Name: סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: חקור מודל עכברים לפיברוזיס מעיי כרוני בדלקת מעיים באמצעות זיהום Salmonella Typhimurium. שיטה זו מאפשרת חקירת מנגנוני פיברוזיס ומטרות טיפוליות במחלת קרוהן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לאינגריד ברטטה. על שירותי היסטולוגיה

כל פרוטוקולי החיות אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת קולומביה הבריטית.
1. הכנת סלמונלה typhimurium ΔAroA תרבויות לgavage אוראלי של עכברים
<ol><li>. מתוך מלאי של גליצרול קפוא Typhimurium ΔAroA, להכין צלחת פס באמצעות LB אגר המכיל 100 μg/mL סטרפטומיצין עם לולאה סטרילית. המלון משלב בין לילה ב-37 ° c. ניתן לאחסן לוחות פס עד שבוע אחד ב -4 ° c.</li>
	<li>יום אחד לפני זיהום, להכין אנטיביוטיקה על ידי המסת 0.5 g של סטרפטומיצין ב 2.5 mL של מים. לאחר מסנן הסטרפטומיצין פתרון חיטוי, בעל פה gavage העכברים באמצעות הנורה משופעת 22G gavage המחט ו 1 מזרק mL עם 100 μL של סטרפטומיצין פתרון (20 מ"ג סטרפטומיצין/מינון). באמצעות לולאה להגבר, איחסן 3 mL של ציר LB (50 μg/mL סטרפטומיצין) בצינור תרבות עם מושבה אחת. דגירה של סלמונלה תרבות aerobically ב 37 ° c לילה עם טלטול ב 200 RPM.</li>
	<li>ביום של זיהום, להכין את מינון הזיהום הסופי על ידי ביצוע 2 ברציפות 1/10 הדילול של תרבויות הלילה סלמונלה ב-PBS סטרילי. זה יגרום ה100 μL המכיל כ 3 x 106 cfu.</li>
	<li>באמצעות הנורה משופעת 22G gavage מחט מזרק 1 mL, gavage כל עכבר עם 100 μL של סלמונלה מוכנה. הערה: הכנת תרבויות סלמונלה באמצעות טכניקות אספטי. ריכוז החיסונים הסופי של סלמונלה עשוי להיות מאומת על ידי הציפוי מדלל סידורי על LB אגר עם סטרפטומיצין. המתח S. Typhimurium יכול להיות מושגת על ידי יצירת קשר עם פרופסור McNagny (kelly@brc.ubc.ca).</li>
</ol>2. הערכת משאות סלמונלה ברקמות
<ol><li>הכינו 2 מ ל בטוח-נעילת, מיקרוצינורות התחתון עגול עם 1 מ ל של PBS סטרילי וחרוז פלדת אל-חלד בלוק. שוקלים מראש את החצוצרות. לפני איסוף הרקמה</li>
	<li>. מורדמים על ידי חשיפה לפחמן דו חמצני לאסוף רקמה מבעלי חיים בודדים בצינורות נפרדים. שוקלים את הצינורות. כדי לקבוע משקולות רקמה</li>
	<li>הומוגון באמצעות מנגנון טחנת מערבל במשך 15 דקות ב-30 Hz. העברה 900 μL של PBS לכל טוב ב-96-מגתחת 2-mL. פיפטה 100 μL של רקמות הומוטים לתוך הבאר הראשונה, לערבב היטב, ולבצע דילול סדרתי על ידי הוספת 100 μL לבארות הבאים עד 10-6 דילול מתקבל. צלחת 10 μL של כל דילול בטרילקטים אל LB אגר המכיל 100 μg/mL streptomcyin.</li>
	<li>לספור ולהכפיל CFU הממוצע על ידי פקטור של 100 מאז 10 μL של המדגם 1000 μL היה מצופה, ואת פקטור הדילול המתאים. חלוקת משקל רקמות הכולל CFU על ידי משקולות רקמות כדי לקבוע CFU לכל גרם של רקמות. הערה: שמור את כל הדגימות על קרח או ב -4 ° c במהלך עיבוד רקמות. השתמש בעזרת מרחב הצינורות באמצעות מדלל סדרתי עם רקמה. הכינו את מיכל ה96 הטוב ביותר המכיל את ה-PBS.</li>
</ol>3. פירובסיריוס אדום כתמים וכימות של קולגן.
<ol><li>לתקן רקמות cecal לילה ב 10% פורמלין באגירה ולהתכונן הטבעה פרפין. גזור מקטעים 5-μm עבור Picrosirius מכתים אדום כפי שמתואר בעבר25.</li>
	<li>לכידת תמונות ללא הפרדות צבע של כל חתך cecal על מיקרוסקופ ברייטפילד.</li>
	<li>פתח את פיג'י (ImageJ) וגרור ושחרר את קובץ התמונה. tif אל סרגל הכלים.</li>
	<li>בשורת התפריטים, בחר תמונה > הקלד > מחסנית RGB כדי לפצל את התמונה לערוצים אדומים, ירוקים וכחולים. החלק את הפס האופקי בתחתית החלונית כדי להגדיר את הערוץ לירוק.</li>
	<li>פתח תמונה > כוונן > הכלי סף. התאם מגבלות מינימום ומקסימום כדי למנוע אותות רקע. לאחר הגדרת הסף הרצוי, סגור את כלי הסף ועבור לניתוח &Gt; קביעת מדידות. בדוק את האזור, שבר אזור, הגבל אל הסף ותווית תצוגה.
</li>
	<li>שער מקטע הרקמה עם בחירות ביד או בחירת מצולע הכלי ולמדוד את% אזור חיובי עבור קולגן על ידי לחיצה על לנתח > מדידה.</li>
	<li>לנרמל את האזור המוחלט חיובי עבור כתמים קולגן לאזור הרקמה. הערה: פיג'י (ImageJ) היא תוכנית מקור פתוח שניתן להוריד ב https://fiji.sc. תמונות עם תנאי לכידה זהה (כלומר, בהירות ומיקוד) חייב להיות מגבלות הסף זהה לכימות מדויקת. אם יש מכתים את הרקע בתוך הרקמה הנבחרת, למדוד את האזור המוחלט ולהחסיר אותו מהאזור חיובי עבור קולגן מתוך הרקמה כולה.</li>
</ol>

