Name: הכנה לדוגמא במיקרומאזן קריסטל קוורץ מדידות של חלבון ומכניקה פולימר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: חקור מדידות מיקרומאזן קריסטל קוורץ לניתוח תכונות מכניות וויסקואלסטיות של סרטי פולימרים. השיטה מאפשרת חישוף רגיש של ריכוזים קטנים ומגיבים לשינויים סביבתיים בביומטריאלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי NSF (DMR-1710491, אס-1743748). E.S. ותמיכת הNSF (DMR-1751308).

QCM-D קולגן וספיחה
1. הכנה לדוגמא וסנסור טרום ניקוי
<ol><li>הכינו 20 מ ל של 0.1 מאגר אצטט M, התאמת ה-pH עם HCl ו NaOH לפי הצורך כדי להשיג pH = 5.6.</li>
	<li>הוסף העכבר זנב החולדה פתרון ל 20 מ ל של מאגר אצטט תחת תנאים סטריליים לריכוז הסופי של 10 μg/mL.</li>
	<li>נקו את חיישן הקוורץ המצופה בזהב להסרת חומר אורגני וביולוגי25,26.<ol>
<li>מניחים את החיישן בצד הפעיל למעלה בחדר UV/אוזון ולטפל במשטח במשך כ 10 דקות.</li>
		<li>החום 5:1:1 תערובת של מים מיוהים (dH2O), אמוניה (25%) ותחמוצת מימן (30%) עד 75 ° c. מניחים את החיישן בפתרון עבור 5 דקות.</li>
		<li>לשטוף את החיישן עם dH2O ו יבש עם זרם של גז חנקן.</li>
		<li>מניחים את החיישן בצד הפעיל למעלה בחדר UV/אוזון ולטפל במשטח עבור 10 דקות. הערה: הליך הניקוי צריך להתבצע באופן מיידי לפני מדידה כדי למזער זיהום סביבתי על משטח החיישן.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. QCM-D-רכישת נתוני מדידה
<ol><li>הפעל את כל הציוד הנדרש כדי לקחת מדידה כולל את המשאבה, יחידת האלקטרוניקה, ותוכנות מחשב.</li>
	<li>הסר את מודול הזרימה מהפלטפורמה הקאמרית והוצא את בורגי האגודל הגדולים כדי לפתוח את המודול.</li>
	<li>אם החיישן הושאר לאחר ניקוי ראשוני (שלבים 1.3.1-1.3.4), לשטוף את החיישן עם מים מוכי (dH2O) ויבש עם זרם של גז חנקן כדי להבטיח כי אין מזהמים על פני השטח.</li>
	<li>הר החיישן במודול הזרימה על O-ring חשוף, תחילה ייבוש האזור עם זרם של גז חנקן ובדיקה כי O-ring הוא שוכב שטוח. החיישן צריך להיות ממוקם עם המשטח הפעיל בצד למטה עוגן בצורת אלקטרודה מונחה לכיוון הסמן במודול הזרימה.</li>
	<li>הפעל את בורגי האגודל כדי לאטום את מודול הזרימה ולהחליפו בפלטפורמת החדר. הצמד צינורות משאבה נחוצים למודול הזרימה ולמשאבה חיצונית.</li>
	<li>באמצעות תוכנת המחשב המתאימה, הגדר את טמפרטורת מודול הזרימה ל-37 ° c. נטר את הטמפרטורה המשתנה עבור 10-15 דקות כדי לוודא שהיא מעורפלת בהתאם לערך הרצוי.</li>
	<li>מצא את תדרי התהודה הראשוניים של החיישן. אם תדרי תהודה כלשהם אינם מצויים על-ידי התוכנה, בדוק שמודול הזרימה ממוקם כראוי על הפלטפורמה הקאמרית או מחדש את החיישן במודול הזרימה כדי להבטיח שהוא ממורכז ומבצע מגע חשמלי מתאים.</li>
	<li>מניחים את המשאבה משאבת צינור ב-1x פוספט באגירה מלוחים פתרון (PBS). הפעל את זרימת המשאבה החיצונית ב -25 μL/min ולבדוק באופן חזותי את הצינורות כדי להיות בטוח כי הנוזל זורם דרך הצינור. הערה: זרימת הנוזלים עשויה להיות קלה יותר לראות על-ידי הגדלת הזרימה של קצב זרימת הנוזלים ל-100 μL/min או יותר. אם הנוזל אינו נראה נע דרך הצינור, סביר להניח כי שני החלקים של מודול הזרימה אינם יוצרים חותם תקין. נסה להדק את בורגי האגודל, להדק את המחברים של צינורות כדי לשקע ו, או להרכבה מחדש את החיישן כדי להיות בטוח כי O-ring הוא שטוח וממורכז.</li>
	<li>אפשר זרימת נוזלים של ה-PBS 1x דרך מודול הזרימה עבור לפחות 15 דקות כדי משקל כראוי.</li>
	<li>הפעל את המדידה בתוכנת המחשב כדי להתחיל ברכישת נתונים. נטר את התדירות וערכי הפיזור עבור 5 דקות לפחות כדי להבטיח קו בסיס יציב.</li>
	<li>לעצור את המשאבה ולהעביר את צינורות מפרץ לפתרון המאגר אצטט קולגן, ולחדש את זרימת הנוזלים. שים לב למועד האירוע לצורך ניתוח מאוחר יותר.</li>
	<li>אפשר לתדר החדש ולערכי הפיזור להיות בעלי ערך יציב. כאן, אנו מצפים ייצוב זה להתרחש לאחר 8-12 h.</li>
	<li>לעצור את המשאבה, להזיז את צינורות האוויר בחזרה לפתרון הערוץ 1x, ולחדש את זרימת הנוזלים. שים לב למועד האירוע לצורך ניתוח מאוחר יותר.</li>
	<li>אפשר לתדר החדש ולערכי הפיזור להיות בעלי ערך יציב. כאן, ייצוב זה מתרחש לאחר 30 דקות. הערה: שלבים 2.13 ו-2.14 ניתן לחזור על כל תקופה חדשה של זרימת נוזלים בניסויים קפדניים יותר עם מספר רב יותר של שלבים.</li>
	<li>סיים את רכישת הנתונים של המדידה ושמור את הנתונים.</li>
	<li>לנקות ולפרק את הציוד QCM.<ol>
<li>הגדל את שיעור זרימת הנוזלים של המשאבה החיצונית כדי 500 μL/min או יותר ומקום אבובים מפרץ לתוך פתרון של 2% הגיהנום פתרון ניקוי עבור לפחות 20 דקות. הערה: עבור ניסויים אחרים, אם ניתוח נוסף של החיישן רצוי, להסיר את החיישן לפני שלב 2.16.1 ולמקם חיישן ניקוי אחר במודול.</li>
		<li>לעצור את המשאבה ולהעביר את צינורות המים כדי dH2O, ולחדש את זרימת הנוזלים כדי להוסיף עוד לשטוף את המערכת לפחות 20 דקות.</li>
		<li>הפסיקו את זרימת הנוזלים והסירו את החיישן ממודול הזרימה. יבש את החיישן בתוך מודול הזרימה עם זרם של גז חנקן. כבו את תוכנת המחשב, יחידת האלקטרוניקה והמשאבה הפריסטלטית. הערה: ניתן לנקות את החיישנים המצופים בזהב, כמפורט בשלבים 1.3.1-1.3.4, ולהשתמש בו שוב במספר מדידות. האינדיקציות כי לא ניתן לעשות שימוש חוזר בחיישן עבור מדידות אמינות עשויים לכלול אך אינם מוגבלים לשינויים גדולים בתדרי התהודה הראשוניים ולשימוש משמעותי במידות הבסיסיות עם זרימת המאגר. ניתן לפתוח ולנתח נתונים בתוכנה המועדפת, כולל אלה שסופקו על-ידי חברות המתמחות בציוד QCM-D.</li>
