Name: שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: למדו שיטת אקס ויוו לניתוח תנועתיות ספונטנית של הרחם בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות מרגיעי שרירים חלקים לטיפול בדיסמנוריאה ומסייעת בפיתוח אפשרויות טיפול חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על-ידי קרנות IU פנימיות. . לפני שהוא תכנן את המחקר XC ו-AGO היו מעורבים בעיצוב הניסויים המתוארים.  FL ו-AGO ניתחו ופרשו את הנתונים. KLL, איוב, חליל ביצע את כל הניסויים vivo ex . חליל כתב את ה-MATLAB. . כתבתי את כתב היד  כל המחברים קראו ואישרו את הגרסה הסופית של כתב היד.

כל ההליכים עם בעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת אינדיאנה (אינדיאנפוליס, IN). 2-5 חודשים-129S-C57BL/6 עכברים בוגרים מינית שימשו במחקר.
זהירות: להבטיח בטיחות על ידי לבישת חלוק מעבדה, מסכה, וכפפות כאשר עובדים עם בעלי חיים וחומרים ביו-מסוכנים.
1. הכנה לפתרון
<ol><li>הכינו את מאגר Krebs, אשר מכיל: 130 מ"מ היאl, 5 מ"מ KCl, 2 מ"מ CaCl2, 1.2 mm נה2PO4, 0.56 mm Mgcl2, 25 מ"מ נחקו3, ו 5 מ"מ גלוקוז, pH 7.4. ברציפות חמצן מאגר Krebs עם תערובת של גזים דחוסים המכילים 5% CO2 ו 95% O2 תוך שמירה על טמפרטורת החוצץ ב 37 ° צ' באמצעות אמבטיה מים במחזור.</li>
	<li>הכנת מלוחים פוספט באגירה של Dulbecco (DPBS), אשר מכיל: 2.68 Mm kcl, 1.47 mm KH2PO4, 136.89 mm הנאקל, ו 8.1 mM Na2hpo4, pH 7.4.</li>
</ol>2. הכנה לבעלי חיים
<ol><li>שאיפת עכברים (3%) עם ניקוי הגז בפסולת. להבטיח הרדמה נאותה על ידי הערכת רפלקסים נסיגה. לצבוט את הבוהן האחורי כדי לאשר שום תנועות לא מעורר, המציין אובדן תגובות רפלקס. לאחר שההרדמה העמוקה מושגת, המתת את החיה על ידי עריפת ראשו. הערה: איזואופלוראן עלול לגרום. להתרחבות שרירים חלקה לכן, הכנת מערכת הרבייה צריך להיות שטף בהרחבה מודבטים במאגר Krebs לפחות 15-30 דקות לפני תחילת ניסויים vivo ex. איזואופלוראן עלול לגרום לגירוי ואי נוחות כאשר הוא במגע עם העור, לכן המשיכו בזהירות.</li>
	<li>מניחים את הגוף על סירת שקילה גדולה מרופדת במגבת נייר. הערה: אנשי המעבדה לנשים בהריון לא צריך להיות מעורב בניסויים עם isofלאנה כי זה יכול להקטין את משקל העובר, להקטין את להתקשות השלד העוברי, ולהגדיל את הסיכון של הפלה ספונטנית8, 9. שאיפת CO2 ניתן להשתמש כתחליף עכברים המתת חסד.</li>
</ol>3. קביעת שלב המחזור האסטתי
<ol><li>עם מלקחיים קטנים, להרים את הדגדגן כדי לקבל גישה ostium הנרתיק לאט להוסיף טיפ מיקרופיפטה המכיל 10 μL של DPBS לתוך הנרתיק.<ol>
<li>ודא שתיאור המיקרופיפטה מוכנס דרך האוסטינום בזווית של 10-30 °, כדי להימנע מלחדור את קיר הנרתיק. הנוזל עדיין צריך להיות גלוי בטיפ לאחר הכניסה. אם הנוזל אינו נראה לעין, הטיפ הוכנס רחוק מדי לתוך הנרתיק, והאזור הפאראפראני של הנרתיק עשוי להיות מחורר.</li>
		<li>משוך בקלילות על השרירים הוואסטסיים הנרתיק עם קצה המיקרופיפטה כדי לאפשר לאוויר לצאת מהנרתיק.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאט לשטוף את חלל הנרתיק על ידי ליטוף למעלה ולמטה 2-3 פעמים עם 10 μL של DPBS ולמקם את ההשעיה התא צייר על שקופית זכוכית.</li>