<ol><li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ulcerative+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ulcerative colitis.</a> New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).</li>
<li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Crohn's disease.</a> The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li>
<li>Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+inflammatory+bowel+disease+pathogenesis%3A+linking+host+genetics+and+the+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome.</a> Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).</li>
<li>Xavier, R. J., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).</li>
<li>Cho, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+and+immunopathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).</li>
<li>Ogura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+frameshift+mutation+in+NOD2+associated+with+susceptibility+to+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease.</a> Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).</li>
<li>Jostins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions+have+shaped+the+genetic+architecture+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).</li>
<li>Rivas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+resequencing+of+GWAS+loci+identifies+independent+rare+variants+associated+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease.</a> Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).</li>
<li>Rioux, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+association+study+identifies+new+susceptibility+loci+for+Crohn+disease+and+implicates+autophagy+in+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis.</a> Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).</li>
<li>Uhlig, H. H., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+intestinal+inflammation+as+tools+to+understand+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).</li>
<li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD%3A+lessons+from+mouse+infection+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li>
<li>Grassl, G. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+enteric+Salmonella+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of enteric Salmonella infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24 (1), 22-26 (2008).</li>
<li>Barthel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Enteric+Salmonella+Infection+in+Mice+Leads+to+Severe+and+Persistent+Intestinal+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aromatic-dependent+Salmonella+typhimurium+are+non-virulent+and+effective+as+live+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines.</a> Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).</li>
<li>Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+Salmonella+virulence+and+host+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Microbiology+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).</li>
<li>Valdez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+drives+an+accelerated+inflammatory+response+during+Salmonella-induced+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice.</a> Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).</li>
<li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+orphan+nuclear+receptor+RORalpha+and+group+3+innate+lymphoid+cells+drive+fibrosis+in+a+mouse+model+of+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Immunology%22%5BJournal%5D)">The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease.</a> Science Immunology. 1 (3), eaaf8864(2016).</li>
<li>Burke, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrogenesis+in+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Fibrogenesis in Crohn's disease.</a> American Journal of Gastroenterology. 102 (2), 439-448 (2007).</li>
<li>Hogan, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+and+regeneration+of+the+respiratory+system%3A+complexity%2C+plasticity%2C+and+mechanisms+of+lung+stem+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).</li>
<li>Fiocchi, C., Lund, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Themes+in+fibrosis+and+gastrointestinal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).</li>
<li>Rieder, F., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+fibrosis+in+IBD%E2%80%94a+dynamic%2C+multifactorial+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intestinal fibrosis in IBD—a dynamic, multifactorial process.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).</li>
<li>Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgery+for+adult+Crohn%27s+disease%3A+what+is+the+actual+risk%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk?</a> Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanisms+of+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanisms of fibrosis.</a> The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).</li>
<li>Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy%2C+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li>
<li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-22+Preserves+Gut+Epithelial+Integrity+and+Promotes+Disease+Remission+during+Chronic+Salmonella+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection.</a> Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).</li>
<li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+IL-13+triggers+TGF-beta1-dependent+tissue+fibrosis+in+chronic+2%2C4%2C6-trinitrobenzene+sulfonic+acid+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis.</a> Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).</li>
<li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-13+signaling+via+IL-13R+alpha2+induces+major+downstream+fibrogenic+factors+mediating+fibrosis+in+chronic+TNBS+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis.</a> Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).</li>
<li>Johnson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+fibrosis+is+reduced+by+early+elimination+of+inflammation+in+a+mouse+model+of+IBD%3A+impact+of+a+%26%2334%3BTop-Down%26%2334%3B+approach+to+intestinal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a &#34;Top-Down&#34; approach to intestinal fibrosis in mice.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).</li>
<li>Darfeuille-Michaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+of+adherent-invasive+Escherichia+coli+associated+with+ileal+mucosa+in+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).</li>
<li>Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+infection+with+Crohn%27s+disease-associated+adherent-invasive+Escherichia+coli+leads+to+chronic+inflammation+and+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis.</a> Nature Communications. 4, 1957(2013).</li>
<li>Imai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellin-mediated+activation+of+IL-33-ST2+signaling+by+a+pathobiont+promotes+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis.</a> Mucosal Immunology. , (2019).</li>
</ol>

