Name: מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: למדו את שיטת ההזרקה התוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות ליצירת מודל כאב אוסטאוארתריטיס. השיטה מאפשרת הערכת התנהגויות הקשורות לכאב ושינויים היסטופתולוגיים לחקר מנגנוני כאב ופיתוח תרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי הקרן המחוזית למדעי הטבע של ג'ה-ג'יאנג של סין (מענק מספר: LY17H270016), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס': 81774331, 81873049 ו-81673997), ופרויקט המדע והטכנולוגיה של מחוז ג'ג'יאנג לרפואה סינית מסורתית של סין (מענק מס': 2013ZQ007 ו-2016ZZ011).

נהלים המערבים נושאי בעלי חיים אושרו על ידי ועדת הנורמות הרפואיות והאתיקה של האוניברסיטה לרפואה סינית בג'ג'יאנג והם בהתאם לחקיקה הסינית בנושא שימוש וטיפול בחיות מעבדה.
1. הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בברך
<ol><li>לאחר שבוע של התאקלמות, מחלקים באופן אקראי ושווה 40 חולדות ספראג-דאולי זכרים במשקל 180-200 גרם (בני 4−5 שבועות) לארבע קבוצות (n = 10 חולדות/קבוצה). הערה: חולדות בקבוצת הביקורת יוזרקו באופן תוך-מפרקי עם 50 μL של מי מלח, ואילו חולדות בקבוצות הניסוי יטופלו ב-0.5, 1.5 או 3 מ"ג של MIA מומס ב-50 μL של מי מלח, בהתאמה.</li>
	<li>ביום ההזרקה, הכינו טרי את התמיסה של MIA במי מלח סטריליים (0.9% NaCl) בריכוז 15, 30 ו-60 מ"ג/מ"ל ותמיסת פנטוברביטל 10% בתמיסת מלח סטרילית (0.9% NaCl). אזהרה: ל-MIA יש השפעה הרסנית ביותר על הקרום הרירי, דרכי הנשימה העליונות, העין, העור ורקמות אחרות. לכן, מסכה וכפפות מומלץ בעת הכנת פתרון.</li>
	<li>הרדמת חולדות על ידי הזרקה תוך-צפקית של קטמין ב-60 מ"ג/ק"ג וקסילזין ב-5 מ"ג/ק"ג (שניהם מוכנים במי מלח). מהדקים בעדינות את בהונות החולדה בפינצטה כדי לאשר הרדמה.</li>
	<li>הניחו את החולדה כשגבה פונה כלפי מטה. לגלח את הברך ולנגב את האזור המקיף את מפרק הברך באלכוהול.</li>
	<li>שמרו על הברך בזווית של 90° וחשפו את גיד הפטלר הלבן מתחת לפטלה. לחץ על גיד הפטלר עם קצה האצבע כדי למצוא את הרווח מתחת לפטלה.</li>
	<li>בחר את צומת הפער ואת הגיד הפטלרי הלטרלי כאתר ההזרקה. לאחר מכן, הכנס את מחט 26 G אנכית לתוך האתר על 5 מ"מ. אין להרגיש התנגדות כאשר המחט נמצאת בחלל המפרק. הערה: חשוב לשמור את המחט בניצב למקום ההזרקה.</li>
	<li>להזריק 50 μL של תמיסת מלח או MIA לתוך חלל המפרק. שלפו באיטיות את המחט ועטפו חתיכת גזה סביב אתר ההזרקה כדי למזער רפלוקס ודליפה. לאחר התאוששות הרדמה, להסיר את גזה.</li>
	<li>בדוק התנהגות הקשורה לכאב ב 1, 7, 14, 21, 28 ו 35 ימים לאחר זריקות כמתואר בסעיף 2.</li>
</ol>2. הערכות התנהגותיות
<ol><li>סף משיכה מכני (MWT) הערה: ה- MWT נמדד על ידי מבחן פון פריי13 והצופה היה עיוור לזריקות שהחיות קיבלו.<ol><li>מניחים חולדה בכלוב פלסטיק מוגבה (17 ס"מ על 11 ס"מ על 13 ס"מ) עם בסיס רשת תיל תלוי 50 ס"מ מעל שולחן. ודאו שסביבת הבדיקה שקטה ותנו לחולדה 30 דקות להסתגל לסביבה.</li>
		<li>לחצו את מחט פון פריי בניצב על פני השטח הכפיים של כף ידה האחורית של כל חולדה. הגבירו את הלחץ בהדרגה (כ-20 גרם לשנייה) ובאופן ליניארי עד להתרחשות הרמת כפות הרגליים או ליקוק הכפות.</li>
		<li>השתמש בכוח נמוך מהסף הקודם כדי להבטיח שהסף הוא כוח הנסיגה המינימלי. בדקו כל חולדה יותר משלוש פעמים, בהפרש של 3-5 דקות לפחות.</li>
		<li>רשום את הכוח המינימלי המעורר רפלקס משיכת כפות. ממוצע הנתונים כ- MWT של חולדות.</li>
	</ol></li>
	<li>חביון נסיגה תרמית (TWL) הערה: ה- TWL נמדד באמצעות מנגנון הבדיקה הכפית (טבלת חומרים) והצופה היה עיוור לזריקות שהחיות קיבלו.<ol><li>הניחו קופסת פרספקס (60 ס"מ על 20 ס"מ x 14 ס"מ, מחולקת ל-6 תאים) על לוח זכוכית בעובי 3 מ"מ, והכניסו חולדות לקופסה (אחת בכל תא). ודאו שהסביבה שקטה וטמפרטורת החדר קבועה.</li>
		<li>תנו לחולדות 30 דקות להסתגל לסביבת הבדיקה.</li>
		<li>כייל את הגירוי התרמי באמצעות רדיומטר אינפרא אדום. הגדר את עוצמת האינפרא אדום הרצויה על 70 יחידות.</li>
		<li>הניחו את פולט/גלאי האינפרא אדום על המיכל ישירות מתחת למרכז הכפה הנבדקת.</li>
		<li>לחיצה על לחצן START . הטיימר יופעל באופן אוטומטי. הבקר יכבה באופן אוטומטי את אור האינפרא אדום ויפסיק את הטיימר לחלוטין ברגע שמתרחשת תנועת הכפה.</li>
		<li>הקלט את זמן התגובה כאשר המראה של משיכת כפות וליקוק כפות. הערה: תגובה חיובית לבדיקה נחשבת למשיכת כפות וליקוק כפות. אם מתרחשת רק נסיגת כפות, יש להתייחס אליה כאל תנועה רצונית של החולדה ולא כאל תגובה חיובית.</li>
		<li>חזור על הבדיקה יותר משלוש פעמים. ממוצע הנתונים כ- TWL של חולדות. הערה: כל חשיפה של חום קורן לא תעלה על 20 שניות. גירויי אינפרא אדום על אותה כפה אחורית צריכים להיות במרחק של לפחות 3−5 דקות זה מזה.</li>
	</ol></li>
	<li>ניתוחי תבניות הליכה הערה: ניתוחי תבניות ההליכה נמדדו באמצעות מערכת הדמיה (Table of Materials) והצופה היה עיוור לזריקות שהחיות קיבלו.<ol><li>התאימו את אורך תא ההליכה באמצעות הידיות בשני הקצוות של תא ההליכה לאורך המתאים לחולדות (למשל, 61 ס"מ).</li>
		<li>הכניסו חולדה לתא ההליכה ואימנו חולדות לבצע ריצות רצופות במשך 5 מחזורי צעדים לפחות במהירות של 18 ס"מ לשנייה לפני הניסוי הפורמלי. הערה: כאשר חולדה ממוקמת לראשונה בתא ההליכה, ניתן להגדיר את המהירות לכ-20 ס"מ לשנייה ולכבות אותה כאשר היא רצה סביב 2 שניות. לאחר מכן הגדר את המהירות ל-18 ס"מ לשנייה. טפחו בעדינות על גב החולדה עם המחיצה, אם החולדה משתהה או נסוגה במהלך הליכה. נסו להפחית את המהירות בהדרגה מ-18 ס"מ לשנייה ל-10 ס"מ לשנייה. אם החולדה בסופו של דבר לא מצליחה לבצע את הבדיקה, מקובל לבחור חולדה אחרת לבדיקה.</li>
		<li>הגבירו באיטיות את מהירות ההליכון עד שהוא מגיע למהירות היעד (18 ס"מ לשנייה). צלם לפחות 5 שניות וידאו של תנועה מתמשכת של החולדה באמצעות מצלמת הווידאו הדיגיטלית המהירה המותקנת מתחת לחגורת ההליכון השקופה.</li>
		<li>בדקו כל חולדה במרחק של לפחות 5 דקות זו מזו כדי להשיג לפחות שלוש ריצות רצופות.</li>
		<li>ציירו "תיבה תוחמת" כדי להגדיר את הגבול של תמונת הליכה של בעלי חיים בתוכנת ההדמיה והזינו את מהירות הריצה עבור כל סרטון. בחר סרטונים כקבוצה ועבד סרטונים באופן אוטומטי על-ידי התוכנה. לאחר עיבוד סרטונים, התוכנה תפיק מספר גיליונות אלקטרוניים לדיווח על מדדי הליכה, כולל עמידה, נדנדה, בלימה, הנעה, קצב, רצף צעדים וכו '.</li>
		<li>חישוב שטח הכפה הכולל (ס"מ2), אורך צעד ממוצע (ס"מ) ואיחוד אורך צעד. הערה: שטח הכפות הכולל הוא הממוצע של השטח הכולל של ארבע כפות של כל קבוצת חולדות ושטח הכפות מוגדר כשטח הכפות המרבי במגע עם ההליכון במהלך שלב העמידה של מחזור הצעדים. אורך צעד הוא המרחק בין מגעים ראשוניים של אותה כפה בצעד שלם אחד. אורך צעד יחידה = אורך צעד ממוצע (ס"מ)/אורך גוף (ס"מ).</li>
	</ol></li>
</ol>3. ניתוחים היסטופתולוגיים ואימונוהיסטוכימיים
<ol><li>המתת חולדות על ידי הזרקה תוך-צפקית של נתרן פנטוברביטל במינון של 150 מ"ג/ק"ג (מוכן במי מלח). כריתת מפרקי הברך באופן מיידי לצורך הניתוחים ההיסטולוגיים.</li>
	<li>לתקן את המפרקים ב 10% פורמלין במשך 24 שעות, decalcify עם 10% EDTA במלח מאוגר פוספט (PBS) במשך 8 שבועות, ולאחר מכן להטמיע את המפרקים פרפין. אזהרה: פורמלין עלול לגרום לגירוי בעיניים, בעור ובדרכי הנשימה. זה צריך להיות מטופל במכסה המנוע.</li>
	<li>חותכים את המפרקים המשובצים בפרפין בעובי 3 מ"מ עם מיקרוטום וצפים באמבט מים בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס המכיל מים מזוקקים.</li>
	<li>העבר חלקים למגלשות זכוכית. יש לייבש את המגלשות למשך הלילה ולאחסן את המגלשות בטמפרטורת החדר (RT) להמשך הכתמים הבאים.</li>
	<li>מניחים את המגלשות בתנור של 60 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות כדי לנטרל את השקופיות.</li>
	<li>טבל את השקופיות ברצף בקסילן, קסילן, 100% אתנול, 100% אתנול, 95% אתנול, 80% אתנול ו-75% אתנול למשך 5 דקות, בהתאמה, ב-RT.</li>
	<li>מקטעי כתמים עם המטוקסילין ואאוזין (H&E), ספרנין-O (SO) והמטוקסילין כחול אלקסיאני (ABH) וכן נוגדנים נגד קולגן מסוג II של חולדות (Col2), קולגן מסוג X (Col10) ומטריצה מטאלופרוטאינאז 13 (MMP13), כמתואר בשלבים 3.8−3.12.</li>
