Name: הכנה לדוגמא לתרסיס אלקטרונון מהמוני ספקטרומטר מונמטריה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: למד הכנה לדוגמא לתרסיס אלקטרונון מהמוני ספקטרומטר מונמטריה לניתוח ביולוגי בזמן אמת. שיטה זו מאפשרת ניתוח ישיר של רקמות גולמיות תוך דקה עם אובדן מינימלי של רכיבים ביולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לאיימי איאיזוקא על הפעלת ה-PESI-MS וקזוקו סאווה-נובורי לקבלת סיוע במזכירות. אנו מודים לברוון גרדנר, Ph.D., מקבוצת אדז (www.edanzediting.com/ac) לעריכת טיוטה של כתב יד זה.

הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת יאמאנאשי אישרה את כל הפרוטוקולים והשימוש בבעלי חיים ניסיוניים המובאים להלן. השימוש במדגם האנושי אושר על ידי מועצת האתיקה המוסדית באוניברסיטת יאמאנאשי.
1. הכנת רקמה מוצקה
הערה: יש לשמור את הדגימות על הקרח לאחר הסרתו מהחיה או מהגוף האנושי כדי לשמר את רעננות הרקמה. אם המדידות אינן מפנות מיד לאחר הניתוח, מומלץ לאחסן את הרקמה ב-80 ° c. זה לא מומלץ להניח את הרקמה בכל סוג של מאגר או תמיסת מלח, כי הם עשויים לחלץ תוכן מסוים מן הרקמה. רקמה שתוקנה עם אלהידס או מוטבע פרפין/שעווה או קריוג'ל אינו מתאים למדידות MS.
<ol><li>חותכים את דוגמית הרקמה כ 2 x 2 x 2 מ"מ באמצעות אזמל או סכין. לחילופין, להכות את המדגם עם trepan (אגרוף ביופסיה חד פעמיות, נשא בגודל 3 מ"מ) משמש לבדיקת העור. במקרה זה, קצץ את אורך העמודה ל-2 מ"מ. הערה: ניתן לנתח כל רקמה באמצעות שיטה זו. בניסוי זה, כבד15 וכליה19, נותחו בהצלחה כדי להשיג ספקטרום המוני. באופן כללי, איברים מסוימים מעניקים ספקטרום מסה טוב, בעוד אלה שיש להם רכיבים סיבי לא.</li>
	<li>אם הרקמה מזוהמת בדם, יש לשטוף את העור בקצרה עם תמיסת מלח באגירה קרה. הערה: כדי למזער את הנזק לרקמות שלאחר המוות, השלימו שלב זה, בהקדם האפשרי, בטמפרטורת החדר. אם לא נעשים מדידות מיידית, הקפא את הרקמה בחנקן נוזלי והחנות ב-80 ° c.</li>
	<li>מניחים את חתך או מנוקב החוצה מדגם (כ 10 מ"ג) לתוך מיקרוצינורית פלסטיק ולהוסיף 100 μL של 50% אתנול. הערה: המשקל המדויק של הדגימות אינו נקבע מכיוון שספקטרומטר המסה המשמש במערכת זו אינו מספק נתונים כמותיים. כ 10 מ"ג הוא אופטימלי עבור רקמת הכמצ'ראל.</li>
	<li>הומוגון המדגם באמצעות מיקרופסל.</li>
	<li>מקום 10 μL של המגון המאכלת לתוך הבאר של המחסנית (איור 2).</li>
	<li>הניחו את המחסנית בחדר היינון של ספקטרומטר המסה והתקינו את המחט מפלדת אל-חלד שישמשו לדגימה (איור 2). הערה: מחטים בדיקה מסופקים על ידי היצרן. הם עשויים פלדה אל חלד יש עקמומיות רדיוס של כ 400 ננומטר.</li>
	<li>סגור את מכסה החדר בחוזקה כדי להפעיל באופן אוטומטי את מכשיר הבטיחות.</li>
	<li>הפעל את מחשב הלוח על-ידי לחיצה על סמל ההתחלה כדי לנתח. באמצעות הפאנלים על המסך, להחיל מתח של 2.3 kV אל המחט כדי לייצר את התרסיס אלקטרו ולהבטיח כי תדירות המחט היא 3 Hz.</li>
	<li>המתן 30 עבור המדידה להסתיים. הערה: ההפעלה נפסקת באופן אוטומטי בעת השלמת רכישת הנתונים. איכות הניתוח מפוקחת על-ידי כרומטוגרם יונים כולל (TIC). זמן המדידה מוגדר להשגת ספקטרום המסה של הנציג וניתן לתקצר או להאריך אותו.</li>
	<li>היפטר ממיכל הדיו והמחט בתוך הרגשנות לאחר מדידת כל מדגם. הערה: ניתן למדוד דגימה אחת בלבד בכל פעם. אין צורך לכייל את המכונה לפני כל מדידה; כיול תלוי בבדיקה הרגילה של הספק פעם בשישה חודשים.</li>
	<li>לנתח את ספקטרום מסה ולייצא את נתוני הטקסט הספקטרלי ההמוני באמצעות התוכנה המשויכת ספקטרומטר המסה (ראה טבלת חומרים) כאמור בשלבים הבאים (איור 3).<ol>
<li>לחץ על קובץ ה- lcd בחלון דפדפן קובץ הנתונים של התוכנה.</li>
		<li>בחר ולחץ על הפסגה בודדת על החלון ספקטרום המסה לתאר באופן אוטומטי כרומטוגרם יון מחולץ (eic).</li>
		<li>בדוק את ה-TIC ו-EIC ולחץ על סמל הספקטרום הממוצע כדי לבחור בחלון טווח הזמן ליצירת הספקטרום ההמוני. הערה: בניתוח זה, מולקולות היעד מופיעות ביחס מסה-לתשלום (m/z) (איור 3). יתר על כן, כי משך הזמן של יינון לשבץ בודד של תנועת המחט הוא קצר מאוד, כל ספקטרום המסה המתקבל הם בעצם ספקטרום הממוצע מעל 10 s (300 סריקות).</li>
