Name: סינתזה של Aptamer-PEI-g-PEG שונה חלקיקי זהב טעון עם וקסורוביצין עבור משלוח תרופות ממוקדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: למדו סינתזה של ננו-חלקי זהב מצופים AS1411-g-PEI-g-PEG לשחרור ממוקד של דוקסורוביצין לתאי סרטן. שיטה זו מפחיתה רעילות ומגבירה יעילות טיפולית בטיפול בסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (31700840); פרויקט המחקר המדעי המרכזי של מחוז הנאן (18B430013, 18A150049). מחקר זה נתמך על ידי תוכנית המלומדים של נאנחו לחוקרים צעירים של XYNU. המחברים רוצים להודות לסטודנט לתואר ראשון זבו קו מהמכללה למדעי החיים ב- XYNU על יצירותיו המועילות. המחברים רוצים להכיר במרכז ניתוח ובדיקות של XYNU לשימוש בציוד שלהם.

התראה: הקפד להתייעץ עם כל גיליונות הנתונים הרלוונטיים לבטיחות החומרים (MSDS) לפני השימוש בכל הכימיקלים. כמה כימיקלים המשמשים להכנת copolymer וננו חלקיקים רעילים מאוד. חלקיקים יש גם סכנות פוטנציאליות. הקפד להשתמש בכל נוהלי הבטיחות המתאימים וציוד מגן אישי, כולל כפפות, חלוק מעבדה, ברדסים, מכנסיים באורך מלא ונעליים קרובות.
1. סינתזה של פוליאתילן גליקול כפול קרבוקסיל (CT-PEG)33
<ol><li>הוסף 1.46 גרם (14.6 mmol) של אנהידריד סוציני (SA) ו 209 מ"ג (1.71 mmol) של 4 דימתילמינופירידין (DMAP) לבקבוקון תחתון עגול 100 מ"ל.</li>
	<li>הוסף 15 מ"ל של tetrahydrofuran נטול מים (THF) לבקבוק המשמש בשלב 1.1 ולהתאים פקק זכוכית. שמור על הבקבוק ב 0 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.</li>
	<li>יש להוסיף 4.28 גרם (4.28 מ"ל) של פוליאתילן גליקול (PEG) ו-1.8 מ"ל (12.8 מ"ל) של טריאתילאמין (TEA) לבקבוקון חדש.</li>
	<li>הוסף 15 מ"ל של THF נטול מים לבקבוק המשמש בשלב 1.3 ולהתאים פקק זכוכית. להעביר את הפתרון לאט בקבוק בשימוש בשלב 1.2, באמצעות מזרק תחת אווירת חנקן.</li>
	<li>מערבבים את הפתרון ב 0 מעלות צלזיוס במשך 2 שעות, ולאחר מכן להמשיך את התגובה בטמפרטורת החדר (RT) לילה.</li>
	<li>באמצעות מאייד סיבובי (40 °C (40 °C, 0.1 MPa), לרכז את פתרון התגובה ולהסיר את ממס THF.</li>
	<li>ב RT, להמיס את פתרון התגובה משלב 1.6 ב 15 מ"ל של 1.325 גרם / מ"ל dichloromethane (DCM), ולאחר מכן להוסיף 15 מ"ל של אתר דיתיל קר (Et2O) כדי לקבל את מוצר המשקעים (פוליאתילן גליקול diacid). הסר את הממס באמצעות נייר סינון. הערה: ניתן לחזור על שלב המשקעים פי 3.</li>
	<li>יבש את המשקעים תחת ואקום ב RT במשך 48 שעות.</li>
</ol>2. סינתזה של קופולימר PEI-g-PEG
<ol><li>הוסיפו 305.47 מ"ג CT-PEG משלב 1.8 ו-5 מ"ל של דימתיל סולפוקסיד (DMSO) לבקבוק ומערבבים ב-RT כדי להבטיח שה-CT-PEG מומס במלואו ב-DMSO.</li>
	<li>להמיס 49.46 מ"ג של 1-(3-דימתילאמינופרופיל)-3-אתילקרבודימיד הידרוכלוריד (EDC) ב 5 מ"ל של DMSO, ולאחר מכן להוסיף את הפתרון לבקבוק בשימוש בשלב 2.1 ומערבבים במשך 30 דקות ב RT.</li>
	<li>להמיס 29.69 מ"ג של N-hydroxysuccinimide (NHS) ב 5 מ"ל של DMSO ולהוסיף את הפתרון בקבוק בשימוש בשלב 2.1. ממשיכים לבחוש ב-RT במשך 3 שעות.</li>
	<li>להמיס 28.6 μL של פוליאתילנימין (PEI) ב 10 מ"ל של DMSO ולהוסיף את הפתרון dropwise לבקבוק בשימוש בשלב 2.1. מערבבים במשך 3 ימים, לפחות.</li>
	<li>העבר את הפתרון המגיב משלב 2.4 לשקית דיאליזה (1,000 ניתוק משקל מולקולרי [MWCO]). מניחים את שקית הדיאליזה לתוך 1 L עם 500 מל של מים אולטרה סגולים כמו dialysate. לשנות את המים אולטרה דק כל 12 שעות במשך 3 ימים.</li>
	<li>להעביר את הפתרון בשלב 2.5 לשקית דיאליזה אחרת (10,000 MWCO). מניחים את שקית הדיאליזה לתוך 1 L עם 500 מל של מים אולטרה סגולים כמו dialysate. לשנות את המים אולטרה דק כל 12 שעות במשך 3 ימים.</li>
	<li>לרכז את הפתרון משלב 2.6 באמצעות מאייד סיבובי (40 °C (40 °C, 0.1 MPa) ולהקפיא לייבש את המדגם כדי להשיג את אבקת PEI-g-PEG.</li>
</ol>3. סינתזה של PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>ממיסים 5 מ"ג של PEI-g-PEG מוכן (שלב 2.7) ב-5 מ"ל של מים אולטרה-דקים בבקבוקון חדש ומתאימים לעצירת זכוכית.</li>