	<li>צביעת H&E<ol><li>יש לשטוף את המגלשות עם H2O שעבר דה-יוניזציה למשך 3 דקות. כתם מחליק עם המטוקסילין במשך 3−5 דקות.</li>
		<li>יש לשטוף את החלקות עםH2O 3x, דקה אחת כל אחת, עד שלא נשאר המטוקסילין על המשטח.</li>
		<li>כתם מחליק עם eosin במשך 30 שניות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x שעבר דה-יוניזציה, דקה אחת כל אחת, עד שלא יישאר אוזין על פני השטח.</li>
		<li>לטבול מגלשות באמוניה של 0.1% למשך 10−20 שניות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>יש לטבול ברצף ב-95% אתנול, 100% אתנול, קסילן, קסילן וקסילן למשך דקה אחת, בהתאמה.</li>
		<li>עטיפת השקופיות בשרף נייטרלי.</li>
	</ol></li>
	<li>כל כך מכתים<ol><li>יש לשטוף את המגלשות עם H2O שעבר דה-יוניזציה למשך 3 דקות. כתם מחליק עם המטוקסילין במשך 3−5 דקות.</li>
		<li>להבדיל במהירות 1% אלכוהול חומצה (כ 3 שניות). לאחר מכן, יש לשטוף עםH2O 3x שעבר דה-יוניזציה, דקה אחת כל אחד, עד שלא יישאר המטוקסילין על פני השטח.</li>
		<li>מחליק כתמים עם פתרון ירוק מהיר (FCF) למשך 5 דקות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>כתם מחליק עם SO במשך 1−2 דקות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>יש לשטוף עם 1% חומצה אצטית למשך 1-2 דקות כדי להסיר את שאריות ה-FCF. יש לשטוף את המגלשות עם H2O שעבר דה-יוניזציה למשך דקה אחת.</li>
		<li>יש לטבול ברצף ב-95% אתנול, 100% אתנול, קסילן, קסילן וקסילן למשך דקה אחת, בהתאמה.</li>
		<li>עטיפת השקופיות בשרף נייטרלי.</li>
	</ol></li>
	<li>מכתים ABH<ol><li>יש לשטוף את המגלשות עם H2O שעבר דה-יוניזציה למשך 3 דקות. יש לטבול ב-1% אלכוהול חומצי למשך 30 שניות ולנקז לזמן קצר על מגבת נייר (אין לשטוף).</li>
		<li>לטבול מגלשות ב- ABH למשך שעה אחת. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x שעבר דה-יוניזציה, דקה אחת כל אחת, עד שלא יישאר ABH על פני השטח.</li>
		<li>להבדיל במהירות 1% אלכוהול חומצה (כ 3 שניות). יש לשטוף את המגלשות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>יש לטבול במי אמוניום ב-0.5% למשך 15 שניות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>לטבול ב-95% אתנול למשך דקה אחת. היסחפו לתוך תמיסת eosin/orange G למשך דקה וחצי.</li>
		<li>יש לטבול ברצף ב-95% אתנול, 100% אתנול, קסילן, קסילן וקסילן למשך דקה אחת, בהתאמה.</li>
		<li>עטיפת השקופיות בשרף נייטרלי.</li>
	</ol></li>
	<li>בחנו את כל השקופיות תחת מיקרוסקופ וקיבלו ציון סטטיסטי בסולם של 0-13 על ידי תצפית כפולת סמיות, על פי שיטת הניקוד של מנקין14.</li>
	<li>אימונוהיסטוכימיה<ol><li>יש לשטוף את המגלשות עם H2O שעבר דה-יוניזציה למשך 3 דקות.</li>
		<li>יש לטבול את השקופיות ב-0.1 M נתרן ציטראט ולהניח את השקופיות בתנור של 60 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות כדי לאחזר את האנטיגן.</li>
		<li>היסחפו לתוך 0.3% Triton X-100 ב-PBS למשך 10 דקות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם PBS 2x, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>הדגירה של מקטעים בתמיסתH 2 O2 3% במתנול ב-RT למשך 10 דקות כדי לחסום פעילות פרוקסידאז אנדוגנית. יש לשטוף את השקופיות עם PBS 2x, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>הדגירה של חלקים עם סרום עזים של 5% ב-PBS למשך 30 דקות ב-RT כדי לחסום כל כריכה לא ספציפית. יש לשטוף את השקופיות עם PBS 2x, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>יש לדגום מקטעי לילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם 100 μL של נוגדנים ראשוניים מדולל PBS (1:1,000) נגד קולגן מסוג II של חולדות (Col2), קולגן מסוג X (Col10) ומטריצה מטאלופרוטאינאז 13 (MMP13). יש לשטוף את השקופיות עם PBS 2x, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>מקטעי דגירה עם 100 μL של נוגדן משני מדולל PBS (1:1,000) (עז נגד עכבר משני או עז נגד עכבר משני) במשך 20 דקות ב- RT. יש לשטוף את השקופיות עם PBS 2x, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>מקטעי דגירה עם 100 μL של 3,3′-diaminobenzidine (DAB) פתרון עבודה. עקוב אחר התגובה כאשר התגובה הכרומוגנית הופכת את אתרי האפיטופ לחום. אזהרה: DAB הוא חומר מסרטן. תמיד ללבוש כפפות ולעבוד עם מכסה המנוע בעת עבודה עם DAB. הערה: זמן התפתחות הצבע עשוי להשתנות בין מספר שניות ל-10 דקות.</li>
		<li>ברגע שמתפתח צבע חום על החלקים, יש לשטוף את השקופיות עםH2O 2x שעבר דה-יוניזציה, 3 דקות כל אחת.</li>
		<li>יש לטבול את השקופיות בהמטוקסילין למשך 1-2 דקות כדי לנטרל שקופיות. לאחר מכן, יש לשטוף את החלקות עם H2O 3x, דקה אחת כל אחת.</li>
		<li>יש לטבול ברצף ב-95% אתנול, 100% אתנול, קסילן, קסילן וקסילן למשך דקה אחת, בהתאמה.</li>
		<li>עטיפת השקופיות בשרף נייטרלי.</li>
		<li>שימו לב לצבע הנוגדנים המכתימים בקטעים תחת מיקרוסקופ.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Hunter, D. J., Schofield, D., Callander, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+individual+and+socioeconomic+impact+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The individual and socioeconomic impact of osteoarthritis.</a> Nature Reviews Rheumatology. 10 (7), 437-441 (2014).</li>
<li>Neogi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+and+impact+of+pain+in+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 21 (9), 1145-1153 (2013).</li>
<li>Teeple, E., Jay, G. D., Elsaid, K. A., Fleming, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+osteoarthritis%3A+challenges+of+model+selection+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal models of osteoarthritis: challenges of model selection and analysis.</a> AAPS Journal. 15 (2), 438-446 (2013).</li>
<li>Woolf, A. D., Pfleger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+major+musculoskeletal+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Burden of major musculoskeletal conditions.</a> Bulletin of the World Health Organization. 81 (9), 646-656 (2003).</li>
<li>Bijlsma, J. W., Berenbaum, F., Lafeber, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis%3A+an+update+with+relevance+for+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis: an update with relevance for clinical practice.</a> Lancet. 377 (9783), 2115-2126 (2011).</li>
<li>McCoy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Osteoarthritis%3A+Comparisons+and+Key+Considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Osteoarthritis: Comparisons and Key Considerations.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 803-818 (2015).</li>
<li>O'Neill, T. W., Felson, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Osteoarthritis+%28OA%29+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Osteoporosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Osteoarthritis (OA) Pain.</a> Current Osteoporosis Reports. 16 (5), 611-616 (2018).</li>
<li>Kuyinu, E. L., Narayanan, G., Nair, L. S., Laurencin, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+osteoarthritis%3A+classification%2C+update%2C+and+measurement+of+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Surgery+and+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models of osteoarthritis: classification, update, and measurement of outcomes.</a> Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11, 19(2016).</li>
<li>Takahashi, I., Matsuzaki, T., Hoso, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+histopathological+developments+in+knee-joint+components+in+a+rat+model+of+osteoarthritis+induced+by+monosodium+iodoacetate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physical+Therapy+Science%22%5BJournal%5D)">Long-term histopathological developments in knee-joint components in a rat model of osteoarthritis induced by monosodium iodoacetate.</a> Journal of Physical Therapy Science. 29 (4), 590-597 (2017).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ongoing+pain+in+the+MIA+model+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Ongoing pain in the MIA model of osteoarthritis.</a> Neuroscience Letters. 493 (3), 72-75 (2011).</li>