	<li>השתמש במיקרוסקופ בניגוד לשלב ההפוך כדי לקבוע את שלב המחזור האסטרולוגי באמצעות ניתוח ציטוג'יק. ההליך מתבצע כמתואר במקום אחר10,11. ודא שההשעיה של התא אינה יבשה לפני שניתן לבצע ניתוח ציטולוגי. ההשעיה עשויה להיות מדולל עם DPBS טרי, במידת הצורך.</li>
</ol>4. העכבר בדרכי הרבייה ניתוח
<ol><li>לסדר את העכבר במצב פרקדן ולפזר את הגפיים שלו כדי לחשוף את האזור הבטן האטימות.</li>
	<li>רסס עם 70% אתנול כדי להרטיב ולחטא את אזור הבטן האופטית.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים, להרים בזהירות את העור ממוקם מעולה לדגדגן. הפוך חתכים רוחבי קטנים על ההיבטים הצדדיים של אזור הבטן התחתונה, עד לגפיים העליונות כדי לחשוף את הצפק (איור 1א). במהלך תהליך זה, יופיע כנף חיצוני. כמו חתכים קטנים נעשים ללא הרף, הכנף יגדל בגודל.</li>
	<li>חותכים בזהירות דרך צפק לחשוף את מערכת העיכול (איור 1B). חשוב לציין כי הקרניים הרחם ניתן לעתים קרובות להיות ממוקם ישירות מתחת צפק, כך לעשות חתכים בזהירות לא לגעת קרניים כמו זה יכול להשפיע על תנועתיות הרחם.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים, להסיר את fascia ואת רקמת השומן המכסה את מערכת העיכול. להסיר את הקטעים הבאים בדרכי העיכול מן חלל הבטן: התריסריון, jejunum, ileum, cecum, בסדר עולה ורוחבי המעי הגס (איור 1ג).</li>
	<li>כדי לאתר את איברי הרבייה, תחילה לזהות את שלפוחית השתן (איור 1C, "4"), אשר עשוי להיות מראה מנוכה בשל הבוצמה לאחר המתת חסד. . הנרתיק יהיה ממש מתחת לשלפוחית השתן</li>
	<li>אתר את סימטרי הערווה במפגש של עצמות הערווה (הרטבה אל שלפוחית השתן).</li>
	<li>באמצעות מספריים, להסיר את סימטרי הערווה על ידי בזהירות לעשות חתכים על הצדדים לרוחב שלה דרך רקמת העור הבין הערווה כדי לקבל גישה ולספק מסלול להפקת וגינה (איור 1ד).</li>
	<li>חותכים את הנקבים הנמצאים בין פי הטבעת לחלק התחתון של הפות.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים, להרים את הנרתיק ולאט לאט בבלו את הרקטום.</li>
	<li>זיהוי שתי קרניים של רחם שיתקרנה לתוך מזלג, rostrally אל הנרתיק. אתרו צינור ההטלה מפותל ושחלה בסוף כל קרן, אשר עשוי להיות חבוי תחת מקטעי דרכי העיכול הנותרים. השתמש במספריים לניתוח קטן כדי להסיר את כל הרצועות המחברות ותומכות בקרניים, בהטלה ובשחלות בתוך חלל הבטן.</li>
	<li>הסירו את מערכת הרבייה, הכוללת את הנרתיק, הרחם, ההטלה והשחלות, מחלל הבטן.</li>
	<li>להעביר את מערכת הרבייה מבודדת (איור 1E) לתוך צלחת פטרי 100 Mm מלא 10 מ ל של dpbs. לא לדחוס את קרני הרחם כדי למנוע נזק myometrium.</li>
	<li>השתמש מלקחיים ומספריים כירורגיים כדי להסיר כל החיבור והאדיפוז מסביב קרני הרחם והנרתיק, כמו גם כל פרווה באזור הערווה שיכול לעכב את איכות התמונה. הסר את הרצועה הרחבה כדי לאפשר תנועתיות של קרני הרחם.</li>
	<li>לשטוף את מערכת הרבייה מבודדת עם DPBS טרי פעמיים ולהעביר אותו לתוך צלחת פטרי 35 מ"מ מלא 3 מ ל של פתרון קרבס מחמצן.</li>