		<li>צור קובץ טקסט המכיל את עוצמת ה- m/z ואת העוצמה על-ידי לחיצה על לשונית הייצוא לניתוח נוסף. ניתן לאחסן קובץ טקסט זה בכל תיקיה. הערה: כל חומרים משמרים של RNA ישפיעו על תבנית ספקטרלית טבעית של דגימות. בנוסף, מומלץ לטפל ולאחסן רקמות ללא כל נוזל (כגון מלוחים באגירה מפוספז) כדי למנוע מהרקמת הרקמה המולקולרית לתוך הנוזל במהלך האחסון. באופן אידיאלי, טריים או טריים מוקפאים ללא כל טיפול משמשים.</li>
	</ol></li>
</ol>2. הכנת נוזלי גוף (סרום)
הערה: כל הליך זה כמעט זהה לזה המשמש רקמה מוצקה. המחסנית עבור דגימת הנוזל זמינה מהיצרן. בגלל הזיהום על ידי כדוריות הדם האדומות (RBCs) יכול במידה ניכרת לצמצם את היעילות של רכישת ספקטרלי של המרכיב המיועד (פלזמה או סרום), הקפד לחסל את כל RBCs על ידי תפרידו לפני המידות.
<ol><li>לקחת 10 μL של דגימת הסרום ולשים אותו לתוך מיקרושפופרת 1.5 mL. הערה: ניתן להשתמש גם בסרום טרי ומאוחסן.</li>
	<li>הוסף 190 μL של 50% אתנול לתוך שפופרת ה1.5 mL, ואז מערבולת עבור 2 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>צנטריפוגה את הנוזל ב 15,000 x g עבור 1-5 דקות ב 4 ° c.</li>
	<li>העבר 10 μL של סופרנטאנט לתוך הבאר של המחסנית.</li>
	<li>מניחים את המחסנית בחדר יינון של המכונה ולהתקין את המחט מפלדת אל-חלד שישמשו עבור אינון לדוגמה (איור 2).</li>
	<li>סגור את מכסה החדר בחוזקה כדי להפעיל באופן אוטומטי את מכשיר הבטיחות.</li>
	<li>הפעל את מחשב הלוח על-ידי לחיצה על סמל ההתחלה כדי לחשב את המחשב.</li>
	<li>מחק את המחסנית לדוגמה ואת המחט כפי שמתואר ב 1.10 פעם מדידות נלקחו.</li>
	<li>לנתח את הסדרות המתקבלות של EIC כאמור להלן (איור 3).<ol>
<li>פתח את קובץ ה-lcd בדפדפן הנתונים.</li>
		<li>לחץ על שיא בודד כדי להציג את TIC ו-eic.</li>
		<li>בחר בחלון טווח הזמן ליצירת ספקטרום מסה באמצעות סמל הספקטרום הממוצע .</li>
		<li>יצא את הקובץ שנוצר המכיל הן את עוצמת ה- m/z והן את אינטנסיביות היונים של שיא מקביל על-ידי לחיצה על הכרטיסייה ' ייצוא ' שעל הצג. הערה: ניתן להחיל הליך זה על רוק, שתן ונוזלי גוף אחרים גם כן.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. הכנה לvivo PESI-MS באורגניזם חי
הערה: בסעיף זה, יישום לניטור פרופיל מטבולית של 5-Fluoro-2'-deoxyuridine (5-FdU) במודל עכבר חי הוא הציג. השתמש בתנאים אספטי ברחבי.
<ol><li>להחדיר 100 μL של 100 מ"מ 5-FdU פתרון לתוך וריד הזנב של עכבר בן 2 חודשים (כ 20 גרם משקל). הערה: אין העדפה למין, לגיל או למתח העכבר. למרות שפרוטוקול זה אושר בזמן שאנו ביצעו את הניסוי5, הכדאיות של ניסוי זה תלויה בהגבלות המוסריות של המדינה שבה היא תתבצע.</li>
	<li>השלך את העכבר בעקבות הפרוטוקול המאושר שלך לטיפול בחיות. להעריך את עומק ההרדמה על ידי חוסר התגובה צובט הזנב. הערה: אם השימוש בנתרן פנטוברביטל אינו מותר על ידי הוועדה האתית לניסויים בבעלי חיים, ניתן להשתמש בשיטות חלופיות, כגון קטמין הידרוכלוריד.</li>
	<li>לגלח את חלל הבטן באמצעות תער חשמלי ולהחיל משחה וטרינר לעיניים.</li>
	<li>לשים את העכבר מורדם במצב פרקדן ולתקן את הכפות על צלחת הפלסטיק באמצעות קלטת תיקון. לקרצף את האתר כירורגי עם מדים של 70% אלכוהול שלוש פעמים.</li>
	<li>לחתוך לפתוח את חלל הבטן באמצעות מספריים. ראשית, חותכים את העור מעבר לפני (10 מ"מ) מדיוק מעל הסרעפת. לחתוך את השריר של הקיר גוף הבטן ואת צפק (ca. 7 מ"מ) ולהחזיק את הפצע פתוח באמצעות חוט נירוסטה כדי לחשוף את משטח הכבד. הערה: אין צורך לשים את פני השטח של הכבד.</li>
	<li>להחיל את קצה המחט בדיקה על פני השטח של הכבד. להתאים את עומק המחט כ 0.5 מ"מ עמוק כדי לייעל את היעילות יינון, בדיקת הדפוס TIC ו ספקטרלי בו זמנית. הגדר את המתח הגבוה ל-2.3 kV ולתדר של 3 Hz על המסך של לוח הבקרה.</li>
	<li>. תסיר את החיה מלוחית הפלסטיק</li>
	<li>תפר את הפצע באמצעות תפר כירורגי ולהחזיר את העכבר לכלוב. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה כדי לשמור על שכיבה משנית. אל תחזיר את העכבר לחברה של בעלי חיים אחרים עד שהוא התאושש באופן מלא.</li>
	<li>לבצע את קורס הזמן של עוצמת יון ב EIC ואת ההליך של תיאור EIC כמו 1.11.1 to 1.11.4.</li>
</ol>