<li>Combe, R., Bramwell, S., Field, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monosodium+iodoacetate+model+of+osteoarthritis%3A+a+model+of+chronic+nociceptive+pain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">The monosodium iodoacetate model of osteoarthritis: a model of chronic nociceptive pain in rats.</a> Neuroscience Letters. 370 (2-3), 236-240 (2004).</li>
<li>Pomonis, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+pharmacological+characterization+of+a+rat+model+of+osteoarthritis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Development and pharmacological characterization of a rat model of osteoarthritis pain.</a> Pain. 114 (3), 339-346 (2005).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Mankin, H. J., Dorfman, H., Lippiello, L., Zarins, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+metabolic+abnormalities+in+articular+cartilage+from+osteo-arthritic+human+hips.+II.+Correlation+of+morphology+with+biochemical+and+metabolic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery%22%5BJournal%5D)">Biochemical and metabolic abnormalities in articular cartilage from osteo-arthritic human hips. II. Correlation of morphology with biochemical and metabolic data.</a> Journal of Bone and Joint Surgery. 53 (3), 523-537 (1971).</li>
<li>Yan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroprotective+effects+of+platelet+lysate+towards+monoiodoacetate-induced+arthritis+by+suppression+of+TNF-%CE%B1-induced+activation+of+NF-%C4%B8B+pathway+in+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Aging%22%5BJournal%5D)">Chondroprotective effects of platelet lysate towards monoiodoacetate-induced arthritis by suppression of TNF-α-induced activation of NF-ĸB pathway in chondrocytes.</a> Aging. 11 (9), 2797-2811 (2019).</li>
<li>Yan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-Articular+Injection+of+Extract+Attenuates+Pain+Behavior+and+Cartilage+Degeneration+in+Mono-Iodoacetate+Induced+Osteoarthritic+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Intra-Articular Injection of Extract Attenuates Pain Behavior and Cartilage Degeneration in Mono-Iodoacetate Induced Osteoarthritic Rats.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 1360(2018).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agkistrodon+ameliorates+pain+response+and+prevents+cartilage+degradation+in+monosodium+iodoacetate-induced+osteoarthritic+rats+by+inhibiting+chondrocyte+hypertrophy+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Agkistrodon ameliorates pain response and prevents cartilage degradation in monosodium iodoacetate-induced osteoarthritic rats by inhibiting chondrocyte hypertrophy and apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 231, 545-554 (2019).</li>
<li>Yamada, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+monosodium+iodoacetate+dosage+to+induce+knee+osteoarthritis%3A+Relation+with+oxidative+stress+and+pain%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Evaluation of monosodium iodoacetate dosage to induce knee osteoarthritis: Relation with oxidative stress and pain.</a> International Journal of Rheumatic Diseases. 22 (3), 399-410 (2019).</li>
<li>Schuelert, N., McDougall, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+that+the+vasoactive+intestinal+peptide+receptor+antagonist+VIP6-28+reduces+nociception+in+an+animal+model+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence that the vasoactive intestinal peptide receptor antagonist VIP6-28 reduces nociception in an animal model of osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 14 (11), 1155-1162 (2006).</li>
<li>Lee, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choline%2C+an+alpha7+nicotinic+acetylcholine+receptor+agonist%2C+alleviates+hyperalgesia+in+a+rat+osteoarthritis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Choline, an alpha7 nicotinic acetylcholine receptor agonist, alleviates hyperalgesia in a rat osteoarthritis model.</a> Neuroscience Letters. 548, 291-295 (2013).</li>
<li>Piesla, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+gait%2C+due+to+inflammation+but+not+nerve+injury%2C+reflects+enhanced+nociception+in+preclinical+pain+models%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Abnormal gait, due to inflammation but not nerve injury, reflects enhanced nociception in preclinical pain models.</a> Brain Research. 1295, 89-98 (2009).</li>
<li>Udo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoiodoacetic+acid+induces+arthritis+and+synovitis+in+rats+in+a+dose-+and+time-dependent+manner%3A+proposed+model-specific+scoring+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Monoiodoacetic acid induces arthritis and synovitis in rats in a dose- and time-dependent manner: proposed model-specific scoring systems.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 24 (7), 1284-1291 (2016).</li>
<li>Guingamp, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mono-iodoacetate-induced+experimental+osteoarthritis%3A+a+dose-response+study+of+loss+of+mobility%2C+morphology%2C+and+biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+%26+Rheumatism%22%5BJournal%5D)">Mono-iodoacetate-induced experimental osteoarthritis: a dose-response study of loss of mobility, morphology, and biochemistry.</a> Arthritis & Rheumatism. 40 (9), 1670-1679 (1997).</li>
<li>Jeong, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eupatilin+Exerts+Antinociceptive+and+Chondroprotective+Properties+in+a+Rat+Model+of+Osteoarthritis+by+Downregulating+Oxidative+Damage+and+Catabolic+Activity+in+Chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Eupatilin Exerts Antinociceptive and Chondroprotective Properties in a Rat Model of Osteoarthritis by Downregulating Oxidative Damage and Catabolic Activity in Chondrocytes.</a> PLoS ONE. 10 (6), 0130882(2015).</li>
<li>Cook, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cartilage+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+%26+Joint+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models of cartilage repair.</a> Bone & Joint Research. 3 (4), 89-94 (2014).</li>
<li>Little, C. B., Zaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+constitutes+an+%22animal+model+of+osteoarthritis%22--the+need+for+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+and+Cartilage%22%5BJournal%5D)">What constitutes an "animal model of osteoarthritis"--the need for consensus.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (4), 261-267 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מודל החולדות של OA המושרה על ידי MIA הוא מודל מבוסס היטב, בשימוש נרחב. הזרקה תוך-מפרקית של MIA גורמת בתחילה לדלקת חמורה וחריפה, מה שמוליד את השלב הארוך והניווני של OA17,18. במחקר זה מדדנו את הרגישות הנוסיספטיבית של MWT ו-TWL, והערכנו שינויים בהליכה באמצעות מערכת הדמיה. דו"חות קודמים מצאו כי הזרקת MIA עלולה להעלות את הרגישות של סיבי מפרק הברך האפרנטיים המובילה לתפיסה נוסית, המתבטאת בהיפראלגיה תרמית ובהפחתת הסף המכני19,20<sup clas...

