Name: בידוד, טרנס-תירבה ותרבות ארוכת טווח של עכבר מבוגר וקרדיומיוציטים עכברים וחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: למדו פרוטוקול מבודד לבידוד, תרבות ארוכת טווח וטרנספקציה של קרדיומיוציטים מבוגרים בעכברים וחולדות. השיטה מאפשרת שרידות של מעל 20 יום ויעילות טרנספקציה של כמעט 100%.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי מימון מהמחלקה לפתולוגיה ורפואה במעבדה, אוניברסיטת סינסינטי, המכללה לרפואה, לד"ר אונור קניסיסק; מענק מהכונים הלאומיים לבריאות (R01HL148598) לד"ר אונור קניסיקאק. ד"ר אונור קניסיקק נתמך על ידי פרס פיתוח הקריירה של איגוד הלב האמריקאי (18CDA34110117). ד"ר Perwez עלאם נתמך על ידי מענק פוסט-ת"ר של איגוד הלב האמריקאי (AHA_20POST35200267). ד"ר מלינה J. Ivey נתמך על ידי מענק NIH T32 (HL 125204-06A1).

כל הניסויים צריכים להתבצע בהתאם להנחיות של המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסמו על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה"ב (NIH). כל הפרוטוקולים המוצגים בסרטון אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) של אוניברסיטת סינסינטי, המכללה לרפואה.
1. הכנה לפני חילוץ לב מעכברים בוגרים (וחולדות)
<ol><li>הכינו את הפתרונות המתאימים, האנזימים והפסקת הפתרונות, בהתאם למתכונים שניתנו בטבלה 1 ובטבלה 2, לבידוד חולדות ועכברים, בהתאמה. לסנן את הפתרונות באמצעות מסנן 0.22 μm כדי להסיר כל זיהום או חלקיקים לא פתורים.</li>
	<li>נקה וחטא את כלי הניתוח על ידי השריה ב-70% אלכוהול במשך 15 דקות, ולאחר מכן לשטוף עם מים מזוקקים כפולים. השאירו את הכלים לאוויר יבש על מגבת נייר נקייה.</li>
	<li>מחממים מראש את אמבט המים ל-37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>נקה את אפליקציית ההתבות על-ידי ריצה עם 70% אלכוהול למשך 5 דקות. הערה: הגדל את קצב הזרימה, המסייע לנקות את הצינורות.</li>
	<li>לאחר זרימת האלכוהול, נקה את שאריות האלכוהול על ידי הפעלת מים מזוקקים כפולים במשך 10 דקות.</li>
	<li>להגדיר 3 פוליסטירן חד פעמי בגודל בינוני שוקל כלים כדי לנקות את הלב לאחר החתך. מלאו את הכלים ב-20 מ"ל של חוצץ מיוצ'יט.</li>
	<li>מוסיפים 2-3 טיפות של הפרין לכל מנה בעזרת פסטר פיפטה ומערבבים היטב על ידי התזת מספר פעמים.</li>
	<li>קח מזרק של 10 מ"ל עם נולה מחט קהה. הערה: ניתן להכין חוט מחט קהה על ידי חיתוך קצה מחט נקייה וסטרילית. מחט 21 G ומחט 14 G שימשו כדי להפוך את הנולה עבור העכבר והעכברוש, בהתאמה.</li>
	<li>מלא את המזרק במאגר סב(טבלה 1). מוציאים את כל בועות האוויר מהמזרק וממקמים אותו במנה השלישית בתנוחה זוויתית. תאבטחו את זה עם סרט הדבקה. הערה: עבור חולדות, פתרון A (טבלה 2) שימש במקום מאגר התזת מיוצייט.</li>
	<li>הכן קשר רופף עם תפר כירורגי והניע אותו סביב המחט.</li>
	<li>להזריק את העכבר עם הפרין (100 יחידות USP / עכבר) על ידי הזרקת תוך אפרטינול, 20 דקות לפני הזרקת ההרדמה.</li>
	<li>הפיצו את מאגר התזת המיוציטים (טבלה 1) דרך מערכת ההתזמה. הפחת את קצב הזרימה ל- 3 מ"ל/דקה. הערה: עבור חולדות, פתרון A (טבלה 2) שימש במקום מאגר התזת מיוצייט.</li>
	<li>לאחר 5 דקות, החלף את מאגר הזיתות בתמיסת האנזים(טבלה 1). הרוויה בתמיסת האנזימים בחמצן במהלך התהליך. השתמש בקצב זרימה של 3 מ"ל/דקה. הערה: עבור בידוד CM חולדה, השתמש בפתרון E (טבלה 2) במקום זאת.</li>
	<li>להרדים את העכבר על ידי הזרקת הרדמה תוך-אפרטונית. השתמש במינון המתאים של הרדמה, מומלץ על ידי IACUC, לניתוח מסוף.</li>
	<li>אשר עומק מספיק של הרדמה על ידי חוסר תגובה לצביטת בהון. לאחר מכן, שים את העכבר על הפלטפורמה הכירורגית.</li>
</ol>2. חילוץ לב מעכברים בוגרים (וחולדות)
<ol><li>לחטא את העור על ידי ניגוב עם 70% אלכוהול.</li>
	<li>פתח בזהירות את התיבה.</li>
	<li>תמחק את הלב. הימנע מרקמות שאינן לב במהלך החתך.</li>
	<li>מניחים את הלב על המנה הראשונה, מלאה במאגר התועה(שולחן 1). הערה: השתמש בפתרון A עבור החולדה (טבלה 2).</li>
	<li>לנקות את הדם מהלב על ידי לסחוט בעדינות.</li>
	<li>מעבירים את הלב למנה השנייה.</li>
	<li>לנקות את הדם מהלב ולהסיר רקמות שאינן לב. לאחר מכן, להעביר את הלב למנה השלישית.</li>