</ol>5. רקמת הדמיה
<ol><li>מניחים את צלחת פטרי המכילה את מערכת הרבייה במאגר קרבס מחמצן על משטח שחור. שמרו על המנה בטמפרטורת החדר. הערה: ניתן להשתמש במשטח מחמם אינפרא אדום כדי לשמור על הרקמה ב 37 ° c.</li>
	<li>אפשר 15-30 מינימום עבור התכווצויות ספונטניות להתחיל. הקלטת תנועתיות רחם ספונטנית במשך 10 דקות ממישור צירית באמצעות כל סוג של ציוד וידאו דיגיטלי.</li>
	<li>העברת ההכנה לצלחת פטרי המכילה את מאגר קרבס החמצון בתוספת מתחם ניסוי. הקלטת תנועתיות רחם ספונטנית במשך כ -10 דקות ממישור צירית באמצעות כל סוג של ציוד וידאו דיגיטלי.</li>
	<li>רוחצים את כל מערכת הרבייה בצלחת פטרי 100 מ"מ עם 10 מ ל של DPBS כדי להעריך את התהודה של הטיפול.</li>
	<li>העבר את ההכנה לצלחת פטרי עם מאגר קרבס טרי. הקלטת תנועתיות רחם ספונטנית במשך כ -10 דקות ממישור צירית באמצעות כל סוג של ציוד וידאו דיגיטלי.</li>
	<li>להעביר את ההכנה 35 מילימטר אחר צלחת פטרי מלא מאגר קרבס מחמצן בתוספת עם הרכב למתחם הבדיקה כדי להבטיח כי אין שינויים מכנית המושרה בתנועתיות הרחם הספונטנית. . זה שליטה חשובה</li>
	<li>העבר את סרטון הווידאו לכונן קשיח של מחשב.</li>
</ol>6. ניתוח נתונים
<ol><li>ליצור קליפים באמצעות כל תוכנה לעריכת וידאו מתוך קטעי וידאו המקורי המכיל את השליטה, טיפול, ולשטוף פרקים.</li>
	<li>השתמש בתוכנת MATLAB ובקובץ ה-script שסופק (ראה מקוון חומר משלים) כדי לכמת תנועתיות רחם ספונטנית. הערה: ההרחבה של ארגז הכלים לראיית מחשב עבור MATLAB חייבת להיות מותקנת כדי שקובץ ה-script יהיה פונקציונלי לחלוטין.<ol>
<li>פתח את קובץ ה-script MATLAB, עבור אל הכרטיסיה עורך ולחץ על הפעל. </li>
		<li>בחרו בקובץ הווידאו הראשון ולחצו על ' פתח'.</li>
		<li>הזינו תווית לקובץ הווידאו בתיבת הדו הנפתחת ולחצו על הלחצן ' אשר'.</li>
		<li>הזן את מרווחי הזמן הדרושים לחישוב קצב תנועת הקרן (מרחק Δ אוקלידית/Δs).</li>
		<li>השתמש בסמן העכבר כדי לבחור שתי נקודות על המסגרת הראשונה של הווידאו. חלון מוקפץ יבקש לאשר שהנקודות הנבחרות ישמשו למעקב. לחץ על התחל כדי ליזום את תהליך מעקב הזמן האמיתי שיוצג בחלון המוקפץ. לחלופין, לחץ על בחירה חוזרת של נקודות כדי לבחור משוב את שתי הנקודות.</li>
		<li>נטר את הדיוק של תהליך המעקב בחלון המוקפץ.</li>
		<li>שים לב לעומת פיזור הזמן של התוויה ומרחק לעומת פיזור זמן בחלון מוקפץ חדש. שמור את שתי הדמויות על ידי בחירת קובץ | שמירה בשם באותו חלון כדי לתעד את הנתונים.</li>
		<li>חפש תיקיה בשם ' הפוינטארירנתונים', שנוצרה באופן אוטומטי על-ידי MATLAB, באותה ספריה שבה ממוקם קובץ ה-SCRIPT של MATLAB. זהה קובץ Excel בשם label_Data המכיל נקודות נתונים שנאספו מהווידאו בשתי כרטיסיות גליון עבודה נפרדות. הערה: ניתן להשתמש בכל תוכנת מעקב אחר תנועה חלופית לכמת תנועתיות רחם ספונטנית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש בתוכנה מתאימה (לדוגמה, Excel או SigmaPlot 13) כדי לבצע את הניתוח הסטטיסטי.</li>
</ol>

