Name: הערכת היכולת הייחודית ביותר לגיל מיוחד למבוגרים דרוזופילה מלאנוטציטים באמצעות שיטת בVivo פגוציטוזה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-11T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: למדו להעריך פעילות פגוציטוזה בתאי דם של Drosophila melanogaster צעירים ומבוגרים בשיטת in vivo. הפרוטוקול מאפשר כימות אירועים פגוציטיים בכל תא בנפרד וחשיפת הבדלים בין גנוטיפים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו היתה נתמכת על ידי מענקים מן המכון הלאומי לבריאות R03 AG061484-02 ואת המכללה המדע הטבעי והמתמטי של מדעי המדינה באלה דיקנסון הפקולטה קרן.

<ol><li>Abhyankar, V., Kaduskar, B., Kamat, S. S., Deobagkar, D., Ratnaparkhi, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DNA%2FRNA+methyltransferase+contributes+to+robust+host+defense+in+ageing+animals+by+regulating+sphingolipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila DNA/RNA methyltransferase contributes to robust host defense in ageing animals by regulating sphingolipid metabolism.</a> The Journal of Experimental Biology. 221, Pt 22 (2018).</li>
<li>DeVeale, B., Brummel, T., Seroude, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+and+aging%3A+the+enemy+within%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunity and aging: the enemy within.</a> Aging Cell. 3 (4), 195-208 (2004).</li>
<li>Gomez, C. R., Nomellini, V., Faunce, D. E., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and aging.</a> Experimental Gerontology. 43 (8), 718-728 (2008).</li>
<li>Panda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+innate+immunosenescence%3A+causes+and+consequences+for+immunity+in+old+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human innate immunosenescence: causes and consequences for immunity in old age.</a> Trends in Immunology. 30 (7), 325-333 (2009).</li>
<li>Aw, D., Silva, A. B., Palmer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+emerging+challenges+for+an+ageing+population%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: emerging challenges for an ageing population.</a> Immunology. 120 (4), 435-446 (2007).</li>
<li>Min, K. -J., Tatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+molecular+mechanism+of+immunosenescence+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Unraveling the molecular mechanism of immunosenescence in Drosophila.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), 2472(2018).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+a+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Banerjee, U., Girard, J. R., Goins, L. M., Spratford, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+genetic+model+for+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a genetic model for hematopoiesis.</a> Genetics. 211 (2), 367-417 (2019).</li>
<li>Rämet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+phagocytosis+and+identification+of+a+Drosophila+receptor+for+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli.</a> Nature. 416 (6881), 644-648 (2002).</li>
<li>Garschall, K., Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+immunity+and+aging+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">The interplay between immunity and aging in Drosophila.</a> F1000Research. 7, (2018).</li>
<li>Brennan, C. A., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+The+genetics+of+innate+immune+recognition+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Drosophila: The genetics of innate immune recognition and response.</a> Annual Review of Immunology. 22 (1), 457-483 (2004).</li>
<li>Rosales, C., Uribe-Querol, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+a+fundamental+process+in+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: a fundamental process in immunity.</a> BioMed Research International. 9042851, Research article (2017).</li>
<li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagosome+maturation%3A+going+through+the+acid+test%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Phagosome maturation: going through the acid test.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 9 (10), 781-795 (2008).</li>
<li>Stuart, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+analysis+of+the+Drosophila+phagosome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A systems biology analysis of the Drosophila phagosome.</a> Nature. 445 (7123), 95-101 (2007).</li>
<li>Mackenzie, D. K., Bussière, L. F., Tinsley, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence+of+the+cellular+immune+response+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Senescence of the cellular immune response in Drosophila melanogaster.</a> Experimental Gerontology. 46 (11), 853-859 (2011).</li>
<li>Horn, L., Leips, J., Starz-Gaiano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+ability+declines+with+age+in+adult+Drosophila+hemocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Phagocytic ability declines with age in adult Drosophila hemocytes.</a> Aging Cell. 13 (4), 719-728 (2014).</li>
<li>Elrod-Erickson, M., Mishra, S., Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+cellular+and+humoral+immune+responses+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Interactions between the cellular and humoral immune responses in Drosophila.</a> Current Biology. 10 (13), 781-784 (2000).</li>
<li>Garg, A., Wu, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Rab14+mediates+phagocytosis+in+the+immune+response+to+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Drosophila Rab14 mediates phagocytosis in the immune response to Staphylococcus aureus.</a> Cellular Microbiology. 16 (2), 296-310 (2014).</li>
<li>Bloomington Drosophila Stock Center: Indiana University Bloomington. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html">https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html</a> (2019).</li>
<li>Fellous, S., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+food+quality+affects+adult+%28but+not+larval%29+immune+gene+expression+independent+of+effects+on+general+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">Larval food quality affects adult (but not larval) immune gene expression independent of effects on general condition.</a> Molecular Ecology. 19 (7), 1462-1468 (2010).</li>
<li>Kurucz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemese%2C+a+hemocyte-specific+transmembrane+protein%2C+affects+the+cellular+immune+response+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Hemese, a hemocyte-specific transmembrane protein, affects the cellular immune response in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (5), 2622-2627 (2003).</li>
<li>Goto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+haemocyte-specific+protein%2C+hemolectin%2C+similar+to+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">A Drosophila haemocyte-specific protein, hemolectin, similar to human von Willebrand factor.</a> Biochemical Journal. 359, Pt 1 99-108 (2001).</li>
<li>Cevik, D., Acker, M., Michalski, C., Jacobs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardin%2C+a+Drosophila+collagen%2C+facilitates+accumulation+of+hemocytes+at+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Pericardin, a Drosophila collagen, facilitates accumulation of hemocytes at the heart.</a> Developmental Biology. 454 (1), 52-65 (2019).</li>
<li>Ghosh, S., Mandal, S., Mandal, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+proliferation+of+adult+hemocytes+in+Drosophila+by+BrdU+incorporation+and+PH3+expression+in+response+to+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Wellcome+Open+Research%22%5BJournal%5D)">Detecting proliferation of adult hemocytes in Drosophila by BrdU incorporation and PH3 expression in response to bacterial infection.</a> Wellcome Open Research. 3, (2018).</li>
<li>Hao, Y., Yu, S., Luo, F., Jin, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jumu+is+required+for+circulating+hemocyte+differentiation+and+phagocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Jumu is required for circulating hemocyte differentiation and phagocytosis in Drosophila.</a> Cell Communication and Signaling. 16 (1), 95(2018).</li>
<li>Petraki, S., Alexander, B., Brückner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+blood+cell+populations+of+the+Drosophila+melanogaster+larva%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assaying blood cell populations of the Drosophila melanogaster larva.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), (2015).</li>
<li>Gyoergy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+allowing+independent+visualization+and+genetic+manipulation+of+Drosophila+melanogaster+macrophages+and+surrounding+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22G3%3A+Genes%2C+Genomes%2C+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tools allowing independent visualization and genetic manipulation of Drosophila melanogaster macrophages and surrounding Tissues.</a> G3: Genes, Genomes, Genetics. 8 (3), 845-857 (2018).</li>
<li>Bosch, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cells+of+adult+Drosophila+do+not+expand%2C+but+control+survival+after+bacterial+infection+by+induction+of+Drosocin+around+their+reservoir+at+the+respiratory+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Blood cells of adult Drosophila do not expand, but control survival after bacterial infection by induction of Drosocin around their reservoir at the respiratory epithelia.</a> BioRxiv. 578864, (2019).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