<ol><li>Fenn, J. B., Mann, M., Meng, C. K., Wong, S. F., Whitehouse, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospray+ionization+for+mass+spectrometry+of+large+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Electrospray ionization for mass spectrometry of large biomolecules.</a> Science. 246, 64-71 (1989).</li>
<li>Karas, M., Bachman, D., Bahr, U., Hillenkamp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-Assisted+Ultraviolet+Laser+Desorption+of+Non-Volatile+Compounds%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Mass+Spectrometry+and+Ion+Processes%22%5BJournal%5D)">Matrix-Assisted Ultraviolet Laser Desorption of Non-Volatile Compounds.</a> International Journal of Mass Spectrometry and Ion Processes. 78, 53-68 (1987).</li>
<li>Tanaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+and+polymer+analyses+up+to+m%2Fz+100000+by+laser+ionization+time-of+flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Protein and polymer analyses up to m/z 100000 by laser ionization time-of flight mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 2, 151-153 (1988).</li>
<li>Hiraoka, K., Nishidate, K., Mori, K., Asakawa, D., Suzuki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+probe+electrospray+using+a+solid+needle%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Development of probe electrospray using a solid needle.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21, 3139-3144 (2007).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, L. C., Yu, Z., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+analysis+of+living+animals+by+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Real time analysis of living animals by electrospray ionization mass spectrometry.</a> Analytical Biochemistry. 417, 195-201 (2011).</li>
<li>Balog, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+tissue+identification+using+rapid+evaporative+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intraoperative tissue identification using rapid evaporative ionization mass spectrometry.</a> Science Translational Medicine. 5, 194ra93(2013).</li>
<li>Boughton, B. A., Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+metabolite+profiling+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+mass+spectrometry+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Spatial metabolite profiling by matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry imaging.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 965, 291-321 (2017).</li>
<li>Shimma, S., Sugiura, Y., Hayasaka, T., Hoshikawa, Y., Noda, T., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-based+imaging+mass+spectrometry+revealed+abnormal+distribution+of+phospholipids+in+colon+cancer+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography.+B%2C+Analytical+Technologies+in+the+Biomedical+and+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">MALDI-based imaging mass spectrometry revealed abnormal distribution of phospholipids in colon cancer liver metastasis.</a> Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 855, 98-103 (2017).</li>
<li>Sugiyama, E., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+brain+gangliosides+using+MALDI+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Visualization of brain gangliosides using MALDI imaging mass spectrometry.</a> Methods in Molecular Biology. 1804, 223-229 (2018).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nondestructive+tissue+analysis+for+ex+vivo+and+in+vivo+cancer+diagnosis+using+a+handheld+mass+spectrometry+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nondestructive tissue analysis for ex vivo and in vivo cancer diagnosis using a handheld mass spectrometry system.</a> Science Translational Medicine. 9, 406(2017).</li>
<li>Pirro, V., Jarmusch, A. K., Vincenti, M., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+drug+analysis+from+oral+fluid+using+swab+touch+spray+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimca+Acta%22%5BJournal%5D)">Direct drug analysis from oral fluid using swab touch spray mass spectrometry.</a> Analytica Chimca Acta. 861, 47-54 (2015).</li>
<li>Chen, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+probe+electrospray+generated+from+a+solid+needle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physical+Chemistry.+B%22%5BJournal%5D)">Characterization of probe electrospray generated from a solid needle.</a> Journal of Physical Chemistry. B. 112, 11164-11170 (2008).</li>
<li>Mandal, M. K., Chen, L. C., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+and+exhaustive+ionization+of+analytes+with+different+surface+activity+by+probe+electrospray+ionization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Sequential and exhaustive ionization of analytes with different surface activity by probe electrospray ionization.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 22, 1493-1500 (2011).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, C. L., Asakawa, D., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+the+probe+electrospray+ionization+%28PESI%29+needle+applied+to+the+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Physical properties of the probe electrospray ionization (PESI) needle applied to the biological samples.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 978-985 (2009).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+renal+cell+carcinoma+as+a+first+step+for+mass+spectrometry-based+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Analysis of renal cell carcinoma as a first step for mass spectrometry-based diagnostics.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 23, 1741-1749 (2012).</li>
<li>Ashizawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+mass+spectra+database+and+diagnosis+algorithm+for+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Construction of mass spectra database and diagnosis algorithm for head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 75, 111-119 (2017).</li>
<li>Johno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+potential+new+biomarkers+of+atherosclerosis+by+probe+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolomics%22%5BJournal%5D)">Detection of potential new biomarkers of atherosclerosis by probe electrospray ionization mass spectrometry.</a> Metabolomics. 14, 38(2018).</li>
<li>Zaitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+endogenous+metabolite+analysis+of+mice+liver+by+probe+electrospray+ionization%2Ftriple+quadrupole+tandem+mass+spectrometry+and+its+preliminary+application+to+in+vivo+real-time+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intact endogenous metabolite analysis of mice liver by probe electrospray ionization/triple quadrupole tandem mass spectrometry and its preliminary application to in vivo real-time analysis.</a> Analytical Chemistry. 88, 3556-3561 (2016).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+diagnosis+of+chemically+induced+hepatocellular+carcinoma+using+a+novel+mass+spectrometry-based+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Real time diagnosis of chemically induced hepatocellular carcinoma using a novel mass spectrometry-based technique.</a> Analytical Biochemistry. 441, 32-37 (2013).</li>
<li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolic+reprogramming+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma.</a> Cancers. 10, 447-461 (2018).</li>
<li>Mandal, M. K., Chen, L. C., Hashimoto, Y., Yu, Z., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+biomolecules+from+solutions+with+high+concentration+of+salts+using+probe+electrospray+and+nano-electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of biomolecules from solutions with high concentration of salts using probe electrospray and nano-electrospray ionization mass spectrometry.</a> Analytical Methods. 2, 1905-1912 (2010).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, L. C., Johno, H., Nakajima, M., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+non-proximate+probe+electrospray+ionization+for+real-time+analysis+of+living+animal%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Development of non-proximate probe electrospray ionization for real-time analysis of living animal.</a> Mass Spectrometry. 3, S0048(2014).</li>
<li>Chen, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+imaging+mass+spectrometry+by+electrospray+ionization+using+solid+needle+as+sampling+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Ambient imaging mass spectrometry by electrospray ionization using solid needle as sampling probe.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 1469-1477 (2009).</li>
<li>Yoshimura, K., Chen, C. L., Asakawa, D., Hiraoka, K., Takeda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+the+probe+electrospray+ionization+%28PESI%29+needle+applied+to+the+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Physical properties of the probe electrospray ionization (PESI) needle applied to the biological samples.</a> Journal of Mass Spectrometry. 44, 978-985 (2009).</li>
<li>Takeda, S., Yoshimura, K., Hiraoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+analytical+oncology+-+Status+quo+of+mass+spectrometry-based+diagnostics+for+malignant+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innovations in analytical oncology - Status quo of mass spectrometry-based diagnostics for malignant tumor.</a> Journal of Analytical Oncology. 1, 74-80 (2012).</li>
<li>Hiraoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component+profiling+in+agricultural+applications+using+an+adjustable+acupuncture+needle+for+sheath-flow+probe+electrospray+ionization%2Fmass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Component profiling in agricultural applications using an adjustable acupuncture needle for sheath-flow probe electrospray ionization/mass spectrometry.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 67, 3275-3283 (2019).</li>
</ol>