	<li>לקצץ את הריאות ורקמות אחרות שמסביב ולנקות דרך עורקים עולה. יש לבצע הליך זה במהירות האפשרית (<5 דקות) כדי לשפר את האיכות והכמות של CM.</li>
</ol>3. עיכול הלב
<ol><li>עיכול לב העכבר הערה: כל הפתרונות/מאגרים המוסדורים דרך לב העכבר צריכים להיות מחומצנים לאורך כל ההליך.<ol>
<li>בזהירות להסיר את מחט הקנולטה מהמזרק ולחבר אותו ל-Langendorff perfusion app app apparatus.</li>
		<li>הימנע מבועות אוויר שנכנסות ללב, מה שעשוי להשפיע על הזרימה של תמיסת האנזים והעיכול.</li>
		<li>הזז את מעיל המים למעלה כדי לספק סביבה הומוגנית ללב. אפשר לתמיסת האנזים לזרום דרך הלב במהירות של 2-3 מ"ל/דקה. הערה: המהירות של הפתרון החולף היא קריטית ויש לה השפעה משמעותית על התוצאה של כמות ואיכות CM.</li>
		<li>תן לתמיסת האנזים לזרום דרך הלב במשך 2 דקות.</li>
		<li>ב 2 דקות, להוסיף 40 μL של 100 μM CaCl2 פתרון אנזים ולערבב. תנו לתמיסת האנזים לעבור דרך הלב עוד 10-15 דקות. הערה: ברגע שהזרימה הופכת חלקה, הלב הופך חום ורך, מה שמצביע על התפלגות שווה של אנזים הקולגן ועיכול תקין של הלב.</li>
	</ol>
</li>
	<li>עיכול לב העכברוש הערה: כל הפתרונות/מאגרים המסתובבים דרך לב החולדה צריכים להיות מחומצנים לאורך כל ההליך.<ol>
<li>בזהירות להסיר את מחט הקנולטה מהמזרק ולחבר אותו ל-Langendorff perfusion app app apparatus.</li>
		<li>הימנע מבועות אוויר שנכנסות ללב, מה שעשוי להשפיע על הזרימה של תמיסת האנזים והעיכול.</li>
		<li>הזז את מעיל המים למעלה כדי לספק סביבה הומוגנית ללב.</li>
		<li>התחל את זרימת תמיסה A במהירות של 2-3 מ"ל/דקה למשך 3-5 דקות כדי להסיר דם מהלב. הערה: מהירות הפתרון העובר היא קריטית ויש לה השפעה משמעותית על התוצאה של איכות CM.</li>
		<li>לאחר ניקוי הדם מהלב, עבור מפתרון א' לפתרון E(שולחן 2). תמיסת Titrate E עם CaCl2 כפי שצוין להלן עבור ריכוז סופי של 0.1 mM בפתרון:<ol>
<li>לאחר 10 דקות של עירוי, להוסיף 12.5 μL של 0.1 M CaCl2.</li>
			<li>לאחר 15 דקות של תב, להוסיף 25 μL של 0.1 M CaCl2.</li>
		</ol>
</li>
		<li>תנו לתמיסת האנזים לעבור דרך הלב עוד 30-40 דקות, עד שהזרימה הופכת מהירה והלב גמיש.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. הכנת מתלה חד-תאי CM
<ol><li>הכנת מתלה חד-תאי CM (עכבר)<ol>
<li>הסר את הלב ממערכת התזת לנגנדורף. מעבירים אותה לצלחת פטרי 60 מ"מ מלאה בתמיסת אנזימים ב-5 מ"ל ומעבירים את המנה למכסה המנוע של ה-biosafety. הערה: הקפיטו עיכול לב מספיק לפני הסרת הלב ממערכת ההתזמה לנגנדורף. זמן העיכול תלוי בפעילות האנזימים, בזרימת התמיסה ובגודל הלב.</li>
		<li>לבצע כל הפרדה מכנית נוספת בשכונה בטיחות ביולוגית כדי להבטיח עקירות ולהימנע מזיהום.</li>
		<li>בזהירות להסיר את atria (1/4th של חלק הלב בסיס) ורקמות שומן נוספות.</li>
		<li>טחון את הלב עם מפס לחתיכות בסדר.</li>
		<li>קח פיפטת פסטר סטרילית וחתוך את הקצה שלה בזווית של 45º.</li>
		<li>השתמש פיפטה פסטר זה כדי לחלק את רקמת הלב בהשעיה של תא יחיד על ידי pipetting עדין. עיכול אופטימלי מספק השעיה של קרדיומיוקיטים חד-תאיים. הערה: הסר את החלק התחתון הצר של צינור ההעברה כדי להפחית את נזקי CM עקב צנרת מכנית.</li>
		<li>לאחר מכן, להוסיף 5 מ"ל של פתרון עצירה כדי לעצור את פעילות האנזימים, אשר מונע את האפשרות של עיכול יתר.</li>
		<li>קח חסום 50 מ"ל טרי ולהניח מסננת תא סטרילית 100 μm על זה.</li>
		<li>להעביר את מתלה cardiomyocyte דרך מסננת התא כדי להסיר את נתח הרקמה. שוטפים את צלחת פטרי ומסננת עם עוד 5 מ"לשל תמיסת עצירה ( שולחן 1) כדי לאסוף את כל cardiomyocytes שנשאר מחובר מסננת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת מתלה חד-תאי CM (חולדה)<ol>
<li>הסר את הלב ממערכת התזת לנגנדורף. מעבירים את הלב לצלחת פטרי 100 מ"מ מלאה ב-5 מ"ל של תמיסה א' ומעבירים את המנה למכסה המנוע של ה-biosafety. הערה: הקפיטו עיכול לב מספיק לפני הסרת הלב ממערכת ההתזמה לנגנדורף. זמן העיכול תלוי בפעילות האנזימים, בזרימת התמיסה ובגודל הלב.</li>
		<li>לבצע כל הפרדה מכנית נוספת בשכונה בטיחות ביולוגית כדי להבטיח עקירות ולהימנע מזיהום.</li>
		<li>בזהירות להסיר את atria (1/4th של חלק הלב בסיס) ורקמות שומן נוספות.</li>
		<li>טחון את הלב עם מפס לחתיכות בסדר.</li>
		<li>קח פיפטת פסטר סטרילית וחתוך את הקצה שלה בזווית של 45º.</li>
