליליטר של PBS של Dulbecco בצלחת פטרי 100 מילימטר, ולהעביר את המדגם לתוך צלחת פטרי חדשה של חיץ קרבס מחומצן טרי כדי להעריך את הפיך של הטיפול. הקלט את תנועתיות הרחם הספונטנית במשך כעשר דקות באותו אופן, כמו בשתי ההקלטות האחרונות.

לאחר מכן להעביר את ההכנה עוד 35 מילימטר צלחת פטרי מלא חיץ קרבס מחומצן בתוספת הרכב עבור תרכובת הבדיקה כדי להבטיח כי אין שינויים הנגרמים מכנית תנועתיות הרחם ספונטנית. הכנת דרכי הרבייה הפגינה תנועתיות גבוהה בלוחות A ו- C בהיעדר אפינפרין. אבל פנוטיפ זה רדום בפאנל B עם נוכחות של אפינפרין מיקרו מולר אחד.

כאן, ניתוח נתונים מדגם של ניהול אפינפרין והתאוששות תנועתיות ספונטנית מוצג, הממחיש כיצד ההשפעות של ההורמון על תנועתיות ספונטנית בדרכי הרבייה ניתן לכמת מן ההקלטות של הרקמה נלקח לפני, במהלך, ואחרי טיפול מורכב הבדיקה. חשוב להימנע דחיסה או overstretching קרני הרחם אחרת שום התכווצות ספונטנית לא יצוין. השיטה שלנו עשויה לשמש גם לבדיקת תרכובות שעשויות להגדיל את התכווצות הרחם.

הליך זה עשוי להיות מיושם על הרחם העכבר בהריון בשלבים המוקדמים יותר של ההריון. לניסוי זה יש פוטנציאל לשדרג לפורמט של שש צלחות היטב להקרנת תרופות תפוקה.