	</ol></li>
</ol>התנפחות מורכבת של QCM
3. הכנה לדוגמא
הערה: ניסוי זה בוצע באמצעות תוכנית MATLAB שפותחה בתוך קבוצת המחקר Shull לאיסוף וניתוח נתונים.
<ol><li>ראשון, מיקום חיישן גביש קוורץ חשוף במחזיק לדוגמה מחובר מנתח רשת וקטורי ומחשב. הפעל את המנתח כדי להחיל מתח נדנוד על החיישן, ולאסוף ספקטרום מוליכות התייחסות החיישן באוויר.</li>
	<li>לטבול את מחזיק המדגם בגביע 100 mL ממולא במים מזוקקים ולאסוף ספקטרום מוליכות התייחסות לחיישן חשוף במים.</li>
	<li>הכינו פתרון 0.5 M של אשלגן ברומיד (KBr).<ol>
<li>מתמוסס 1.79 גרם של KBr ב 30 מ ל של מים מזוקקים. ללחוץ עד התפרקה.</li>
		<li>הכנס פרוסת סיליקון קטנה לתוך הפתרון KBr בזווית כדי ליצור שקופית עבור חיישן הקוורץ במהלך שלב הריפוי כדי למנוע מהסרט לרדת מהחיישן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן את החיישן לציפוי מסתובב.<ol>
<li>הגדר את פרמטרי מעיל הספין ל-10,000 rpm, 8,000 האצת ו-5 s.</li>
		<li>הכנס את החיישן אל מרובע הספין והפעל את הוואקום.</li>
		<li>לכסות את פני החיישן עם אתנול ולהפעיל את משטח ספין כדי לנקות את משטח החיישן.</li>
		<li>הוסף את ה-(PSS: PDADMA שהוכן באותו אופן כפי שמפורט בסדמאן ואח '. 22) אל פני השטח של החיישן.<ol>
<li>אם הקומפלקס הוא בשני שלבים (פולימר עשיר פולימר עני), לאט להכניס את הפייפט לתוך הפתרון. לפנות את הפייפט על ידי ניפוח בועות תוך הזזת מחית המחמד לשלב צפוף הפולימר עשיר.</li>
			<li>לאחר שחרור כמה בועות בשלב עשיר פולימר, לצייר את 0.5-0.75 mL של הפתרון העשיר פולימר לתוך pipet. שמירה על הלחץ על הנורה pipet לא לאפשר את השלב המסכן פולימר להיכנס pipet, למשוך את pipet מתוך הפתרון.</li>
			<li>נגב את החלק החיצוני של. מחית המחמד באמצעות קינגב הוסף מספיק הפתרון שלך על פני השטח של חיישן הקוורץ כדי לכסות לחלוטין את פני השטח. ודא שאין בועות גלויות בפתרון על משטח החיישן.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>ספין המעיל לדוגמה, ובאופן מיידי להטביע את החיישן בפתרון 0.5 M KBr כדי למנוע התגבשות מלח על הסרט. הערה: לעיתים קשה לתאם שלב זה. שחרר את החיישן ממש מעל פתרון KBr לקבלת התוצאות הטובות ביותר.</li>
	<li>הרשו לסרט לעבור לפחות 12 שעות. הערה: כדי להקל על ביצוע הניסוי, הכינו את שלב 4 בערב והרשו לסרט לצאת ללילה.</li>
</ol>4. מדידת הסרט באוויר ובמים
<ol><li>העבר את החיישן לגביע ממולא במים מזוקקים כדי להסיר את העודף KBr מהסרט ומהצד האחורי של החיישן. השאר את החיישן בפתרון עבור 30-60 דקות.</li>
	<li>קח מדידה של הסרט באוויר. . התייחסות לחיישן החשוף באוויר הרשו לנתוני הסרט להיות בשפה מעורפלת.</li>
	<li>הכנס סידן גופרתי מיובש לתוך גביע 100 mL למדוד את עובי הסרט יבש לחלוטין. להסיר סידן גופרתי מן הגביע ולשטוף את הגביע עם מים מזוקקים.</li>
	<li>ממלאים את הגביע 100 mL עם 30 מ ל של מים מזוקקים. הכנס מהומה כדי לוודא שהמים מסתובבים סביב הסרט. מדדו את הסרט במים כ-30-45 דקות או עד שנתוני הסרט מסובטים. . התייחסות לחיישן החשוף במים</li>
	<li>הכינו פתרון 15 מ"ל של 3 M KBr במים מזוקקים. למדוד 5.35 g של KBr לתוך גליל הדרגתי ולמלא ל 15 מ ל עם מים מזוקקים. . מערבולת עד התפרקה</li>
	<li>הוסיפו את פתרון KBr לגביע עם מים מזוקקים ב0.1 מ'. טבלה 1 מתווה את המרווחים 0.1 M ב-mL של 3 M kbr פתרון. התמודד עם הסרט הרחק מהמקום בו הפתרון KBr מתווסף למים כך שהסרט לא מתמוסס. ודא שהמערכת הפכה להיות מעורפלת לפני הוספת תוספת נוספת של פתרון KBr.</li>
	<li>לאחר כל הנתונים נרכשו, להסיר את הסרט מן המחזיק ומקום בגביע של מים מזוקקים. אפשר למלח לעזוב את הסרט (30-60 דקות) ולייבש את הסרט באוויר.</li>
	<li>כדי לנקות את הסרט מתוך חיישן, להוסיף KBr לגביע ומערבולת בעדינות את הפתרון. אפשר לשבת 5-10 דקות. חזור על תהליך זה 2-3 פעמים, ולאחר מכן לשטוף את החיישן עם מים מזוקקים. הערה: ניתן לנקות את החיישן ולעשות בו שימוש חוזר אם התגובה מהחיישן עדיין טובה. ניתן לבדוק זאת על-ידי החיישן בעל קריאות רוחב פס מוחלטות קטנות עבור ההרמוניה של הריבית (&lt; 100 Hz).</li>
</ol>5. ניתוח נתונים
<ol><li>פתח את ניתוח נתונים QCM-D MATLAB GUI שנוצרו על ידי Sadman (<a href="https://github.com/sadmankazi/QCM-D-Analysis-GUI" target="_blank">https://github.com/sadmankazi/QCM-D-Analysis-GUI</a>)27. פתח את הסרט בקובץ נתוני האוויר על ידי בחירת "טען QCM." הערה: קבוצת Shull פיתחה ממשק פיתון דומה לאיסוף נתונים וניתוח QCM (<a href="https://github.com/shullgroup/rheoQCM" target="_blank">https://github.com/shullgroup/rheoQCM</a>). חלק מקוד הניתוח מסופק במידע המשלים הן לניתוח הנתונים והן ליצירת האיורים בנייר זה.</li>
	<li>בחר את החישוב הרצוי (בין 3, 5, 3 או 3, 5, 5), גמא, וסרט בסמלים באוויר . לחץ על התוויה QCM.</li>
	<li>לקבוע את עובי הסרט היבש באמצעות נקודת הנתונים השווה ביותר (בדרך כלל נקודת הנתונים האחרונה) מהניסוי. הקלט ערך זה.</li>
	<li>פתח את הסרט בקובץ נתוני המים. בחר את אותם הפרמטרים כמו בשלב 5.2, למעט הסרט במים במקום הסרט באוויר.</li>
	<li>אחרי כל צעד השיווציה של הניסוי נפיחות, לקבוע את עובי הסרט, מורכבות הטיה מודול, ואת זווית הפאזה אלסטי השלב. הקלט ערכים אלה יחד עם חוזק יונית (החל מ-0-1 M בהפרשים של 0.1 M).</li>
	<li>קבע את אחוז הנפיחות כמו <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/60584/60584eq3.jpg">3 כאשר dp הוא הסרט עובי מהפתרון ו- dpיבש הוא עובי הסרט יבש.</li>
</ol>