הפרוטוקול המתואר כאן הוא דרך אמינה לכמת היבטים שונים של phagocyציטוזה, תחת תנאים ניסיוניים מבוקרת. אנו מודעים לכך יש לנו רק בדקנו את ההליך הזה עם חלקיקים בקטריאלי גראם שליליים ותוצאות עשויות להיות שונות אם חלקיקים בקטריאלי גראם חיוביים משמשים. אכן, זה יהיה מעניין להשוות את התגובות phagocytic הן חיידקים גרם שלילית גראם חיוביים בתנאים ניסיוניים שונים. השימוש בננו-מזרק מאפשר שליטה מדויקת על אמצעי הזרקה, ולהבטיח שכל זבוב מוזרק באותו נפח של חלקיקים. מגבלה אחת לפרוטוקול נובעת מחוסר עקביות בהכנות לחלקיקים. חלקיקים יהיה לצבור פעם קפואים, אז וריאציות קטנות בכמויות דילול, או חוסר vortexing, יכול להשפיע על ריכוז חלקיקים בין ניסויים. כדי למזער וריאציות אפשריות בריכוזי חלקיקים בין הגילאים, מועיל להזריק זבובים בני 1 ו-5 שבועות באותו היום, תוך שימוש באותו פתרון מחט וחלקיקים. חיסרון פוטנציאלי נוסף הוא שבמהלך הניתוח ניתן לפגוע בכלי הקיבול ו/או בקוטיקולה בקלות אם פינים אינם מטופלים כראוי. כדי להימנע מהפרעה לכלי הקיבול, יש למזער את מספר הפינים הנמצאים בשימוש בכל ניתוח. היתרון של שיטת הניתוח הוא כי כל קיבעון, שטיפת שלבים וכתמים ניתן לבצע בלוחית הניתוח. מכיוון שציפורנייך מוצמדים, פעולה זו מונעת את הציפורנייך מאיבוד בין שלבים.
בהשוואה לשיטות הקיימות18,19,25,26,27,28,29, לפרוטוקול המתואר יש יתרונות ומגבלות. על ידי מבתר את הכלי הגבי, אנו מסוגלים להמחיש ולכמת הומוציטים הפרט במיקום זה. זה מאפשר לזהות וריאציות עדינות בפעילות phagocytic בין קבוצות ניסיוני. שיטות אחרות להמחיש חלקיקים מתויג באופן שונה על ידי איסוף הומוציטים באמצעות בליד/שריטהבדקה19,25,26,27, או באמצעות קוטיקולה שלמה,18,19,28,29; עם זאת, הומוציטים בודדים לא ניתן להעריך כאשר דמיינו דרך הקוטיקולה הגבי. היתרון של פרוטוקול זה, כאשר בהשוואה לשיטת הבליד/שריטה הוא שהשיטה שלנו מאפשרת לנו להעריך רק את אותם הומוציטים הקשורים לכלי הקיבול, והיא מהווה חשבון למחזור תאים או לאלה שלאורך קיר הגוף, שעשויים להיות שונים מבחינה פונקציונלית. מבתר את הספינה התחתית גם מסיר את הצורך לכלול סיבוב שני של זריקות עם הקונקויום הפלואורסצנטית, כמו טרימין כחול19,26. הסיבה לכך היא כי כל החלקיקים לא מאוגד או נבלע על ידי תא יהיה שטף משם במהלך שטיפת שלבים. לעומת זאת, שיטות חלופיות עשויות להיות קלות יותר לביצוע מכיוון שהן אינן דורשות ניתוח. בעוד מבתר את הספינה התחתית קל ללמוד, שלב זה מוסיף רמה של מורכבות זה לא יכול להיות אפשרי בכמה עיצובים ניסיוניים.
למרות השימוש המתואר זה בשנת vivo phagocyציטוזה להעריך ולכמת אירועים phagocytosis בין גילאים שונים, פרוטוקול זה הוא מאוד להתאמה והוא יכול לשמש כדי לנתח היבטים שונים של phagocyציטוזה בין גנוטיפ, מין, או רקמה סוג. עם phagocyציטוזה להיות בעל חשיבות מרכזית עבור רוב בעלי חיים מטבעות, הבנת כיצד תהליך זה מסרב עם הגיל יכול להוביל טיפולים טיפוליים טובים יותר עבור אוכלוסיית ההזדקנות. גישה זו מציעה פוטנציאל לטווח ארוך להסבר היבטים של שינויים הקשורים לגיל בתגובה החיסונית, עם דגש מיוחד על phagocyציטוזה.