	<li>הוסף 100 מ"ל של 0.3 mM HAuCl4 פתרון בקבוק ומערבבים את הפתרון במשך 3 שעות ב RT. הערה: צבע הפתרון צריך להשתנות מיד מצהוב לכתום.</li>
	<li>הוסף 1 מ"ל של 1 מ"ג / מ"ל NaBH4 פתרון בקבוק ומערבבים את הפתרון במשך 3 שעות ב RT. הערה: פתרון התגובה צריך להפוך באופן מיידי בורגונדי.</li>
	<li>חייג את מוצר התגובה באמצעות שקית דיאליזה (1,000 MWCO) במשך 3 ימים כמתואר בשלב 2.5 כדי להשיג את הפתרון PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>4. סינתזה של DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>הוסף 1 מ"ל של 2.2 מ"ג / מ"ל DOX פתרון ו 20 מ"ל של PEI-g-PEG@AuNPs פתרון בקבוק חדש ולהתאים עם פקק זכוכית.</li>
	<li>להמיס 0.727 מ"ג של EDC ב 1 מ"ל של מים אולטרה מתוקים ולהוסיף את פתרון EDC לבקבוק בשימוש בשלב 4.1.</li>
	<li>להמיס 0.437 מ"ג של NHS ב 1 מ"ל של מים אולטרה סגולים. מוסיפים את פתרון NHS לבקבוק ומערבבים ב- RT במשך שעה.</li>
	<li>חייג את מוצר התגובה באמצעות שקית דיאליזה (1,000 MWCO) במשך 3 ימים כמתואר בשלב 2.5 כדי להשיג את הפתרון DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>5. סינתזה של AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>הוסף 20 מ"ל של פתרון DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ו- 4OD של AS1411 (OD = צפיפות אופטית; 1OD ≈ 33 מיקרוגרם) לבקבוקון חדש.</li>
	<li>להמיס 28.76 מ"ג של EDC ב 1 מ"ל של מים אולטרה מתוקים ולהוסיף את פתרון EDC לבקבוק בשימוש בשלב 5.1.</li>
	<li>להמיס 17.27 מ"ג של NHS ב 1 מ"ל של מים אולטרה סגולים. הוסף את פתרון NHS לבקבוק המשמש בשלב 5.1 ומערבבים את התגובה במשך שעה אחת ב- RT.</li>
	<li>חייג את מוצר התגובה באמצעות שקית דיאליזה (1,000 MWCO) במשך 3 ימים כמתואר בשלב 2.5 כדי להשיג AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>6. אפיון לדוגמה
<ol><li>להמיס את פולימר CT-PEG (שלב 1.8) ו PEI-g-PEG copolymer (שלב 2.7) בכלורופורם-d בצינורות תהודה מגנטית גרעינית (NMR), בהתאמה. לנתח את הדגימות באמצעות ספקטרומטר NMR 600 MHz מצויד מגנט מוליך-על 14.09 T ו 5.0 מ"מ 600 MHz פס רחב Z-שיפוע בדיקה ברזולוציה גבוהה כדי לאשר את המבנה הכימי34.</li>
	<li>פזרו את ה-AUNPs, DOX ו-AS1411 והכינו את PEI-g-PEG@AuNPs (שלב 3.4), DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (שלב 4.4) ו-AS1411-G-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (שלב 5.4), בהתאמה במים אולטרה-דקים. לאחר מכן, העברה לקובטים והקלט ספקטרום אולטרה סגול גלוי (UV-vis) באמצעות ספקטרופוטומטר UV-vis.</li>
	<li>חבר דבק דו-צדדי (~ 2 מ"מ x 2 מ"מ) לנייר אלומיניום, וטבל את הפתרון לדוגמה (PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ו- AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs) בקלטת כולה באופן אחיד. לנתח את הדגימות באמצעות מנתח ספקטרוסקופיה פוטואלקטרון רנטגן.</li>
	<li>פזרו פתרונות PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ופתרונות PEG@AUNPS AS1411-G-DOX-g-PEI-g-g,, בהתאמה במים אולטרה-דקים. לאחר מכן, העבר ל- cuvettes והערך את התפלגות הגודל באמצעות פיזור אור דינמי.</li>
	<li>פזרו פתרונות PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs ופתרונות PEG@AUNPS AS1411-g-DOX-G-PEI-g-g במים אולטרה-דקים (טיפה אחת של דגימה לכל 5 מ"ל מים אולטרה-דקים עבור כל דגימה). סוניקאט ל-2 שעות. טובלים את רשת הנחושת בפתרונות לדוגמה ומתייבשים תחת מנורת אינפרא אדום. לאפיין את המורפולוגיה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים שידור.</li>
	<li>הזרק 1 מ"ג של AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs לתוך 20 kDa MWCO קלטת דיאליזה, ולאחר מכן למקם 80 מ"ל של מלוחים מאגר פוספט (PBS) עם 5% אלבומין סרום בקר (BSA). מערבבים ב 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>בנקודות הזמן שנקבעו מראש, לאסוף 100 μL aliquots ולהחליף עם PBS טרי. השתמש ספקטרופוטומטר UV-vis כדי למדוד את עוצמת הפלואורסצנטיות DOX של aliquots.</li>