		<li>השתמש פיפטה פסטר זה כדי לחלק את רקמת הלב בהשעיה חד-תאית על ידי pipetting עדין. עיכול אופטימלי מספק השעיה של קרדיומיוקיטים חד-תאיים. הערה: הסר את החלק התחתון הצר של צינור ההעברה כדי להפחית את נזקי CM עקב צנרת מכנית.</li>
		<li>הוסף 5 מ"ל של פתרון B(טבלה 2)להתליית CM ולהעביר את הפתרון דרך מסננת תא 100 μm כדי להסיר את כל חתיכות שנותרו של שומן או רקמה אחרת שאינה מעכלת.</li>
		<li>לאסוף את הסינון בבקתון חרסי טרי 50 מ"ל.</li>
		<li>השתמש עוד 5 מ"ל של פתרון B כדי לשטוף את צלחת פטרי וכל CM שנותר דרך מסננת התא.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. הסרת הודעות שאינן CMs
<ol><li>הסרת הודעות שאינן הודעות CMs מהמתלה של תא יחיד למבוגרים (עכבר)<ol>
<li>צנטריפוגה מתלה התא ב 20 x g במשך 3 דקות.</li>
		<li>בטל את supernatant והשתמש מחדש את התאים ב- 10 מ"ל של פתרון עצירה (טבלה 1). הערה: הגדלת הריכוז של BSA בפתרון העצירה תגביר את צמיגותה ותפחית את קצב המפסקים של משתמשים שאינם CMs.</li>
		<li>תוסתר מחדש את נותן MS על ידי היפוך עדין של הצינור 3-5 פעמים.</li>
		<li>במרווחי זמן של 3 דקות, הוסף 10 μL של 100 μM CaCl2 פתרון ולערבב. חזור על הפעולה שלוש פעמים.</li>
		<li>לאחר התוספת הרביעית, צנטריפוגה מתלה cardiomyocyte ב 20 x g במשך 3 דקות.</li>
		<li>זרוק את הסופרנטנט.</li>
		<li>תוסתור מחדש ב-CMs מחום מראש (37 ºC), מדיית ציפוי CM עכבר מבוגר(טבלה 3).</li>
	</ol>
</li>
	<li>הסרת הודעות שאינן הודעות מ- CMs מהמתלים של תאים בודדים למבוגרים (חולדה)<ol>
<li>כדורי ב 20 x g במשך 3 דקות ב 25 ºC.</li>
		<li>בטל את supernatant וכנס מחדש את התאים לתוך 25 מ"ל של פתרון B(טבלה 2).</li>
		<li>מערבבים את התאים על ידי היפוך עדין ולמקם אותו בעמדה צינור כדי לאפשר CM להתיישב תחת כוח הכבידה.</li>
		<li>השליכו בזהירות את הסופרנטנט.</li>
		<li>לתוספות מחדש את התאים טרי 25 מ"ל של פתרון B ו titrate זה 1.0 mM CaCl2 על ידי תוספת צעד של 50 μL, 75 μL, ו 100 μL של 0.1 M CaCl2 במרווחי 3-5 דקות. הערה: בשלב זה ניתן להשתמש בריכוז גבוה יותר של BSA בפתרון B. הגדלת הריכוז של BSA בפתרון B מגבירה את צמיגות ובכך, מפחיתה את קצב המ המום של משתמשים שאינם CMs.</li>
		<li>כדוריות ב 20 x g עבור 3 דקות ב 25 ºC, לשאוף supernatant, ולהוסיף את הנפח הרצוי של מדיה תרבות תא חולדה למבוגרים(טבלה 4).</li>
		<li>זרעים CMs על צלחת מצופה למימינין. הערה: ניתן להשתמש בציפוי מראש של CMs על לוח תרבות שאינו מצופה כדי למזער את הזיהום של תאים שאינם CM.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. ציפוי CM למבוגרים
<ol><li>ציפוי מראש<ol>
<li>תוסתה מחדש את הקרדיומיוציטים לתקשורת התרבות.</li>
		<li>מראש צלחת התאים לתוך צלחת 60 מ"מ או 100 מ"מ עבור עכבר או חולדה CM, בהתאמה.</li>
		<li>דגירה CMs עבור 2 שעות באינקובטור בתוספת 5% CO2 ב 37 ºC.</li>
		<li>במהלך הדגירה pre-plate, לכסות את צלחות תרבות התא עם למינין (10 μg / מ"ל ב PBS) עבור תרבות CM לטווח ארוך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר 2 שעות של ציפוי מראש, לאסוף CMs בבקתון חסוני 50 מ"ל.</li>
	<li>לאסוף את התאים מהצלחת וצלחת מחדש אותם לתוך למינין מצופה 24 צלחת תרבות גם לניסויים טרנסאפציה.</li>
	<li>תאי תרבות באינקובטור ב 37 ºC בתוספת 5% עם CO2. 4-6 שעות מספיק כדי לדבוק cardiomyocytes עם פני השטח, ולכן, transfection יכול להתבצע 6 שעות לאחר ציפוי. הערה: מדיום הציפוי המכיל FBS משמש בדרך כלל ומראה תאימות טובה יותר עם מחקרי התפשטות. עם זאת, אמצעי ללא סרום יכול לשמש לניסויים שבהם גורמים הפרשה מנותחים.</li>
</ol>7. תברה
<ol><li>דגירה CMs לצלחת תרבות התא מצופה למינין במשך 4-6 שעות.</li>
	<li>ארבע שעות לאחר זריעת CM על הלוח מצופה למימינין, להחבת תאים עם siRNAs (50 nM) של עניין באמצעות ריאגנט transfection (למשל, Lipofectamine RNAiMAX) על פי פרוטוקול היצרן.</li>
	<li>שנה מדיה 24 שעות לאחר הטרנס-תעבורה וכל 24 שעות לאחר מכן למשך עד 20 יום.</li>
	<li>לאחר 20 ימים, לתקן תאים עם 4% PFA ב PBS עבור יישומים במורד הזרם, כולל immunocytochemistry עבור סמנים ספציפיים לב כגון Troponin כדי להבטיח cardiomyocytes חיים היו תרבותיים בהצלחה לטווח ארוך.</li>
</ol>