אוסטאוארתריטיס (OA) היא מחלת המפרקים הנפוצה ביותר בעולם, הפוגעת בכ-10-12% מאוכלוסיית המבוגרים1. המפרק המעורב ביותר הוא הברך, ול-OA יש שכיחות גבוהה יותר בקרב מבוגרים, במיוחד נשים2. כמחלה כרונית, OA מתפתחת בהדרגה במשך עשרות שנים לכשל במפרקים עם תסמינים כגון אובדן סחוס, דלקת סינוביאלית, אוסטאופיטוזה, ירידה בתפקוד וכאב כרוני3. על פי ארגון הבריאות העולמי (WHO), OA היא המחלה הרביעית בשכיחותה אצל נקבות והמחלה השמינית בשכיחותה אצל גברים. עד 2020, OA עשויה להפוך למחלה הרביעית הכי משביתה בבני אדם4. עם זאת, הטיפולים הזמינים כיום של OA מטפלים רק בסימפטומים ומאריכים את הזמן עד לניתוח החלפת מפרקים5.
OA ספונטני בחולים אנושיים לעתים קרובות לוקח זמן רב כדי לייצר סימפטומים קליניים כגון כאב הקשור למפרקים6. בשלבים המוקדמים של OA, הכאב הוא בדרך כלל לסירוגין והופך תכופים וחמורים יותר ככל שהמחלה מתקדמת, מה שהופך אותו לתלונה השלטת של חולים7. לכן, מודלים נרחבים של בעלי חיים לכאבי OA פותחו בחצי המאה האחרונה כדי לקדם טיפול לשיכוך כאבים. מודלים OA חולקו באופן קלאסי מודלים ספונטניים המושרה. מודלים ספונטניים כוללים מודלים טבעיים ומודלים מהונדסים גנטית, שיכולים לדמות בצורה קרובה יותר את מהלך ה- OA הראשוני בבני אדם8. בדרך כלל ניתן לחלק מודלים מושרים לשתי קטגוריות: 1) OA פוסט טראומטי המושרה על ידי ניתוח או טראומה אחרת; או 2) הזרקה תוך-מפרקית של חומרים כונדרוטוקסיים או מעודדי דלקת3. מודלים אלה מניחים בסיס למחקר הפתופיזיולוגי של OA ותורמים רבות לפיתוח תרופות להפחתת הכאב ולהגברת התפקוד.
לאחרונה, הגורם הנפוץ ביותר עבור מודלים OA הוא מונו-יודואצטט (MIA). MIA, מעכב של גליצרלדהיד-3-פוספט דהידרוגנאז, יכול לגרום לשינויים במטריצת הסחוס, השפלה, אובדן סחוס, סינוביטיס ושינויים אחרים, הדומים לשינויים הפתולוגיים של דלקת מפרקים ניוונית אנושית9. צוין כי הזרקה תוך-מפרקית של MIA גרמה לכאב מתמשך 28 יום לאחר מתן MIA, מה שמצביע על כך שמודל MIA עשוי להיות שימושי לחקר כאב נוסיצפטיבי כרוני10,11,12. במחקר זה, חולדות ספראג-דאולי זכרים קיבלו זריקות תוך-מפרקיות עם 0.5, 1.5 או 3 מ"ג של MIA במפרקי הברך. חומרת כאבי המפרקים הנגרמים על ידי MIA נמדדה על ידי הערכת רגישות מכנית ותרמית ב 1, 7, 14, 21, 28 ו -35 ימים לאחר הזריקות. על בסיס זה, 1.5 מ"ג של MIA נבחר כריכוז הסופי להערכת דפוסי הליכה ושינויים היסטולוגיים ב 28 ימים לאחר הזריקות.