המחבר המקביל מומן על ידי Shimadzu, יצרנית וספקית של כלי PESI-MS.

למרות pesi הוא נגזרת של ESI עבור ספקטרומטר המסה4, זה היתרון ביותר עבור ניטור טבולומיקס בזמן אמת, כמו גם לניתוח התגובות הביוכימי מבלי לבצע כל הטיפולים מורכבים או הזמן לצרוך מראש5,14,15,17. זוהי טכניקה פשוטה ומיידית ספקטרומטר מסה שניתן להחיל על המצב המשולב של אורגניזמים חיים. כיוון שהוא אינו דורש מפלים מורכבים של טיפולים לדוגמה, יש אפשרות גדולה הרבה יותר להעריך את ההרכב המ...

ספקטרומטר מסה (MS) הוא מימוש טכנולוגי של הרדונות; היא מקטינה את מטרת הניתוח ליחידה שניתן לפרש על בסיס מינים מולקולריים או מפלים. לכן, זוהי שיטה ייצוגית לכימיה אנליטית. הוא מורכב מארבעה תהליכים: אינון, ניתוח, גילוי ורכישה ספקטרלית. מכיוון שיינון של המולקולה הוא התהליך הראשון בספקטרומטר מסה, הוא בדרך כלל מגביל את צורת האנליטים שיעובדו. רוב ההליכים האינון דורשים השמדת מבנה, מורפולוגיה ותהליכים ביולוגיים בזמן אמת של דגימות אורגניות. לדוגמה, בתרסיס אלקטרונון (ESI) MS דורש כי הדגימות יהיו במצב נוזלי עבור אינון יעיל1. לפיכך, יש לעבור דוגמאות להכנה ביוכימית מורכבת, המשנה את הרכב המולקולות. לחילופין, בעוד באמצעות מטריקס באמצעות לייזר באמצעות desorption (maldi) MS יכול לשחזר מפות מולקולריות דקה רקמות מנות2,3, יעילות יינון שלה הוא נמוך מדי כדי לזהות את כל המולקולות בדגימות, והוא עני במיוחד בניתוח חומצות שומן. בהתחשב מגבלות אלה, בדיקת אלקטרונון בדיקה (PESI)4 ניתן להשתמש כדי להתבונן בזמן אמת שינויים במערכות ביולוגיות באתרו מבלי להרוס את השלמות המבנית5, בעוד האורגניזם הביולוגי להיות נצפתה הוא מבחינה טכנית במצב חי. מחט נאה מאוד משמשת במקרה זה, המשמש בו זמנית כבוחר לדוגמה ופולט יונים. משמעות הדבר היא כי המדגם מורכבים רצפים טרום טיפול ניתן עקף כדי לקבל ספקטרום מסה המשקפים את הרכיבים המולקולריים של מערכת החיים באתרו.
ישנן מספר שיטות אינון אחרות היריבות PESI-MS. האחד הוא מהיר הסלע אינון ספקטרומטר המסה (ריימס)6. טכניקה זו פועלת היטב במהלך הניתוח משום שהוא מורכב עם סכין חשמלי אוספת את הפלומה יון שנוצר במהלך החיתוך. בעוד ריימס הוא מאוד שימושי עבור הניתוח, זה ביסודו שיטה הרסנית הדורשת אבלציה חשמלי של הרקמה. לפיכך, היא אינה שימושית לניתוח מפורט של תאים ורקמות במדגם מוכן או בניתוחי מעבדה. יתר על כן, משום שהיא אוספת כמות גדולה של פלומה המכילה פסולת רקמות, זה דורש תחזוקה ממושכת של המכשירים לאחר כל שימוש, ובכך להגביל את השימוש במכונה זו הליכים כירורגיים מיוחדים. שיטה דומה, הנקראת לייזר הספקטרומטר המסה (LDI-MS)7, היא טכניקה נוספת שאינה פולשנית ושימושית עבור ניתוח פני השטח. מכיוון שטכניקה זו טובה בסריקת פני השטח של הדגימה, היא משיגה ניתוח דו מימדי כולל כגון הדמיה מלדית מיסה מאסיבית8,9. עם זאת, מכיוון LDI-MS חל רק על ניתוח פני השטח, PESI-MS הוא יתרון עבור ניתוח דגימות למשל, בתוך הרקמה. טכניקה נוספת, מספרט עט10, דווחה כדי להשיג ספציפיות ורגישות באבחון סרטן בלוטת התריס, אבל קוטרו של החללית הוא בסדר mm והוא ספציפי עבור ניתוח פני השטח, כלומר זה לא יכול לזהות גושים קטנים של סרטן או נגעים מקומי עמוק. כמו-כן, מאחר ששיטה זו משתמשת בתעלת זרימה מיקרוקפילר המוטבעת בעט המקדח, הזיהום הצולב חייב להילקח בחשבון, בדומה ל-LDI-MS. טכניקות אחרות קיימות שהוחלו על הגדרות קליניות, כגון בדיקת זרימה וטופס יינון בספוגית11, אבל הם לא נפוצים.