המערכת החיסונית הטבועה, המורכבת ממחסומים פיזיים וכימיים לזיהום, כמו גם רכיבים סלולריים, הוא שימור אבולוציוני על פני אורגניזמים רב-תאיים1,2. כמו קו ההגנה הראשון, מערכת החיסון מולדת משחק תפקיד קריטי במאבק הפולשים פתוגנים בכל החיות1,2,3. המרכיבים של התגובה החיסונית מולדת כוללים מגוון רחב של סוגי תאים אשר מסווגים על בסיס כי הם חסרים ספציפיות זיכרון אימונולוגיים2,3,4. בבני אדם, סוגי תאים אלה כוללים מונוציטים phagocytic ו מקרופאגים, נויטרופילים, ו ציטוטוקסיים טבעי הרוצח תאים4,5. בעוד שיש מערכת חיסונית תפקודית היא הכרחית עבור הישרדות מארח, ברור כי הפונקציה של תאים חיסוניים ירידות עם הגיל, תופעה הידועה בשם חיסוני5,6. היכולת להעריך את השינויים הקשורים בגיל בתגובה החיסונית, כולל היבטים שונים של תהליך של phagocyציטוזה, יכול לסייע ההבנה שלנו של המערכת החיסונית. ההליך שאנו מתארים כאן מספק גישה יעילה לשחזור להעריך ולכמת אירועים phagocytic ידי הומוציטים ב Drosophila ילה melanogaster.
דרוזופילה היא מודל אידיאלי לחקר התגובה החיסונית מסיבות רבות. עבור אחד, יש קבוצה נרחבת של כלים גנטיים זמינים אשר מאפשרים לתמרן בקלות ביטוי גנים בצורה תלוית רקמות7. כלים אלה כוללים אוסף של מוטציות, RNA הפרעות מניות, GAL4/UAS מניות, ואת Drosophila פאנל התייחסות גנטית המכילה 205 שונים שורות שונות שעבורן רצפי הגנום כולו מקוטלגים8. מחזור החיים הקצר של דרוסופילה והמספר הגדול של אנשים שיוצרו מאפשרים לחוקרים לבדוק אנשים מרובים בסביבה מבוקרת, בפרק זמן קצר. זה משפר מאוד את היכולת לזהות הבדלים עדינים בתגובות החיסונית לזיהום בין גנוטיפים, בין המינים או לאורך הגילאים. חשוב מכך, רכיבים גנטיים רבים ופונקציות של התגובה החיסונית מולדת, כולל phagocyציטוזה, הם שימור אבולוציונית בין מדרוזוהילה ויונקים1,2.
בדרוזופילה, תהליך הפייגוציטוזה הנובע מזיהום מבוצע על ידי המטוציטים phagocytosis המכונה פלמטוציטים, אשר שוות ערך למקפאגים של יונקים9. הומוציטים חיוניים לזיהוי מגוון רחב של חלקיקים וניקוי פתוגנים מחיידקים9,10,11,12,13. תאים אלה לבטא מגוון של קולטנים שחייבים להבדיל את עצמי מפני לא עצמית, וליזום אירועים איתות הדרושים כדי לבצע את התהליך phagocytic10,11,12,13,14,15. לאחר חלקיק מאוגד, הוא מתחיל להיות הפנימו על ידי ארגון משנה של שלד אקטין ושיפוץ של קרום פלזמה להתרחב סביב החלקיקים, ויצרו גביע phagocytic11,12,13,14. במהלך תהליך זה, קבוצה נוספת של אותות מורה לתא להפנים את החלקיקים עוד על ידי סגירת הגביע phagocytic, ויוצרים ממברנה מאוגד phagoכמה11,12,13,14,15. Phagosome לאחר מכן עובר תהליך התבגרות, שיוך עם חלבונים שונים ומיזוג עם ליסוזומים, ויצרו phagolyso, חומצי חומציים11,12,13,14,15. בשלב זה, חלקיקים יכולים ביעילות להיות מושפל ומסולק11,12,13,14,15. מחקרים דרוזוהילה חשפו כי זבובים מבוגרים יותר (4 שבועות של גיל) יש יכולת מופחתת לנקות זיהום בהשוואה לזבובים צעירים (בן שבוע אחד), כנראה בשל, לפחות בחלק, לירידה בהיבטים מסוימים של phagocyציטוזה16,17.
השיטה המתוארת כאן משתמשת בשני חלקיקים שאינם מתויג בחום של החיידק הקולי , האחד הנושא את מערכת האנטי-וולופפור הסטנדרטית, והוא בעל החומציות הרגישה, כדי להעריך שני היבטים שונים של פאגוציטוזה: הדבר הראשוני של חלקיקים, ואת השפלה של חלקיקים phagolyso, בתוך הקפדה זו, פלואורו-חלקיק פלואורסצנטית הוא הנצפה כאשר החלקיקים מאוגדים ונבלע על-ידי הומוציטים, ואילו חלקיקי ה-pH רגישים בלבד בתנאי ה-pH נמוך של phagosome. אירועי פלורסנט ניתן לצפות הומוציטים הנמצאים לאורך כלי הקיבול. אנו מתמקדים הומוציטים מקומי לכלי הקיבול, אשר מספקים נקודת ציון אנטומית לאתר הומוציטים אשר ידועים לתרום לסיווג חיידקי, ולבודד אותם בעקביות. עם זאת, הומוציטים בחלקים אחרים של הגוף המוליקמ הם גם חשובים עבור סיווג. למרות שאנחנו לא למדו את האוכלוסייה הזאת התאים, ההליך הכללי שלנו יכול להיות ישים עבור phagocytic בחני ספר של תאים אלה גם. אחד היתרונות של הגישה שלנו הוא שאנחנו יכולים לכמת אירועים phagocytic בתוך הומוציטים בודדים, המאפשר לנו לזהות וריאציה עדינה בתהליכים phagocytic. מחקרים אחרים המדמיינים את אירועי הפלורסנט דרך הקוטיקולה18,19 אין להתחשב בהבדלים במספרי הומוציטים הנוכחים, שחשוב במיוחד לשקול במקרה שלנו כספירות מוחלטת של הומוציטוט צפויים להשתנות עם הגיל17.