<ol><li>van Amerongen, M. J., Engel, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+cardiomyocyte+proliferation+and+its+potential+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Features of cardiomyocyte proliferation and its potential for cardiac regeneration.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 12, 2233-2244 (2008).</li>
<li>Parente, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia%2Freoxygenation+cardiac+injury+and+regeneration+in+zebrafish+adult+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoxia/reoxygenation cardiac injury and regeneration in zebrafish adult heart.</a> PLoS One. 8, 53748(2013).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regenerative+capacity+of+zebrafish+reverses+cardiac+failure+caused+by+genetic+cardiomyocyte+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The regenerative capacity of zebrafish reverses cardiac failure caused by genetic cardiomyocyte depletion.</a> Development. 138, 3421-3430 (2011).</li>
<li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li>
<li>Graham, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e50289(2013).</li>
<li>Brette, F., Orchard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-tubule+function+in+mammalian+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">T-tubule function in mammalian cardiac myocytes.</a> Circulation Research. 92, 1182-1192 (2003).</li>
<li>Müller, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+the+cardiac+sodium+calcium+exchanger+promoter+in+adult+and+neonatal+cardiomyocytes+by+Nkx2.5+and+serum+response+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of the cardiac sodium calcium exchanger promoter in adult and neonatal cardiomyocytes by Nkx2.5 and serum response factor.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 34, 807-821 (2002).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+ischemic+heart+disease%3A+novel+carriers+for+bioinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Exosomes in ischemic heart disease: novel carriers for bioinformation.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 120, 109451(2019).</li>
<li>Wu, Y. S., Zhu, B., Luo, A. L., Yang, L., Yang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Cardiokines+in+Heart+Diseases%3A+Beneficial+or+Detrimental%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The Role of Cardiokines in Heart Diseases: Beneficial or Detrimental.</a> BioMed Research International. 2018, 8207058(2018).</li>
<li>Eppenberger, H. M., Hertig, C., Eppenberger-Eberhardt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+rat+cardiomyocytes+in+culture+A+model+system+to+study+the+plasticity+of+the+differentiated+cardiac+phenotype+at+the+molecular+and+cellular+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cardiovascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adult rat cardiomyocytes in culture A model system to study the plasticity of the differentiated cardiac phenotype at the molecular and cellular levels.</a> Trends in Cardiovascular Medicine. 4, 187-193 (1994).</li>
<li>Alam, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Senescence-Associated+Genes+Rb1+and+Meis2+in+Adult+Cardiomyocytes+Results+in+Cell+Cycle+Reentry+and+Cardiac+Repair+Post-Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Senescence-Associated Genes Rb1 and Meis2 in Adult Cardiomyocytes Results in Cell Cycle Reentry and Cardiac Repair Post-Myocardial Infarction.</a> Journal of the American Heart Association. 8, 012089(2019).</li>
<li>Arif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-210-mediated+proliferation%2C+survival%2C+and+angiogenesis+promote+cardiac+repair+post+myocardial+infarction+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-210-mediated proliferation, survival, and angiogenesis promote cardiac repair post myocardial infarction in rodents.</a> Journal of Molecular Medicine. 95, 1369-1385 (2017).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nature Cell Biology. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Nippert, F., Schreckenberg, R., Schlüter, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Cultivation+of+Adult+Rat+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e56634(2017).</li>
<li>Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+Culture+and+Transduction+of+Adult+Mouse+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54012(2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simplified%2C+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119, 909-920 (2016).</li>
<li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiomyocytes+for+cell+signaling+and+in+vitro+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51357(2014).</li>
<li>Pinz, I., Zhu, M., Mende, U., Ingwall, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+isolation+procedure+for+adult+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">An improved isolation procedure for adult mouse cardiomyocytes.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 61, 93-101 (2011).</li>
<li>O'Connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 357, 271-296 (2007).</li>
<li>Dou, Y., Arlock, P., Arner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blebbistatin+specifically+inhibits+actin-myosin+interaction+in+mouse+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blebbistatin specifically inhibits actin-myosin interaction in mouse cardiac muscle.</a> American Journal of Physiology: Cell Physiology. 293, 1148-1153 (2007).</li>
<li>Kabaeva, Z., Zhao, M., Michele, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blebbistatin+extends+culture+life+of+adult+mouse+cardiac+myocytes+and+allows+efficient+and+stable+transgene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blebbistatin extends culture life of adult mouse cardiac myocytes and allows efficient and stable transgene expression.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 294, 1667-1674 (2008).</li>
<li>Sellin, L. C., McArdle, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+effects+of+2%2C3-butanedione+monoxime%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Multiple effects of 2,3-butanedione monoxime.</a> Pharmacology & Toxicology. 74, 305-313 (1994).</li>
</ol>