<ol><li>Marx, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quartz+crystal+microbalance%3A+A+useful+tool+for+studying+thin+polymer+films+and+complex+biomolecular+systems+at+the+solution+-+Surface+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Quartz crystal microbalance: A useful tool for studying thin polymer films and complex biomolecular systems at the solution - Surface interface.</a> Biomacromolecules. 4 (5), 1099-1120 (2003).</li>
<li>Kleber, C., Hilfrich, U., Schreiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+QCM+and+TM-AFM+investigations+of+the+early+stages+of+degradation+of+silver+and+copper+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Surface+Science%22%5BJournal%5D)">In situ QCM and TM-AFM investigations of the early stages of degradation of silver and copper surfaces.</a> Applied Surface Science. 253 (7), 3712-3721 (2007).</li>
<li>Yeh, C. J., Hu, M., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+Inhibition+of+Radical+Polymerizations+Investigated+with+the+Rheometric+Quartz+Crystal+Microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Oxygen Inhibition of Radical Polymerizations Investigated with the Rheometric Quartz Crystal Microbalance.</a> Macromolecules. 51 (15), 5511-5518 (2018).</li>
<li>Sturdy, L. F., Yee, A., Casadio, F., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+characterization+of+alkyd+cure+kinetics+with+the+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Quantitative characterization of alkyd cure kinetics with the quartz crystal microbalance.</a> Polymer. 103, 387-396 (2016).</li>
<li>Delgado, D. E., Sturdy, L. F., Burkhart, C. W., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+quartz+crystal+rheometry+in+the+megahertz+frequency+regime%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Polymer+Science%2C+Part+B%3A+Polymer+Physics%22%5BJournal%5D)">Validation of quartz crystal rheometry in the megahertz frequency regime.</a> Journal of Polymer Science, Part B: Polymer Physics. , 1-9 (2019).</li>
<li>Bilchak, C. R., Huang, Y., Benicewicz, B. C., Durning, C. J., Kumar, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Frequency+Mechanical+Behavior+of+Pure+Polymer-Grafted+Nanoparticle+Constructs%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">High-Frequency Mechanical Behavior of Pure Polymer-Grafted Nanoparticle Constructs.</a> ACS Macro Letters. 8 (3), 294-298 (2019).</li>
<li>Hook, F., Rodahl, M., Brzezinski, P., Kasemo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+dissipation+kinetics+for+protein+and+antibody-antigen+adsorption+under+shear+oscillation+on+a+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Energy dissipation kinetics for protein and antibody-antigen adsorption under shear oscillation on a quartz crystal microbalance.</a> Langmuir. 14, 729-734 (1998).</li>
<li>Liss, M., Petersen, B., Wolf, H., Prohaska, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+aptamer-based+quartz+crystal+protein+biosensor%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">An aptamer-based quartz crystal protein biosensor.</a> Analytical Chemistry. 74 (17), 4488-4495 (2002).</li>
<li>Felgueiras, H. P., Murthy, N. S., Sommerfeld, S. D., Brás, M. M., Migonney, V., Kohn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competitive+Adsorption+of+Plasma+Proteins+Using+a+Quartz+Crystal+Microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Materials+and+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Competitive Adsorption of Plasma Proteins Using a Quartz Crystal Microbalance.</a> ACS Applied Materials and Interfaces. 8 (21), 13207-13217 (2016).</li>
<li>Keller, C. A., Kasemo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+specific+kinetics+of+lipid+vesicle+adsorption+measured+with+a+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Surface specific kinetics of lipid vesicle adsorption measured with a quartz crystal microbalance.</a> Biophysical Journal. 75, 1397-1402 (1998).</li>
<li>Olsson, A. L. J., Quevedo, I. R., He, D., Basnet, M., Tufenkji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+quartz+crystal+microbalance+with+dissipation+monitoring+to+evaluate+the+size+of+nanoparticles+deposited+on+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Using the quartz crystal microbalance with dissipation monitoring to evaluate the size of nanoparticles deposited on surfaces.</a> ACS Nano. 7 (9), 7833-7843 (2013).</li>
<li>Xu, X., Zhang, C., Zhou, Y., Cheng, Q. L. J., Yao, K., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quartz+crystal+microbalance+study+of+protein+adsorption+on+chitosan%2C+chitosan%2Fpoly%28vinyl+pyrrolidone%29+blends+and+chitosan-graft-poly%28vinyl+pyrrolidone%29+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bioactive+and+Compatible+Polymers%22%5BJournal%5D)">Quartz crystal microbalance study of protein adsorption on chitosan, chitosan/poly(vinyl pyrrolidone) blends and chitosan-graft-poly(vinyl pyrrolidone) surfaces.</a> Journal of Bioactive and Compatible Polymers. 22, 195-206 (2007).</li>
<li>Weber, N., Pesnell, A., Bolikal, D., Zeltinger, J., Kohn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+properties+of+fibrinogen+adsorbed+to+the+surface+of+biomaterials+used+in+blood-contacting+medical+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic properties of fibrinogen adsorbed to the surface of biomaterials used in blood-contacting medical devices.</a> Langmuir. 23, 3298-3304 (2007).</li>
<li>Johannsmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic%2C+mechanical%2C+and+dielectric+measurements+on+complex+samples+with+the+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Chemistry+Chemical+Physics%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic, mechanical, and dielectric measurements on complex samples with the quartz crystal microbalance.</a> Physical Chemistry Chemical Physics. 10 (31), 4516-4534 (2008).</li>
<li>Denolf, G. C., Sturdy, L. F., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+rheological+characterization+of+homogeneous+polymer+films+with+the+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">High-frequency rheological characterization of homogeneous polymer films with the quartz crystal microbalance.</a> Langmuir. 30 (32), 9731-9740 (2014).</li>
<li>Martin, E. J., Mathew, M. T., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+properties+of+electrochemically+deposited+protein%2Fmetal+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic properties of electrochemically deposited protein/metal complexes.</a> Langmuir. 31 (13), 4008-4017 (2015).</li>
<li>Sturdy, L., Casadio, F., Kokkori, M., Muir, K., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quartz+crystal+rheometry%3A+A+quantitative+technique+for+studying+curing+and+aging+in+artists%27+paints%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer+Degradation+and+Stability%22%5BJournal%5D)">Quartz crystal rheometry: A quantitative technique for studying curing and aging in artists' paints.</a> Polymer Degradation and Stability. 107, 348-355 (2014).</li>
<li>Sadman, K., Wiener, C. G., Weiss, R. A., White, C. C., Shull, K. R., Vogt, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Rheometry+of+Thin+Soft+Materials+Using+the+Quartz+Crystal+Microbalance+with+Dissipation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Quantitative Rheometry of Thin Soft Materials Using the Quartz Crystal Microbalance with Dissipation.</a> Analytical Chemistry. 90 (6), 4079-4088 (2018).</li>
<li>Wasilewski, T., Szulczyński, B., Kamysz, W., Gębicki, J., Namieśnik, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+three+peptide+immobilization+techniques+on+a+qcm+surface+related+to+acetaldehyde+responses+in+the+gas+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">Evaluation of three peptide immobilization techniques on a qcm surface related to acetaldehyde responses in the gas phase.</a> Sensors (Switzerland). 18 (11), 1-15 (2018).</li>
<li>Lvov, Y., Ariga, K., Kunitake, T., Ichinose, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+Multicomponent+Protein+Films+by+Means+of+Electrostatic+Layer-by-Layer+Adsorption%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Assembly of Multicomponent Protein Films by Means of Electrostatic Layer-by-Layer Adsorption.</a> Journal of the American Chemical Society. 117 (22), 6117-6123 (1995).</li>
<li>Sauerbrey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Verwendung+von+Schwingquarzen+zur+W%C3%A4gung+d%C3%BCnner+Schichten+und+zur+Mikrow%C3%A4gung%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Physik%22%5BJournal%5D)">Verwendung von Schwingquarzen zur Wägung dünner Schichten und zur Mikrowägung.</a> Zeitschrift für Physik. 155 (2), 206-222 (1959).</li>
<li>Sadman, K., Wang, Q., Chen, Y., Keshavarz, B., Jiang, Z., Shull, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+Hydrophobicity+on+Polyelectrolyte+Complexation%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Influence of Hydrophobicity on Polyelectrolyte Complexation.</a> Macromolecules. 50 (23), 9417-9426 (2017).</li>
<li>Sievers, P., Moß, C., Schröder, U., Johannsmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+torsional+resonators+to+monitor+electroactive+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Use of torsional resonators to monitor electroactive biofilms.</a> Biosensors and Bioelectronics. 110, 225-232 (2018).</li>
<li>Ringberg, J. Q-Sense Explorer Operator Manual. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRingberg%2C+J+%22Biolin+Scientific%22">Biolin Scientific</a>. , Stockholm, Sweden. (2017).</li>
<li>Ringberg, J. Q-Sense User Guide: Instrument care and sensor pre-cleaning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRingberg%2C+J+%22Biolin+Scientific%22">Biolin Scientific</a>. , Stockholm, Sweden. (2015).</li>
<li>Kern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Evolution+of+Silicon+Wafer+Cleaning+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+The+Electrochemical+Society%22%5BJournal%5D)">The Evolution of Silicon Wafer Cleaning Technology.</a> Journal of The Electrochemical Society. 137 (6), 1887(1990).</li>
<li>Sadman, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSadman%2C+K+%22sadmankazi%2FQCM-D-Analysis-GUI%3A+QCMD-Analyze%22">sadmankazi/QCM-D-Analysis-GUI: QCMD-Analyze</a>. , (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