PESI הוא המזעור הקיצוני של ESI, שבו הנימים של הננו-electrospray ממיר על מחט מוצק עם עקמומיות טיפ רדיוס של כמה מאות ננומטר. אינון מתרחש באזור המוגבל ביותר של קצה המחט על ידי יצירת חרוט טיילור, על אילו דגימות להישאר עד אינון של כל הנוזלים על הקצה הוא השלים12. אם האנליטה נשאר על קצה המחט מתכת, עודף מטען הוא שנוצר ברציפות בממשק בין מחט מתכת לבין האנליטים. לכן, אינון סדרתי של מולקולות מתרחשת בהתאם לפעילות המשטח שלהם. מאפיין זה הופך את המחט טיפ סוג של chromatogram, הפרדת האנליטים בהתאם לפעילות המשטח שלהם. יותר מבחינה טכנית, מולקולות עם פעילות המשטח חזקה לבוא אל פני השטח של החרוט טיילור והם מוהים מוקדם יותר מאשר אלה עם פעילות משטח חלש, אשר לדבוק פני השטח של המחט עד סוף תהליך יונן. כך, אינון מלאה של כל המולקולות שנאספו על ידי המחט מושגת13. יתר על כן, כי טכניקה זו אינה כרוכה בתוספת של הממס המיותר למדגם, כמה מאות של ליטרים של נשים מספיקות כדי לקבל ספקטרום מסה חזק מספיק לניתוח נוסף14. מאפיינים אלה הם יתרון לניתוח של דגימות ביולוגיות שלמות. עם זאת, החיסרון העיקרי של PESI-MS טמון הרציפות באינון בגלל התנועה המעברת של המחט לאורך הציר האנכי, דומה מכונת ניסור. היינון מתרחש רק כאשר קצה הגשוש מגיע לנקודה הגבוהה ביותר כאשר גובה פתח היונים מיושר על הציר האופקי. אינון מפסיק בזמן שהמחט מרימה דגימות, ולכן היציבות של אינון אינה שווה לזו ב-ESI המקובלת. לכן, PESI-MS אינה שיטה אידיאלית עבור פרוטאומניקס.
עד היום, PESI-MS הוחל בעיקר על ניתוח של מערכות ביולוגיות, כיסוי מגוון רחב של שדות ממחקר בסיסי הגדרות קליניות. לדוגמה, הניתוח הישיר של רקמת האדם שהוכנו במהלך הניתוח היה מסוגל לחשוף את הצטברות של triacylglycerol הן קרצינומה של תאי הכליה15 ו קרצינומה של הלוע הלבן16. שיטה זו יכולה גם למדוד דגימות נוזל, כגון דם, כדי להתמקד בפרופיל השומנים. לדוגמה, מולקולות מסוימות כללו במהלך שינויים תזונתיים בארנבים; זה דווח כי כמה מולקולות אלה ירדו בשלבים מוקדמים מאוד של הניסויים, המציין את רגישות גבוהה והתועלת של מערכת זו עבור אבחון קליני17. יתרה מזאת, בקשה ישירה לבעלי חיים חיה אפשרה גילוי של שינויים ביוכימיים של הכבד לאחר לילה אחד של צום5. Zaitsu et al.18 בקרה זה ניסוי5 וניתח את פרופילי חילוף החומרים של הכבד כמעט באותו האופן, עם תוצאות שחיזקו את היציבות והתוכעות של השיטה המקורית שלנו. יתר על כן, הצלחנו להפלות את רקמת סרטן מתוך הכבד שמסביב סרטניים בעכברים באמצעות טכניקה זו19. לכן, זוהי טכניקה מגוונת של ספקטרומטר המסה השימושית בקביעות שונות, הן בvivo והן במבחנה. מנקודת מבט אחרת, ניתן להכניס את מודול PESI להתאמת מספר גדול של ספקטרומטר מסה על-ידי התאמת הקובץ המצורף הגובר. במאמר קצר זה, אנו מציגים את היסודות ודוגמאות של יישומים (איור 1), כולל יישומים עם חיות חיים5.
על פי התקנות והחוקים בכל מדינה, יש לסדר חלקים מפרוטוקול זה כדי לעמוד בקריטריונים של כל מוסד. היישום לאורגניזם החי הוא המעניין והמאתגר ביותר משום שהוא יכול לספק שינויים ביוכימיים או מטבוליים ברקמות או באיברים בבעלי חיים באתרו. בעוד שיישום זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת יאמאנאשי, בשנת 20135, סיבוב נוסף של אישור יהיה כעת הכרחי בגלל השינויים האחרונים בתקנות עבור ניסויים בבעלי חיים. לכן, מספר שינויים במזימה הניסיונית, מומלץ. לגבי הספקטרום ההמוני שהושג בניסויים, לקיחת תנודות של ספקטרום מסה בין כל מדידה לחשבון, אין מערכת שיתוף מידע ספקטרלי כי הוא משותף הקהילה הרצף נוקלאוטיד. הטיפול חייב להילקח כאשר המפעיל מטפל במחט כדי למנוע תאונות מקל המחט, במיוחד בעת הסרת המחט ממחזיק המחט. מכשיר מיוחד לניתוק המחט הוא מאוד שימושי למטרה זו. מאחר שהתא של מודול PESI הוא תא אטום, סגור, דליפה של הפלומה יון לא מתרחש אם ספקטרומטר המסה מופעל על פי ההוראות.

