Name: מזהה הקמת אספקת דם משותף בעכברים Parabiotic על ידי הזרקת הסוכר קאודל וריד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: למד שיטה בטוחה לאימות כימריזם בדם בעכברים פרביוטיים באמצעות הזרקת גלוקוז לווריד הזנבי. השיטה מאפשרת מחקר ביורפואי אמין ללא פגיעה בבעלי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו הייתה נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (81570399 ו 81773735), תוכנית המחקר ופיתוח המפתח הלאומי של סין-מסורתי הרפואה הסינית מודרניזציה פרויקט מחקר (2017YFC1702003), ו היי לונג ג'יאנג הקרן המצטיין למדעי הנוער (JC2017020).

כל ההליכים הכרוכים בבעלי חיים והטיפול בהם אושרו על-ידי שימוש בבעלי חיים מוסדיים ובוועדת הרפואה של חרבין.
הערה: הכלים והציוד הנדרשים לשיטה מפורטים בטבלת החומרים.
1. הכנת חומרים ובעלי חיים
<ol><li>סדר C57BL/6 עכברים זכרים עם משקל בין 20 g-25 גרם מספק בעלי חיים סטנדרטיים המעבדה.</li>
	<li>הבית העכברים במחזור של 12 h החושך: 12 h החשיכה ב -24 עד 26 ° צ' עם גישה בליבינום למים ומזון.</li>
</ol>2. פרביוזיס
<ol><li>באמצעות הזרקה של 20 גרם/L 2, 2, 2-tribromoethanol בריכוז של 0.1 mL/10 g. לאשר הרגעה הולמת כפי שמצוין על ידי הרפיה שריר, נשימה איטית ויציבה, אובדן רפלקס העור, היעלמות רפלקס הקרנית.</li>
	<li>החלת משחה אופטלמולוגית עם טיפ-עצה כדי למנוע עיניים יבשות.</li>
	<li>בצע את ההליך parabiosis כפי שמתואר בעבר5.<ol>
<li>מניחים את העכברים במצב פרקדן. לגלח ביסודיות את הצד השמאלי של עכבר אחד בצד ימין של העכבר השני החל כ 1 ס מ מעל המרפק ל 1 ס מ מתחת לברך עם מכונת גילוח חשמלית. השתמש קרם דפילציה כדי לנקות לחלוטין את הפרווה על העור מגולח.</li>
		<li>לנגב את האזורים המגולחים. עם שפתי-האור מניחים את העכברים על משטח מחומם מכוסה על ידי כרית סטרילי.</li>
		<li>צור חתכים בעור האורך החל מ 0.5 ס מ מעל המרפק כדי 0.5 ס מ מתחת למפרק הברך באמצעות זוג מספריים חדים על הצד המגולח של כל חיה.</li>
		<li>לנתק את העור מfascia תת עורית בעדינות לאחר החיתוך.</li>
		<li>לחבר את האוקרגון והברך של parabiont עם תפר 3-0.</li>
		<li>תפר את העור מגולח עם תפר מתמשך 5-0.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנס 0.5 mL של 0.9% התת-עורי אל כל עכבר כדי למנוע התייבשות.</li>