תוצאות הקולגן מSauerbrey ומשטרי הגמיש. על ידי התוויית התדר משתנה מנורמל למספר ההרמוני המתאים, אנו מתבוננים כי המגבלה Sauerbrey מחזיקה נכון עבור כ 2 ה הראשון של המדידה. עם זאת, עם המסה גוברת הקפדה על החיישן, עם זאת, תדירות מנורמלת עבור הרמוני השלישי והחמישי להתחיל לסטות אחד מהשני (t &gt; 2 h), המציין את היכולת לקבוע את המאפיינים האלסטיים של הסרט נספחת.
השוואה ישירה בין תוצאות הדוגמנות הגמישה של התוכנה ומידול חוק הכוח מקבוצת Shull מציינים הבדל ניכר במאפייני החומרים המחושבים. במהלך המדיד...

מאזן המיקרואיזון הגבישי של גביש הקוורץ (QCM) ממנף את האפקט הפיזואלקטרי של גביש קוורץ כדי לנטר את תדר התהודה שלו, התלוי בנפח המסה שעל פני השטח. הטכניקה משווה את התדר התהודה ואת רוחב הפס של חיישן AT גזור גביש קוורץ (בדרך כלל בטווח של 5 MHz)1 באוויר או נוזל לתדר רוחב פס של החיישן לאחר התצהיר של סרט. ישנם מספר יתרונות עבור שימוש QCM לחקר מאפייני הסרט דק וממשקים, כולל רגישות גבוהה למסה ופוטנציאלי שינויים אלסטי המאפיין (בהתאם אחידות לדוגמה עובי), את היכולת לבצע מחקרים באתרו2, ואת היכולת לחקור ציר זמן הרבה יותר קצר מאשר להטות מסורתי הטיה או ניתוח מכני דינאמי (DMA) בדיקת ציר זמן קצר לאחר מאפשרת התבוננות באופן שבו התגובה בציר הזמן הזה משתנה במהלך קצר מאוד (אלפיות)3 וארוך (שנים) משכי זמן4. יכולת זו מועילה לחקר מגוון תהליכים קינטית והיא גם הרחבה שימושית של טכניקות מסורתיות מסוג rheometric5,6.
הרגישות הגבוהה של QCM הובילה גם את השימוש הכבד שלה ביישומים ביולוגיים לחקור את האינטראקציות הבסיסיות של biomolecules קטן מאוד. ניתן להשתמש במשטח חיישנים בלתי מצופה או פונקציונליזציה כדי לחקור ספיחה של חלבונים; עוד יותר, ביוחישה באמצעות אירועי קשירה מורכבים בין אנזימים, נוגדנים ואפתמים ניתן לבחון על פי שינויים במסה7,8,9. למשל, הטכניקה שימש כדי להבין את הטרנספורמציה של ושלפוחיות לשומנים מישורי bilayer כתהליך דו-שלבי של ספיחה של נוזלים המכילים שלפוחיות למבנה נוקשה על ידי התבוננות בשינויים הקשורים בתדירות ובגמישות אלסטיות10. בשנים האחרונות, QCM הציע בנוסף פלטפורמה חזקה כדי לפקח על אספקת סמים על ידי שלפוחיות או חלקיקים11. בהצטלבות של הנדסת חומרים וביולוגיה מולקולרית ותאית, אנו יכולים להשתמש ב-QCM כדי להבהיר אינטראקציות מפתח בין חומרים ורכיבים ביו-אקטיביים כגון חלבונים, חומצות גרעין, ליפוזומים ותאים. לדוגמה, ספיחה חלבון כדי ביומטריה במורד התגובות הסלולר כגון דלקת משמש לעתים קרובות כאינדיקטור חיובי של biocompatibility, ואילו במקרים אחרים מצורף חלבון לציפוי ממשק עם דם יכול לגרום קרישה מסוכן בכלי12,13. לפיכך, ניתן להשתמש ב-QCM ככלי לבחירת מועמדים אופטימליים לצרכים שונים.
שתי גישות משותפות לביצוע ניסויים ב-QCM אוספות נתונים מקובלים מהניסוי: הגישה הראשונה מתעדת את משמרת התדר ואת רוחב הפס החצי (Γ) של הפסגה החשמלית. הגישה השנייה, QCM עם פליטת (QCM-D), מתעדת את משמרת התדר ואת פקטור הפיזור, אשר פרופורציונלי ישירות Γ דרך המשוואה 1,14
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/60584/60584eq1.jpg">1
כאשר D הוא גורם הפיזור ו מואייסיב הוא התדר. הן D ו Γ קשורים אפקט השיכוך הסרט יש על החיישן, אשר נותן אינדיקציה לנוקשות של הסרט. הכתב התחתי n מציין את התדר או הרמוני, שהם תדרי התהודה המוזרים של חיישן הקוורץ (n = 1, 3, 5, 7...). לדיון נוסף במודלים המשתמשים בהרמוניה מרובה, ניתן למצוא את המסה והתכונות האלסטיים של הסרט בסקירה של יוחנן בן14 ומסמכים קודמים מקבוצת שובל15,16,17,18.
שיקול מפתח אחד להכנת דגימות QCM הוא כיצד להחיל את הסרט הדק על משטח החיישן. כמה שיטות נפוצות כוללות ציפוי ספין, ציפוי מטבל, ציפוי ירידה, או ספיחה של הסרט על פני החיישן במהלך הניסוי19,20. ישנם ארבעה אזורים לדגימות QCM: מגבלת Sauerbrey, משטר הגמיש, המשטר הצובר והמשטר העילי. עבור סרטים דקים מספיק, מגבלת Sauerbrey חל, כאשר התדירות משמרת (Δמואייסיב) מספק את הצפיפות המסה של פני השטח של הסרט. בתוך מגבלת Sauerbrey, תדירות משמרת המאזניים ליניארי עם הרמוני התהודה, n, ושינויים מקדם השיכוך (D או Γ) הם בדרך כלל קטנים. במשטר זה לא ניתן למצוא מידע מספיק כדי לקבוע באופן ייחודי את המאפיינים הרטילוגיים של השכבה מבלי לקבל הנחות נוספות. נתונים במשטר זה משמשים כדי לחשב את הצפיפות המסה של פני השטח (או עובי אם הצפיפות ידועה הפריורי) של הסרט. במשטר הצובר, שבו המדיום במגע עם הגביש הוא עבה מספיק, גל האוונזאת מפיץ את הגל לתוך המדיום לפני שהוא מוכנס לגמרי. כאן, לא ניתן להשיג מידע המוני באמצעות Δמואייסיב. עם זאת, באזור זה, מאפיינים גמישים הגמיש נקבעים באופן אמין באמצעות שילוב של Δמואייסיב ו ΔΓ 15,18. במשטר בצובר, אם המדיום הוא נוקשה מדי, הסרט להלח את התהודה של החיישן, מונע את האוסף של כל הנתונים האמינים מ QCM. המשטר הגמיש והנידק הוא המשטר המתווך שבו הסרט הוא רזה מספיק כדי לקבל את גל ההטיה במלואו דרך הסרט, כמו גם ערכים אמינים עבור הגורם החשמלי. מקדם השיכוך ו Δמואייסיב ניתן להשתמש כדי לקבוע את המאפיינים אלסטי וגמיש של הסרט, כמו גם המסה שלה. כאן, מאפיינים גמישים וגמיש מקבלים על ידי תוצר של הצפיפות ואת הגודל של מודול ההטיה המורכבת | G* | p ואת השלב זווית שניתנו על ידי Φ = arctan (g " / g"). כאשר הסרטים מוכנים במגבלת Sauerbrey, ניתן לחשב את האזור מסה לכל יחידה בהתבסס על משוואת Sauerbrey המוצגת מתחת ל-21,
