Name: שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: למדו שימוש בקרום כוראלי ממברנה של עוף (CAM) כמודל in vivo לחקר סרטן גינקולוגי ואורולוגי. שיטה זו מאפשרת צמיחה מהירה של גידולים בסביבה חסינית לבדיקת טיפולים חדשניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לד ר פויוקו טאנוק ובין וו להכשרה הראשונית בשיטה זו. שיחות עם ד ר אווה Koziolek היו אינסטרומנטלי באופטימיזציה גישה זו והיה מוערך מאוד. עבודה זו לא היה אפשרי ללא מימון מן המקורות הבאים: מחקר טבק הקשורים לתוכנית המחקר פוסט דוקטורט (27FT-0023, כדי ACS), מחלקת ההגנה (משרד ההגנה) סרטן השחלות תוכנית המחקר (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), מחקר הקשורות לטבק תוכנית פיילוט השפעה גבוהה טייס (27FT-0016), ואת התמיכה המוסדית UCLA, כולל מענק הזרע JCCC (NCI/NIH P30CA016042) ו-3R מענק מהמשרד של סגן הקנצלר למחקר LW.

<ol><li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li>
<li>Jackson, S. J., Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tissue+models+in+cancer+research%3A+looking+beyond+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Human tissue models in cancer research: looking beyond the mouse.</a> Disease Models & Mechanisms. 10 (8), 939-942 (2017).</li>
<li>Cheon, D. J., Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Models+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%3A+Mechanisms+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Mouse Models of Cancer.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 6 (1), 95-119 (2011).</li>
<li>Howlader, N., et al. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2016. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. https://seer.cancer.gov/csr/1975_2016/ (2018).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+chorioallantoic+membrane+angiogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model.</a> Methods Molecular Biology. 843, 47-57 (2012).</li>
<li>Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chicken+chorioallantoic+membrane+model+in+biology%2C+medicine+and+bioengineering%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering.</a> Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).</li>
<li>Lokman, N. A., Elder, A. S., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+assay+as+an+in+vivo+model+to+study+the+effect+of+newly+identified+molecules+on+ovarian+cancer+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis.</a> International Journal of Molecular Science. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li>
<li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay%3A+A+3D+Animal+Model+for+Study+of+Human+Nasopharyngeal+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chick Chorioallantoic Membrane Assay: A 3D Animal Model for Study of Human Nasopharyngeal Carcinoma.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130935(2015).</li>
<li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+systems+to+study+and+visualize+human+tumor+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis.</a> Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1119-1130 (2008).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Embryo+Assay+as+Chemosensitivity+Test+for+Malignant+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick Embryo Assay as Chemosensitivity Test for Malignant Glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Kavaliauskaitė, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sodium+Valproate+on+the+Glioblastoma+U87+Cell+Line+Tumor+Development+on+the+Chicken+Embryo+Chorioallantoic+Membrane+and+on+EZH2+and+p53+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sodium Valproate on the Glioblastoma U87 Cell Line Tumor Development on the Chicken Embryo Chorioallantoic Membrane and on EZH2 and p53 Expression.</a> BioMed Research International. 2017, 12(2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Histone+Methyltransferase+EZH2+Mediates+Tumor+Progression+on+the+Chick+Chorioallantoic+Membrane+Assay%2C+a+Novel+Model+of+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">The Histone Methyltransferase EZH2 Mediates Tumor Progression on the Chick Chorioallantoic Membrane Assay, a Novel Model of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> Translational Oncology. 6 (3), 273-281 (2013).</li>
<li>Rudy, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Wnt+pathway+inhibition+of+human+squamous+cell+carcinoma+growth+and+metastasis+in+the+chick+chorioallantoic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Otolaryngology+-+Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">In vivo Wnt pathway inhibition of human squamous cell carcinoma growth and metastasis in the chick chorioallantoic model.</a> Journal of Otolaryngology - Head & Neck Surgery. 45 (1), 26(2016).</li>
<li>Canale, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-27+inhibits+pediatric+B-acute+lymphoblastic+leukemia+cell+spreading+in+a+preclinical+model%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Interleukin-27 inhibits pediatric B-acute lymphoblastic leukemia cell spreading in a preclinical model.</a> Leukemia. 25, 1815(2011).</li>
<li>Loos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino-functionalized+nanoparticles+as+inhibitors+of+mTOR+and+inducers+of+cell+cycle+arrest+in+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Amino-functionalized nanoparticles as inhibitors of mTOR and inducers of cell cycle arrest in leukemia cells.</a> Biomaterials. 35 (6), 1944-1953 (2014).</li>