יש צורך קריטי להקים פרוטוקול לבידוד cardiomyocyte למבוגרים ותרבות לטווח ארוך כדי לבצע מחקרים מכניים ספציפיים לתא. יש רק כמה דיווחים דנים פרוטוקולי בידוד CM למבוגרים, ואפילו פחות מהם משמשים לתרבות ארוכת טווח של עכברים בוגרים CM15,16,17. זה הראו כי CM חולדה למבוגרים יש סובלנות גבוהה יותר בתרבות המבחנה מאשר העכברים הבוגרים CM10,11,12. בדו"...

מחלות לב הן אחת הסיבות המובילות למוות ברחבי העולם. כמעט כל סוגי פגיעת לב לגרום לאובדן משמעותי של cardiomyocytes למבוגרים (CMs). לבבות יונקים בוגרים אינם מסוגלים לתקן את פציעת הלב שלהם בשל אופיו הרגיש של CM1 הבוגר. לכן, כל עלבון ללב היונקים הבוגרים גורם לאובדן קבוע של CMs, המוביל לתפקוד לב מופחת ואי ספיקת לב. שלא כמו יונקים בוגרים, בעלי חיים קטנים כמו דגי זברה ולבבות ניוט יכולים לחדש את פגיעת הלב שלהםבאמצעות התפשטותCM קיימת 2,3,4. מאמץ עולמי הוא מתמשך למצוא התערבות טיפולית חדשנית עבור פגיעה לב באמצעות גישות הן proliferative ולא התפשטות. בעשורים האחרונים פותחו סוגים שונים של מודלים של עכברים גנטיים כדי ללמוד פגיעה ותיקון לב. עם זאת, השימוש במודלים של בעלי חיים vivo ממשיך להיות גישה יקרה עם המורכבות הנוספת כדי לפענח מנגנון תא אוטונומי מאפקטים משניים. חוץ מזה, במערכות vivo מאתגרים לנתח CM השפעות ספציפיות של התערבות תרופתית הגורם איתות cardioprotective מן CM.
יתר על כן, התרבות ארוכת הטווח של CMs למבוגרים יש צורך לבצע ניתוחי התפשטות CM. CM התפשטות assays דורשים מינימום של 4-5 ימים עבור תאים להיות מושרה לתוך מחזור התא ולקבל נתונים מדויקים לאחר מכן. בנוסף, מחקרים המשתמשים CMs מבודדים עבור מחקרים אלקטרופיזיולוגיים, סינון סמים, מחקרי רעילות, ו Ca++ מחקרי הומסטאזיס כולם זקוקים למערכת תרבות משופרת5,6,7. יתר על כן, מחקרים אחרונים מראים את המשמעות cardioprotective של ציטוקינות הפרשת CMs (cardiokines)8,,9. על מנת לחקור את התפקיד הטיפולי ואת המנגנון המולקולרי של קרדיוקין אלה במהלך תיקון לב והתחדשות, נדרשת תרבות ממושכת.
מלשינים של חולדות בוגרות חזקים מספיק לבידוד חד-תאי ולתרבות ארוכת טווחבמערכת חוץ-חוץ-10,,11,,12. עם זאת, CMs עכבר מבוגר הם עניין רב עבור חוץ חוץ, בשל הזמינות של מגוון רחב של מודלים עכבר מהונדסים גנטית, המאפשר עיצוב וביצוע של ניתוחים חדשניים שונים שאינם אפשריים עם חולדה CM13. בניגוד לבידוד CM חולדה למבוגרים, זה די מאתגר לקבל השעיה חד-תאית מלבבות עכבר מבוגר, ואת התרבות לטווח ארוך של CMs עכבר מבוגר בתרבות הוא אפילו יותר מאתגר.
בידוד CM למבוגרים מלבבות עכבר וחולדות באמצעות מערכת Langendorff הוקמה בעבר כדי ללמוד CMפונקציה 5,14,15. כאן, תיארנו בפירוט את הפרוטוקולים לבידוד CM למבוגרים הן חולדות ועכברים, כמו גם תרבות ארוכת טווח שונה, transfection, והתפשטות CM של תאים מבודדים.