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/60584/60584eq2.jpg">2
כאשר Δמואייסיבn הוא השינוי בתדר התהודה, n הוא הטון של עניין, מואייסיב1 הוא תדירות התהודה של החיישן, Δm / A הוא המסה לאזור של הסרט, ו- Zq הוא עכבה אקוסטית של קוורץ, אשר בשנת לחתוך קוורץ הוא Zq = 8.84 x 106ק ג / m2s. המשטר הגמיש והגמישה מתאים ביותר לחקר הסרטים הפולימריים, ומגבלת הכמויות היא שימושית ללימוד פולימר בנפח22 או פתרונות חלבון16. המשטרים השונים תלויים בתכונות של חומר העניין, עם העובי האופטימלי באופן מיטבי, ובדרך כלל הולך וגובר עם קשיות הסרט. איור 1 מתאר את ארבעת האזורים ביחס לצפיפות אריאל של הסרט, מודול הטיה מורכבים, וזווית הפאזה, שם הנחנו מערכת יחסים ספציפית בין זווית השלב ואת קשיות הסרט כי הוכח להיות רלוונטי לחומרים מסוג זה. סרטים רבים של התעניינות מעשית עבים מדי ללימוד התכונות האלסטיים של הגמיש עם QCM, כגון ביואמים מסוימים, שבהם העוביים מסודרים על פי הסדר של עשרות עד מאות מיקרון23. סרטים עבים כאלה הם בדרך כלל לא מתאימים ללמוד באמצעות QCM, אבל ניתן למדוד באמצעות מהדהד בתדר נמוך יותר (כגון המאיירים)23, המאפשר גל להטות להפיץ עוד לתוך הסרט.
כדי לקבוע איזה משטר רלוונטי למדגם qcm נתון, חשוב להבין את הפרמטר d /λn , שהוא היחס של עובי הסרט (ד) כדי להטות את אורך הגל של תנודה מכנית של חיישן גביש קוורץ (λn)15,16,18. המשטר האידיאלי האלסטי גמיש הוא d /λn = 0.05-0.218, שבו ערכים מתחת 0.05 נמצאים בתוך המגבלה Sauerbrey וערכים לעיל 0.2 גישה למשטר בצובר. תיאור קפדני יותר של d /λn מסופק במקום אחר15,18, אבל זה פרמטר כמותי להתוות את המגבלה Sauerbrey ואת המגבלה אלסטי הגמיש. תוכניות הניתוח המשמשות להלן מספקות פרמטר זה ישירות.
יש כמה מגבלות נוספות לניתוח סרטים דקים עם QCM. Sauerbrey והחישובים אלסטי וגמיש להניח את הסרט הוא הומוגנית הן ברחבי עובי הסרט ולרוחב על פני השטח אלקטרודה של QCM. בעוד הנחה זו עושה את זה מאתגר ללמוד סרטים שיש להם חללים או מילוי נוכח, היו כמה חקירות QCM לסרטים המורכב של חלקיקים מושתל6. אם ההטרוסקסואלים קטנים בהשוואה לעובי הסרט הכולל, ניתן להשיג באופן אמין מאפיינים אלסטיים של המערכת המורכבת. למערכות הטרוגניות נוספות, יש לצפות בערכים המתקבלים מניתוח גמיש ובזהירות רבה. באופן אידיאלי, התוצאות שהתקבלו ממערכות עם טרוגניות לא ידוע צריך להיות מאומת נגד מערכות אשר ידועים להיות הומוגנית. זוהי הגישה שאנו לקחנו במערכת הדוגמה המתוארת במאמר זה.
נקודה חשובה שאנו ממחישים במאמר זה היא התכתובת המדויקת בין מדידות QCM שנעשו בתחום התדרים (כאשר Γ מדווח) והניסויים בתחום הזמן (כאשר D מדווחים). תוצאות משני ניסויים QCM שונים, תחום אחד בזמן ותחום תדר אחד, מתוארים, כל אחד מעורב שונה אך מושגית מערכת הקשורים מודל. המערכת הראשונה היא דוגמה פשוטה של קולגן המצורף לחיישן כדי להמחיש את הקינטיקה כריכה הנציגה ואת השפה של ספיחה לאורך זמן במהלך תחום הזמן (qcm-D) מדידה. קולגן הוא החלבון הנפוץ ביותר בגוף, ידוע צדדיות שלה של התנהגויות קשירה מורפולוגיה. פתרון הקולגן המשמש כאן אינו דורש פונקציונליות נוספת של משטח הזהב של החיישן כדי לגרום ספיחה9. המערכת הניסיונית השנייה היא קומפלקס פוליאלקטרוליט (מורכב מקלקר) המורכב מפוליסטירן מוקצף (PSS) ומפולי (דיאלאילדימונומוניום) (PDADMA) שהוכנו באותה צורה כמו Sadman ואח '22. חומרים אלה להתנפח ולהיות רך מלח (KBr במקרה זה) פתרונות, המציעה פלטפורמה פשוטה ללימוד מכניקה פולימר באמצעות גישה תחום תדר (QCM-Z). עבור כל פרוטוקול, תהליך ההכנה, הנקיטת והניתוח של מדידה מוצג באיור 2. הסכמטי מראה כי ההבדל העיקרי בין הגישות QCM-Z ו-QCM-D הוא בשלב איסוף הנתונים והמכשור המשמש בניסוי. כל טכניקות ההכנה לדוגמה המוזכרות תואמות לשתי הגישות, וכל גישה יכולה לנתח דגימות בשלושת האזורים המתוארים באיור 1.
הנתונים שלנו מדגימים כי הכנת דגימות, בין אם על ידי ציפוי חיישן לפני או במהלך מדידה, מכתיב את היכולת לחלץ את התכונות האלסטי הגמיש של מערכת. על ידי עיצוב השלבים המוקדמים של הניסוי כראוי, אנו יכולים לקבוע איזה מידע אנחנו יכולים לאסוף במדויק במהלך שלב הניתוח.