למחברים אין קונפליקטים פיננסיים של עניין לגלות.

ההבנה שלנו של הפתוגנזה של IBD היה משופר מאוד על ידי מודלים העכבר של דלקת במעיים. למרות מודלים בודדים כגון לא לכידה של כל התכונות של מחלת האדם מורכבים ורב עצרת, הם היו שימושיים בזיהוי תכונות מפתח של התקדמות המחלה. הטיות פיברוטית הקשורים IBD נשאר צורך קליני מרכזי מבחינה קלינית כאשר הטיפולים הנוכחיים אינם יעילים בהתפתחות מחלות היפוך. יתר על כן, המעי פיברוזיס קשה ללמוד בסביבה מעבדה בשל מגבלות על מודלים בעלי חיים נוכחיים. חשיפה כרונית כדי tnbs בעכברים balb/c הוכח לגרום קולגן חזק התצהיר במעי הגס כי הוא מונע על ידי IL-13 ו tgf-...

קוליטיס כיבית (UC) ו קרוהן מחלת (CD) הן שתי הצורות הגדולות של ibd והם מאופיינים כמו כרונית הפרעות דלקתיות במערכת העיכול 1,2. הפרעות אלה יש השפעה גדולה על איכות החיים של החולים. תסמינים של IBD כוללים כאבי בטן, שלשול, בחילות, ירידה במשקל, חום, ועייפות3. מחקרים שנעשו לאחרונה זיהו גורמים גנטיים וסביבתיים שתורמים הפתוגנזה המחלה; הוא חשב כי גורמי סיכון כאלה לתרום הפרעה של מכשול האפיתל וכתוצאה מכך טרנסלוקציה או דגימות יתר של אנטיגנים לומיאל4. כתוצאה מכך, זה יוזם תגובה דלקתית מחריגה על פלורה הקומנדונית מתווכת על ידי תאים חיסוניים מעיים4. תכונות של סיבוכים הקשורים ibd יכול להאריך לאתרים מעבר למערכת העיכול המשפיעים על איברים שונים כולל המפרקים, העור, והכבד1,2. סימנים מכילים של UC כוללים דלקת חמורה לפזר בדרך כלל מקומי במעי הגס1. פתולוגיה של מחלות משפיעה על רירית ורירית המעיים של המעי וכתוצאה מכך כיבית שטחיים1. לעומת זאת, תקליטור יכול להשפיע על כל חלק של מערכת העיכול למרות הראיות של מחלה נמצא בדרך כלל המעי הגס ו-הדימעי2. יתר על כן, דלקת ב-CD הוא טרנסקיר, המשפיעה על כל השכבות של קיר המעי2.
כמה גנים הרגישות IBD אשר זוהו מצביעים כי דיסרגולציה של המכשול האפיתל או חסינות הם תורמים קריטיים התקדמות המחלה5. מוטציות בתחום הנוקלאוטיד 2 (NOD2) מבוטא על ידי מונוציטים נמצאה קשורה עם רגישות מוגברת לתקליטור; זה מדגיש את הקשר בין זיהוי המערכת החיסונית שונה של רכיבים חיידקיים ואת המחלה6. לאחרונה הגנום-wide לימודי התאגדות (GWAS) חשפו מסלולים נוספים העלולים להיות מעורבים בפתוגנזה של IBD כולל וריאציות גנטיות ב: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R מסלולים תלויים מקושר לחסינות אדפטיבית, MUC1, MUC19 וPTGER4 בתחזוקת מחסומי מעיים, ובATG16L-מתווך מותאם אוטומטית7,8,9. בעוד מחקרים אלה מבוססי האוכלוסייה הגנטיקה הגדילו את ההבנה שלנו של ibd, אללים הרגישות לבדה לא מספיקים ליזום ולקיים מחלה כרונית3. גורמים אחרים שאינם גנטיים כולל שינויים בהרכב microbiome בבטן וירידה בגיוון הקשורים לדלקת במעיים. עם זאת, לא ברור אם הבטן לפני או היא תוצאה של התגובות החיסונית מוסדר3. למרות האטיולוגיה של IBD נשאר ברור, ההבנה שלנו של הפתוגנזה של המחלה שופרה על ידי מודלים העכבר הניסיוני של דלקת המעיים10,11. מודלים אלה באופן אינדיבידואלי אינם מייצגים באופן מלא את המורכבות של המחלה האנושית, אבל הם יקרי ערך להסבר מסלולים pathפסלוגיים כי יכול להיות רלוונטי IBD ולאימות של אסטרטגיות טיפוליות בלתי סופי10, . בסדר, 11 מודלים אלה עכבר בדרך כלל להסתמך על ייזום של דלקת על ידי אינדוקציה כימית או זיהום, העברת תאים חיסוניים, או מניפולציה גנטית. יתר על כן, אסטרטגיות אלה לעיתים קרובות כרוך רטבאליות בשלמות אפיתל או אפנון של חסינות מולדים או אדפטיבית.