</ol>7. CCK-8 מבחנים של חלקיקי AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>לגדל תאי A549 במדיום הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) בתוספת 10% סרום שור עוברי, 100 U / mL פניצילין, ו 100 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין תחת אווירה לחה של 95% אוויר ו 5% CO2 ב 37 °C (67 °F). החלף את מדיום התרבות כל יומיים. השתמש בתאים במעבר 5 עבור התפשטות התא ו cytotoxicity מבחנים כדי להעריך כמותית את cytotoxicity של מוכן AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs חלקיקים.</li>
	<li>הוסף 100 μL של פתרון חלקיקים לתוך כל באר מכילים 1 מ"ל של מדיום התא. לאחר culturing עבור 24 שעות ו 48 שעות, להסיר את המדיה תרבות מצלחות תרבות התא, ולאחר מכן להוסיף 300 μL של מדיה תרבות טריים ו 30 μL של ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8) פתרונות ערכת מיד לכל באר. דגירה עבור 4 שעות באינקובטור CO2 ב 37 °C (69 °F).</li>
	<li>העבר 200 μL של פתרונות תגובה משלב 7.2 לתוך צלחת באר 96. קרא את הצפיפות האופטית (OD) של כל באר ב 570 ננומטר עם קורא microplate.</li>
	<li>שימו לב למורפולוגיה של התאים במהירות של 24 שעות ו-48 שעות מתחת למיקרוסקופ.</li>
</ol>

<ol><li>Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-tasking+base+ligand%3A+a+new+concept+of+AuNPs+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2019%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2019.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li>
<li>Jang, B., Kwon, H., Katila, P., Lee, S. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+delivery+of+biological+therapeutics+for+multimodal+and+synergistic+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dual delivery of biological therapeutics for multimodal and synergistic cancer therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 98, 113-133 (2016).</li>
<li>Gansler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixty+years+of+CA%3A+a+cancer+journal+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Sixty years of CA: a cancer journal for clinicians.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 60 (6), 345-350 (2010).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanism+for+Selective+Cytotoxicity+towards+Cancer+Cells+of+Diselenide-Containing+Paclitaxel+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanism for Selective Cytotoxicity towards Cancer Cells of Diselenide-Containing Paclitaxel Nanoparticles.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (8), 1755-1770 (2019).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+ratiometric+loading+of+PTX+and+DOX+based+on+redox-sensitive+mixed+micelles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Precise ratiometric loading of PTX and DOX based on redox-sensitive mixed micelles for cancer therapy.</a> Colloids Surfaces B: Biointerfaces. 155, 51-60 (2017).</li>
<li>Blum, R. H., Carter, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin.+A+new+anticancer+drug+with+significant+clinical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adriamycin. A new anticancer drug with significant clinical activity.</a> Annals of Internal Medicine. 80 (2), 249-259 (1974).</li>
<li>de Lima, R. D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+alleviates+the+deleterious+effect+of+doxorubicin+on+rat+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+Photobiology+B%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy alleviates the deleterious effect of doxorubicin on rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Photochemistry Photobiology B. 196, 111512(2019).</li>