<ol><li>Kuijsters, N. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+peristalsis+and+fertility%3A+current+knowledge+and+future+perspectives%3A+a+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 35 (1), 50-71 (2017).</li>
<li>Kural, M., Noor, N. N., Pandit, D., Joshi, T., Patil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Menstrual+characteristics+and+prevalence+of+dysmenorrhea+in+college+going+girls%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Family+Medicine+and+Primary+Care%22%5BJournal%5D)">Menstrual characteristics and prevalence of dysmenorrhea in college going girls.</a> Journal of Family Medicine and Primary Care. 4 (3), 426-431 (2015).</li>
<li>Dehnavi, Z. M., Jafarnejad, F., Kamali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+aerobic+exercise+on+primary+dysmenorrhea%3A+A+clinical+trial+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+education+and+health+promotion%22%5BJournal%5D)">The Effect of aerobic exercise on primary dysmenorrhea: A clinical trial study.</a> Journal of education and health promotion. 7, 3(2018).</li>
<li>Lindner, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+prostaglandins+in+the+regulation+of+cyclic+events+in+the+ovary+and+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+prostaglandin+and+thromboxane+research%22%5BJournal%5D)">Significance of prostaglandins in the regulation of cyclic events in the ovary and uterus.</a> Advances in prostaglandin and thromboxane research. 8, 1371-1390 (1980).</li>
<li>Bernardi, M., Lazzeri, L., Perelli, F., Reis, F. M., Petraglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysmenorrhea+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22F1000+research%22%5BJournal%5D)">Dysmenorrhea and related disorders.</a> F1000 research. 6, 1645(2017).</li>
<li>Marjoribanks, J., Ayeleke, R. O., Farquhar, C., Proctor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs+for+dysmenorrhoea%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cochrane+database+of+systematic+reviews%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal anti-inflammatory drugs for dysmenorrhoea.</a> The Cochrane database of systematic reviews. 7, 001751(2015).</li>
<li>Oladosu, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+skeletal+muscle+activity+precedes+spontaneous+menstrual+cramping+pain+in+primary+dysmenorrhea%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+obstetrics+and+gynecology%22%5BJournal%5D)">Abdominal skeletal muscle activity precedes spontaneous menstrual cramping pain in primary dysmenorrhea.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 219 (1), 91(2018).</li>
<li>Lawson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occupational+exposures+among+nurses+and+risk+of+spontaneous+abortion%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+obstetrics+and+gynecology%22%5BJournal%5D)">Occupational exposures among nurses and risk of spontaneous abortion.</a> American journal of obstetrics and gynecology. 206 (4), 327-328 (2012).</li>
<li>Mazze, R. I., Wilson, A. I., Rice, S. A., Baden, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+development+in+mice+exposed+to+isoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22Teratology%22%5BJournal%5D)">Fetal development in mice exposed to isoflurane.</a> Teratology. 32 (3), 339-345 (1985).</li>
<li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS One. 7 (4), 35538(2012).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+reproductive+status%2Fstages+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Current protocols in neuroscience. , Appendix 4, Appendix (2009).</li>
<li>Segal, S., Csavoy, A. N., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tocolytic+effect+of+catecholamines+in+the+gravid+rat+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+analgesia%22%5BJournal%5D)">The tocolytic effect of catecholamines in the gravid rat uterus.</a> Anesthesia and analgesia. 87 (4), 864-869 (1998).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenylephrine%2C+a+common+cold+remedy+active+ingredient%2C+suppresses+uterine+contractions+through+cAMP+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Phenylephrine, a common cold remedy active ingredient, suppresses uterine contractions through cAMP signalling.</a> Scientific reports. 8 (1), 11666(2018).</li>
<li>Domino, M., Pawlinski, B., Gajewski, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomathematical+pattern+of+EMG+signal+propagation+in+smooth+muscle+of+the+non-pregnant+porcine+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Biomathematical pattern of EMG signal propagation in smooth muscle of the non-pregnant porcine uterus.</a> PLoS One. 12 (3), 0173452(2017).</li>
<li>Crane, L. H., Martin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pace-maker+activity+in+the+myometrium+of+the+oestrous+rat%3A+in+vivo+studies+using+video-laparoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%2C+fertility%2C+and+development%22%5BJournal%5D)">Pace-maker activity in the myometrium of the oestrous rat: in vivo studies using video-laparoscopy.</a> Reproduction, fertility, and development. 3 (5), 519-527 (1991).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