<table><tbody><tr><td>5-Fluoro-2'-deoxyuridine (5-FdU)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8791-25MG</td><td>25 מ"ג</td></tr><tr><td>אגרוף ביפוזי חד פעמי (Trepan)</td><td>kai Europa GmbH</td><td>BP-30F</td><td>גודל קדח 3 מ"מ</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>נקלאי טסק</td><td>14710-25</td><td>מגיב טהור במיוחד</td></tr><tr><td>LabSolutions</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>ver. 5.96, מנתח נתונים</td></tr><tr><td>מיקרופסטל</td><td>United Scientific אספקה</td><td>S13091</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-צינור</td><td>Treff</td><td>982855</td><td>0.5 מ"ל שקוף</td></tr><tr><td>PESI-MS (יינון בדיקה ישירה-MS)</td><td>Shimadzu</td><td>DPiMS-2020</td><td>ספקטרומטר מסה מצויד בבקשת PESI</td></tr><tr><td>PPGT</td><td>Shimadzu</td><td>ND</td><td>מחובר ל-DPiMS-2020</td></tr></tbody></table>

הכנה לדוגמא לתרסיס אלקטרונון מהמוני ספקטרומטר מונמטריה

Sample Preparation for Probe Electrospray Ionization Mass Spectrometry

ספקטרומטר מסה (MS) הוא כלי רב עוצמה בכימיה אנליטית משום שהוא מספק מידע מדויק מאוד על מולקולות, כגון יחס מסה-לתשלום (m/z), אשר שימושיים להסיק משקולות ומבנים מולקולריים. בעוד שזוהי ביסודו שיטה אנליטית הרסנית, הפיתוחים האחרונים בטכניקת הסביבה הסביבתית אפשרו לנו לרכוש נתונים תוך השארת רקמות במצב שאינו שלם יחסית במונחים של יושרה. (PESI) הוא שיטה ישירה שנקראת כביכול, משום שהיא אינה דורשת טיפול מורכב וארוך-זמן של דגימות. מחט עדינה משמשת כבוחר לדוגמא, כמו גם פולט אינון. בהתבסס על המאפיין החריף והעדין של המכשיר, השמדת הדגימות היא מינימלית, המאפשרת לנו לרכוש מידע מולקולרי בזמן אמת מיצורים חיים באתרו. בזאת, אנו מציגים שלושה יישומים של טכניקת PESI-MS שיהיה שימושי עבור מחקר ופיתוח ביו-רפואי. אדם כרוך ביישום לרקמה מוצקה, שהיא היישום הבסיסי של טכניקה זו לאבחנה הרפואית. כמו טכניקה זו דורשת רק 10 מ"ג של המדגם, זה עשוי להיות מאוד שימושי הגדרות קליניות שגרתית. היישום השני הוא לאבחון רפואי מתורבת שבו סרום דם אנושי נמדד. היכולת למדוד דגימות נוזלים הוא גם בעל ערך בניסויים ביולוגיים שונים בהם נפח מספיק של מדגם עבור טכניקות אנליטיות קונבנציונאלי לא ניתן לספק. האפליקציה השלישית נשענת לעבר היישום הישיר של מחטי המחקר בבעלי חיים חיים, שם נוכל להשיג דינמיקה בזמן אמת של מטבוליטים או סמים באיברים ספציפיים. בכל יישום, אנו יכולים להסיק את המולקולות שזוהו על ידי MS או להשתמש באינטליגנציה מלאכותית כדי לקבל אבחנה רפואית.

כפי שתואר באיור 3, הנתונים המתקבלים מטכניקת PESI-MS הם הספקטרום ההמוני, שטווח ה- m/z שלו נע בין 10 ל-1,200 במערכת זו. בעוד אחד יכול לזהות מולקולות עד m/z 2,000, היו כמה פסגות שהתקבלו באמצעות טכניקה זו על הטווח ההמוני של m/z 1,200. לכן ניתחנו את הפסגות מ- m/z 10 עד 1,200. היו קבוצות בולטות של פסגות סביב m/z 800 ו 900; הראשון מייצג את הרכיבים קרום התא, כגון כולין זרחן (PC) מינים, והשני מייצג triacyl גלירול (תג). <str...

מאמר זה מציג שיטות הכנה לדוגמה עבור שיטה אנליטית ייחודית בזמן אמת המבוססת על ספקטרומטר מסה סביבתי. שיטה זו מאפשרת לנו לבצע ניתוח בזמן אמת של המולקולות הביולוגית בvivo ללא כל טיפול מיוחד.

Mass spectrometry (MS) is a powerful tool in analytical chemistry because it provides very accurate information about molecules, such as mass-to-charge ...