<li>Markowska, A., Kaysiewicz, J., Markowska, J., Huczynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline%2C+salinomycin%2C+monensin+and+ivermectin+repositioned+as+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Doxycycline, salinomycin, monensin and ivermectin repositioned as cancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 29 (13), 1549-1554 (2019).</li>
<li>Songbo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+injury+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Toxicology Letters. 307, 41-48 (2019).</li>
<li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Gabizon, A., Shmeeda, H., Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+pegylated+liposomal+Doxorubicin%3A+review+of+animal+and+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin: review of animal and human studies.</a> Clinical Pharmacokinetics. 42 (5), 419-436 (2003).</li>
<li>Xu, X., Ho, W., Zhang, X., Bertrand, N., Farokhzad, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicine%3A+from+targeted+delivery+to+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicine: from targeted delivery to combination therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (4), 223-232 (2015).</li>
<li>Feng, S., Nie, L., Zou, P., Suo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+drug+and+polymer+molecular+weight+on+drug+release+from+PLGA-mPEG+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of drug and polymer molecular weight on drug release from PLGA-mPEG microspheres.</a> Journal of Applied Polymer Science. 132 (6), 41431(2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Temperature-sensitive+Hydrogel+with+VEGF+Loaded+Microspheres+for+Vascularization+and+Bone+Regeneration+of+Femoral+Head+Necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Letters%22%5BJournal%5D)">Injectable Temperature-sensitive Hydrogel with VEGF Loaded Microspheres for Vascularization and Bone Regeneration of Femoral Head Necrosis.</a> Materials Letters. 229, 138-141 (2018).</li>
<li>Abadeer, N. S., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Cancer+Thermal+Therapy+Using+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Cancer Thermal Therapy Using Gold Nanoparticles.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 120 (9), 4691-4716 (2016).</li>
<li>Riley, R. S., Day, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-mediated+photothermal+therapy%3A+applications+and+opportunities+for+multimodal+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-mediated photothermal therapy: applications and opportunities for multimodal cancer treatment.</a> WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (4), 1449(2017).</li>
<li>Fratoddi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Hydrophilic+Gold+Nanoparticles+as+Carrier+for+Anticancer+Copper%28I%29+Complexes%3A+Loading+and+Release+Studies+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly Hydrophilic Gold Nanoparticles as Carrier for Anticancer Copper(I) Complexes: Loading and Release Studies for Biomedical Applications.</a> Nanomaterials (Basel). 9 (5), 772(2019).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-loaded+gold+plasmonic+nanoparticles+for+treatment+of+multidrug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Drug-loaded gold plasmonic nanoparticles for treatment of multidrug resistance in cancer.</a> Biomaterials. 35 (7), 2272-2282 (2014).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2740-2779 (2012).</li>