<table><tbody><tr><td>סיכות חרקים 0.10 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td>כאן: סיכות נחתכות לשניים, והקצה החד משמש</td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרקים סטריליים</td><td>Becton Dickinson</td><td>309602</td><td>מלא בשמן מינרלי לטעינת מחט</td></tr><tr><td>15% סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>למדיית דיסקציה</td></tr><tr><td>16% Paraformaldehyde</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td>בדרגת EM, 4% עובד, מדולל ב-1X PBS</td></tr><tr><td>1x מי מלח חוצץ פוספט (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל Trasnfer Pipet</td><td>Falcon</td><td>357524</td><td></td></tr><tr><td>3.5 אינץ' נימי זכוכית</td><td>Drummond</td><td>3-000-203-G/X</td><td>1.14 מ"מ OD X 3.5 אינץ' אורך X 0.53 אינץ' תעודת זהות</td></tr><tr><td>35x10 מ"מ צלחות פטרי</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>351008</td><td>משמש כצלחת חיתוך, מלא בחצי הדרך Sylgard</td></tr><tr><td>6x פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>למדיית דיסקציה</td></tr><tr><td>70% גליצרול</td><td>Sigma</td><td>G9012</td><td></td></tr><tr><td>מערבל מערבולת אנלוגי</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים נקודתיים ביולוגיים, Dumont No. 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)</td> <td>Life Technologies</td><td>D1306</td><td>מדולל 1:1000 בזן</td></tr><tr><td></td><td></td> PBST<td>Drosophila</td><td>1x w[*]; P{w[+mC]=He-GAL4.Z}85, P{w[+mC]=UAS-GFP.nls}8</td></tr><tr><td>E. coli (זן K-12) BioParticles&trade;, Alexa Fluor&trade; 594 Conjugate</td><td>Life Technologies</td><td>E23370</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית שקופיות</td><td>Premiere</td><td>D17026102</td><td></td></tr><tr><td>Live Cell Imaging</td><td>Solution Life Technologies</td><td>A14291DJ</td><td>מאגר מועדף להכנת חלקיקים ודילול</td></tr><tr><td>שמן מינרלי</td><td>Mpbio</td><td></td><td></td>194836</tr><tr><td>Nanoject II מזרק ננוליטר אוטומטי</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>צר פוליסטירן סופר בתפזורת בקבוקוני Drosophila</td><td>Genesee</td><td>32-116SB</td><td>גודל: 25 X 95 מ"מ</td></tr><tr><td>מיקסר אגוזים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>88-861-043</td><td>מהירות בשימוש: 20 סל"ד</td></tr><tr><td>pHrodo&trade; אדום E. coli BioParticles ומסחר; מצומד לפגוציטוזיס</td><td>Life Technologies</td><td>P35361</td><td></td></tr><tr><td>שניידר Drosophila Cell Culture Media (1x)</td><td>Gibco</td><td>21720-024</td><td>מדיית דיסקציה, משלבת: שניידרס, FBS ועט/סטרפטוקוקוק; מסנן לעקר</td></tr><tr><td>נתרן</td><td>אזיד Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>2mM (או 20%) מספריים</td></tr><tr><td>קפיציים</td> עובדים <td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 סיליקון אלסטומר</td> אלקטרונים <td>מיקרוסקופיה מדעי</td><td>24236-10</td><td>הכן על פי הפרוטוקול שסופק</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td>עבור PBS + 0.1%</td></tr><tr><td>טווין חולץ פיפטה אנכי דגם 700C</td><td>דיוויד קופף מכשירים</td><td>812368</td><td>מחמם: 55? סולנואיד: 45</td></tr><tr><td>Zeiss AxioImager.Z1 מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>Zeiss</td><td></td><td>כאן: מערכת הפרעות מבניות Apotome עם תוכנת הדמיה Zeiss Zen</td></tr></tbody></table>