<table><tbody><tr><td>נוגדן אנטי-קולגן II</td><td>Abcam (בריטניה)</td> <td>34712</td><td>נוגדן ראשוני לאימונוהיסטוכימיה (IHC)</td></tr> <tr><td>נוגדן אנטי-קולגן X (Col10)</td><td>Abcam (בריטניה)</td> <td>49945</td><td>נוגדן ראשוני</td></tr><tr><td>למערכת הדמיה IHC DigiGait</td><td>פרטי עכבר (בוסטון, מסצ'וסטס, ארה"ב)</td><td></td><td>ציוד לניתוחי דפוסי הליכה</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861006</td><td>הצבע ל-HE צביעת</td></tr><tr><td>Fast Green FCF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7252</td><td>הצבע לצביעת SO</td></tr><tr><td>נוגדן נגד עכבר עז</td><td>ZSGQ-BIO (בייג'ינג, סין)</td><td>PV-9002</td><td>נוגדן משני</td></tr><tr><td>לנוגדנים נגד ארנב IHC עז</td><td>ZSGQ-BIO (בייג'ינג, סין)</td><td>PV-9001</td><td>נוגדן משני ל-IHC</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3163</td><td>הצבע לצביעה HE</td></tr><tr><td>MIA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I4386-10G</td><td>אבקת</td></tr><tr><td>MMP13</td><td>Cell Signaling Technology, Inc. (דנברס, מסצ'וסטס, ארה"ב)</td><td>69926</td><td>נוגדן ראשוני למרכז</td></tr><tr><td>הטמעת רקמות מודולרי</td> IHC <td>Thermo Fisher Scientific (ארה"ב)</td><td>EC 350</td><td>לייצר גושי פרפין.</td></tr><tr><td>מכשיר בדיקה פלנטרי</td><td>UgoBasile (איטליה)</td><td>37370</td><td>ציוד לבדיקת TWL</td></tr><tr><td>ערכת ריאגנטים PrimeScript RT (מושלם בזמן אמת)</td><td>TaKaRa Biotechnology Co. Ltd. (דאליאן, סין)</td><td>RR037A</td><td>חילוץ RNA כולל מתאים מתורבתים</td></tr><tr><td>מיקרוטומים סיבוביים והזזה</td><td>Thermo Fisher Scientific (ארה"ב)</td><td>HM325</td><td>קטעי פרפין מדויקים.</td></tr><tr><td>Safranin-O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2255</td><td>הצבע לצביעת SO</td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP 5 Jr</td><td>Sakura (יפן)</td><td></td> <td>מעבד חדירת ואקום</td></tr></tbody></table>