<li>Wei, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+drug+nanomicelles+formed+by+self-assembling+amphiphilic+dendrimer+to+combat+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anticancer drug nanomicelles formed by self-assembling amphiphilic dendrimer to combat cancer drug resistance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (10), 2978-2983 (2015).</li>
<li>Galluzzi, L., Buque, A., Kepp, O., Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Effects+of+Conventional+Chemotherapy+and+Targeted+Anticancer+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunological Effects of Conventional Chemotherapy and Targeted Anticancer Agents.</a> Cancer Cell. 28 (6), 690-714 (2015).</li>
<li>Muddineti, O. S., Ghosh, B., Biswas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+trends+in+using+polymer+coated+gold+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Current trends in using polymer coated gold nanoparticles for cancer therapy.</a> International Journal of Pharmaceutics. 484 (1-2), 252-267 (2015).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+Orange+removal+by+a+novel+PEI-AuNPs-hemin+nanocomposite%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methyl Orange removal by a novel PEI-AuNPs-hemin nanocomposite.</a> Journal of Environmental Sciences. 53, 278-283 (2017).</li>
<li>Gu, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticles for cancer therapy.</a> Nano Today. 2 (3), 14-21 (2007).</li>
<li>Srinivasarao, M., Galliford, C. V., Low, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+the+design+of+ligand-targeted+cancer+therapeutics+and+imaging+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Principles in the design of ligand-targeted cancer therapeutics and imaging agents.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (3), 203-219 (2015).</li>
<li>Liu, Z., Shi, Y., Chen, Z., Duan, L., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+towards+the+use+of+aptamers+in+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Science+Bulletin+%28Chinese+Version%29%22%5BJournal%5D)">Current progress towards the use of aptamers in targeted cancer therapy.</a> Chinese Science Bulletin (Chinese Version). 59 (14), 1267(2014).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Vandghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+LNA-loaded+nanoparticles+of+star-shaped+glucose-core+PCL-PEG+copolymer+for+enhanced+inhibition+of+oncomiR-214+and+nucleolin-mediated+therapy+of+cisplatin-resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Antisense LNA-loaded nanoparticles of star-shaped glucose-core PCL-PEG copolymer for enhanced inhibition of oncomiR-214 and nucleolin-mediated therapy of cisplatin-resistant ovarian cancer cells.</a> International Journal of Pharmaceutics. 573, 118729(2020).</li>
<li>Andghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AS1411+aptamer-decorated+cisplatin-loaded+poly%28lactic-co-glycolic+acid%29+nanoparticles+for+targeted+therapy+of+miR-21-inhibited+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">AS1411 aptamer-decorated cisplatin-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles for targeted therapy of miR-21-inhibited ovarian cancer cells.</a> Nanomedicine. 13 (21), 2729-2758 (2018).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+anti-nucleolin+recombinant+immunoagent+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human anti-nucleolin recombinant immunoagent for cancer therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (30), 9418-9423 (2015).</li>