<li>Rovithi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+bioluminescent+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+models+for+primary+pancreatic+cancer+cells%3A+a+platform+for+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Development of bioluminescent chick chorioallantoic membrane (CAM) models for primary pancreatic cancer cells: a platform for drug testing.</a> Scientific Reports. 7, 44686(2017).</li>
<li>Majerník, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Insights+into+the+Effect+of+Hyperforin+and+Photodynamic+Therapy+with+Hypericin+on+Chosen+Angiogenic+Factors+in+Colorectal+Micro-Tumors+Created+on+Chorioallantoic+Membrane%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Novel Insights into the Effect of Hyperforin and Photodynamic Therapy with Hypericin on Chosen Angiogenic Factors in Colorectal Micro-Tumors Created on Chorioallantoic Membrane.</a> International Journal of Molecular Science. 20 (12), 3004(2019).</li>
<li>Swadi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+the+chick+chorioallantoic+membrane+xenograft+model+of+neuroblastoma+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Optimising the chick chorioallantoic membrane xenograft model of neuroblastoma for drug delivery.</a> BMC Cancer. 18 (1), 28(2018).</li>
<li>Klingenberg, M., Becker, J., Eberth, S., Kube, D., Wilting, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+as+an+in+vivo+xenograft+model+for+Burkitt+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane as an in vivo xenograft model for Burkitt lymphoma.</a> BMC Cancer. 14 (1), 339(2014).</li>
<li>Avram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+A375+human+melanoma+models+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+and+Balb%2Fc+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice.</a> Oncology Reports. 38 (1), 89-99 (2017).</li>
<li>Zabielska-Koczywas, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+model+as+an+in+vivo+model+to+study+morphological+and+histopathological+features+of+feline+fibrosarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">3D chick embryo chorioallantoic membrane model as an in vivo model to study morphological and histopathological features of feline fibrosarcomas.</a> BMC Veterinary Research. 13 (1), 201(2017).</li>
<li>Skowron, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+the+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane+assay+to+study+treatment+approaches+in+urothelial+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Urologic+Oncology%3A+Seminars+and+Original+Investigations%22%5BJournal%5D)">Applying the chicken embryo chorioallantoic membrane assay to study treatment approaches in urothelial carcinoma.</a> Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations. 35 (9), e511-e523 (2017).</li>
<li>Jefferies, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+imaging+of+engineered+human+tumors+in+the+living+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Non-invasive imaging of engineered human tumors in the living chicken embryo.</a> Scientific Reports. 7 (1), 4991(2017).</li>
<li>Taizi, M., Deutsch, V. R., Leitner, A., Ohana, A., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+rapid+in+vivo+system+for+testing+therapeutics+on+human+leukemias%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematology%22%5BJournal%5D)">A novel and rapid in vivo system for testing therapeutics on human leukemias.</a> Experimental Hematology. 34 (12), 1698-1708 (2006).</li>
<li>Strojnik, T., Kavalar, R., Barone, T. A., Plunkett, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+model+and+immunohistochemical+comparison+of+U87+human+glioblastoma+cell+xenografts+on+the+chicken+chorioallantoic+membrane+and+in+rat+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental model and immunohistochemical comparison of U87 human glioblastoma cell xenografts on the chicken chorioallantoic membrane and in rat brains.</a> Anticancer Research. 30 (12), 4851-4860 (2010).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+model+for+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology.</a> Experimental Cell Research. 328 (2), 314-324 (2014).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-integrating+Lentiviral+Approach+Overcomes+Cas9-Induced+Immune+Rejection+to+Establish+an+Immunocompetent+Metastatic+Renal+Cancer+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+-+Methods+%26+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">A Non-integrating Lentiviral Approach Overcomes Cas9-Induced Immune Rejection to Establish an Immunocompetent Metastatic Renal Cancer Model.</a> Molecular Therapy - Methods & Clinical Development. 9, 203-210 (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

הרחבת הגידול וחרט באמצעות מודל מצלמת ההיתרים מהירה יותר הנצפה ישירות הגידול מאשר קיים בדגמי בעלי חיים vivo. בנוסף, עלויות הן נמוכות באופן משמעותי לאחר הרכישה הראשונית של ציוד הושלם, במיוחד כאשר בהשוואה לעלות של עכברים הפרוצים החיסונית. המצב הראשוני והחיסוני של עוברי העוף מתיר בקלות את מצבה של רקמת האדם והמורין. אפילו עם עוצמות אלה, למודל CAM יש מגבלות. הזמן הקצר שיכול להיות יתרון יכול להיות גם לרעת אם מחקרי טיפול לטווח ארוך מוצדקת. מעמד החיסוני/עמידות החיסונית של מודל CAM יכול לסבך את המחקרים של הגידול-אינטראקציות החיסונ...