הערכת היכולת הייחודית ביותר לגיל מיוחד למבוגרים דרוזופילה מלאנוטציטים באמצעות שיטת בvivo פגוציטוזה

Assessing the Age-Specific Phagocytic Ability of Adult Drosophila melanogaster Hemocytes using an In Vivo Phagocytosis Assay

Phagocyציטוזה היא פונקציה חיונית של התגובה החיסונית מולדת. תהליך זה מבוצע על ידי הומוציטים phagocytic אשר תפקידה העיקרי הוא לזהות מגוון רחב של חלקיקים ולהרוס פתוגנים מיקרוביאלית. כמו בגיל האורגניזמים, תהליך זה מתחיל לרדת, אך מעט ידוע על המנגנונים הבסיסיים או את הבסיס הגנטי של החיסוני. כאן, זריקה המבוססת על הvivo של phagocyציטוזה משמש להערכת שינויים הקשורים גיל בהיבטים שונים של phagocyציטוזה, כגון קשירה, השפלה והשפלות של חלקיקי הפנפניט, על ידי החלפת אירועים מסוג phagocytosis ב הומוציטים אצל מבוגרים דרוזופילה. דרוזופילה מלאנוגסטר הפך למודל אידיאלי כדי לחקור שינויים הקשורים גיל בתפקוד החיסוני הטבוע מסיבות רבות. עבור אחד, מרכיבים גנטיים רבים ופונקציות של התגובה החיסונית מולדת, כולל phagocyציטוזה, הם שמרו אבולוציונית בין היונקים האלה. בגלל זה, התוצאות שהתקבלו משימוש בפרוטוקול זה צפויים להיות רלוונטיים באופן נרחב כדי להבין את גיל שינויים הקשורים בתפקוד החיסוני במגוון של אורגניזמים. בנוסף, אנו מודעים לכך ששיטה זו מספקת הערכות כמותיים של יכולת phagocytic, אשר יכול להיות שימושי עבור מגוון של נושאי מחקר, ולא צריך להיות מוגבל למחקרים של הזדקנות.