	<li>הכנס טרמדול (10 מ"ג/25 גרם/יום) הפנימי מוברג לכל עכבר כדי להקל על הכאב.</li>
</ol>3. ואלידציה של כימנות מחזור
<ol><li>שיטת התנודה בגלוקוז הערה: לוודא את הבנייה המוצלחת של הצ מחזור בין parabionts בשיטת תנודות הגלוקוז (אין צום) ביום העשירי לאחר ניתוח parabionts.<ol>
<li>באמצעות הזרקת הצפק של 20 גרם/L 2, 2, 2-טריברואואתנול לכל עכבר בריכוז של 0.1 mL/10 גרם.</li>
		<li>לתקן את עכברי התורמים בתוך. תיקון זנב של עכבר חזותי ורידי</li>
		<li>שפשף את הורידים הקאואל באגף של אחד מזנבו של הפראבונט עם כדור צמר גפן שנספג ב 70-75% אלכוהול כדי לנקות את הזנב ולהתרחב בכלי הדם.</li>
		<li>החזק מזרק 1.0 mL המכיל גלוקוז ביד ימין ולשמור את המחט במקביל הווריד (פחות מ 15 °).</li>
		<li>הכניסו את המחט לתנוחה כ-2-4 ס מ מקצה הזנב.</li>
		<li>הכנס 100 μL של גלוקוז (1.2 g/ק"ג) לתוך התורם בתוך 10 s. הערה: המונח תורם מתייחס לפרביונט המקבל את הזרקת הגלוקוז דרך העורק האחורי. המטופל הוא הפרבימונט השני, שאינו מקבל גלוקוז ישירות.</li>
		<li>נקה את הבהונות. עם שפתי-האור לחתוך את הבהונות של עכברים התורם והנמען עם מספריים ולאסוף טיפת דם בנקודות זמן שונות לאחר ההזרקה של גלוקוז (1 דקות, 5 דקות, 10 דקות, 15 דקות, 20 דקות, 30 דקות, 40 דקות, 50 דקות, ו 60 דקות). הסר את קריש הדם בכל נקודת זמן איסוף כדי למנוע נזק נוסף. הערה: הנפח של דם שנאסף היה 10-25 ul עבור בדיקה אחת, ו 90-225 ul בסך הכל.</li>
		<li>לטפטף את הדם לתוך מרכז מבחני גלוקומיטר עבור זיהוי רמת גלוקוז.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תשתמש בכתם הכחול של. אוון כשליטה חיובית3<ol>
<li>הכנס 200 μL של 0.5% כחול הנוגדן של אוון intraperitoneally לתוך העכבר התורם.</li>
		<li>2 h מאוחר יותר, המתת החסד על ידי הזרקה התוך הצפק של 20 גרם/L 2, 2, 2-tribromoethanol לכל עכבר בריכוז של 0.2 mL/10 גרם, ולאסוף דם משני parabits על ידי ניקוב לב.</li>
		<li>צנטריפוגה את דגימות הדם ב 916 x עבור 15 דקות.</li>
		<li>. אספו נסיוב מהסופרנטאנט</li>
		<li>דלל את הנסיוב עם 0.9% הנאגל בשעה 1:50.</li>
		<li>למדוד את ספיגת דגימות סרום מדולל ב 620 ננומטר עם ספקטרוסקופיה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