כאן, תיארנו שיטה להערכת כמובן ספונטני של כל מערכת הרבייה המכרסמים, הכוללת את השחלות, ההטלה, קרניים הרחם והנרתיק. השתמשנו בשיטה דומה כדי להדגים את השפעת ההרפטית של הphenylephrine על תנועתיות הרחם הספונטנית13, עם זאת, בעבר לא יכולנו לספק ניתוח כמותי של הנתונים. בעבודה זו, פיתחנו אלגוריתם לטיפול כמותי בניתוח נתונים באמצעות מודול מעקב תנועה MATLAB. זוהי טכניקה שימושית לבדיקת תרופות חדשות המווסתים התכווצויות הרחם ללא קשר אם הסמים להירגע או ליישר השרירים החלק הרחם. היתרון העיקרי של מודל זה הוא כי מערכת ...

כאיבר הנשי העיקרי, הרחם הוא חיוני לרבייה וחיוני להזנה של העובר1. הרחם מורכב משלוש שכבות: הפריטרינום, myometrium ו רירית. Myometrium הוא שכבת הקונקטילה הגדולה של הרחם וממלא תפקיד מפתח במסירה העובר. רירית הרחם היא השכבה הפנימית ביותר בטנה חלל רחמי והוא חיוני עבור השתלת העובר. בנשים שאינן בהריון של גיל הרבייה, שכבת רירית הרחם היא לשפוך חודשי בתחילת מחזור המחזור. Myometrium מסייע בתהליך זה לשפוך על ידי שמירה על התכווצויות myomeמשפטו ספונטנית הדרושים לניקוי רקמת רירית הרחם נמק מהרחם1.
למרבה הצער, הגדילה הגוברת של משפט העצמי עלולה לגרום לתופעות לוואי שליליות כגון דינוריאה, או כאבי וסת כואבים. הדבר נראה במיוחד אצל נשים צעירות וביטול נשים מפרנות2. עם זאת, הדברת שונה עבור כל אישה תלוי בחוזק של הצירים myometrial שלהם; התכווצויות חזק יותר משויכים לעתים קרובות עם התחושה של התכווצויות חמורות3. שימוש באולטרסאונד של הרחם יכול להיות מזוהה בדרך כלל כגלים של רירית הרחם. שחרור משופר של פרוסטגלנדינים במהלך הווסת4 ברחם שעברו sl, רירית הרחם הוא האמין לתרום להגדלת מבחן היתר משפט, וכתוצאה מכך איסכמיה ו היפוקסיה של שריר הרחם וכך גדל . כאב3
חוסר מעשה חמור יכול לעכב את הפעילות היום יומית של נשים מסוימות ו 3 כדי 33% של נשים יש כאב חמור מאוד, אשר יכול לגרום לאישה להיות מרותק למיטה עבור 1 עד 3 ימים כל מחזור הווסת5. דימננוריאה היא הגורם המוביל לתחלואה גינקולוגית בנשים בגיל הרבייה, ללא קשר לגיל, ללאום ולמעמד הכלכלי5. השכיחות המשוערת של חוסר הדברת הוא גבוה ומשתנה, החל מ 45% עד 93% אצל נשים בגיל הרבייה5.  דימננוריאה-כאבים משויכים יש השפעה על חיי היומיום של נשים עלול לגרום לביצועים אקדמיים עניים אצל מתבגרים, איכות נמוכה יותר של שינה, הגבלה של פעילויות יומיומיות, ואת מצב הרוח משתנה5.
הרבה נשים שחווים האתר מהווה מקום לטיפול בתרופות מנוגדות לדלפק כדי להקל על כאבם. תרופות כאלה מעל לדלפק מכילות מעכבי ציקלוחמצן (קוקס) אשר מונעים היווצרות של פרוסטגלנדינים6. עם זאת, מעכבי קוקס קשורים לאירועים וכלי דם לוואי, ועל כ -18% מהנשים עם הדידון אינם מגיבים למעכבי האלה7. לכן, יש צורך בתרופות חדשות כדי להפחית את התכווצויות הווסת. כיוון שמעל הרחם תורם לפתוגנזה של הדינוריאה, אסטרטגיה אפשרית אחת יכולה להיות השימוש בהרפיית הרחם.
מועיל לכמת את ההשפעות של תרופות מרפה פוטנציאלי במודל של באופן טבעי המתרחשים הצירים myometrial שפט ספונטנית כמו גל. עם זאת, עד כה, לא יעיל vivo שיטה לשעבר לבדיקת תרופות מרגיעות שרירים ברחם שלמים תוארה. כיום, מדידות מתח איזומטרי משמשות כדי להעריך את ההשפעות של תרופות להרפדלות. במהלך מדידות כאלה, רצועת שריר הרחם נשמרת באורך קבוע תחת מראש באמבט רקמה בעוד הכוח של התכווצויות שריר הרחם נרשם לפני ואחרי גירוי אוקסיטוצין בנוכחות או העדר של סם מרפה. למרות שגישה זו מועילה מאוד, היא דורשת ציוד יקר. יתר על כן, התכווצויות איזומטרי לא דומה הצירים הספונטאני הספונטנית כמו גל שמתרחשים באופן טבעי ברחם שלם. באופן ייחודי, גלי הרחם myometrial שפט במכרסמים יכול להיות מדומה כמו קרן הרחם לתנועתיות כאשר מערכת הרבייה כולה (שחלות, ההטלה, הרחם, והנרתיק) נשמרת בפתרון מאגר. כאן, אנו מציגים שיטה vivo ex לניטור התנועתיות הספונטנית של רחם העכבר ללא שינוי הממוקם בצלחת פטרי המכילה מאגר קרבס מחמצן. כמו כן, אנו מתארים אלגוריתם כימות תנועתיות ניצול מעקב MATLAB תנועה. גישה זו מספקת חלופה קלה וזולה פחות לבדיקת הפוטנציאל ההרפייתי של תרופות ותרכובות סינתטיות טבעיות.