עכברים שימשו כאורגניזם מודל קלאסי לחקר מחלות אנוש, כולל ממאירות. כיונקים, הם חולקים. דמיון רב לבני אדם רמה גבוהה שלהם של דמיון גנטי אפשרה מניפולציה הטרנסגניים של הגנום העכבר כדי לספק תובנה עצומה לתוך השליטה הגנטית של מחלות האדם1. ניסיון רב בטיפול של וניסויים עם עכברים הביא להיות מודל הבחירה למחקר ביו רפואי. עם זאת, בנוסף חששות מוסרית ומדעית לגבי דגמי murine, הם יכולים גם להיות יקרים למדי זמן רב2,3. התפתחות של גידולים יכול לקחת שבועות או אפילו חודשים. הדיור במוסד אופייני בלבד יכול לרוץ במאות עד אלפי דולרים בעוד גידולים מתפתחים. סרטן השחלות הוא דוגמה של חיסרון זה משום הצמיחה שלה במודלים murine יכול בקלות לקחת חודשים. עיכובים התקדמות מחקר פוטנציאלי להשפיע על סרטן השחלות חולים ' בהתמדה נמוכה הישרדות שיעור 5 שנים של רק 47% (כלומר, עלייה בהישרדות של רק 10% מעל 30 שנים)4. באופן דומה, סרטן אורולוגי (כליות, ערמונית, וסרטן שלפוחית השתן) מהווים 19% של כל המקרים הסרטניים בארצות הברית ו -11% של מקרי מוות הקשורים לסרטן4. כך, רומן בגישה vivo ללמוד סרטן גינקולוגית ואורולוגיים יכול להציל מעבדה משמעותית זמן, עבודה, וכסף, גם אם מודל זה מיושם רק ניסויים הראשונית ההקרנה. בנוסף, ההאצה המתקבלת של ממצאי מחקר יכול להשפיע באופן משמעותי על 177,000 אנשים שאובחנו עם סרטן אלה מדי שנה.
מודל CAM עוף מציע יתרונות רבים הנוגעים בסוגיות הנ ל. מודל פופולרי כדי ללמוד אנגיוגנזה5,6, הפלישה תא הגידול7,8, גרורות7,9, מודל העובר אפרוח מצלמת כבר שימש ללמוד צורות רבות של סרטן, כולל glioma10,11,12, הראש והצוואר קרצינומה של תאים13,14, לוקמיה15,16, סרטן הלבלב17, ו סרטן המעי הגס18. בנוסף, מודלים קאם נוצרו עבור נוירובלסטומה19, לימפומה בורקיט20, מלנומה21, וחתולים פיברוסרקומה22. מחקרים קודמים הציגו גם חרט סרטן שלפוחית השתן23 ו סרטן הערמונית קווי התאים24, אבל עם פרטי פרוטוקול מוגבל. לא רק שהביצים זולות בהרבה מעכברים, אבל הן גם מפיקות תוצאות מאוד מובנות25,26. הם מראים פיתוח מהיר של ואסילטורה, והתפתחות הגידול יכולה להתרחש מהר ככל כמה ימים ולהיות דמיינו longitudinally דרך החלון הפתוח. עם מסגרת הזמן 21 יום בין הפריה ביצה הבקיעה, ניסויים ניתן להשלים בתוך כמה שבועות. יתרה מזאת, העלות הנמוכה, צורכי הדיור המוגבלים, וגודל קטן מאפשרים בקלות ניסויים בקנה מידה גדול שיהיה מיועד ללימודי העכבר.
לכן, ביקשו למטב את מודל CAM עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית סרטן. בשל המצב החיסוני של העובר הקודם עוף27, שני העכבר ואת התאים האנושיים יכול להיות מושתל בקלות. ככזה, יש לנו בהצלחה לחרט מנופה השחלות, כליות, ערמונית, וסרטן שלפוחית השתן. עבור כל אחד מסוגי הגידולים האלה, מצלמת בקלות מקבל הוקמה murine ו/או האדם תאים הגידול קווי. חשוב מכך, שנקטפו טרי רקמות הגידול האנושי העיקרי יכול גם לעבור מתוך תאים מתעכל או פיסות של רקמה מוצקה עם שיעור גבוה של הצלחה. כל אחד מסוגי הסרטן האלה ומקורות התא דורש אופטימיזציה, אשר אנו חולקים כאן.