Parabiosis מתייחס לטכניקה כירורגית של חיבור שתי חיות חיים כדי להקים מערכת כלי דם משותף על ידי ניסיוני פירושו6,7,8. היתרון של מודל זה הוא כי החומרים המיוצרים על ידי אדם אחד יכול לפעול על שני בעלי חיים באותו זמן. לפיכך, ניתן להשתמש במודל הפרביוזיס כדי לחקור את התפקיד של חומר או גורם במחלה קשורה, תוך הפקת מסקנות משמעותיות וחדשניות רבות. לאור ערך היישום הגדול שלה, המודל הביא להבנה טובה יותר של מחלות לב וכלי דם8</su...

Parabiosis היא שיטת דוגמנות שבה שני אורגניזמים חיים מחוברים יחד בניתוח ולהתפתח כמערכת פיזיולוגית אחת עם מערכת משותפת מחזור הדם1. דגמים כאלה שימשו באופן נרחב לחקר הפיזיולוגיה בשל היתרון כי החומרים המיוצרים על ידי אדם אחד יכולים לפעול על שתי בעלי חיים באותו זמן דרך מערכת הדם המשותפת. מאז אמצע 1800, כאשר הניסויים parabiotic היו חלוץ על ידי פול ברט2, השיטות לבניית מודלים parabiotic הפכו סטנדרטיים. עם זאת, שיטה פשוטה ונוחה לאימות הקמתה המוצלחת של כימריזם דם חסר. נמסר כי מחזור הזרימה ניתן להעריך בהצלחה על ידי intraperitoneally הזרקת 0.5% הצבע הכחול אוונס באחד הפראביבטים ואחריו מדידה של בספיגת כחול אוונס בדם של שני הפראביב עם קורא מיקרולוח3. שיטה נוספת מחייבת גזע עכבר מסוים המכיל CD 45.1+-ו-cd 45.2+-מונוציטים עם התווית בכל מבנה. Cy, תא הציטונסה משמש לאחר מכן כדי לקבוע כמינות דם על ידי מדידת תדירות של שני סמנים ב מונוציטים מן הטחול או הדם4. עם זאת, שיטות אלה הן לעתים קרובות קטלני או מסורבל לבעלי חיים, ושיטה בטוחה ופשוטה לאימות מהיר ואמין של מודלים parabiotic הוא רצוי מאוד. במחקר זה, הקמנו שיטה חדשה למטרה זו, אשר אומתה במודל העכבר של parabiosis. הריכוז של גלוקוז בדגימות דם שנלקח מווריד הזנב נמדד באמצעות גלוקומיטר, והתבנית של שינויים ברמת הגלוקוז בעכברי התורם והנמען נחשבת אינדיקציה לצ המחזור. קראנו לשיטה זו את שיטת התנודות בגלוקוז. היישום של שיטת אימות זו אינו מוגבל לעכברים, אך ניתן להרחיב אותם למודלים פתולוגיים שונים, למעט אלה עם חוסר התקנה רציני של מטבוליזם הגלוקוז. ההליך הוא פשוט, הצלת זמן, ובטוח.

<table><tbody><tr><td>מלקחיים מעוקלים</td><td>מכשירים כירורגיים JZ, סין</td><td>J31340</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>מכשירים כירורגיים JZ, סין</td><td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מחט</td><td>JZ מכשירים כירורגיים, סין</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים 2.5 מ"ל</td><td>Agilent, ארה"ב</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין</td><td>Solarbio, סין</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>tramadol</td><td>Yijishiye, סין</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>גלוקומטר</td><td>Roche Diabetes Care, אינדיאנה</td><td>Accu-Chek Active רצועות</td><td></td>בדיקה</tr><tr><td>Counterstain הכחולות של</td><td>אוון Solarbio, סין</td><td>G1810</td><td></td></tr><tr><td>קרם אפילציה</td><td>Nair, ארה"ב</td><td>שמיכת חימום LL9161</td><td></td></tr><tr><td>( כרית חימום)</td> <td>Kent Scientific Corp, ארה"ב</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>Codos, סין</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 תפר כירורגי</td><td>מפעל מחטי תפרים רפואיים בשנחאי, סין</td><td>SYZ 3-0#, SYZ 5-0#</td><td></td></tr></tbody></table>

מזהה הקמת אספקת דם משותף בעכברים parabiotic על ידי הזרקת הסוכר קאודל וריד

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabiosis היא שיטה ניסיונית לשילוב בניתוח שתי בעלי חיים מקבילים לאורך ציר האורך של הגוף. אנו מציגים פרוטוקול לגילוי הקמתה המוצלחת של כימריזם דם בפראביטס על ידי הזרקת וריד caudal של גלוקוז. . עכברים מיוטיים נבנו גלוקוז הוזרק לתוך העכבר התורם דרך הווריד הזנב, ותנודות של רמת הגלוקוז בדם נמדד בשני העכברים באמצעות גלומוטר דם בנקודות זמן שונות. התוצאות שלנו הראו כי לאחר הזרקת גלוקוז, רמת הגלוקוז בדם בעכברים תורמים גדל בחדות אחרי 1 דקות ירד לאט לאחר מכן. בינתיים, רמת הגלוקוז בדם של עכברים הנמען לשיאה 15 דקות לאחר ההזרקה. תוצאות דומות הושגו עם אוונס כחול, משמש שליטה חיובית עבור גלוקוז. התנודות הסינכרוניות של רמות הגלוקוז בדם מעידות על כך שזרימת הדם בין שני העכברים הוקמה בהצלחה.