סלמונלה בידור serovars הם פתוגנים מעיים שיכולים להדביק בני אדם ועכברים. לאחר בליעה, סלמונלה יכול ליישב את הבטן על ידי פלישה ישירה של epithelia, M תאים, או אנטיגן הצגת תאים12. עכברים נגועים דרך הפה עם S. Typhimurium מביא את הקולוניזציה בעיקר של אתרים מערכתית כגון הטחול ובלוטות הלימפה מצע עם שפע נמוך יחסית במערכת העיכול12. עם זאת, טיפול מקדים של עכברים עם סטרפטומיצין משפר את היעילות של סלמונלה מושבת המעיים על ידי הפחיתה את ההשפעות ההגנה המארחת של מיקרוביוטה נורמלי13. התכונות הפתולוגיים של מודל זה כוללות הפרעה או כיבית של מכשול האפיתל, גיוס גרנולוציט, ובצקת חמורה13. לחילופין, זיהום עם כיתות החיסון S. מוטציה ΔAroA typhimurium מוביל לקולוניזציה כרונית של מעי והמעי הגס הנמשכת עד היום 40 לאחר זיהום14. . הס' המתח ΔAroA typhimurium יש פגם בביוסינתזה של חומצות אמינו ארומטיות; זה הופך את זן מוטציה avirulent והוא יכול להיות מנוצל כחיסון יעיל מאוד15. זיהום אוראלי בעכברים מוביל Th1-ו-Th17-cytokine תגובה דלקתית הקשורים, שיפוץ רקמות נרחב, ואת התצהיר קולגן. פתולוגיה רקמות קשורה לרמות גבוהות של גורם פרו-פיברוטי כגון TGF-β1, CTGF, ו IGF14. הצלקות הטראנקינטיות שדווחו במודל זה מזכירים את תצורות של סטריקצ'ור שנצפו לעתים קרובות ב-IBD. האינדוקציה של פיברוזיס על ידי סלמונלה דורש התקפה אלימה על ידי האיים הפתוגניות של סלמונלה (SPI)-1 ו-2 12. . חשוב מכך, זה ה מודל הדלקת העור ΔAroA מהווה מערכת שימושית לחקר תגובות פיברוטיות בעכברים מוטנטים המתוחזקים ברקע C57/Bl6. הזן C57/Bl6 הוא רגיש מאוד ל -S. Typhiumurim SL1344 זיהום בשל אובדן של פונקציה מוטציה ב הגן קידוד ההתנגדות הטבעית הקשורים מקרופאג חלבון (nramp)-116,17. מצאנו כי IL-17A ו-רוα תלוי בתאי הלימפה מולדים הם תורמים חשובים בפתוגנזה במודל זה18.
סיבוך משמעותי של תקליטור הוא מוסדר ומוגזם התצהיר של מטריקס מסחטות (ecm) כולל קולגן2,19. למרות מערכת העיכול יש קיבולת גבוהה יחסית להתחדשות, הצטלקות פיברוטיק יכול לנבוע בשל תגובות ריפוי הפצע לא פתורות המשויכים דלקת כרונית וחמורה20,21. בתקליטור, התוצאה היא השפעות מדלשליליות על ארכיטקטורת הרקמה המובילה לפגיעה משמעותית באיברים21,22. הטבע הטרנסציורי של הדלקת שנצפתה בתקליטור בסופו של דבר לפני העיבוי של קיר המעי הקשורים היצרות סימפטומטי או היווצרות סטריקצ'ור21. כשליש מהחולים בתקליטור דורשים כריתת מעיים של סיבוך זה22. אין טיפולים אנטי פיברופטיים יעילים ibd בהתחשב בכך שהשימוש בוקחת כגון azath, או אנטי-tnfα ביולוגי אין השפעה או רק בצניעות מופחתת הדרישה של התערבויות כירורגי19,23 . בעוד סיסטיק הוא חשב להיות תוצאה של דלקת כרונית, תאים של מוצא mesenchymal כגון פיברותקיעות ו קרום הלב הם נחשבים מקורות סלולריים העיקרי של ecm בפיברוטיק צלקות21,24. כרונית ס'. הזיהום ΔAroA typhimurium הוא מודל עכבר חזק של סיסטיק מעיים שיכול להציע תובנות לתוך הפתוגנזה של תכונות כמו תקליטור.