<table><tbody><tr><td>-010 טפלון (PTFE) לבן 55 Duro Shore D טבעות O טבעות</td><td>ה-O-Ring Store</td><td>TEF010</td><td>טבעת נון-סטיק לזריעת תאים. 1/4 אינץ' מזהה X 3/8 אינץ' OD X 1/16 אינץ' CS פוליטטרפלואורואתילן (PTFE).</td></tr><tr><td>C4-2</td><td>ATCC</td><td>CRL-3314</td><td>קו תאי סרטן הערמונית האנושי.</td></tr><tr><td>תאי CWR22Rv1</td><td></td><td></td><td>CWR היו מתנתו האדיבה של ד"ר דיוויד אגוס (Keck Medicine מאוניברסיטת דרום קליפורניה)</td></tr><tr><td>ציטוקרטין נוגדן 8/18 (C-51)</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-44929-0.02mg</td><td>בשימוש בדילול של 1:100 לניתוח אימונוהיסטוכימי של גידולי CAM בשחלות אנושיות.</td></tr><tr><td>D-Luciferin Firefly, מלח אשלגן</td><td>Goldbio</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>מספריים תפעוליים עדינים; מעוקל; חד-חד; אורך להב 30 מ"מ; 4-3/4 אינץ'. אורך כולל</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS6703</td><td>זה מסופק כאקסample. כל מספריים מעוקלים דומים יעבדו גם כן.</td></tr><tr><td>ערכת כלים Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max</td><td>Dremel</td><td>8050-N/18</td><td>ערכה זו מכילה את כל הכלים הדרושים.</td></tr><tr><td>ביצי עוף מופרות (רוד איילנד אדום - חום, בדרגת מעבדה)</td><td>AA Lab Eggs Inc.</td><td>N/A</td><td>יהיה צורך לזהות ספק ביצים מקומי, מכיוון שספק זה מספק רק באופן אזורי.</td></tr><tr><td>HT-1376</td><td>ATCC</td><td>CRL-1472</td><td>קו תאים של סרטן שלפוחית השתן האנושית.</td></tr><tr><td>Hovabator Genesis 1588 Deluxe Egg Incubator Combo Kit</td><td>Incubator Warehouse</td><td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td><td>ניתן להשתמש בחממות ביצים אחרות, אך יהיה צורך לאמת את אמינותן. לאחר ההשתלה, ניתן להשתמש גם בחממת תאים עם CO2 מושבת.</td></tr><tr><td>ID8</td><td></td><td></td><td>לא זמין מסחרית, ראה PMID: 10753190.</td></tr><tr><td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td><td>Incubator Warehouse</td><td>1102</td><td>ניתן להשתמש בפמוטים אחרים; עם זאת, זה מועדף מבין אלה שבדקנו. נר זה כלול בערכת החממה הנ"ל.</td></tr><tr><td>מלקחיים לאיריס, 10 ס"מ, מעוקל, משונן, 0.8 מ"מ קצות</td><td>World Precision Instrument</td><td>15915</td><td>זה מסופק כדוגמה. כל מלקחיים מעוקלים דומים יעבדו גם כן. לשיטה זו נעשה שימוש במספר מותגים.</td></tr><tr><td>קוצץ איזופלורן</td><td>מפיץ</td><td>0010250</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הדמיה IVIS Lumina II In Vivo</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Membrane Matrix HC; </td><td>קורנינג</td><td>ללא</td> LDEV 354248 <td>תמיסת מטריצה חוץ-תאית</td></tr><tr><td>MyC-CaP</td><td>ATCC</td><td>CRL-3255</td><td>קו תאי סרטן הערמונית בעכברים.</td></tr><tr><td>בקר פיפט נייד XP Pipet-Aid</td><td>Drummond Scientific</td><td>4-000-101</td><td>כל בקר פיפט דומה יהיה מתאים.</td></tr><tr><td>PrecisionGlide מחטים היפודרמיות</td><td>BD</td><td>305196</td><td>זה מסופק כאקסample. כל מחט 18G תעבוד באופן דומה.</td></tr><tr><td>RENCA</td><td>ATCC</td><td>CRL-2947</td><td></td></tr><tr><td>Semken Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11008-13</td><td>זה מסופק כדוגמה. כל מלקחיים דומים או סגנון אחר המתאים להעדפת החוקרים יתאימו.</td></tr><tr><td>SKOV3</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td>קו תאי סרטן השחלות האנושי.</td></tr><tr><td>מלקחיים לדגימה</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>72914</td><td>זה מסופק כאקסample. המלקחיים המשמשים למשיכת הקליפה להדמיית ביולומינסנציה הם באורך של כ-12.8 ס"מ עם קצוות ברוחב 3 מ"מ.</td></tr><tr><td>כדורי כותנה סטריליים</td><td>פישרברנד</td><td>22-456-885</td><td>זה מסופק כדוגמה. כל כדורי צמר גפן סטריליים יספיקו.</td></tr><tr><td>מוטות ערבוב עם שוטר גומי; קוטר 5 מ"מ, אורך 6 אינץ'</td><td>United Scientific Supplies</td><td>GRPL06</td><td>זה מסופק כדוגמה. כל מוטות ערבוב זכוכית דומים יעבדו גם כן.</td></tr><tr><td>T24</td><td>ATCC</td><td>HTB-4</td><td>קו תאים של סרטן שלפוחית השתן האנושית.</td></tr><tr><td>Tegaderm חבישה שקופה בסגנון מסגרת מקורי 2 3/8 אינץ' x 2 3/4 אינץ'</td> <td>Moore Medical</td><td>21272</td><td></td></tr><tr><td>כלי תרבית רקמות, קוטר 10 ס"מ</td><td>קורנינג</td><td>353803</td><td>זה מסופק כאקסample. ניתן להשתמש בכל צלחת דומה וסטרילית בגודל 10 ס"מ. אין צורך בטיפול בתרבית רקמות.</td></tr><tr><td>צינורות מעבדה שקופים של Tygon - קיר 1/4 x 3/8 x 1/16 (50 רגל)</td><td>Tygon</td><td>AACUN017</td><td>זה מסופק כאקסample. כל צינור בגודל דומה יעבוד גם כן.</td></tr></tbody></table>