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

ניתן לחלק את המודלים החייתיים הנוכחיים של דלקת מפרקים ניוונית (OA) למודלים ספונטניים ומודלים מושרים, שמטרתם לדמות את השינויים הפתופיזיולוגיים של OA אנושי. עם זאת, כתסמין העיקרי בשלב מאוחר של OA, הכאב משפיע על חיי היומיום של החולים, ואין הרבה מודלים זמינים. המודל המושרה על ידי מונו-יודואצטט (MIA) הוא מודל הכאב OA הנפוץ ביותר, המשמש בעיקר במכרסמים. MIA הוא מעכב של גליצרלדהיד-3-פוספט דהידרוגנאז, הגורם למוות של כונדרוציטים, ניוון סחוס, אוסטאופיט ושינויים מדידים בהתנהגות בעלי חיים. חוץ מזה, ניתן לזהות שינויי ביטוי של מטריקס מטאלופרוטינאז (MMP) וציטוקינים מעודדי דלקת (IL1 β ו- TNF α) במודל המושרה על ידי MIA. שינויים אלה עולים בקנה אחד עם תנאים פתופיזיולוגיים של OA בבני אדם, מה שמצביע על כך ש-MIA יכול לגרום למודל כאב OA מדיד ומוצלח. מחקר זה נועד לתאר את המתודולוגיה של הזרקה תוך-מפרקית של MIA בחולדות ולדון בהתנהגויות הקשורות לכאב ובשינויים היסטופתולוגיים הנובעים מכך.

