קוונפיקציה מוחלטת של מטבוליזם החלבון ללא שימוש בפרוטאין על-ידי היפוך-שלב נוזלי כרומטוגרפיה המסה-ספקטרומטריה

סינתזת חלבונים נטולת תאים היא טכנולוגיה מתפתחת במערכות וביולוגיה סינתטית לייצור במבחנה של חלבונים. למערכות סינתזת חלבונים נטולות תאים אין קיר תאים, ולכן יש לנו גישה ישירה למטבוליטים. בפרוטוקול זה, אנו מכמתים את המדידות המוחלטות של 40 מטבוליטים המעורבים בחילוף חומרים מרכזי של פחמן ואנרגיה, המאפשר לנו לאפיין את חילוף החומרים ללא תאים.

הפרוטוקול מסתמך על גרורות של התרכובות עם אנילין, המאפשר הפרדה טובה יותר ורזולוציית ספקטרומטריית מסה גבוהה יותר. בנוסף, אנו משתמשים בתקנים פנימיים עם אנילין תווית isotopic, לכמות מוחלט של מטבוליטים. מטבוליטים מתויגים coelute, אשר מבטל את ההשפעות של דיכוי ברזל.