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

מודלים עכבר הם בדיקות בחינת ביצועים עבור בלימודי סרטן vivo. עם זאת, עלות, זמן, שיקולים אתית הובילו שיחות חלופיות לvivo מודלים סרטניים. הקרום כוראלאלי ממברנה (CAM) המודל מספק חלופה זולה, מהירה המאפשרת ויזואליזציה ישירה של פיתוח הגידול מתאים הדמיה vivo. ככזה, ביקשו לפתח פרוטוקול מיטבי לחרט גינקולוגית ולהפוך גידולים אורולוגיים למודל זה, אשר אנו מציגים כאן. כ 7 ימים הפריה, תא האוויר מועבר לצד הvascularized של הביצה, שם נוצר פתח במעטפת. גידולים ממורין וקווי התאים האנושיים רקמות ראשיות ניתן לאחר מכן מצטלבים. אלה הם בדרך כלל שנזרע תערובת של מטריקס ובינוניות ובינוניים כדי למנוע פיזור הסלולר ולספק תמיכה מזינים עד התאים לגייס אספקת כלי דם. גידולים עשויים לצמוח לאחר מכן עד 14 ימים נוספים לפני בקיעה ביצה. על ידי שתילת תאים באופן בלתי נשכח עם גחלילית לוציפראז, הדמיה ביולומינסנציה יכול לשמש לאיתור רגיש של גידול בקרום והסרטן להתפשט לאורך העובר. מודל זה יכול לשמש לחקר הטווריגניות, פלישה, גרורות, ויעילות טיפולית. מודל מצלמת עוף דורש פחות זמן ומשאבים פיננסיים בהשוואה למודלים murine מסורתיים. מכיוון שהביצים הן בעיות חיסוני ועמידות חיסונית, רקמות מכל אורגניזם יכול להיות מושתל ללא בעלי חיים הטרנסגניים יקרים (למשל, עכברים) נדרש עבור השרשה של רקמות האדם. עם זאת, רבים מהיתרונות של מודל זה יכול להיות גם מגבלות, כולל את זמן הגידול הקצר הדור החיסוני/החיסונית המצב העמידות. בנוסף, למרות כל סוגי הגידולים המוצגים כאן בתוך מודל הקרום כוראלאלי העוף ממברנה, הם עושים זאת עם דרגות שונות של צמיחת הגידול.

עד כה, מצאנו את השיטה הזאת של השרשה כדי להצליח עבור סרטן השחלות, כליה, ערמונית, ושלפוחית השתן. כל אחד מהם היה מיטבי כדי לזהות תנאים ספציפיים לשרשה, למרות שייתכנו גמישות. של סוגי גידולים נבדק, הצמיחה סרטן השחלות היה הרבה פחות מבוטא ובדרך כלל לא גלוי ללא סיוע של הדמיה ביולומינסנציה (איור 1). עם זאת, ההתקשות של מצלמת יכול להיות מורגש עם מלקחיים באזור של השרשה. זה עשוי לעזור לזהות צמיחת הגידול אפשרי בהעדר הדמיה ביולומינסנציה, אם כי אימות נוסף יידרש באמצעות היסטול...

אנו מציגים את המודל ממברנה העוף כוראואליאלי כחלופה, השתלה שולחן, במודל vivo עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית תאים לסרטן וגידולים הנגזר החולה.