בעזרת מתודולוגיה זו, הקמנו מודל כאב OA בחולדה וזיהינו את השינויים שנוצרו. MWT ו- TWL שיקפו אלודיניה מכנית והיפראלגיה תרמית, בהתאמה. כפי שניתן לראות באיור 1, MIA גרם לאלודיניה מכנית ולהיפראלגזיה תרמית באופן תלוי מינון. למרבה הפלא, הירידה של MWT הגיעה לשיא מ 21 ימים ל 28 ימים, ולאחר מכן התאושש, מה שמרמז כי תיקון משותף עשוי להתרחש בשלב זה, אבל MWT של 3 מ"ג MIA הקבוצה עדיין היה ברמה נמוכה. השינוי של TWL היה תואם פחות או יותר ל-MWT (איור 2).
<p class="jove_conten...

מחקר זה מתאר את השיטה של הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות ודן בהתנהגויות הקשורות לכאב כתוצאה מכך ובשינויים היסטופתולוגיים, המספקים סימוכין ליישומים עתידיים.

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

הזרקת MI תוך מפרקית גורמת לשינויים מדידים בהתנהגות הקשורה לכאב, אשר ממלאת תפקיד חשוב בהערכת הצלחת הדוגמנות ההליך ניתן לשחזור ויעיל בזמן. בנוסף, המינון המואץ הם תווית קונטרה נופלת קטנה כמו גם יונקים קלים. ומי שידגים את ההליך יהיה זושיאנג צ'ן, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלנו.הניחו את החולדה המורדמת במצב שכיבה והסירו את הפרווה מברך אחת. יש לחטא את העור החשוף באלכוהול ולמקם את הברך בזווית של 90 מעלות כדי לחשוף את גיד הפיקה הלבן מתחת לפיקה. הפעל לחץ על גיד הפיקה בקצה האצבע כדי למצוא את הפער מתחת לפיקה.והחזק את המחט בניצב למפרק, הכנס מחט בגודל 26 לצומת הפער וגיד הפיקה הרוחבי. כאשר המחט במקומה, הזרקו 50 מיקרוליטר של תמיסת MIA לחלל המפרק לפני שתחזירו את המחט לאט. לאחר מכן עטפו חתיכת גזה סביב מקום ההזרקה כדי למזער ריפלוקס ודליפה.ב-1, 7, 14, 21, 28 ו-35 ימים לאחר ההזרקה הניחו חולדה אחת מוזרקת בפלסטיק מוגבה בגודל 17 על 11 על 13 ס"מ עם בסיס רשת תיל תלוי 50 ס"מ מעל שולחן, בסביבה שקטה תנו לחולדה 30 דקות להסתגל לסביבה לפני לחיצה על מחט פון פריי בניצב על פני העציץ של כפה אחורית אחת. הגברת הלחץ בהדרגה וליניארית עד שמתרחשת הרמת כפות או ליקוק כפות. כאשר מתרחשת נסיגת כפות, השתמש בכוח נמוך מהסף הקודם כדי להבטיח שהסף הוא כוח הנסיגה המינימלי.כאשר כל חולדה נבדקה לפחות ארבע פעמים, בהפרש של שלוש עד חמש דקות לפחות, רשום את הכוח המינימלי המעורר רפלקס נסיגת כפות וממוצע הנתונים כ-MWT של החולדות. כדי לבדוק את ה-TWL, הנח חולדה מוזרקת אחת לכל תא של קופסת פרספקס בגודל 60 על 20 על 14 סנטימטר. הניחו לצלחת זכוכית בעובי שלושה מילימטר בחדר שקט עם טמפרטורה קבועה ותנו לחולדות 30 דקות להסתגל לסביבת הבדיקה.בתום תקופת ההתמצאות יש לכייל את הגירוי התרמי באמצעות רדיומטר אינפרא אדום ולהגדיר את עוצמת האינפרא אדום הרצויה ל-70 יחידות. הנח את גלאי פולט האינפרא אדום על המיכל ישירות מתחת למרכז הכפה הנבדקת, ולחץ על התחל. הטיימר יתחיל אוטומטית.ברגע שמתרחשת תנועה של הכפה, הבקר יכבה אוטומטית את אור האינפרא אדום ויעצור את הטיימר. רשום את זמן התגובה כאשר נצפית נסיגת כפות וליקוק כפות. לאחר חזרה על הבדיקה לפחות ארבע פעמים עבור כל חולדה, ממוצע הנתונים הוא TWL של החולדות.כדי להעריך את דפוס השער של החולדות שטופלו ב-MIA, השתמש תחילה בכפתורים בשני קצוות תא ההליכה כדי להתאים את אורך התא ל-61 סנטימטרים. לאחר מכן, הכניסו חולדה לתא ההליכה ואמנו את החולדה לבצע ריצות ללא הפרעה במשך חמישה מחזורי צעדים לפחות במהירות של 18 סנטימטרים לשנייה. לאחר אימון החולדה, צלמו לפחות חמש שניות של תנועה רציפה של כל חולדה עם מצלמת וידאו דיגיטלית במהירות גבוהה המותקנת מתחת לחגורת ההליכון השקופה.לאחר צילום לפחות שלוש ריצות רצופות בהפרש של חמש דקות, צייר תיבה תוחמת כדי להגדיר את הגבול של תמונת ההליכה של החיה בתוכנת ההדמיה והזן את מהירות הריצה עבור כל סרטון. לאחר מכן התחל את הניתוח האוטומטי על ידי התוכנה. לאחר העיבוד, התוכנה תפיק מספר גיליונות אלקטרוניים המדווחים על מדדי השער, כולל העמדה, הנדנדה, השבירה, ההנעה, הקצב ורצף הצעדים.MIA גורם לאלודיניה מכנית והיפרלגזיה תרמית באופן תלוי מינון. באופן מדהים, הירידה ב-MWT מגיעה לשיא מ-21 ימים ל-28 ימים לפני ההתאוששות, מה שמרמז על כך שתיקון מפרקים עשוי להתרחש בשלב זה. שימו לב שה-MWT של קבוצת ה-MIA של שלושה מיליגרם עדיין ברמה נמוכה בנקודות זמן אלה.השינוי ב-TWL תואם פחות או יותר את זה שנצפה עבור MWT. ב-1.5 מיליגרם של MIA, רמות פרמטרי ההליכה כולל שטח הכפות הכולל ואורך צעד היחידה מופחתות משמעותית בקבוצת MIA. לאחר 28 ימים, מה שמרמז על כך ש-MIA גורם לכאבי מפרקים הקשורים לדלקת מפרקים ניוונית בחולדות.ניתוח היסטופתולוגי על ידי Makin Scoring חושף ניוון סחוס ברור, הפרעה בקולגן וחוסר ארגון מטריצות בקבוצת MIA. בנוסף, טיפול ב-1.5 מיליגרם של MIA גורם לוויסות משמעותי של MMP 13 וקולגן מסוג 10 והפחתה משמעותית של קולגן מסוג 2. חשוב למצוא את הצומת הנכון.אין למלא התנגדות כאשר המחט מגיעה לחלל האטרי. טכניקה זו אפשרה כייצור של מודל כאב OA יציב וניתן לשחזור ותרם תרומה חשובה לפיתוח תרופות להפחתת כאב והגברת התפקוד. לצד נוסף של MI יש השפעה אובייקטיבית ביותר על קרום הברד ושם למסכה ותמיד יש ללבוש את הכפפות בעת הכנת תמיסה זו.