<table><tbody><tr><td>2 מ"ל צינורות נעילה בטוחים תחתונים עגולים</td><td>Eppendorf</td><td>22363344</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי נירוסטה</td><td>Qiagen</td><td>69989</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>טיפים פיפט פתח גדול פישר</td><td></td><td></td> 2707134 <td></td></tr><tr><td>2 מ"ל צלחות מגה-בלוק</td><td>Sarstedt</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>מחטי Gavage</td><td>FST</td><td>18061-22</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטומיצין סולפט</td><td>סיגמא</td><td>S9137</td><td></td></tr><tr><td>טחנת מיקסר</td><td>Retsch</td><td>MM</td><td></td></tr></tbody></table>

סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

רקמות פיברוזיס המאופיינת הצטברות פתולוגית של מטריקס מסחטות כגון קולגן היא תוצאה של דלקת מתמשכת ותיקון מוסדר. ב מחלת המעי הגס (IBD), פיברוזיס מוביל תצורות סטריקצ'ור חוזרים שבהם אין טיפול יעיל מלבד כריתת כירורגית. בשל התחלתה המאוחרת, התהליכים כי הכונן פיברוזיס הוא פחות לומד ובעיקר לא ידוע. לכן, סיבוכים פיברופטיים מייצגים אתגר מרכזי ב-IBD. בפרוטוקול זה, חזקה במודל vivo של סיסטיק מעיים מתוארת כאשר סטרפטומיצין טרום טיפול של C57Bl/6 עכברים ואחריו gavage אוראלי עם כיתה החיסון סלמונלה typhimurium ΔAroA מוטציה מוביל מושבת פתוגן מתמשך ו פיברוזיס של המעי. מתודולוגיות להכנת S. Typhimurium עבור החיסון, בדיקת הפתוגן העומסים המעי הטחול, והערכת התצהיר קולגן ברקמות המעי מוסברים. מודל זה מחלה ניסויית שימושי עבור בדיקת גורמים מארחים כי גם לשפר או להחריף את תקליטור כמו פיברוזיס מעיים.