ב שישה עכברים תורמים, רמות הגלוקוז בדם עלה בחדות כדי 26.5 μm/L (173% עלייה) בממוצע של 1 דקות לאחר ההזרקה של 100 μL של גלוקוז (1.2 g/ק"ג) דרך הווריד הזנב ולאחר מכן ירד בהדרגה ל 13.3 μm/L ב 60 דקות. בעכברי הנמען, הגלוקוז בדם עלה באיטיות לאחר ההזרקה והגיע לרמת השיא הראשונה ב -15 דקות (47% הגדלה, 12.2 μm/L). בהתבסס על התוצאות הנ ל, התקן של מחזור המחזור הוגדר כדלקמן: 1) עלייה חדה ברמת הגלוקוז בדם (מינימום 100% להגדיל או &gt; 20 μm/L) בעכברים תורמים בתוך 1 דקות לאחר הזרקת גלוקוז, ו 2) עלייה משמ...

כאן אנו מתארים שיטה חדשה של זיהוי הקמת מוצלח של זרימת דם משותפת של שני parabits באמצעות הזרקת וריד caudal של גלוקוז, הגורם נזק מינימלי והוא לא קטלני לתוך parabionts.

מזהה הקמת אספקת דם משותף בעכברים Parabiotic על ידי הזרקת הסוכר קאודל וריד

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

הפרוטוקול שלנו מספק שיטת אימות משופרת עבור כימריזם במחזור ושיטה להגדרת מודל פרביוזיס מוצלח למחקר ביו-רפואי. בהשוואה לשיטות הקיימות לגילוי כימריזם בדם בפרביוזיס שלעתים קרובות קטלניות או מסורבלות, הפרוטוקול שלנו בטוח ופשוט, ומאפשר אימות מהיר ואמין. למרות שיטה זו היא ספציפית לגילוי של כימריזם דם במודלים פרביוזיס, זה יכול להיות מיושם על כל מחקרים ביו מעורבים הליכים פרביוטיים.הצעד המאתגר ביותר הוא הזרקת גלוקוז. לכן הקפד לתרגל את הזרקת וריד הזנב לפני ביצוע הליך ניסיוני, או להשתמש קיבוע זנב עכבר חזותי ורידים. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה, מניחים שני 20 עד 25 גרם הרדמה C57 שחור 6 עכברים זכרים בתמונת supine, ולהשתמש מכונת גילוח חשמלית כדי לגלח ביסודיות את הצד השמאלי של עכבר אחד ואת הצד הימני של העכבר השני מסנטימטר אחד מעל המרפק לסנטימטר מתחת לברך.הסר את כל השיער שנותר עם קרם depilatory לפני ביצוע חתכים בעור האורך בעור מנוקה של כל בעל חיים, החל 0.5 ס"מ מעל המרפק ל 0.5 ס"מ מתחת למפרק הברך, בעדינות לנתק את העור מן fascia תת עורי. חבר את olecranon ואת הברך של parabiont עם תפר 3-0, ולתפור את העור מגולח עם תפר רציף 5-0. ואז להזריק תת עורית 0.5 מיליליטר של 0.9% נתרן כלורי כדי למנוע התייבשות, ולהזריק תוך שרירית 10 מיליגרם של tramadol לכל 25 גרם של עכבר כדי להקל על הכאב, לתוך כל עכבר ליום במשך שלושה ימים.כדי לאמת את הבנייה המוצלחת של זרימת הדם בין כימריזם בין פרביונטים על ידי תנודות גלוקוז, ביום העשירי לאחר ניתוח פרביוזיס, לאבטח את העכברים התורמים בקיבוע זנב עכבר חזותי ורדי, ולהשתמש 70 עד 75% כדור כותנה ספוג אתנול לשפשף את הוורידים caudal באגף של זנב אחד parabiont. הכנס מחט מזרק של מיליליטר אחד לתוך וריד caudal 2-4 ס"מ מקץ הזנב ובמקביל לווריד ככל האפשר, ולהזריק אחד עד שני גרם לקילוגרם של גלוקוז ב 100 microliters של תמיסת מלח לתוך התורם על תקופה של 10 שניות. לאחר מכן להשתמש במספריים כדי להסיר את בהונות מן התורם ואת בעלי החיים הנמען כדי לאפשר איסוף של טיפת דם בנקודות זמן שונות של עניין לאחר הזריקה.