osteoarthritis-pain-model-induced-intra-articular-injection-mono

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אוסטיאוארתריטיס (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב מתישה הקשורים כאב נשאר רק מבוקרת חלקית משככי כאבים זמינים. במודלים של בעלי חיים מפותחים כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני הכאב הקשורות OA. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה מודל monoiodoacetate כאב OA בתוך העכבר.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

יש פיתח מדד עורר של כאבי מפרקים ואנו יחד זה עם שיטה סטנדרטית למדידת ספונטנית קוץ מאתר מודלים שונים של דלקת מפרקים כימית המושרה. אמצעים אלה הם רגישים לשחזור עבור סוגים שונים של כאבי פרקים.

אמצעי ספונטנית עורר הכאב במודלים מאתר של כאבי ברכיים Monoarticular

בפרוטוקול זה הוכן מודל אוסטיאוארתריטיס בברך בשיטת וידמן המתוקנת, ומפורטים נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות של אקופוטומיה. יעילות האקופוטומיה הוכחה על ידי בדיקת התכונות המכניות של שריר הירך הארבע ראשי והגיד והתכונות המכניות והמורפולוגיות של הסחוס.

יישום של אקופוטומיה במודל אוסטיאוארתריטיס ברך בארנב

פרוטוקול זה מתאר את שיטות ההתערבות של Tuina במודל חולדה הנגרמת על ידי הזרקת נתרן מונויודואצטט של דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA), המספק התייחסות ליישום של Tuina במודלים של בעלי חיים KOA. פרוטוקול זה גם לומד את המנגנון היעיל של Tuina עבור KOA, והתוצאות יסייעו לקדם את יישומו.

התערבות Tuina בהזרקת נתרן מונויודואצטט מודל חולדה של אוסטיאוארתריטיס בברך

פרוטוקול זה מתאר כיצד מדידת כוח הנשיכה וסף נסיגת הראש יכולה ללכוד התנהגות כאב בכאב דלקתי של מפרק טמפורומנדיבולרי (TMJ) המושרה על ידי אדג'ובנט (CFA).

מדידת כאבי מפרק טמפורומנדיבולרי על ידי כוח נשיכה ומבחני נימה פון פריי בעכברים

הפרוטוקול מתאר כיצד למדוד היפרלגזיה בברך בעכברים. אנו מראים דוגמאות במודלים של עכברים לכאבי ברכיים חריפים כמו גם במודלים של דלקת מפרקים ניוונית (OA).

הערכת היפרלגזיה בברך בעכברים באמצעות מדידת יישום לחץ

בגלל הפשטות של ניתוח תוצאות התנהגותיות חזקים, היצרות כרונית של עצב השת הוא אחד מראש יחסני במודלים של בעלי חיים של כאב נוירופתי. תוך 24 שעות לאחר הניתוח, רגישות יתר לכאב הוא הקים ניתן למדוד כמותית באמצעות פריי פון aesthesiometer (מבחן מכני) ו מטר כאבים plantar (מבחן תרמית).

היצרות כרונית של העצב Sciatic ואת רגישות יתר לכאב בדיקה אצל חולדות

יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

אנו מציגים שיטה להשראת לחץ תוך עיני מוגבר (IOP), על ידי הזרקת מיקרוספירות מגנטיות לעין העכברוש, כדי ליצור מודל של גלאוקומה. זה מוביל לעליית לחץ חזקה, ולמוות עצבי נרחב. פרוטוקול זה קל לביצוע, אינו דורש זריקות חוזרות ומייצר עליות IOP יציבות לאורך זמן.

ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

למדו את שיטת ההזרקה התוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות ליצירת מודל כאב אוסטאוארתריטיס. השיטה מאפשרת הערכת התנהגויות הקשורות לכאב ושינויים היסטופתולוגיים לחקר מנגנוני כאב ופיתוח תרופות.

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

גלה סרטונים נוספים