טיפול סטרפטומיצין ואחריו זיהום אוראלי עם S. Typhimurium ΔAroA מוביל לדלקת מעיים חזקה פיברוזיס במיוחד מעי (איור 1). בעול הפתוגן אופייני של 108 עד 109 cfu ל 1 גרם של מעי ו 104 cfu per 1 g של הטחול ניתן לשחזר בעלי חיים נגועים (איור 2). הערכה של פיברוזיס ב picrosirius קטעי ויטראז אדום מציינים שיא פיברוזיס 21 ימים לאחר זיהום בעוד הרבה של הפתולוגיה נפתרה על ידי יום 42 pi (איור 3 <strong class="xfi...

פרוטוקול זה מתאר מודל העכבר של סלמונלה פיברוזיס המעי מונחה הדומה הסימנים העיקריים מפתח פתולוגי של מחלת קרוהן כולל דלקת קיר ופיברוזיס. שיטה זו יכולה לשמש כדי להעריך גורמים מארחים לשנות את התוצאות הפיברוטיות באמצעות עכברים מוטציה המתוחזקות על C57Bl/6 רקע גנטי.

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

פיברוזיס רקמה היא הדרך העיקרית כי איברים להיכשל לאורך זמן, בתגובה דלקת כרונית או הזדקנות. ולמעשה, אני טוען שאם לא תמות מסוכן זיהומיות או מסרטן, סביר להניח שתמות מביברוזיס איברים ככל שתזדקן. למרבה הצער, אין הרבה מודלים עכבר גדול לחקות פיברוזיס רקמה אנושית.אז מה שפיתחנו הוא מודל עכבר של מחלת קרוהן, זו מחלה בבני אדם שגורמת לפיברוזיס של המעיים והיא במידה רבה בלתי ניתנת לזיהוי. למעשה, הדרך היחידה שאתה יכול לטפל בו היא באמצעות הסרה כירורגית של הרקמה הפיברוטית ו קשירה מחדש של המעיים. היתרון של המודל שלנו הוא שהוא חודר באופן מלא בכל זני העכברים והוא מחקה מקרוב את מחלת הקרוהן האנושית והפיברוזיס נמשך יותר מחודש, שהוא באמת מודל חזק.החלק המאתגר ביותר של הליך זה הוא הטיפול בעכברים ובמיוחד gavage אוראלי שכן זה דורש הרבה תרגול הסמכה מיוחדת. בעת ביצוע הליך זה בפעם הראשונה, יש להיות מודעים לכך שעבודה עם סלמונלה דורשת אמצעי זהירות נאותים וטכניקה סטרילית. סילוק פסולת וחיידקים צריך להיות מתוכנן לפני הניסוי.ההדגמה החזותית של הליך זה חשובה מאוד משום שהיא כרוכה בטיפול בסלמונלה הדורשת אמצעי זהירות מיוחדים כמו גם טכניקה סטרילית נכונה. כדי להתחיל בהליך זה, להגדיר צלחת עם אגר LB המכיל סטרפטומיצין בריכוז של 100 מיקרוגרם למיליליטר. באמצעות לולאת תוסנה סטרילית, פס הצלחת עם מלאי גליצרול קפוא של חץ דלתא S טיפימור

chronic-salmonella-infection-induced-intestinal-fibrosis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

לבסס מודל כרוני חיידקי עכבר נגוע...