<table><tbody><tr><td>2,3-בוטאן דיון מונוקסיים</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>B-0753</td><td></td></tr><tr><td>בלביסטטין</td><td>APExBIO</td><td>B1387</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>449709</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים</td><td>קורנינג קוסטאר</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>מסננת</td> <td>תאיםBD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Cel-miR-67</td><td>Dharmacon</td><td>CN-001000-01-50</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז type2</td><td>וורת'ינגטון</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות חד פעמיות להעברה מדורגת</td><td>פישרברנד</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>כלי שקילה חד פעמיים מפוליסטירן</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>Z154881-500EA</td><td></td></tr><tr><td>הנשר השונה של דולבקו's</td><td>medium Thermo Scientific</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>EdU</td><td>Life Technologies</td><td>C10337</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר</td><td>עוברי קורנינג</td><td>35-015-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fine Point מלקחיים דיוק גבוה</td><td>Fisherbrand</td><td>22-327379</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G-5400</td><td></td></tr><tr><td>המוציטומטר</td><td>Hausser Scientific</td><td>1483</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>PSLAB-018285-02</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>דיוק גבוה ישר רחב נקודה חזקה פינצטה/מלקחיים</td><td>פישרברנד</td><td>12-000-128</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I0516-5ML</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-8281</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746436</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Life Technologies</td><td>13778-150</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td></td></tr><tr><td>למינין עכבר טבעי</td><td>Invitrogen</td><td>23017-015</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>קורנינג</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>פנטוברביטל</td><td>הנרי שיין</td><td>24352</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ</td><td>מלח Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>פרוטאז XIV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td></td></tr><tr><td>סלניום</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>229865+5G</td><td></td></tr><tr><td>siMeis2</td><td>Dharmacon</td><td>s161030</td><td></td></tr><tr><td>siRb1</td><td>Dharmacon</td><td>s128325</td><td></td></tr><tr><td>ישר קהה / חד מספריים חיתוך</td><td>פישר מדעי</td><td>28252</td><td></td></tr><tr><td>ישר דק מאוד דיוק קצה מלקחיים</td><td>Fisherbrand</td><td>16-100-120</td><td></td></tr><tr><td>טאורין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>טרנספרין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8158-100MG</td><td></td></tr><tr><td>מספריים חלקים במיוחד בגימור משופע</td><td>Fisherbrand</td><td>22-079-747</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>3006S</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד, טרנס-תירבה ותרבות ארוכת טווח של עכבר מבוגר וקרדיומיוציטים עכברים וחולדות