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

חריטה של גידולים על קרום העוף chorioallantoic, או CAM, ניתן להשתמש במחקרים של tumorigenicity, יעילות הטיפול או crosstalk הסלולר. שיטה זו מאפשרת גידול מהיר חסכוני בהגדרה אימונוטוולרנטית ב vivo. באמצעות מודל CAM, גישות טיפוליות חדשניות ניתן לבדוק במהירות באמצעות קווי תאים או אפילו דגימות גידול החולה.ההיבטים המכריעים ביותר של פרוטוקול זה הם הבטחת היווצרות מצלמת נאותה ולא לשבש את CAM או כלי דם בעת פתיחת הביצים. ביום התפתחותי שבע או שמונה כאשר CAM התפתחה במלואה, לכבות את מסובב הביצים ולהחנות כ 1-3 ביצים לתוך מתלה הביצים בארון biosafety. עם האורות כבויים, מניחים נר ביצה על קליפת הביצה כדי לזהות ולסמן את המיקום של תא האוויר של ביצה אחת, ולאחר מכן להזיז את נר הביצה מעל הקליפה כדי למצוא רשת כלי דם גדולה, סיבוב הביצה לפי הצורך.כלי דם אידיאלי יתענף ליד אמצע הביצה. השתמש בסמן כדי לעקוב אחר כלי הדם שישמש להשתלה. לאחר הפניית האור למכסה המנוע, השתמש בכלי סיבובי אלחוטי המצויד באבן שחיקה של קרביד סיליקון כדי לקדוח חור קטן במעטפת ישירות מעל מרכז תא האוויר.כאשר רוב הקליפה הוסרה אך עם קרום פנימי לבן שלם, לקדוח עוד חור קטן שבו חלון כלי הדם ייפתח כפי שהודגם רק. כאשר החור השני מוכן, השתמש במחט מד 18 כדי לנקב בעדינות את הממברנה הפנימית הלבנה מעל תא האוויר ואת כלי הדם דואג כי הממברנה הפנימית הלבנה, אבל לא את CAM, הוא שיבש לאורך כל האזור שנקדח. עם אור מכסה המנוע כבוי שוב, להשתמש בנר הביצה כדי לוודא כי תא האוויר הועבר מקצה הביצה לאזור מעל כלי הדם.במידת הצורך, מניחים צינורות ואקום מוכנס לתוך בקר פיפטה סביב החור מעל תא האוויר המקורי בעדינות להחיל יניקה בפרץ קצר כדי להזיז את תא האוויר. סמן את קווי המתאר של המיקום החדש של תא האוויר כ 0.5 ס"מ בתוך גבול מצלמת האוויר ולתקן חתיכת סרט אריזה רק גדול מספיק כדי לכסות את החור מעל תא האוויר החדש. לאחר הכנת שתי הביצים האחרות כפי שהודגם זה הרגע, החזירו את הביצים לאנקובטור ופתחו כל ביצים נוספות לניסוי בקבוצות של אחת עד שלוש כפי שהוכח.כאשר כל הביצים נפתחו, להעביר אחת עד שלוש ביצים עם תאי אוויר שהועברו אל מתלה הביצה בארון biosafety ולהשתמש בכלי סיבובי אלחוטי מצויד גלגל חיתוך עגול לחתוך קו קטן מעל גבול תא האוויר לחלוטין דרך התא מבלי לשבש את CAM או vasculature. באמצעות מספריים מעוגלים, לחתוך סביב תא האוויר הנותר כדי ליצור חלון במעטפת ולאמת את הכדאיות של העובר. עוברים בני קיימא יציגו כלי דם נרחבים, אלבומין ברור, תנועת עוברים ו/או פעימות לב נראות לעין.בעוברים שאינם ניתנים לשימוש, CAM עשוי להיראות אטום עם מעטים, אם בכלל, כלי קיים העוברים עשויים להיות קטנים או נעדרים ללא תנועה או פעימות לב. באמצעות מטליות סמקין, למשוך חתיכות קטנות של כותנה מכדור כותנה סטרילי בעדינות כתם את פני השטח CAM של העוברים קיימא כדי להסיר את כל אבק פגז ופסולת, ולאחר מכן לכסות את פתיחת הקליפה עם חתיכה אחת של שישה על שבעה סנטימטרים שקוף הסרט ההלבשה מבלי לגעת CAM ולהחזיר את הביצים לאנקובטור עם החלון נפתח פונה למעלה. השתמש חתיכת מתלה ביצה, הקצה של מסובב הביצה, או פריט מתאים אחר כדי לתמוך כל ביצים לשמור מתגלגל.כדי להכין השעיית תאים סרטניים להשתלה, לקצור את התאים מתרבות התאים הסרטניים של עניין ומעים את התאים על ידי צנטריפוגה. שאף את העל-טבעי ולחץ מחדש מכנית על התאים במדיום השיורי. מניחים את ההשעיה התא על קרח ולהשתמש פיפטה כדי למדוד את נפח התאים באמצעי.לאחר מכן בצע שימוש חוזר בתאים בריכוז של אחד עד שני מיליון תאים ב 20 עד 100 microliters של בינוני בתוספת 2.7 עד 4 מיליגרם למטריצה חוץ תאית מיליליטר וכל גורמי גדילה או תוספים אחרים של עניין. להשתלת תאים סרטניים, באמצעות טבעת שאינה מקל, מניחים עד שש ביצים להיות מושתלים על מתלה הביצים ולגלגל את הקצוות של הסרט השקוף להתלבש לכיוון החלון הפתוח כדי להסיר את הסרט מן הקונכיות. בדוק אם הביצים הן קיימא ובריאות.ביצים אידיאליות יהיו כלי גדול עם כלי הסתעפות קטנים יותר בתוך מרכז השטח שנפתח. באמצעות מדפים קשתית מעוקלת, מניחים טבעת סטרילית שאינה מקל על CAM מעל כלי השיט באופן אידיאלי מעל נקודת ענף. השתמש מוט ערבוב זכוכית סטרילית בעדינות שוחקים את CAM ו pipette ההשעיה תא סרטן למרכז הטבעת.כאשר כל התאים נמסרו, לאטום את הפתח עם חתיכה של רבע אחד של שישה על שבעה סנטימטרים שקוף הסרט ההלבשה ולתייג את הביצה עם ייעוד שתל מתאים. לאחר מכן מניחים את הביצים בבטחה באינקובטור עם פתיחת הקליפה הפונה זקוף. כדי להשתיל תאים סרטניים ללא שימוש בטבעת שאינה מקל, שאף את ההשעיה התא לתוך קצה פיפטה בגודל מתאים והחזקת החלק העליון של הקצה בזהירות להוציא את קצה פיפטה ולהמקם את הקצה אופקית לתוך צלחת סטרילית 10 ס"מ רקמות תרבות.לאחר שהטיפים נטענו, מניחים את המנה באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 עד 30 דקות, בודקים פולימריזציה לאחר 15 דקות. כמות קטנה של נוזל בדרך כלל לדלוף החוצה כמו כל קצה ממוקם בצלחת. השתמש בנוזל זה כדי להעריך את היקף הפולימריזציה בתוך הקצה.כאשר המטריצה מוכנה, מניחים קצה אחד על פיפטה בגודל מתאים ומדכאים את הבוכנה כדי לאלץ את מתלי התאים המפולגים חלקית אל ה- CAM באופן אידיאלי מעל הנקודה המסועפות של כלי גדול ומפותח. בשיטות אלה, הן קווי תאים סרטניים של סרטן השחלות האנושית והן מורין וחתיכות הגידול העיקריות הביאו לחריטה מוצלחת של גידולים עם מורפולוגיות התואמות לאלה שנצפו במודלים אחרים של vivo. מתוך סוגי הגידולים שנבדקו, צמיחת סרטן השחלות הייתה הרבה פחות בולטת ובדרך כלל לא נראתה ללא סיוע של הדמיה bioluminescence.ההשפעות של הוספת גורמי גדילה או הורמונים בזמן ההשתלה ניתן לבדוק גם באמצעות שיטות אלה. עבור סרטן הכליות, ההשתלה של תאים צלולים תאי הכליה קרצינומה של תאים מקווי תאים הוקמה או חתיכות מגידולים כליות אנושיים ראשוניים מייצרת היווצרות גידול מהירה וחזקה. כמו כן, מספר קווי תאים סרטניים של סרטן הערמונית האנושית ומורין וקווי תאים סרטניים בשלפוחית השתן האנושית וחתיכות הגידול העיקריות שימשו לביסוס גידולים באמצעות מודל זה.זה חיוני כדי למנוע שיבוש CAM ואת כלי הדם ולוודא כי CAM אינו לדבוק הקליפה בעת פתיחת החלון. לאחר חריטה מוצלחת, מודל CAM יכול לשמש כדי להעריך את היעילות הטיפולית של טיפולים של עניין או אינטראקציות בין סוגי תאים שונים בתוך הגידול.