לאחר מכן הוסיפו טיפה של כל דגימת דם למרכז רצועת בדיקת גלוקומטר לגילוי רמת הגלוקוז. כדי לאמת את הבנייה המוצלחת של זרימת הדם על ידי ספיגת צבע כחול אוונס, להזריק 200 microliters של 0.5% אוונס כחול נגד להכתים תוך פרטית לתוך העכבר התורם, ולאסוף דם משני parabionts על ידי ניקוב לב לאחר שעתיים. מפרידים את הסרום באמצעות צנטריפוגה, ומעבירים את הסרום לצינור חרוט לדילול ביחס של 1 עד 50 ב-0.9% נתרן כלורי.לאחר מכן למדוד את הספיגה של דגימות סרום מדולל ב 620 ננומטר על ספקטרופוטומטר. בניתוח מייצג זה של רמות הגלוקוז בדם בשישה עכברים תורמים, רמת הגלוקוז בדם עלתה בחדות ל-26.5 מיקרומולאר לליטר בממוצע דקה לאחר הזרקת 100 מיקרוליטר של גלוקוז דרך וריד הזנב. רמות הגלוקוז בדם ירדו בהדרגה ל-13.3 מיקרוליטר לליטר ב-60 דקות.בעכברים המטופל, הגלוקוז בדם גדל לאט לאחר ההזרקה, והגיע לרמת השיא הראשונה ב 15 דקות. הריכוז של צבע כחול אוונס בסרום של פרביונטיות הצביע גם על בנייה מוצלחת של כימריזם מחזור הדם, וצמתים תת עוריים בין הפרביומונים ניתן היה לראות בבירור. בפרביונטיות שלא ביסידו כימריזם דם 15 יום לאחר ניתוח הפרביוזיס, העכברים המטופלים לא הציגו רמת גלוקוז מוגברת בדם תוך 60 דקות לאחר הזרקת גלוקוז לחיה התורמת.גם ריכוז הדם של כחול אוונס בשני המטופלים לא הועלה, מה שמוכיח ששיטת תנודות הגלוקוז רגישה כמו השיטה הכחולה של אוונס. יתר על כן, רמת האינסולין בדם ירדה באופן משמעותי שעה לאחר הזרקת הגלוקוז בגלל רמות הגלוקוז המוגברות במהירות והתאוששה לרמות נורמליות בשלוש שעות, מה שמצביע על כך שההשפעות של הגלוקוז המוזרק על חילוף החומרים של האינסולין ניתנות לשחזור. יש לדאוג לוודא כי המחט מוכנס ישירות לתוך וריד הזנב.לאחר אישור כימריזם הדם של פרביונטים בשיטה זו, שינויים פיזיולוגיים ניתן ללמוד בבעלי חיים פרביוטיים חיים.

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Parabiotic הצטרפותו של שני אורגניזמים מוביל להתפתחותה של מערכת דם משותפת. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את הצעדים כירורגית כדי ליצור חיבור בין parabiotic עכבר wild-type ועכבר-GFP-לבטא מכונן.

Parabiosis בעכברים: פרוטוקול מפורט

Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין מווסת את השריר זלוף ומגביר את microvascular על פני השטח אזור (גיוס microvascular) זמין לחילופי ממס בין interstitium דם ורקמות. מיקרוסקופ intravital משולב, בדיקת אולטרה סאונד משופרת לעומת זאת מוצג להעריך בו זמנית של אינסולין פעולה בכל כלי גדול יותר, את microcirculation ויוו.

משולב מיקרוסקופ Intravital משופרת לעומת זאת בדיקת אולטרה סאונד של Hindlimb העכבר ללמוד Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין זלוף שריר

המאמר הנוכחי מתאר את הדור ואת מטבולית איפיון של עכברים-fed דיאטה עתירת שומן כמודל של עמידות לאינסולין הנוצרות על-ידי תזונה והשמנה. עוד כולל פרוטוקולים מפורט לביצוע הבדיקה סובלנות גלוקוז דרך הפה ואת הבדיקה עמידות אינסולין, מעקב אחר שינויים לכל הגוף של גלוקוז חילוף החומרים ויוו.