כרוני סלמונלה עכבר אינפקטד דגם

דגמים ניסיוניים של מחלות מעי דלקתיות אפשרו לנו לבחון את התגובות מורכב החיסון המולדת ובעלי כושר הסתגלות הקשורים בפתוגנזה. באמצעות הניקוד היסטולוגית, כימות של תומכי ציטוקינים דלקתיים ופעילות myeloperoxidase, אפשר להתחיל להעריך את התגובות הללו לראות מחלות מעי דלקתיות.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

מקור: לו, ב. ס. ואחרים. זיהום כרוני בסלמונלה פיברוזיס במעי. J. Vis. Exp. (2019)הסרטון מדגים את כימות העומס החיידקי במודל עכבר של זיהום כרוני בסלמונלה טיפימוריום עמידה לסטרפטומיצין. לאחר המתת חסד וניתוח סטרילי, רקמות ציקלי וטחול נקצרות, הומוגניות עם חרוזי פלדה לשחרור חיידקים, ומדוללות באופן סדרתי. הדילול מצופה על אגר סלקטיבי, ומושבות נראות נספרות להערכת עומס חיידקי לגרם רקמה באתרים מעיים ומערכתיים.

כימות עומס חיידקי רקמה במודל עכבר של זיהום כרוני במעי

זיהום rodentium Citrobacter מספק מודל יקר ללמוד זיהומים חיידקיים enteric כמו גם לארח תגובות וקוליטיס חיסוניים בעכברים. פרוטוקול זה מתאר מדידה של יושרת מכשול, עומס הפתוגן ופגיעת היסטולוגית מאפשרת אפיון היסודי של תרומות פתוגן ומארח לקוליטיס המדבק העכברי.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

הפרעה בזרימת המרה גורמת לפגיעה דלקתית חמורה בכבד כולסטטי עם רצף אופייני תלוי זמן של שינויים מורפולוגיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקשירה כירורגית של צינור המרה המשותף בעכברים המאפשר לגרום לתגובה פיברוטית חזקה לאחר 21 עד 28 יום.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

במחקר זה, אנו מתארים הליך מפורט של פיברוזיס בתיווך מעיים של TNBS, אשר מציג הפתופסולוגיה המקבילה ל-פיברוזיס של קרוהן. אנו גם דנים גישה זו לאור של rapamycin הקלה השפעות מעכבות על סיסטיק מעיים.

תובנה מכניסטית לתוך פיתוח של מעיים TNBS-תיווך פיברוזיס והערכת השפעות העכבות של Rapamycin

פיתחנו מודל של chorioamnionitis כדי לדמות חשיפה עוברית לדלקת אימהית (FEMI) ללא סיבוכים של אורגניזמים חיים כדי לבחון את ההשפעות של FEMI על התפתחות מערכת העיכול של הצאצאים. זה מאפשר מחקר של סיבות מכניות להתפתחות של פגיעה במעיים בעקבות chorioamnionitis.

מודל מורין של חשיפה עוברית לדלקת אימהית כדי ללמוד את ההשפעות של Chorioamnionitis חריפה על התפתחות מעיים שזה עתה נולד

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הפיתוח של מודל קוליטיס דמוי קרוהן במכרסמים. דלקת טרנסמולרית מובילה להיצרות באתר ההחדרה של TNBS, והגדלה מכנית נצפתה במגזר הפרוקסימלי להיצרות. שינויים אלה מאפשרים ללמוד מתח מכני בקוליטיס.

מודל מכרסמים המושרה על ידי TNBS לחקר התפקיד הפתוגניים של מתח מכני במחלת קרוהן

פרוטוקול זה מתאר את האינדוקציה של אלח דם מונובקטריאלי גראם שלילי במערכת מודל עכבר. המודל שימושי בחקירת תגובות הפונדקאי הדלקתיות והקטלניות במהלך אלח דם.

אפיון סלמונלה טיפימוריום המושרה על ידי דלקת צפק ספטית בעכברים

פרוטוקול זה מדגים כיצד ניתן להשתמש במודל העכבר חסר 5'-אינוזיטול פוספטאז (SHIP) המכיל 5'-אינוזיטול פוספטאז (SHIP) של דלקת איליאלית ופיברוזיס דמויי מחלת קרוהן (CD) לבדיקת טיפולים חדשים ל-CD.

הערכת התערבויות טיפוליות במודל העכבר חסר SHIP של אילייטיס ופיברוזיס דמויי מחלת קרוהן

חקור מודל עכברים לפיברוזיס מעיי כרוני בדלקת מעיים באמצעות זיהום Salmonella Typhimurium. שיטה זו מאפשרת חקירת מנגנוני פיברוזיס ומטרות טיפוליות במחלת קרוהן.

סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס

גלה סרטונים נוספים