<table><tbody><tr><td>אפינפרין הידרוכלוריד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>&nbsp; E4642&nbsp;</td><td></td></tr><tr>PBS <td>Fisher Sceintific</td> <td>של Dulbecco</td>&nbsp;<td>17-512Q</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 200 PROOF</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 &middot; 2H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0751</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp; &middot; 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-2374</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting מלקחיים מדויקים מחודדים במיוחד</td><td>פישר Sceintific</td><td>13-812-42</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים מוקשים קשתית</td><td>עדינה כלי מדע עדינים</td><td>14091-09</td><td></td></tr><tr><td>דיסקציה סטריאומיקרוסקופ מודולרי בעל ביצועים גבוהים</td><td>Leica</td><td>MZ6&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ צבעוני דיגיטלית 5 מגה פיקסל עם מערכת קירור אקטיבית</td><td>Leica</td><td>&nbsp; DFC425 C</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומאסטר מיקרוסקופ סיבים אופטיים מקורות אור</td><td>פישר Sceintific&nbsp;</td><td>12-562-21</td><td></td></tr><tr><td>שקילת סירה</td><td>פישר Sceintific&nbsp;</td><td></td><td></td>WB30304</tr><tr><td>ממירים מדהימים חלוק כירורגי סטנדרטי&nbsp;</td><td>בריאות קרדינל&nbsp;</td><td>9515</td> כפפות <td>קטנות, בינוניות או גדולות</td></tr><tr><td></td><td>McKesson Corporation</td><td>20-1080</td><td>קטנות, בינוניות או גדולות; כפפות כירורגיות לטקס או ניטריל סטריליות ללא אבקה</td></tr><tr><td>&nbsp; צלחת פטרי</td><td>קורנינג פלקון</td><td>351029</td><td>100 מ"מ</td></tr><tr><td>&nbsp; פטרי צלחת</td><td>קורנינג פלקון</td><td>353001</td><td>35 מ"מ</td></tr><tr><td>95% O2- 5% CO2 תערובת גזים</td><td>Praxair</td><td>&nbsp; MM OXCD5-K</td><td></td></tr><tr><td>מסכות לולאת אוזניים</td><td>Valumax International</td><td>5430E-PP</td><td></td></tr><tr><td>DSLR 24.2 MP מצלמה</td><td>Canon</td><td>EOS Rebel T6i</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>N/A</td><td>גרסה 2019 ואילך</td></tr></tbody></table>

שיטה vivo ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם matlab מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

דימננוריאה, או התכווצויות כואבות, הוא הסימפטום השכיח ביותר הקשורים מיעוט בנקבות וחומרת שלה יכול להפריע חיי היומיום של נשים. כאן, אנו מציגים שיטה קלה וזולה שתהיה אינסטרומנטלית לבדיקת תרופות חדשות היורדת מתגובת הרחם. שיטה זו מנצלת את היכולת הייחודית של מערכת הרבייה של העכבר כולו כדי להפגין תנועתיות ספונטנית כאשר מתוחזק לשעבר vivo בצלחת פטרי המכילה מאגר קרבס מחמצן. התנועתיות הספונטנית הזאת דומה לפעילות הניסיונית של הרחם האנושי, המכונה גלי רירית-רחם. כדי להדגים את יעילות השיטה, העסקנו סם להרפיית רחם מוכר, אפינפרין. אנו מדגימים כי התנועתיות הספונטנית של מערכת הרבייה של העכבר כולו יכולה להיות מהירה והפיך מעכבות על ידי 1 μM אדרנלין במודל זה פטרי צלחת. תיעוד שינויי תנועתיות הרחם ניתן לבצע בקלות באמצעות טלפון חכם רגיל או מצלמה דיגיטלית מתוחכמת. פיתחנו אלגוריתם מבוסס MATLAB המאפשר מעקב תנועה לכמת שינויי תנועתיות הרחם ספונטנית על ידי מדידת שיעור של תנועות קרן הרחם. היתרון העיקרי של גישה זו vivo ex היא כי מערכת הרבייה נשאר שלם לאורך כל הניסוי כולו, שמירה על כל אינטראקציה הסלולר הפנימית בתוך רחמי. המגבלה העיקרית של הגישה הזאת היא כי עד 10-20% של שטרן עלול להפגין תנועתיות ספונטנית. עד כה, זוהי השיטה הvivo לשעבר הכמותית הראשונה להערכת תנועתיות הרחם הספונטנית במודל צלחת פטרי.

איור 1 מראה תמונות מייצגות שצולמו במהלך הליכי הבידוד של דרכי הרבייה המתוארים בפרוטוקול זה. כדי להימנע מזיהום מאגר עם פרווה, אשר יקטין את איכות הווידאו, הלחלח את גוף העכבר עם 70% אתנול. בחינת הסדר העיקרית עבור סעיף הניתוח של הפרוטוקול היא למצוא את שלפוחית השתן. הרחם והנרתיק יהיה ממוקם נחות לשלפוחית השתן.
כדי לבדוק את הפרוטוקול, הגענו. למערכת הרבייה כולה בעזרת אפינפרין אדרנלין ידוע כגורם הרפיה שרירים חלקה הרחם. הורמון זה מופק באופן שורש ליבת יותרת הכליה ומשמש הורמון...

התכווצויות הרחם חשובים לרווחתם של הנקבות. עם זאת, באופן פתולוגי הגדילה הפתולוגית עלולה לגרום לדיסנוריאה, במיוחד לנשים צעירות. כאן, אנו מתארים הכנה vivo ex פשוטה המאפשרת הערכה מהירה של היעילות של מרפה שרירים חלקה שניתן להשתמש בהם לטיפול בדינוריאה.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