<li>Pichiorri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+NCL+targeting+affects+breast+cancer+aggressiveness+through+miRNA+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo NCL targeting affects breast cancer aggressiveness through miRNA regulation.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (5), 951-968 (2013).</li>
<li>Hou, S., McCauley, L. K., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+erosion+properties+of+PEG-containing+polyanhydrides%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Synthesis and erosion properties of PEG-containing polyanhydrides.</a> Macromolecular Bioscience. 7 (5), 620-628 (2007).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Vaginal+Hydrogels+as+a+Multi-Drug+Carrier+for+Contraception%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injectable Vaginal Hydrogels as a Multi-Drug Carrier for Contraception.</a> Applied Sciences. 9 (8), 1638(2019).</li>
<li>Zou, P., Suo, J., Nie, L., Feng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-responsive+biodegradable+star-shaped+block+copolymers+for+vaginal+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Temperature-responsive biodegradable star-shaped block copolymers for vaginal gels.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (13), 6316-6326 (2012).</li>
<li>Etrych, T., Šubr, V., Laga, R., Říhová, B., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+conjugates+of+doxorubicin+bound+through+an+amide+and+hydrazone+bond%3A+Impact+of+the+carrier+structure+onto+synergistic+action+in+the+treatment+of+solid+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 58, 1-12 (2014).</li>
<li>Safari, F., Tamaddon, A. M., Zarghami, N., Abolmali, S., Akbarzadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyelectrolyte+complexes+of+hTERT+siRNA+and+polyethyleneimine%3A+Effect+of+degree+of+PEG+grafting+on+biological+and+cellular+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyelectrolyte complexes of hTERT siRNA and polyethyleneimine: Effect of degree of PEG grafting on biological and cellular activity.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 44 (6), 1561-1568 (2016).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ספקטרום NMR 1H (איור 2) מאשר את הסינתזה המוצלחת של קופולימר CT-PEG וקופולימר PEI-g-PEG. המשקולות המולקולריות של PEG ו-PEI היו 1,000 ו-1,200, בהתאמה. בנוסף, המערכת הקטליטית EDC / NHS שימשה לסנתז PEI-g-PEG קופולימר באמצעות תגובות אמיד. יש לציין כי אם המשקלים המולקולריים של PEG ו- PEI השתנו לסנתז PEI-g-PEG copolymer, אז זמן התגובה ואת המערכת הקטליטית צריך להיות הערכה מחדש. כמו כן, מצב התגובה עבור ציפוי COPolymer PEI-G-PEG על AuNPs צריך להיות מותאם עוד יותר, בעיקר בגלל משקל המולקולה ו...

בהיותו הבעיה העיקרית בבריאות הציבור ברחבי העולם, סרטן מאופיין באופן נרחב כבעל שיעור ריפוי נמוך, שיעור הישנות גבוה ושיעור תמותה גבוה1,2. השיטות הקונבנציונליות הנוכחיות נגד סרטן כוללות ניתוח, כימותרפיה והקרנות3, ביניהן כימותרפיה היא הטיפול העיקרי לחולי סרטן במרפאה4. תרופות קליניות נגד סרטן בשימוש כוללות בעיקר paclitaxel (PTX)5 ו דוקסורוביצין (DOX)6,7. DOX, תרופה אנטי-ניאופלסטית, יושמה באופן נרחב בכימותרפיה קלינית, בשל היתרונות של ציטוטוקסיות סרטן ועיכוב התפשטות תאים סרטן8,9. עם זאת, DOX גורם לב-חזה10,11, ואת זמן מחצית החיים הקצר של DOX מגביל את היישום שלה במרפאה12. לכן, נשאי תרופות מתכלים נדרשים לטעון DOX ושחרור subequently באופן מבוקר לאזור ממוקד.