כדי להמחיש את שיטות ההזרקה המתוארות, איור 1A מציג את אתר ההזרקה על דרוסופילה מלאנוסטר, כמו גם איך צבע המזון מאפשר אישור חזותי שהזבוב הזריק (איור 1a). תוספת של צבע מזון גם מסייע הכרה של מחט סתומה. זריקות ניתן לבצע בבטן, אבל לשמור על אתר ההזרקה עקבית על פני ניסויים. פעולה זו תסייע למזער את הווריאציות האפשריות בין כל ניסוי.
כדי להמחיש את החלקיקים המסומנים באופן פלואורוסקופים בתוך הומוציטים הקבועים לאורך כלי הקיבול, ניתחנו את הכלי הפנימי וקוטיקולה הבטן המצורפת. איור 2א-פ מתווה את שיטות החיתוך.
כדי להעריך את היכולת הספציפית לגיל של זבובים צעירים ובגיל לבצע phagocyציטוזה, הומוציטים לאורך הספינה הרכה הם דמיינו באמצעות מיקרוסקופ פלורסנט. כדי להבטיח כי רק תאים לאורך כלי הקיבול הם נספרים, נוגדנים או gfp-מתויגים גנים עבור סמנים תא דם מסוימים או קולגן ספציפי הלב, כגון Hemese ו- הומולטין, או קרום הלב (איור 3), בהתאמה, ניתן להשתמש22,23,24. התוויות של החיידק הקולי הם 1 מ"מ באורך, בעוד הומוציטים הם 10 מ"מ בקוטר17. רק אירועי פלורסנט הממוקמים בקוטר של 10 מ"מ ממורכזים בגרעין DAPI-חיוביים נספרים (איור 4). כדי לכמת אירועי פלורסנט, נעשה שימוש בתוכנת ImageJ (איור 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig1.jpg"> איור 1: אתר הזרקה ואימות חזותי. (א) צד צדדי של בית החזה הוא נדקר עם מחט משכה נימי. (ב) זריקות מאומתות באופן חזותי על ידי הוספת צבע מזון ירוק לפתרון חלקיקים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig2.jpg"> איור 2: קרע בכלי הקיבול. (א) פינים מוצבים בבית החזה ובבטן האחורי (חיצים שחורים). (B-C) שני חתכים אופקיים (חיצים ירוקים) נעשים בקצה האחורי של הבטן (ב), ואת הקצה הקדמי (C). (ד) חתך אנכי (חץ ירוק) מורכב באמצע הבטן, חיבור שתי החתכים האופקיים. (ה) פינים אופציונליים (*) משמשים לפילה את חלל הבטן וחשיפת רקמות פנימיות. (ו) רקמות פנימיות (חיתוך, בטן, רחם, שחלות, גופי שומן) מוסרים, וחושפים את הכלי הקדמי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig3.jpg"> איור 3: מבט מגחוני על כלי גזור מנקבה בת 5 שבועות שהוזרק עם חלקיקים בעלי חומציות רגישה, ומוכתם בנוגדן המכוון נגד רקמת הלב (א). קו לבן מנוקד מתווה את הצד הצדדי של הספינה הקדמית, עם חץ המצביע לעבר האזור הקדמי. (ב) תמונה מוגדלת של (א): אשכולות של הומוציטים (חץ כחול) שהיו חיידקים משפילים באופן פעיל, בתוך תא אבי העורקים הראשון של הספינה הראשונה. (ג) תמונה מוגדלת של (א) לחלוקה לרמות של מטריצה המומנת (ecm) חלבון כמו קולגן, בקרום הלב (החץ הירוק), המחזיק את הכלי הראשוני במקום24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig4.jpg"> איור 4: בגזור הספינה הקשורים הומוציטים מתוך זבוב נקבה הוזרק עם חלקיקי pH רגישים, או fluoro-חלקיקים. (א) הכלי הגבי והומוציטים המשויכים לאלה הקשורים ל-pH-מתויג בעלי רגישות גבוהה . הקולי חלקיקים (אדום), או (E) Fluoro-מתויג החלקיקים E. coli (אדום), מבודד מזבוב בן שבוע 1, לאחר התאוששות עבור 60 דקות (ב, F) הזחה מוגדלת של (A) ו (E) (קופסה לבנה), בהתאמה, מראה שני הומוציטים בודדים עם אירועים משני. (ג) הכלי הדו והומוציטים המשויכים עםהחומרהמשוכן הרגיש של pH . הקולי חלקיקים (אדום), או ( G) Fluoro-מתויג החלקיקים E. coli (אדום), מבודד מזבוב בן 5 שבועות, לאחר שהחלים עבור 60 דקות (D, H) הכניסה מוגדלת של (C) ו (G) (קופסה לבנה), בהתאמה, מראה שני הומוציטים בודדים עם אירועים בטבלה. קו לבן מנוקד מתווה את הצד הצדדי של הספינה הקדמית, עם חץ המצביע לעבר האזור הקדמי. גרעינים מוכתם עם DAPI (כחול). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig5.jpg"> איור 5: בדיקת אירועי phagocytic בתוך 10 מ"מ הומוציטים באמצעות מונה התא ב-imagej. (א) לאחר פתיחת תמונות ב-imagej, ניתן להשתמש בכלי ההודעה של מונה התא כדי לעקוב אחר אירועי phagocytic לכל תא. (ב) כלי זה יקצה צבע שונה לכל תא שנבחר לספירה, כאשר כל נקודה מתאימה לאירוע פלורסנט בתוך תא זה. לחיצה על ' alt + y ' תציג טבלה המציגה את מספר האירועים שנספרו לכל תא. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

פרוטוקול זה מתאר בvivo של פאיגוציטוזה המשמש להערכת ולכמת את היכולת של דרוסופילה מלאנוזוזה בגיל צעיר ומיושן לחיידק הפאגוציטוז.