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

תרבות החיים לשעבר של קרדיומיוציטים יונקים בוגרים (CMs) מציגה את המערכת הניסיונית הרלוונטית ביותר למחקר במבחנה של ביולוגיה לבבית. CMs יונקים בוגרים הם תאים מובדילים סופנית עם קיבולת התפשטות מינימלית. המצב שלאחר המיטוטיקה של CMs למבוגרים לא רק מגביל את התקדמות מחזור תא cardiomyocyte, אלא גם מגביל את התרבות היעילה של CMs. יתר על כן, התרבות ארוכת הטווח של CMs למבוגרים היא הכרחית עבור מחקרים רבים, כגון התפשטות CM וניתוח של ביטוי גנים.
העכבר והעכברוש הם שתי חיות המעבדה המועדפות ביותר שישמשו לבידוד קרדיומיוציט. בעוד התרבות ארוכת הטווח של CMs חולדה אפשרית, CMs עכבר מבוגר רגישים למוות ולא ניתן לתרע יותר מחמישה ימים בתנאים נורמליים. לכן, יש צורך קריטי לייעל את בידוד התא ואת פרוטוקול תרבות לטווח ארוך עבור CMs murine למבוגרים. עם פרוטוקול זה שונה, ניתן לבודד בהצלחה ותרבות הן עכבר בוגר ועכברוש CMs במשך יותר מ 20 ימים. יתר על כן, יעילות הטרנס-תום-רוחב של סי.אם מבודד גדלה באופן משמעותי בהשוואה לדוחות קודמים. עבור בידוד CM עכבר מבוגר, שיטת perfusion Langendorff מנוצל עם פתרון אנזים אופטימלי ומספיק זמן עבור דיסוציאציה מטריצה extracellular מלא. על מנת להשיג CMs חדרי טהור, שני atria נותקו והושלכו לפני שהמשיך עם ההתנתקות והציפוי. התאים פוזרו על צלחת מצופה למימינין, מה שאפשר חיבור יעיל ומהיר. CMs הורשו להסתפק 4-6 שעות לפני תירגם siRNA. מדיה תרבות היה רענן כל 24 שעות במשך 20 ימים, ולאחר מכן, CMs היו קבועים ומוכתמים עבור סמנים ספציפיים לב כגון טרופונין סמנים של מחזור תא כגון KI67.

הפרוטוקול הנוכחי שונה מאפשר בידוד יעיל ותרבות של חולדות ועכברים CMs במבחנה. עבור חולדה CM בידוד, בסך הכל 3 מבוגר (12 שבועות) זכר פישר 344 חולדות שימשו בהליך. איור 1 מציג את הגדרות הציוד הכירורגי והבידוד הנדרשות בהליך; כל חלק סומן ותואר במקרא הדמות. קולגנס סוג 2 שימש לעיכול, אשר מניב כמות גבוהה של CMs באיכות גבוהה מבידוד מוצלח (איור 2A). 24 שעות לאחר הבידוד, תאים אלה היו טרנסגאד עם מחזור תאים וגורם siRNAs ספציפי נגד Rb1 ו Meis2, ואילו, cel-miR-6...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד, טרנס-תירטוי ותרבות ארוכת טווח של עכבר בוגר וקרדיומיוציטים של חולדות.

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

מטרת הסרטון הזה היא להדגים פרוטוקול סטנדרטי לבידוד קרדיומיוציטים למבוגרים, תרבות ארוכת טווח ו transfection. בידוד ו culturing cardiomyocytes מעכבר או חולדה ממשיכים להיות שיטה חיונית כדי לחקור את הביולוגיה האוטונומית התא של קרדיומיוציטים בתוך הלב בריא ומחלות. יש כמה שאלות שאנחנו יכולים לענות באמצעות קרדיומיוציטים מבודדים.כמו הפוטנציאל המשגשג. ישנם שינויים בביטוי גנים או ביטויי ציטוקין ספציפיים עם תגובת הפציעה. למרבה הצער, קרדיומיוציטים עכבר לא לשרוד בשבוע אחד בתנאי תרבות נורמלית.לכן, בסרטון זה, אנו מתארים שיטה ממוטבת לבודד קרדיומיוציטים עכבר בוגר, transfixed אותם ותרבת אותם הרבה מעבר 21 ימים, טכניקה זו קשה בתחילה לשלוט. אבל עם תרגול אפשר להשיג כ 80 עד 90% לשרוד קרדיומיוציטים לאחר בידוד על 100 אחוז יעילות transfection. ורוב הקרדיומיוציטים האלה בתנאים הנכונים יכולים לשרוד את 20 הימים האחרונים.נקו וערקו את המכשירים הכירורגיים שלכם על ידי השרייתם ב-70% אלכוהול למשך 15 דקות ולאחר מכן שטפו אותם במים מזוקקים כפולים. לאחר המים, להשאיר את הכלים באוויר להתייבש הבא, לנקות את המנגנון שפע על ידי הפעלת 70% אלכוהול פעמיים במשך חמש דקות כל אחד. הגדלת קצב הזרימה תסייע לנקות את הצינורות לאחר אלכוהול לשטוף את כל האלכוהול שנותר על ידי הפעלת מים מזוקקים כפול במשך 10 דקות.הגדר שלוש מנות כדי לנקות את הלב

isolation-transfection-long-term-culture-adult-mouse-rat

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

במאמר זה תיארנו את הדרך טיפוסי לבודד תרבות עכברוש מבוגר myocytes לב. Collagenase ו פרוטאז משמשים לעכל לבודד myocytes יחיד. Myocytes תרבותי לעקוב בפרוטוקול זה לעמוד בדרישות הניסוי ביותר.