<table><tbody><tr><td>חומצה אצטית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>תמיסת אמוניום הידרוקסיד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221228</td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>בדיקה מימית QCM</td><td>AWSensors</td><td>CLS 00050 A</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr><tr><td>קולגן I חלבון חולדה, זנב</td><td>תרמו פישר A1048301 מדעי</td><td></td><td>לספיגת</td></tr> <tr><td>קולגןמים מזוקקים</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>EM3234</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים; בדרך כלל קל לרכוש במעבדות מחקר, אך יש מספר קטלוגי למקרה שהוא אינו נגיש</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>793175-1GA-PB</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr><tr><td>Gibco פוספט חוצץ מלח</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>20012-027</td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>Hellmanex III</td><td>Z805939 סיגמא-אולדריץ'</td><td></td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>תמיסת מי חמצן</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>216763</td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>קימברלי-קלארק מקצועי Kimtech Science Kimwipes מגבי משימות עדינים, 1-רובד</td><td>פישר מדעי</td><td>06-666A</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr><tr><td>NP2K VNA</td><td>Makarov מכשירים</td><td></td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr><tr><td>פולי (דיאלדימתילאמוניום כלוריד), MW 200,000</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>409022</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים; להליך סינתזה מלא ראה Sadman et al.</td></tr><tr><td>פולי (סטירן-סולפונט) מלח נתרן 30% משקל במים</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>561967-500G</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים; להליך סינתזה מלא ראה Sadman et al.</td></tr><tr><td>אשלגן ברומיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>793604-1KG</td><td>לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr><tr><td>QSense QCM מערכת סייר</td><td>Biolin Scientific</td><td></td><td>לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>נתרן אצטט,</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S2889</td><td>נטול מים לספיגת קולגן</td></tr><tr><td>ציפוי ספין, דגם WS-650MZ-23NPP</td><td>טכנולוגיות</td><td></td><td>לורל לנפיחות פוליאלקטרוליטים</td></tr></tbody></table>

הכנה לדוגמא במיקרומאזן קריסטל קוורץ מדידות של חלבון ומכניקה פולימר

Sample Preparation in Quartz Crystal Microbalance Measurements of Protein Adsorption and Polymer Mechanics

במחקר זה, אנו מציגים דוגמאות שונות של כמה דק הכנת הסרט לניסויים במיקרואיזון קריסטל קוורץ המודיעה על המידול המתאים של הנתונים וקובעת אילו מאפיינים של הסרט ניתן לכמת. המיקרו-מאזן גביש הקוורץ מציע פלטפורמה רגישה במיוחד למדידת שינויים עדינים בתכונות מסה ו/או מכניות של סרט שהוחל על-ידי התבוננות בשינויים בתהודה מכנית של גביש קוורץ בתדר גבוה. היתרונות של גישה זו כוללים את הרב-תכליתיות הניסיונית שלה, יכולת ללמוד שינויים בנכסים במגוון רחב של אורכי זמן ניסיוניים ושימוש במידות מדגם קטנות. אנו מדגימים כי, בהתבסס על עובי ולהטות את מודול השכבה שהופקדו על החיישן, אנו יכולים להשיג מידע שונה מן החומר. כאן, קונספט זה מנוצל במיוחד כדי להציג פרמטרים ניסיוניים וכתוצאה מכך חישובי המסה והגמיש של קולגן נספחת על מכלולי זהב ופוליאלקטרוליט במהלך נפיחות כפונקציה של ריכוז מלח.

השינויים בתדר עם הזמן במהלך התצוגה ספיחה חלבון מאפיין עקומת הרמה המוצגת באיור 3א-ב. שטיפת המאגר הראשונית של 1x PBS על פני שטח החיישן החשוף משרה רק שינויים זניחים בתדר, המציע קו בסיס קבוע כדי לשמש כהפניה לנקודות נתונים עתידיים. המבוא של פתרון קולגן גורם ספיחה חלבון להתחיל, נצפתה כירידה קבועה בתדירות לאורך זמן, עד הצפיפות של מישורים קולגן דבק בסיס יציב (איור 3א). התדר המדויק וערכי המסה יהיו תלויים מאוד באנרגיית הטוהר והמשטח של החי...

המיקרו-איזון בגביש הקוורץ יכול לספק מגוון מדויק וגמיש לסרטים בטווח מיקרון או סאב-מיקרון, הרלוונטי לחקירות בעלי חישה והסביבה, ציפויים ומדעי הפולימר. עובי המדגם משפיע על המידע שניתן להשיג מהחומר במגע עם החיישן.

In this study, we present various examples of how thin film preparation for quartz crystal microbalance experiments informs the appropriate modeling of ...