הערכת היכולת הייחודית ביותר לגיל מיוחד למבוגרים דרוזופילה מלאנוטציטים באמצעות שיטת בVivo פגוציטוזה

Phagocytosis is an essential function of the innate immune response. This process is carried out by phagocytic hemocytes whose primary function is to ...

הפרוטוקול שלנו מספק גישה יעילה וחוזרת על עצמה כדי להעריך ולמת אירועים phagocytic בהמוציטים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שאנחנו יכולים לכמת אירועים phagocytic בתוך hemocytes בודדים המאפשר לנו לזהות וריאציות בתהליכים phagocytic בקרב גנוטיפים בזבובים בודדים. ביצוע ניתוחים יכול להיות מאתגר, ולכן בעת ביצוע טכניקה זו בפעם הראשונה, לתרגל ניתוחים ככל האפשר לפני ביצוע ההליך המלא.התחל על ידי הכנת מחטי זכוכית להזרקה. מלא מזרק מילימטר אחד בשמן מינרלי, ולצרף את המחט hypodermic 30 מד מסופק עם מזרק ננו. הכנס את המחט 30 מד לתוך הקצה הקהה של מחט נימי משך ולמלא אותו בשמן מינרלי.לאט להסיר את המחט 30 מד לוודא כי אין בועות אוויר נוצרים. הסר את הקולט והצב את ה- O-ring האטום כשהכניסה פונה כלפי מעלה. מניחים את ה-O-ring הגדול יותר על בוכנה מתכת, ולאחר מכן לחבר מחדש את הקולט מבלי להדק.הכנס את בוכנה מתכת לתוך הקצה הקהה של מחט זכוכית מלא שמן בעדינות לדחוף אותו למטה החדרת אותו לתוך O-ring גדול יותר. ואז להדק את הקולט עד מאובטח. לאחר מילוי המחט עם פלואורו או חלקיקים רגישים pH, להזריק את הזבובים בצלחת sternopleural של בית החזה.ההזרקה מוצלחת אם הצבע הירוק נכנס לטיסה. מניחים את הזבובים המוזרקים לתוך בקבוקון מזון חדש ומים לב לזמן שהטיסה הראשונה והאחרונה הוזרקו. הניחו את הבקבוקון על צידו עד שכל הזבובים יתאוששו כדי למנוע מהם להיתקע במזון.כוון את הצד הגחוני של הזבוב למעלה תחת סטריאומיקרוסקופ ניתוח. ואז להכניס סיכת חרק לתוך בית החזה ועוד דרך הקצה האחורי ביותר של הבטן ליד איבר המין. לאחר שכל הזבובים הוצמדו, השתמש בצינור העברה כדי להוסיף מספיק מדיית ניתוח כדי לכסות את הזבובים.הסר את הראש עם מספריים cuticle, ולעשות חתך אופקי ישירות מעל הסיכה האחורית בבטן, ואז עוד בקצה הראשון של הבטן. בצע חתך אנכי המחבר את שני החתכים האופקיים אשר יפתחו את חלל הבטן. השתמש מטלפים כדי להסיר את האיברים הפנימיים ואת הרקמה, הקפדה על הימנעות כלי הגב.במידת הצורך, השתמשו בפינים נוספים כדי לאבטח את הקצוות החתוכים של החותך. לאחר מכן להסיר את בית החזה עם מספריים קוטיקל. השלך את מדיית הניתוח והחלף אותה במיליליטר אחד של 4%PFA, והגן על הניתוחים מפני אור ככל האפשר.לתקן את הניתוחים במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר תוך נדנדה ב 20 סל"ד. לאחר מכן הסר את התיקון והוסף מיליליטר אחד של PBST 1X. אם תרצה, להכתים את הניתוחים עם נוגדנים.לאחר הרכבה את cuticles על שקופית מיקרוסקופ, להשתמש מדפים לכוון אותם בצד הגחוני למעלה, ולוודא כי כלי הגב גלוי. זבובים צעירים ומבוגרים הוערכו על יכולת ספציפית לגיל לבצע phagocytosis על ידי הדמיה פלואורסצנטי של hemocytes לאורך כלי הגב. נוגדן נגד ורידים שימש כדי להבטיח כי רק תאים לאורך כלי הגב נספרו.מכיוון שחלקיקי E.coli הנקראים פלואורסצנטיים הם מיקרומטר אחד באורך והמוציטים הם בקוטר של 10 מיקרומטר, נספרו רק אירועים פלואורסצנטיים בקוטר של 10 מיקרומטר שבמרכזם גרעין DAPI חיובי. תוכנת ImageJ שימשה אז לכימות האירועים. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לדמיין כי הזבוב הוזרק למעשה ולזכור כי העיתוי הוא קריטי.השלמת זריקות ותניתוכים בזמן תסייע למזער את השגיאה הניסיונית ואת הווריאציות האפשריות בקצב האפגוגיטי. טכניקה זו תאפשר לחוקרים לחקור מגוון רחב של נושאי מחקר כולל שאלות לגבי חסינות תאית, אוכלוסיות שונות של תאי דם או הבחנה בין phagocytosis מייצור AMP במהלך תגובה חיסונית מוצלחת.

assessing-age-specific-phagocytic-ability-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

המולימפה של דרוזופילה משמשת הן כדם והן כנוזל אינטרסטיציאלי, המסתובב בכל הגוף במהלך שלבי הזחל והבוגרים. סרטון זה מתאר פרוטוקול לאיסוף המולימפה של הזחלים על מנת לכמת את התאים במחזור.