חלקיקים נמצאים בשימוש נרחב במערכות משלוח תרופות ממוקדות ויש להם מספר יתרונות בטיפול בסרטן (כלומר, יחס משטח לנפח גדול, גודל קטן, היכולת לתמצת תרופות שונות, כימיית משטח מתכווננת, וכו ') 13,14,15. בפרט, חלקיקי זהב (AuNPs) היו בשימוש נרחב ביישומים ביולוגיים וביו-רפואיים, כגון טיפול בסרטן פוטותרמי16,17. המאפיינים הייחודיים של AuNPs, כגון סינתזת facile ופונקציונליזציה משטח כללי, יש סיכויים מצוינים בתחום הקליני של טיפול בסרטן18. כמו כן, AuNPs שימשו כדי לזהות אסטרטגיות אספקת תרופות, לאבחן גידולים, להתגבר על ההתנגדות במחקרים רבים19,20.
למרות זאת, AuNPs צריך להיות מותאם עוד יותר כדי להתגבר על עמידות לסמים באמצעות שחרור מקומי גבוה בנגעים הגידול באמצעות חדירה משופרת ושמירה (EPR), כגון תכונות מיקוד ונגישות. תרופות רב-תכליתיות פולימריות הפגינו יתרונות ייחודיים, כגון מסיסות מים משופרת של תרופות הידרופוביות נגד סרטן וזמן זרימת דם ממושך21,22. פולימרים שונים בעלי תאימות ביולוגית שימשו לציפויים של AuNP, כגון פוליאתילן גליקול (PEG), פוליאתילנימין (PEI), חומצה היאלורונית, הפרין וקסנטן גאם. ואז היציבות, כמו גם את המטען, של AuNPs הוא השתפר היטב23. באופן ספציפי, PEI הוא פולימר מסועף מאוד המורכב מיחידות חוזרות רבות של אמינים ראשוניים, משניים ושלישוניים24. PEI יש מסיסות מעולה, צמיגות נמוכה, רמה גבוהה של פונקציונליות, אשר מתאים ציפוי על AuNPs.
מצד שני, תרופות נגד סרטן צריך להיות מועבר לתאי סרטן ישירות עם יעילות טעינה משופרת, ועם רעילות נמוכה יותר לטיפול בגידולים גרורתיים ראשוניים ומתקדמים25. ligands ממוקד יש פוטנציאל גדול עבור תרופות נגד סרטן ממוקד מערכות משלוח26. הסלקטיביות שלה עבור מולקולת היעד מחייב מעניק תרופה נגד סרטן מיקוד ספציפיות ומגביר את העשרת התרופה ברקמות חולות27. ליגנדים נוספים כוללים נוגדנים, פוליפפטידים ומולקולות קטנות. בהשוואה ליגנדים אחרים, חומצת גרעין aptamers יכול להיות מסונתז במבחנה והם קלים לשינוי. AS1411 הוא אוליגונוקלאוטיד phosphodiester 26 bp ללא שינוי המהווה מבנה G-tetramer דימרי יציב לאגד במיוחד קולטן חלבון גרעיני היעד overexpressed על תאים סרטניים28,29,30. AS1411 מעכב את התפשטותם של תאים סרטניים רבים אך אינו משפיע על הצמיחה של תאים בריאים31,32. כתוצאה מכך, AS1411 שימש כדי לפברק מערכת אספקת סמים ממוקדת אידיאלית.
במחקר זה, קופולימר PEI-g-PEG מסונתז באמצעות תגובת אמיד, אז PEI-g-PEG חלקיקי זהב מצופים (PEI-g-PEG@AuNPs) הם מפוברק. בנוסף, DOX ו- AS1411 מקושרים ברצף PEG@AuNPs PEI-g-g המוכן, כפי שמוצג באיור 1. פרוטוקול מפורט זה נועד לסייע לחוקרים להימנע רבים מהמלכודות הנפוצות הקשורות לייצור PEG@AUNPS PEI-g-PEG@AuNPs חדש טעון עם DOX ו- AS1411.