מיקרו-איזון גביש הקוורץ שימושי לחשת ריכוזים קטנים של תרכובת אחרת ו ניתן ליישם אותו בשאלות הנוגעות למכניקה של חומר רך ומערכות ביו-חומריות. היתרון העיקרי הוא שמיקרו-איזון גביש הקוורץ מסוגל להשיג מידע מדויק ביותר עבור גדלי מדגם קטנים. בעת חילוץ מידע רכוש מכני, יש צורך לעבוד עם סרטים בעובי המתאים.החוקרים חייבים להיות זהירים ליישם את המודל הנכון לסרט במהלך הניתוח. הטכניקה מתאימה היטב לחקר מגוון רחב של מערכות חומרים ולהבנת האופן שבו תכונות מכניות של חומרים פולימריים מגיבות לסביבה. לאחר הפעלת כל הציוד הדרוש, הסר את מודול הזרימה מפלטפורמת התא ופתח את רצף האגודלים הגדול כדי לפתוח את המודול.יבש את O-ring על מודול הזרימה עם זרם של גז חנקן ולבדוק כי O-ring שוכב שטוח. הר את החיישן על O-ring על ידי הצבת החיישן עם צד פני השטח הפעיל למטה ואלקטרודה בצורת עוגן מכוונת לכיוון הסמן במודול הזרימה. מצא את תדרי תהודה הראשוניים של החיישן.מניחים את צינורות משאבת 1X. התחל את זרימת המשאבה החיצונית במהירות של 25 מיקרוליטר לדקה ובדוק את הצינורות כדי לוודא שהנוזל זורם דרך הצינור. אפשר לזרימת הנוזלים לצייד כראוי במשך 15 דקות לפחות.בתוכנה, לחץ על התחל מדידה כדי להתחיל את המדידה ולהתחיל ברכישת נתונים. נטר את ערכי התדרים והפיזור למשך חמש דקות לפחות כדי להבטיח קו בסיס יציב. עצרו את המשאבה והזיזו את צינורות המגירה לתסוע חיץ אצטט הקולגן וחדשו את זרימת הנוזלים.שים לב לשעה של אירוע זה לניתוח מאוחר יותר. אפשר לערכי התדר והפיזור החדשים לצייד במשך שמונה עד 12 שעות לערך יציב, ולאחר מכן הפסק את המשאבה, העבר את צינורות ההשבה בחזרה לפתרון PBS 1X וחדש את זרימת הנוזלים. שים לב לשעה של אירוע זה לניתוח מאוחר יותר.שוב, אפשר לערכי התדר וההתפוגגות החדשים לצייד במשך 30 דקות לערך יציב. סיים את רכישת הנתונים של המדידה ולאחר מכן שמור את הנתונים. ראשית, מקם חיישן גביש קוורץ חשוף במחזיק מדגם המחובר למנתח הרשת והמחשב הווקטוריים.הפעל את המנתח כדי להחיל מתח נדנוד על החיישן ולאסוף ספקטרום מוליכות התייחסות עבור החיישן באוויר, ולאחר מכן להטביע את מחזיק המדגם בסקילר 100 מיליליטר ללא שפתיים מלא מים מזוקקים ולאסוף ספקטרום מוליכות התייחסות עבור החיישן החשוף במים. הכנס רקיק סיליקון קטן לתוך פתרון אשלגן ברומיד טוחן 0.5 בזווית כדי ליצור שקופית עבור חיישן קוורץ במהלך שלב החישול כדי למנוע מהסרט לרדת מהחיישן. היכונו להוסיף את ה-PEC לפני השטח של החיישן.אם קומפלקס PEC הוא בשני שלבים, בזהירות לצייר כ 0.5 מיליליטר של השלב עשיר פולימר לתוך פיפטה. שמירה על לחץ על הנורה pipette לא לאפשר את השלב פולימר עניים להיכנס פיפטה, לצייר את פיפטה מתוך הפתרון. לנגב את החלק החיצוני של פיפטה באמצעות לנגב כימיה.הוסף מספיק פתרון טיפה חכם על פני השטח של חיישן קוורץ כדי לכסות לחלוטין את פני השטח. ודא שאין בועות גלויות בתסרון על משטח החיישן. ספין מעיל מדגם PEC ומיד להטביע את החיישן בתסכום ברומיד אשלגן טוחן 0.5 כדי למנוע התגבשות מלח על הסרט.אפשר לסרט להתוות לפחות 12 שעות. מעבירים את החיישן לסק מלא במים מזוקקים כדי להסיר את האשלגן ברומיד העודף מהסרט ואת החלק האחורי של החיישן. השאירו את החיישן בתסרון למשך 30 עד 60 דקות.קח מדידה של הסרט להחיל על פני השטח של החיישן באוויר התייחס החיישן החשוף באוויר. אפשר לנתונים של הסרט לצייד. לאחר מכן, הכנס סידן גופרתי מיובש לתוך מקור שפתיים 100 מיליליטר ולמדוד את עובי הסרט יבש לחלוטין.מוציאים סידן גופרתי מהסק ושטיפת הסלק במים מזוקקים. מלאו את ה-100 מיליליטר במזנון ללא שפתיים ב-30 מיליליטר של מים מזוקקים. הכנס בר ערבוב כדי להבטיח שהמים מסתובבים סביב הסרט.בהתייחס החיישן החשוף במים, למדוד את הסרט במים במשך כ 30 עד 45 דקות או עד נתוני הסרט הם שיווי משקל. הכן פתרון 15 מיליליטר של שלושה אשלגן ברומיד טוחן על ידי מדידת 5.35 גרם של אשלגן ברומיד לתוך גליל מדורג ולמלא 15 מיליליטר עם מים מזוקקים. מערבולת עד מומס.להתמודד עם הסרט הרחק מהמקום שבו פתרון אשלגן ברומיד מתווסף למים, כך הסרט לא להתמוסס. מוסיפים את תווי האשלגן ברומיד לבקבוק עם מים מזוקקים במרווחים של 0.1 טוחנות. ודא שהמערכת נמצאת במיקום לפני הוספת תוספת נוספת של פתרון האשלגן ברומיד.לאחר שכל הנתונים נרכשו, הסר את הסרט מהמחזיק והצב בבקבוק מים מזוקקים. אפשרו למלח לעזוב את הסרט למשך 30 עד 60 דקות ולייבש את הסרט. במחקר זה, כניסתה של תותב קולגן גרמה לספיגת החלבון להתחיל אשר נצפתה כירידה מתמדת בתדירות ולהגדיל את התפוגגות לאורך זמן עד הצפיפות של מישור קולגן דבק בקו בסיס יציב.שינויי התדירות מתואמים עם המסה של הסרט וההתפוגגות מתואמת עם פיזור אנרגיה מהסרט. יש צורך במודל תיאורטי כדי להשיג את המאפיינים הוויקואלסטיים באופן כמותי. הניתוח הוויסקולסטי של קולגן באמצעות מודל חוק כוח מראה את המסה האווירית, מודולוס ההטיה המורכב וזווית הפאזה הוויסקואלסטית בהתאמה.10 השעות הראשונות מצביעות על שלב הסחיר העיקרי של הקולגן למשטח החיישן עם התקופה שבין 10 ל -20 שעות המציגה את שלב האקוויליביציה לפני שטיפת החיץ שבוצעה בשעה 20 שעות. הנה העלילה של זווית הפאזה הוויסקואלסטית ומודולוס ההטיה המורכב מעל הטווח הכללי של הדגימות הנמדדות באמצעות QCM. הקו הירוק מציין את קשרי הגומלין ליניאריים בין שני המאפיינים.עלילה זו מראה כיצד PEC יכול להדגים מגוון רחב של תכונות מכניות המבוססות על היחס של פולימר, מים ומלח במערכת. הכנת המדגם משפיעה ישירות על התוצאות מניסוי QCM. הבנת הנתונים שברצונך ללמוד מדגימה מודיעה עד כמה הדגימה צריכה להיות עבה.QCM שימושי מאוד לחוש תהליכים סביבתיים וביולוגיים. זה יכול גם לחקור את ההתנהגות הרולוגית במשטר בתדר גבוה לאפיון צמיגות של חומרים.

sample-preparation-quartz-crystal-microbalance-measurements-protein

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

זהו צעד אחר צעד מדריך המציג את המטרה, תפעול, והתוצאות נציג ספקטרומטר כוח הכבידה הרומן.