הפרעה בקוטיקולה: שיטה לאיסוף המולימפה מזחלי דרוזופילה

סרטון זה מדגים טכניקת צביעה חיסונית כדי לדמיין בליעת תאים אפופטוטיים בתאים עובריים הומוגניים של Drosophila melanogaster. שיטה זו מספקת תובנות לגבי הפיזיולוגיה התאית על ידי קביעת מידת הבליעה של תאים אפופטוטיים.

בדיקת פגוציטוזיס: טכניקה של צביעה חיסונית כדי לדמיין בליעת תאים אפופטוטיים בתאים עובריים של Drosophila melanogaster

סרטון זה מדגים בדיקת in vivo שנועדה למדוד פגוציטוזה חיידקית בזבובי דרוזופילה בוגרים. בעקבות הזרקת חיידקים בעלי תווית פלואורסצנטית לבטנם של זבובים בוגרים, המוציטים הקשורים לכלי הדם הגבי עוסקים בפאגוציטוזה. הכנסת צבע כחול טריפאן משמשת כדי להרוות את הפלואורסצנטיות הנפלטת על ידי חיידקים חוץ-תאיים, שאינם פגוציטוזיים. תהליך מרווה זה משפר את הזיהוי של חיידקים phagocytosed כאשר נצפה תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

בדיקת In Vivo לכימות פגוציטוזה חיידקית בזבובי דרוזופילה בוגרים

תאי דם דרוזופילה, או המוציטים, עוברים בין אתרי מגורים למחזור הדם.  בזחל, המוציטים תושבים (יושבים) מתמקמים במיקרו-סביבות אינדוקטיביות, הכיסים ההמטופויאטיים, בעוד המוציטים במחזור נעים בחופשיות בהמולימפה. מטרת פרוטוקול זה היא בידוד וכימות סטנדרטיים של שתי אוכלוסיות ההמוציטים הללו, הנבדלות מבחינה התנהגותית אך משתנות זו בזו.

אוכלוסיות תאי דם Assaying של<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; זחל

תסיסנית ומערכות hematopoietic יונקים חולקים הרבה מאפיינים משותפים, מה שהופך תסיסנית מודל גנטי אטרקטיבי ללמוד hematopoiesis. כאן אנו מדגימים לנתיחת הרכבה של איבר hematopoietic הגדול זחל אימונוהיסטוכימיה. כמו כן, אנו מתארים שיטות Assay שונים תאי hematopoietic זחל כולל hemocytes במחזור ותאי קריסטל נייחים.

שיטות לבדיקת בלוטת לימפה hemocytes ב<em&gt; תסיסנית</em&gt; זחלים

אנו כאן לתאר assay phagocytosis באמצעות תאים עובריים מפוזרים של תסיסנית . זה מאפשר לנו בקלות ובמדויק לכמת רמות phagocytosis vivo , וכדי לזהות מולקולות חדשות הנדרשות phagocytosis של תאים אפופטוטיים.

Assay Phagocytosis עבור תאים אפופטוטיים ב תסיסנית עוברים

שיטה זו מדגימה כיצד להמחיש הפתוגן הפלישה לתוך תאים חרקים עם דגמים תלת ממדיים (3D). Hemocytes של הזחלים דרוזופילה נדבקו בנגיף פתוגנים נגיפי או חיידקי, או vivo לשעבר או ויוו. Hemocytes נגוע היו לאחר מכן קבועה, צבעונית עבור הדמיה עם מיקרוסקופ קונפוקלי, עוקבות שיחזור תאי תלת-ממד.

החילוץ של Hemocytes של הזחלים דרוזופילה melanogaster זיהום מיקרוביאלי וניתוח

פרוטוקול זה מתאר וזמינותו של phagocytosis ויוו ב מבוגרים דרוזופילה melanogaster לכמת פגוציט הכרה ואישור של זיהומים חיידקים.

הערכת התגובה החיסונית הסלולר של זבוב הפירות, דרוזופילה melanogaster, שימוש ב Vivo Phagocytosis Assay

במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח את מערכת העצבים המרכזית של הזחלים third תסיסנית instar.

Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

למדו להעריך פעילות פגוציטוזה בתאי דם של Drosophila melanogaster צעירים ומבוגרים בשיטת in vivo. הפרוטוקול מאפשר כימות אירועים פגוציטיים בכל תא בנפרד וחשיפת הבדלים בין גנוטיפים.

הערכת היכולת הייחודית ביותר לגיל מיוחד למבוגרים דרוזופילה מלאנוטציטים באמצעות שיטת בVivo פגוציטוזה

גלה סרטונים נוספים