תרבות ראשונית של הלב Myocytes למבוגרים עכברוש

Myocytes לב למבוגרים הם תאים ראשוניים, כי יכול להיות מבודד לבבות בעלי חיים מתורבתים במשך כמה ימים. במהלך תקופה זו תרבות העברת גנים adenoviral ניתן להשתמש בהם כדי להביע biosensors מקודדים גנטית (GEBs) או חלבונים היתוך ניאון. שתי הגישות לאפשר חקירות הסלולר באמצעות מיקרוסקופיה confocal.

בידוד מניפולציה גנטית של Myocytes לב למבוגרים הדמיה confocal

תרבויות cardiomyocyte העכבר ראשיים הן אחד הכלים המרכזיים לחקירה של ארגון ותפקוד myofibrillar. הפרוטוקול הבא מתאר את הבידוד והתרבות של שריר לב עיקרי מלב עכבר בילוד. תרבויות cardiomyocyte וכתוצאה מכך עשויות לשמש בהמשך עבור מגוון רחב של מבחני ביומכנית, ביוכימי ותא ביולוגי.

בידוד והתרבות של שריר לב עכבר בילוד

כאן אנו מתארים את הבידוד של cardiomyoctyes עכבר המבוגר באמצעות מערכת זלוף Langendorff. תאים וכתוצאה מכך הם Ca2 +, סובלניים, חשמלי שקט ויכולים להיות מתורבת וtransfected עם אדנו או lentiviruses כדי לתפעל ביטוי גנים. הפונקציונליות שלהם יכולה גם להיות מנותחת באמצעות מערכת MMSYS וטכניקות תיקון מהדק.

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

אנו מתארים שיטה אמינה לבידוד של שריר לב עכבר בוגר. פרוטוקול זה מניב תוצאה עקבית לתרבות של שריר לב בוגר מתפקד ממגוון רחב של עכברים מהונדסים גנטי.

בידוד והתרבות של שריר לב מאוס למבוגרים לתא איתות ו<em&gt; במבחנה</em&gt; לב היפרטרופיה

פרוטוקול זה מתאר שיטה שלב אחר שלב לבידוד הניתן לשחזור ותרבית ארוכת טווח של קרדיומיוציטים של עכברים בוגרים עם תפוקה, טוהר וכדאיות גבוהים.

בידוד, תרבות התמרה של cardiomyocytes עכבר למבוגרים

כמה פרוטוקולים פותחו ותיארו לבידוד של סוגי תאים לב שונים של הלב חולדה. כאן, פרוטוקול אופטימיזציה מתואר המאפשר בידוד של איכות גבוהה תאים מרכזיים של תאים לב (cardiomyocytes, תאים אנדותל, fibroblasts) מתוך הכנה אחת, הפחתת עלויות הניסוי.

בידוד סימולטני של Cardiomyocytes באיכות גבוהה, תאים אנדותל, ו Fibroblasts של לב עכברוש מבוגר

כאן, אנו מציגים עבור בידוד של טיפוח של עכברים בוגרים חדרית cardiomyocytes (ARVC) פרוטוקול. ניתן להשתמש ARVC מבודד לטיפוח לטווח הקצר ולטווח הארוך. בידוד של טיפוח של ARVC יכול לשחק תפקיד מפתח בפיתוח משטרי הטיפול החדש למחלות לב.

בידוד, טיפוח של עכברים בוגרים Cardiomyocytes

שיטה מתוארת לבידוד בו זמנית של מיוציטים ולא מיוציטים הן מהאטיה והן מחדרי הלב של עכבר בוגר יחיד. פרוטוקול זה מביא לתשואות עקביות של מיוציטים לבביים ברי קיימא מאוד ולא מיוציטים ומפרט תנאי תרבות אופטימליים ספציפיים לתאים עבור פנוטיפים וניתוח במבחנה.

בידוד ותרבות בו זמנית של מיוציטים פרך, מיוציטים חדריים, ולא מיוציטים מלב עכבר בוגר

תקן הזהב בקרדיולוגיה לניסויים פונקציונליים תאיים ומולקולריים הוא קרדיומיוציטים. מאמר זה מתאר התאמות לטכניקה שאינה לנגנדורף לבידוד קרדיומיוציטים של עכברים.

שיטה פשוטה ויעילה לבודד באופן עקבי קרדיומיוציטים עכבר

למדו פרוטוקול מבודד לבידוד, תרבות ארוכת טווח וטרנספקציה של קרדיומיוציטים מבוגרים בעכברים וחולדות. השיטה מאפשרת שרידות של מעל 20 יום ויעילות טרנספקציה של כמעט 100%.

בידוד, טרנס-תירבה ותרבות ארוכת טווח של עכבר מבוגר וקרדיומיוציטים עכברים וחולדות

גלה סרטונים נוספים