using-chicken-chorioallantoic-membrane-vivo-model-to-study

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בסרטון זה, אנו מתארים טכניקה לפתיחת קליפת הביצה של ביצת תרנגולת מופרית כדי לחשוף את הקרום הכוריאואלנטואי שלה או CAM הנושא רשת של כלי דם מסתעפים. ה- CAM החשוף יכול לשמש במידול גידולי ביצו.

חלון ביצים: שיטה לפתיחת קליפת ביצי תרנגולת מופרית לחשיפת כלי הדם של הממברנה הכוריאואלנטואית

בסרטון זה, אנו מתארים השתלה של תאים סרטניים על קרום כוריואלנטואי של תרנגולת כדי ליצור מודל in ovo. המודל משתיל בהצלחה את תאי סרטן השחלות כדי לחקור את התקדמות הסרטן הגינקולוגי.

מודל סרטן מבוסס קרום עוף Chorioallantoic: מודל In Ovo לחקר גידולים וגרורות של תאים סרטניים

סרטון זה מדגים את ההליך של הזרקה תוך ורידית של תאים סרטניים לתוך כלי הדם של קרום כוריואלנטואי תרנגולת כדי ליצור מודל גרורות סרטניות CAM. התאים המוזרקים יוצרים בסופו של דבר מושבות מפוזרות של תאים חד-סרטניים, מה שמאפשר לחקור פלישה וגרורות של סרטן.