חקר In Vivo מטבוליזם הגלוקוז עכברים הניזונה דיאטה עתירת שומן באמצעות בדיקת הגלוקוז אוראלי סובלנות (OGTT) ובדיקה עמידות לאינסולין (ITT)

מחקר זה מתאר את המדידה הישירה של ייצור גלוקוז בכבד במודל עכבר תסמונת השחלות הפוציקסטי באמצעות מעקב גלוקוז איזוטופי יציב באמצעות וריד הזנב הן בצום והן במצבים עשירים בגלוקוז יחד.

הערכה של ייצור גלוקוז בכבד במודל עכבר תסמונת השחלות הפוציקסטי

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה להשתלת מוניטור סוכר רציף מסחרי המיועד לחולים על עכברים ומספקים את הסקריפטים לניתוח התוצאות.

ניטור סוכר רציף פשוט בעכברים הנעים בחופשיות

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה וזעיר פולשנית להשתלה והדמיה של תאי NIT-1 בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD) - עכברים משולבים בעלי כשל חיסוני חמור המאותגרים בטחול מטוהר מעכברי NOD סוכרתיים ספונטניים.

ניטור ביולומינסנטי של הישרדות השתל במודל העברה מאומץ של סוכרת אוטואימונית בעכברים

מהדק היפרגליקמי משמש למדידת שחרור אינסולין עם ריכוז גלוקוז גבוה יותר בדם. מהדק היפוגליקמי מיועד למדידת ייצור גלוקוז המושרה על ידי תגובות נגד ויסות. שתי השיטות משתמשות באותו הליך כירורגי. כאן, אנו מציגים טכניקת מהדק להערכת מטבוליזם גלוקוז מערכתי.

מהדק היפרגליקמי ומהדק היפוגליקמי בעכברים מודעים

בפרוטוקול זה מתוארות שיטות רלוונטיות למטבוליקה עורקית מותאמת ל-BAT באמצעות GC-MS במודל עכבר. שיטות אלה מאפשרות רכישת תובנות יקרות ערך לגבי חילופי מטבוליטים בתיווך BAT ברמת האורגניזם.

מטבולומיקה עורקית למדידה בחילוף מטבוליטים של Vivo ברקמת שומן חומה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכבר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI)-העברת עוברים (ET), המאפשר לנו לצפות בשינויים הקשורים לגיל במטבוליזם של גלוקוז שניתן לייחס ל- ICSI, ומספקים תובנות לגבי ההשפעות ארוכות הטווח הפוטנציאליות שלו על ההתפתחות האנושית.

ניטור רמת הסוכר בדם בצאצאי עכבר לאחר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית

הפרוטוקול מדגים שיטה לאיסוף דם מוורידי פורטל ווריד נבוב נחות מעכברים ברצף כדי להעריך את הייצור והספיגה של מטבוליטים מיקרוביאליים במעי.

איסוף דם רציף מווריד נבוי נחות ואחריו וריד פורטל להערכת מטבוליטים מיקרוביאליים במעיים בעכברים

כאן, אנו מספקים פרטים על ביצוע הפרשת אינסולין מגורה גלוקוז (GSIS) באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם כטכניקה נוספת להערכת תפקוד הלבלב האנדוקריני עם הפחתת מבלבלים אפשריים.

הפרשת אינסולין מגורה על ידי גלוקוז באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם

למד שיטה בטוחה לאימות כימריזם בדם בעכברים פרביוטיים באמצעות הזרקת גלוקוז לווריד הזנבי. השיטה מאפשרת מחקר ביורפואי אמין ללא פגיעה בבעלי החיים.

מזהה הקמת אספקת דם משותף בעכברים Parabiotic על ידי הזרקת הסוכר קאודל וריד

גלה סרטונים נוספים