הפרוטוקול שלנו הוא משמעותי כי הוא מספק את שיטת האקס ויוו הכמותית הראשונה להערכת תנועתיות ספונטנית של רחם שלם. גישה חדשנית זו מספקת חלופה קלה ופחות יקרה לבדיקת הפוטנציאל הרפה של תרופות המתרחשות באופן טבעי בתרכובות סינתטיות. יתרון מרכזי של טכניקה זו הוא כי כל האינטראקציות התאיות תוך רחמי להישאר שלם לאורך כל הניסוי.על התכווצות הרחם קשורה דיסמניוריאה, אשר מרגיעי הרחם עשוי להיות שימושי לטיפול. שיטה זו מספקת דרך קלה לבדוק מרגיעים חדשים. לאחר אישור שלב מחזור estrous, מניחים את העכבר בתצב supine, ולהפיץ את גפיים כדי לחשוף את אזור האגן הבטן.הרטב את הבטן עם 70% אתנול, ולהשתמש מדפים כדי להרים בזהירות את העור מעולה הדגדגן. בצע חתכים רוחביים קטנים על ההיבטים הרוחבים של אזור הבטן התחתונה עד גפיים העליונות כדי לחשוף את peritoneum. בזהירות לחתוך דרך peritoneum לחשוף את מערכת העיכול מבלי לפגוע בקרני הרחם, ולהשתמש מדפים כדי להסיר את fascia ואת רקמת השומן המכסה את מערכת העיכול.הסר את התריסודן, ג'ג'ונום, ileum, cecum, ואת המעי הגס העולה וה רוחבי. אתר את שלפוחית השתן כדי לאתר את הנרתיק שנמצא ישירות מתחת לשלפוחית השתן. אתר את סימפיזת הערווה בהתכנסות של עצמות הערווה, caudal לשלפוחית השתן, ולהשתמש במספריים כדי לבצע בזהירות חתך בצדדים הצדדיים של סימפיזת הערווה דרך הרקמה הבין-גולגולתית fibrocartilaginous כדי לקבל גישה ולספק מסלול לחילוץ הנרתיק.חותכים דרך הנקבים הממוקמים בין פי הטבעת לחלק התחתון של הפות, ולהשתמש במלקחיים כדי להרים את הנרתיק כדי לאפשר כריתה איטית של פי הטבעת. לזהות את שתי קרני הרחם כי bifurcate לתוך מזלג rostrally לתוך הנרתיק ולאתר oviduct מפותל השחלה בסוף כל קרן. זיהוי נכון של קרני הרחם הוא קריטי להליך כדי להבטיח שהרקמות לא ייפגעו.השתמש מספריים ניתוח קטן כדי להסיר את כל הרצועות להתחבר ולתמוך קרניים, oviducts ושחלות בתוך חלל הבטן, ולהסיר את הנרתיק, הרחם, oviducts ושחלות. מעבירים את כל מערכת הרבייה המבודדת לצלחת פטרי 100 מילימטר המכילה 10 מיליליטר של PBS של דולבקו. השתמש מדפים ומספריים כירורגיים כדי להסיר כל רקמת חיבור ושומן המקיפה את קרני הרחם ואת הנרתיק, כמו גם כל פרווה באזור הערווה שיכול לעכב את איכות התמונה.הסר את הרצועה הרחבה כדי לאפשר תנועתיות של קרני הרחם ולשטוף את הרקמה פעמיים עם PBS טרי של Dulbecco לכל לשטוף לפני העברת מערכת הרבייה מבודדת לתוך צלחת פטרי 35 מילימטר המכיל שלושה מיליליטר של פתרון קרבס מחומצן. להדמיית תנועתיות ספונטנית, מניחים את צלחת פטרי על משטח שחור בטמפרטורת החדר, ומאפשרים 15 עד 30 דקות להתחלת התכווצויות ספונטניות. כאשר ניתן לצפות בתנועה, להקליט את תנועתיות הרחם ספונטנית במשך 10 דקות ממטוס אקסיאלי באמצעות כל סוג של ציוד וידאו דיגיטלי.לאחר מכן, להעביר את ההכנה לתוך צלחת פטרי המכיל חיץ קרבס מחומצן בתוספת תרכובת הבדיקה ולתזמן את תנועתיות הרחם ספונטנית במשך 10 דקות נוספות באותו אופן. בסוף תקופת ההקלטה, לשטוף את כל מערכת הרבייה ב 10 מיליליטר של PBS של Dulbecco בצלחת פטרי 100 מילימטר, ולהעביר את המדגם לתוך צלחת פטרי חדשה של חיץ קרבס מחומצן טרי כדי להעריך את הפיך של הטיפול. הקלט את תנועתיות הרחם הספונטנית במשך כעשר דקות באותו אופן, כמו בשתי ההקלטות האחרונות.לאחר מכן להעביר את ההכנה עוד 35 מילימטר צלחת פטרי מלא חיץ קרבס מחומצן בתוספת הרכב עבור תרכובת הבדיקה כדי להבטיח כי אין שינויים הנגרמים מכנית תנועתיות הרחם ספונטנית. הכנת דרכי הרבייה הפגינה תנועתיות גבוהה בלוחות A ו- C בהיעדר אפינפרין. אבל פנוטיפ זה רדום בפאנל B עם נוכחות של אפינפרין מיקרו מולר אחד.כאן, ניתוח נתונים מדגם של ניהול אפינפרין והתאוששות תנועתיות ספונטנית מוצג, הממחיש כיצד ההשפעות של ההורמון על תנועתיות ספונטנית בדרכי הרבייה ניתן לכמת מן ההקלטות של הרקמה נלקח לפני, במהלך, ואחרי טיפול מורכב הבדיקה. חשוב להימנע דחיסה או overstretching קרני הרחם אחרת שום התכווצות ספונטנית לא יצוין. השיטה שלנו עשויה לשמש גם לבדיקת תרכובות שעשויות להגדיל את התכווצות הרחם.הליך זה עשוי להיות מיושם על הרחם העכבר בהריון בשלבים המוקדמים יותר של ההריון. לניסוי זה יש פוטנציאל לשדרג לפורמט של שש צלחות היטב להקרנת תרופות תפוקה.