הדגמת שימושים של ספקטרומטר הכבידה רומן כוח כדי למתוח מדוד חלבונים סיביים

השיטה של ​​שימוש מצב מוצק nanopores לפקח על הלא ספציפית ספיחה של חלבונים על פני השטח אורגניים מתואר. השיטה משתמשת בעיקרון דופק-התנגדות, ומאפשר ספיחה להיות נחקר בזמן אמת והן ברמת מולקולה בודדת. בגלל תהליך ספיחה של חלבון יחיד רחוק שיווי משקל, אנו מציעים את העסקתם של מערכים מקבילים של nanopores סינתטי, מה שמאפשר לקביעת כמותית של קצב מסדר ראשון נראית לעין תגובה קבועה של חלבון ספיחה, כמו גם את לאנגמיור ספיחה מתמדת.

חלבון ניטור ספיחה עם מצב מוצק nanopores

סרטון זה מדגים טכניקת מיקרו-כבידה מפזרת כדי לחקור את הקישור של חלבונים לדו-שכבות ליפידים. שלפוחיות חד-למלריות קטנות מתווספות כדי לצפות את פני השטח של חיישן הקוורץ של מיקרו-איזון. באמצעות קשירה תלוית יון סידן של חלבון המטרה קושר פוספוליפידים לדו-שכבתי, מנוטרים שינויים בתדירות התנודה של החיישן ובפיזור התנודה כדי לקבוע את אופי הקישור הדו-שכבתי של חלבון-ליפידים.

טכניקת מיקרו-כבידה מפזרת לחקר אינטראקציה דו-שכבתית חלבון-שומנים

סרטון וידאו זה מדגים שיטה לחקר אינטראקציות חלבון-תרופה באמצעות ביו-פנינג מבוסס ביו-סנסור QCM של ספריית הפפטידים-פאגים T7. הביו-פנינג של פאגים המציג פפטיד ספציפי על הביו-חיישן QCM מאפשר בידוד ספציפי של פפטידים בעלי זיקה גבוהה, ולאחר מכן ריצוף חומצות אמינו, המסייע לזהות אתרי אינטראקציה ספציפיים על חלבון המטרה.

קוורץ-קריסטל מיקרו-איזון ביו-פנינג מבוסס ביוסנסור לחקר אינטראקציות חלבון-תרופה

מוצגת המתודולוגיה לביצוע ניסויי מיקרוסקופיה של כוח חיכוך למברשות מגע: שתי מברשות פולימריות המורכבות מ-(א) מצעים ו-(ב) בדיקות קולואידיות מחליקות כדי להראות כי על ידי שימוש בשתי מערכות מברשות בלתי ניתנות לערבוב, החיכוך במגעי הזזה מצטמצם בהשוואה למערכות מברשות הניתנות לערבוב.

מדידות הכנה וחיכוך מיקרוסקופית כוח של immiscible, המתנגדות למברשות פולימר

מוצג פרוטוקול לחיבור מגוון גדול של מולקולות בודדות באופן קוולנטי לקצה AFM. ניתנים נהלים ודוגמאות לקביעת כוח ההדבקה והאנרגיה החופשית של מולקולות אלה על תומכים מוצקים וממשקים ביולוגיים.

חוקר מולקולה בודדת הדבקה על ידי הכוח האטומי ספקטרוסקופיה

כדי לקבל מידע בסיסי על ספיגה ומיחזור של זהב ממערכות מימיות, נחקרה האינטראקציה של ננו-חלקיקי Au(III) ו-Au(0) על חלבוני שכבת S. הספיגה של פולימרים חלבונים נחקרה על ידי ICP-MS וזו של חד-שכבות חלבון על ידי QCM-D. AFM עוקב מאפשר הדמיה של הננו-מבנים.

Au-אינטראקציה של הפולימרים Slp1 וחד שכבתי מ<em&gt; Lysinibacillus sphaericus</em&gt; JG-B53 - QCM-D, ICP-MS וAFM ככלים לbiomolecule-מתכת לימודים

פרוטוקול זה מתאר את הנייח קוולנטיות של חלבונים עם heterobifunctional silane זיווג סוכן תחמוצת סיליקון משטחים המיועדים ספקטרוסקופיה בכוח כוח אטומי מבוסס מיקרוסקופיה מולקולה בודדת אשר הוא כשניסחתי האינטראקציה של RrgA (pilus-1 עצה adhesin של ס pneumoniae) עם fibronectin.

קיבעון קוולנטיות של חלבונים על ספקטרוסקופיה כוח מולקולה בודדת

כאן, אנו מציגים טיפול נסיוני זה יכול להיות מועסק כדי לקבוע את הזיקות מחייב ואת מצב של האינטראקציה של פוספוליפיד מחייב חלבון ללא תווית annexin A2 עם קיבוע הנתמכות על-ידי מוצק bilayers (סאט גלובל) על ידי מדידת בו זמנית ספיגת המוני, המאפיינים viscoelastic של החלבון annexin A2.

Microgravimetry dissipative ללמוד את הדינמיקה איגוד של פוספוליפיד איגוד חלבון Annexin A2 כדי Bilayers השומנים הנתמכות על-ידי מוצק באמצעות מהוד קוורץ

אנו מספקים פרוטוקולים ונתונים מייצגים עבור עיצוב, הרכבה, ואפיון מיקרו מורכבות מורכבים, חלקיקים ליבה פגז שנוצרו על ידי פוליאלקטרוליטים וטעונה הידרופילי מחויב לחסום הסופולימרים.

הרכבה ואפיון של מטלות מורכבות פוליאלקטרוליט

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות לחקר המבנה והדינמיקה של שני חלבוני מודל שיש להם תפקיד חשוב בבריאות האדם. הטכניקה משלבת אפיון ביופיזי עם ספקטרוסקופיה של הד ספין נויטרונים כדי לגשת לדינמיקה בזמן ובקני המידה של האורך הרלוונטיים לתנועות אינטרדומיין של חלבונים.

חקר דינמיקת חלבונים באמצעות ספקטרוסקופיה של הד ספין נויטרונים

חקור מדידות מיקרומאזן קריסטל קוורץ לניתוח תכונות מכניות וויסקואלסטיות של סרטי פולימרים. השיטה מאפשרת חישוף רגיש של ריכוזים קטנים ומגיבים לשינויים סביבתיים בביומטריאלים.

הכנה לדוגמא במיקרומאזן קריסטל קוורץ מדידות של חלבון ומכניקה פולימר

גלה סרטונים נוספים