לכן, זוהי ספקטרומטריית מסת סביבה ייחודית, המתאימה במיוחד לניתוח דגימות ביולוגיות, הן במבחנה והן במבחנה. מכיוון שזה אינו דורש באופן קבוע טיפול מקדים מיוחד של דגימות, כגון מיון תאים, שברים וריכוז, הוא יכול לנתח מדגם עם אובדן מינימלי של רכיבים ביולוגיים, במיוחד אלה הקיימים כמות קטנה מאוד. טכניקה זו מאפשרת לך לנתח את חומרי רקמת הגלם ישירות בדקה על ידי ספקטרומטריית מסה.המהירות היא ללא הפרעה החוסן של המערכת, היתרונות העיקריים הטבועים בטכניקה זו. כל מה שאתה צריך לעשות הוא רק כדי להכין סיליקה, 10 מיליגרם של דגימת רקמות, ו 10 microliters של להתרבות. ולשים אותם לתוך מחסנית חד פעמית.הוא מוגדר למכונת PESI-MS, ותקבל את התוצאה תוך מספר דקות. על ידי בחירת ספקטרומטר המסה המתאים, אתה יכול להוסיף ביאורים לזהות המולקולרית. כדי להתחיל, לאחזר את הכבד או רקמת הכליה מהמקפיא.על צלחת פקק, לחתוך את דגימת הרקמה על שניים על שניים על שני מילימטרים באמצעות אזמל או סכין. לחלופין, אגרוף את המדגם עם Trepan לקצץ את אורך העמודה לשני מילימטרים. אם הרקמה מזוהמת בדם, יש לשטוף בקצרה עם מלוחים קרים כקרח.מניחים כ -10 מיליגרם של דגימת החתך או אגרוף החוצה לתוך microtube פלסטיק ולהוסיף 100 microliters של 50% אתנול. השתמש micropestle כדי הומוגניזציה המדגם. ואז עם pipetman, למקם 10 microliters של homogenate לתוך הבאר של המחסנית של ספקטרומטר המסה.מניחים את המחסנית בתא היוניזציה של ספקטרומטר מסה יינון בדיקה ישירה ולהתקין את בדיקה מחט לגנוב אל חלד שישמש עבור יינון מדגם. סגור את מכסה התא בחוזקה כדי להפעיל באופן אוטומטי את התקן הבטיחות. הפעל את המחשב על הלוח על ידי לחיצה על סמל ההתחלה לנתח, באמצעות לוחות על המסך, להחיל מתח של 2.3 קילובולטים על המחט כדי ליצור את electrospray ולהבטיח כי התדירות של המחט הוא שלושה הרץ.המתן 30 שניות עד שהמדידה תושלם. לאחר מדידת כל דגימה, יש להשליך את המחסנית והמחט במנושל biohazard. כדי לנתח את ספקטרום המסה, פתח את התוכנה הקשורה לספקטרומטר המסה.לחץ על קובץ L-C-D בחלון דפדפן קובץ הנתונים של התוכנה. בחירה ללחוץ על שיא אחד של חלון ספקטרום המסה, ולתאר באופן אוטומטי E-I-C. בדוק את T-I-C ו- E-I-C, ולחץ על סמל הספקטרום הממוצע כדי לבחור את טווח הזמן ליצירת ספקטרום המסה.יצא את נתוני הטקסט הספקטרליים של המסה. כדי לנתח נוזלי גוף, יש להכין עד 10 מיקרוליטר של דגימת הסרום, ולחלק אותה למיקרו-צינור של 1.5 מיליליטר. מוסיפים 190 מיקרוליטרים של 50% אתנול לצינור, ואז מערבולת לשתי דקות בטמפרטורת החדר.כדי לחסל את כל תאי הדם האדומים, צנטריפוגה הנוזל ב 15, 000 פעמים G במשך 1 עד 5 דקות בארבע מעלות צלזיוס. להעביר 10 microliters של supernatant לתוך הבאר של המחסנית ולהמשיך למדוד על ספקטרומטר המסה כמו קודם לכן. פרוטוקול זה מציג הכנת מדגם עבור PESI-MS על מדגם מוצק, מדגם נוזלי, ובעלי חיים חיים.קרצינומה של תאי הכליה האנושיים מראה פסגות אופייניות של שומנים ניטרליים. היו פסגות חזקות יחסית בספקטרום ביחס מסה לטעינה של 900 מרקמה קרצינומה של תאי הכליה האנושיים שלא זוהו ברקמה הלא סרטנית שמסביב. פסגות אלה מייצגות בעיקר טריאצ'יל גליצרול.דוגמה לנתונים שנרכשו ברקמות כבד רגילות, תיארו את הנגע הניאופלסטי של חולה עם הפטיטיס כרונית ושחמת הכבד. סרום אנושי משלושה אנשים נותח באמצעות PESI-MS, היו הבדלים ברורים בדפוסים הספקטרליים בקרב האנשים. עבור השינויים המטבוליים ב 5-FdU מוזרק דרך הווריד לתוך כלי הזנב של העכבר, זיהוי מהיר מאוד ורגיש של 5-FdU עם adduct נתרן הושג בכבד במקום.כמו העומק של קצה המחט מאתר הרקמה, ממלא את התפקיד החשוב ביותר יינון שקורא את רכישת נתונים מוצלחת, הקפד לעקוב אחר ההוראות. אתה יכול לזהות את המין המולקולרי על ידי התבוננות במסד הנתונים המסחרי. זוהי דרך להכשיר את המנגנון המולקולרי של המחלה.חוקרים רבים הפכו מעוניינים ביישום של טכניקה זו לחיזוי השגשוג של המחלה וזה פרוגנוזה. במיוחד באמצעות ביופסיה של ריקט. רק תוודא שלא תידקר על ידי מחט הגשוש.זה יכול פשוט להימנע עם מכשיר מסוים להסרת המחט מהמכונה.

sample-preparation-for-probe-electrospray-ionization-mass-spectrometry

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

Digital מיקרופלואידיקה היא טכניקה מאופיין מניפולציה של טיפות בדידים (~ NL - מ"ל) על מערך של אלקטרודות על ידי יישום של שדות חשמליים. הוא מתאים היטב בביצוע מהיר, רציף, מבחני מיניאטורי ביוכימיים אוטומטיות. כאן אנו מדווחים פלטפורמה מסוגל מיכון כמה מדרגות עיבוד proteomic.