ex-vivo-method-for-assessing-mouse-reproductive-tract-spontaneous

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מונוציטים הם מווסתים מרכזיים של חסינות מולדת וממלאים תפקיד קריטי בחידוש המערכת הפגוציטית החד-גרעינית ההיקפית ובמקרה של דלקת. כתב יד זה מתאר את הליך ההדמיה בזמן אמת של מח העצם של קלווריה של העכבר כדי לחקור את מנגנון הגיוס של המונוציטים.

מעקב עכבר מח עצם המונוציטים<em&gt; In vivo</em

כתב יד זה מספק פרוטוקול להשתלת טלמטרים בעכבר לצורך מדידת לחצים תוך רחמיים במהלך ההריון.

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להערכת שינויים בכלי הדם האימהיים במהלך ההריון בעכברים. באמצעות שיטות סטריאולוגיות, שיפוץ העורקים הספירליים העשרוניים מוערך כמותית והתוצאות מאושרות איכותית באמצעות אימונוהיסטוכימיה.

הערכה של כלי דם אימהי שיפוץ במהלך ההריון ברחם העכבר

עכברים נמצאים בשימוש נרחב ללמוד ביולוגיה הריונית. עם זאת, סיום ההריון נדרשת עבור מחקרים כאלה אשר מונע חקירות האורך, מחייבת השימוש במספר גדול של בעלי חיים. לכן, אנו מתארים שיטה לא פולשנית של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה לגילוי מוקדם ומעקב אחר האירועים שלאחר ההשתלה העכבר בהריון.

שימוש הרומן של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה תלת מימדי אפיון בתחילת ההריון העכבר

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור live-הדמיה של fluorescently שכותרתו קטעי רירית הרחם האנושי הושתל בעכברים. השיטה מאפשרת ללמוד את השפעות הסמים על גודל הנגע endometriotic באמצעות ניטור, כימות של זריחה הנפלטים על ידי הכתבת פלורסנט בזמן...

ניטור לא פולשנית של גודל הנגע במודל של עכברים Heterologous ' של אנדומטריוזיס

זרע חייב לנווט בהצלחה דרך צינור ההטלה כדי להפרות oocyte. כאן אנו מתארים את הבקשה למדידת העברת זרע  בתוך הרחם הדו. הדבר יכול לספק נתונים כמותיים על חלוקת זרע בתוך הרחם לאחר ההזדווגות, כמו גם על מהירות, מהירות כיוונית ותדר היפוך.

מדידת הדרכה זרע ותנועתיות בתוך האלגיה של מערכת הרבייה של האנדרוגינוס

פרוטוקול זה מתאר שיטה למעקב אחר התקדמות שינויים מורפולוגיים לאורך זמן ברחם במודל עכברי מושרה של סרטן רירית הרחם באמצעות הדמיית אולטרסאונד עם קורלציה לשינויים גסים והיסטולוגיים.

הערכת אולטרסאונד לא פולשנית של התקדמות סרטן רירית הרחם במחיקה מכוונת Pax8 של מדכאי הגידול Arid1a ו - Pten בעכברים

ביסוס הריון הוא תהליך דינמי הכולל הצלבה מורכבת של עוברים ורחם. התרומות המדויקות של סביבת הרחם האימהית לתהליכים אלה נותרו תחום מחקר פעיל. כאן, פרוטוקולים מפורטים מסופקים כדי לסייע בעיצוב מודלים של בעלי חיים in vivo כדי לענות על שאלות מחקר אלה.

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

מחקר זה מציג מודל עכבר חדש שתוכנן במיוחד כדי לדמות אנדומטריומה, תת-סוג משמעותי קלינית של אנדומטריוזיס. על ידי שימוש בעכברי C57BL/6J, המודל שואף להבהיר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, ומציע כלי מעודן לגשר על פער הידע הנוכחי ברפואת הרבייה.

הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

למדו שיטת אקס ויוו לניתוח תנועתיות ספונטנית של הרחם בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות מרגיעי שרירים חלקים לטיפול בדיסמנוריאה ומסייעת בפיתוח אפשרויות טיפול חדשות.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

גלה סרטונים נוספים