הזרקה תוך ורידית של תאים סרטניים לתוך כלי הדם של קרום כוריואלנטואי עוף: הליך להקמת מודל סרטן קרום כוריואלנטואי לחקר פלישה לסרטן וגרורות

בסרטון זה, אנו מתארים את השיטה לתרבית משותפת של גרעיני שורש גביים ותאים סרטניים על קרום כוריאואלנטואי אפרוח או CAM כדי לחקור פלישה פריעצבית.

Chick Chorioallantoic Membrane או CAM Tumor Model: שיטת In Ovo להדמיית פלישה פריעצבית של תאי גידול

סרטון זה מדגים את בידודו של קרום כוריאואלנטואי נושא גידול מעובר התרנגולת. ניתן להשתמש ב- CAM שנקצר ליישומים נוספים במורד הזרם.

קציר קרום צ'וריואלנטואי אפרוחים: שיטה לבידוד קרום כוריאואלנטואי נושא גידול מביצת תרנגולת

הממברנה הכוריואלנטואית של הגוזל (CAM) היא חסרת חיסון ובעלת כלי דם גבוהים, מה שהופך אותה למודל טבעי in vivo של צמיחת גידול ואנגיוגנזה. בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה אמינה לגידול גידולי קרצינומה תלת מימדיים של הכבד (HCC) באמצעות בדיקת CAM.

<em&gt; באוב</emAssay&gt; אפרוח chorioallantoic ממברנה (CAM) כמודל xenograft יעיל של Hepatocellular Carcinoma

הפלישה הנקבים הוא פנוטיפ אגרסיבי הראש והצוואר קרצינומה של תאים וגידולים אחרים. מודל הממברנה של האפרוח שימש ללימוד אנגיוגנזה, הפלישה לסרטן וגרורות. כאן אנו מדגימים כיצד מודל זה יכול להיות מנוצל כדי להעריך את הפלישה הנקבים בvivo.

ממברנה של צ'יק כוראלאנטוניק במודל Vivo להערכת הפלישה לתוך הראש ולסרטן הצוואר

ברור גרורות תא כליות קרצינומה של תאים היא מחלה ללא מודל בעל חיים כולל לחקירה יסודית מראש. פרוטוקול זה ממחיש שני מודלים של בעלי חיים חדשניים עבור המחלה: מודל העכבר המושתל אורתולמריחה ומודל ממברנה של עוף כוראלואלי, שניהם הפגינו גרורות בריאות הדומה למקרים קליניים.

השוואת הכליה גרורות תא כליות קרצינומה של תא מודל הוקמה בתוך כליה העכבר על עוף כוראולאלי ממברנה

פרוטוקול זה מתאר שלוש שיטות כיצד להשיג ולהשתמש בעוברי עוף בני 5 עד 8 ימים ובממברנה הכוריאואלנטואית שלהם (CAM) כמודל in vivo לחקר הדמיית אולטרסאונד משופרת ניגודיות ואספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות.

הכנת עוברי עוף אקס אובו וכלי קרום כוריואלנטואיים כמודל In Vivo להדמיית אולטרסאונד משופר ניגודיות ומחקרי אספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות

זוהי שיטה יעילה לסנן מדכאים או נהגים של גרורות סרטן. תאים, המועברים בספריית ביטויים, מוזרקים לתוך כלי הקרום chorioallantoic עוף כדי ליצור מושבות גרורתיות. מושבות שיש להם ירידה או פולשניות מוגברת הם excised, מורחב, reinjected כדי לאשר פנוטיפ שלהם, ולבסוף, מנותח באמצעות רצף תפוקה גבוהה.

גילוי של רגולטורים גרורתיים באמצעות מודל ממברנה צ'יק תוך-ויאטואי מהיר וכמותי

במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לפיתוח מודל קסנוגרפטינג של קרום כוריואלנטואי אפרוח (CAM) עבור רקמת שחלה אנושית ומדגימים את יעילות הטכניקה, מסגרת הזמן של רה-וסקולריזציה של השתל ויכולת הקיום של הרקמה על פני תקופת השתלה של 6 ימים.

מודל הממברנה הכוריאואלנטואית של אפרוח (CAM) ככלי לחקר השתלת רקמת שחלה

למדו שימוש בקרום כוראלי ממברנה של עוף (CAM) כמודל in vivo לחקר סרטן גינקולוגי ואורולוגי. שיטה זו מאפשרת צמיחה מהירה של גידולים בסביבה חסינית לבדיקת טיפולים חדשניים.

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

גלה סרטונים נוספים