מיקרופלואידיקה דיגיטלי עבור עיבוד אוטומטי proteomic

בסרטון זה, אנו מדגימים מיצוי מבוסס SPME של מטבוליטים מכליה מתורם שנקטף מראש. ניתן להשתמש במטבוליטים שחולצו לביצוע אנליזה מטבולית וליפידומית על מנת להעריך את איכות האיברים להשתלה.

דגימת מיקרו-מיצוי בשלב מוצק: טכניקה מבוססת בדיקה לחילוץ דגימות מרקמות השתל

הארכיטקטורה של מתחמי חלבון חיוני לתפקוד שלהם. שילוב של טכניקות שונות המוני spectrometric הוכיח עוצמה ללמוד ההרכבה שלהם. אנחנו מספקים פרוטוקולים cross-linking כימי, יליד ספקטרומטר מסה ולהראות כמה שיטות משלימות אלה לעזור להבהיר את הארכיטקטורה של יחידת משנה רב חלבון הרכבות.

שילוב cross-linking כימי ספקטרומטר מסה של מתחמי חלבון שלם ללמוד את הארכיטקטורה של יחידת משנה רב חלבון להרכבות

פרוטוקול מפורט מתואר את ההפרדה, זיהוי של אפיון proteoforms דגימות חלבון באמצעות נימי אזור אלקטרופורזה-ספקטרומטריית electrospray יינון-טנדם ספקטרומטר מסה (CZE-ESI-MS/MS). הפרוטוקול יכול לשמש עבור אפיון ברזולוציה גבוהה proteoforms דגימות חלבון וזיהוי בקנה מידה גדול של proteoforms בדגימות פרוטאום מורכבים.

בקנה מידה גדול פרוטאומיקס מלמעלה למטה באמצעות ספקטרומטר מסה של טנדם אלקטרופורזה של אזור נים

פרוטאום אפיון של מיטות microvascular עינית היא גורלית להבנה מעמיקה של פתולוגיות עינית רבים בבני אדם. מחקר זה מדגים שיטה יעילה, מהירה, חזקה עבור חילוץ חלבון, הכנת הדוגמא של כלי דם קטנים העסקת חזירי קצר האחורי ciliary העורקים ככלים מודל עבור פרוטאומיקס מסה ספקטרומטר מבוססת על ניתוח.

הכנת הדוגמא מסה ספקטרומטר מבוססת על ניתוח פרוטאומיקס של עינית Microvessels

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

ספינגוליפידים הם מטבוליטים ביו-אקטיביים בעלי תפקידים מבוססים היטב במחלות אנושיות. אפיון שינויים ברקמות עם ספקטרומטריית מסה יכול לחשוף תפקידים באטיולוגיה של מחלות או לזהות מטרות טיפוליות. עם זאת, תרכובת ה-OCT המשמשת לשימור בהקפאה בביו-רפוזיטורים מפריעה לספקטרומטריית מסה. אנו מתארים שיטות לניתוח ספינגוליפידים ברקמות אנושיות המוטמעות ב-OCT עם LC-ESI-MS/MS.

הכנת רקמות אנושיות משובצות בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית לניתוח ספקטרומטריית מסה

מוצג פרוטוקול לקביעת סמנים ביולוגיים בשפע נמוך מדגימות סרום מיובשות שהודגמו עם הסמן הביולוגי פפטיד משחרר פרוגסטרין (ProGRP). חרוזים מגנטיים מצופים נוגדנים משמשים לניקוי והעשרה סלקטיביים של פפטיד ProGRP פרוטאוטיפי. הפפטיד שנלכד מנותח לאחר מכן על ידי ספקטרומטריית מסה כרומטוגרפית נוזלית-טנדם.

מיקרו-דגימה בניתוח חלבונים ממוקד מבוסס ספקטרומטריית מסה של חלבונים בעלי שפע נמוך

כאן, אנו מקימים שיטה פרוטאומית מבוססת ספקטרומטריית מסה תוך שימוש באזורי עניין מבודדים בקטעי רקמה קבועים בפורמלין, משובצים בפרפין. פרוטוקול זה משמש לניתוח פרוטאום מאזורי רקמה ספציפיים בקטעי רקמה קבועים בפורמלין, משובצים בפרפין.

גישה יעילה לפרוטאומיקה מבוססת ספקטרומטריית מסה תוך שימוש באזורי רקמה נבחרים

פרוטוקול זה נועד לשמר מטבוליטים של תאים עבור ספקטרומטריית מסה של תא בודד (SCMS) על ידי שילוב של שטיפת תמיסת מלח נדיפה, מרווה חנקן נוזלי מהיר, ייבוש בהקפאה ואחסון של -8 מעלות צלזיוס. הוא מדגים כי כיבוי חנקן נוזלי חיוני לשמירה על פרופילי מטבוליטים, בעוד שיש למזער אחסון קר ממושך כדי למנוע שינויים מטבוליים.

הכנת מדגם למחקרי מטבולומיקה של ספקטרומטריית מסה של תא בודד: שטיפת תאים משולבת, מרווה, ייבוש ואחסון

למד הכנה לדוגמא לתרסיס אלקטרונון מהמוני ספקטרומטר מונמטריה לניתוח ביולוגי בזמן אמת. שיטה זו מאפשרת ניתוח ישיר של רקמות גולמיות תוך דקה עם אובדן מינימלי של רכיבים ביולוגיים.

הכנה לדוגמא לתרסיס אלקטרונון מהמוני ספקטרומטר מונמטריה

גלה סרטונים נוספים