<table><tbody><tr><td>4-Dimethylaminopyridine</td><td>Macklin</td><td>D807273</td><td></td></tr><tr><td>A549 תא</td><td></td><td>ATCC CCL-185TM</td><td></td></tr><tr><td>AS1411</td><td>BBI Life Sciences Corporation</td><td></td><td>5'-d (TTTGGTGGTGTGGTTGTGTGGTGGTGGTGG) FL-AS1411 (פלואורופור מסומן AS1411)</td></tr> <tr><td>נטול מים טטרהידרופוראן (THF)</td> <td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ערכת ספירת תאים -8 ( CCK-8)</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>96992-500TESTS-F</td><td></td></tr><tr><td>דיכלורומתאן</td><td>רפואה סינית מסורתית</td><td>80047318</td><td></td></tr><tr><td>אתר דיאתיל (Et2O)</td> <td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>מקלין</td><td>D806645</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הנשר המותאם של דולבקו (DMEM)</td><td>סיגמא אולדריץ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>'דוקסורוביצין הידרוכלוריד</td><td>Rhawn</td><td>R017518</td><td></td></tr><tr><td>אתר מוחלט</td><td>רפואה סינית מסורתית</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>העברת פליטת שדה מיקרוסקופ</td><td>אלקטרונים FEI Company</td><td>Tecnai G2 F 20</td><td></td></tr><tr><td>Gold(III) כלוריד טריהידראט</td><td>Rhawn</td><td>R016035</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר לייזר בגודל חלקיקים</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>ZetasizerNanoZS/ Masterszer3000E</td><td></td></tr><tr><td>Microplate Reader</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride</td><td>Macklin</td><td>N808856</td><td></td></tr><tr><td>N-Hydroxysuccinimide</td><td>Macklin</td><td>H6231</td><td></td></tr><tr><td>NMR תוכנה</td><td>דלתא 5.2.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר תהודה מגנטית גרעינית</td><td>JEOL</td><td>JNM-ECZ600R/S3</td><td></td></tr><tr><td>מקור 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פניצילין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>V900929-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>פולי (אתילן גליקול)</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>81188</td><td>BioUltra, תמיסת Mn ~ 1000</td></tr><tr><td>פולי (אתילנימין) ממוצעת</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>482595</td><td>ממוצע Mn ~ 1200, 50 wt.% ב-H2O</td></tr><tr><td>נתרן בורוהידריד, אבקה</td><td>Acros</td><td>C18930</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>85886-10ML</td><td></td></tr><tr><td>אנהידריד סוקסיני</td><td>רפואה סינית מסורתית</td><td>30171826</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran</td><td>רפואה סינית מסורתית</td><td>40058161</td><td></td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>רפואה סינית מסורתית</td><td>80134318</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר UV/VIS/NIR</td><td>Lambda950</td><td>Lambda950</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר פוטו-אלקטרונים רנטגן</td><td>Thermo&ensp; פישר&ensp; מדע</td><td>K-ALPHA 0.5EV</td><td></td></tr></tbody></table>

סינתזה של aptamer-pei-g-peg שונה חלקיקי זהב טעון עם וקסורוביצ'ין עבור משלוח תרופות ממוקדות

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

בשל עמידות לתרופות ורעילות בתאים בריאים, השימוש ב- doxorubicin (DOX) הוגבל בטיפול קליני בסרטן. פרוטוקול זה מתאר את העיצוב של פולי (אתילנימין) מושתל עם פוליאתילן גליקול (PEI-g-PEG) חלקיקי זהב פונקציונליים (AuNPs) עם aptamer טעון (AS1411) ו DOX באמצעות תגובות אמיד. AS1411 מחובר במיוחד עם קולטני גרעין ממוקדים על תאים סרטניים, כך DOX מטרות תאים סרטניים במקום תאים בריאים. ראשית, PEG הוא carboxylated, לאחר מכן מושתל PEI מסועף כדי לקבל COPolymer PEI-g-PEG, אשר אושרה על ידי ניתוח 1H NMR. לאחר מכן, חלקיקי זהב מצופים קופולימר PEI-g-PEG (PEI-g-PEG@AuNPs) מסונתזים, ו- DOX ו- AS1411 נקשרים בקובאליות ל- AuNPs בהדרגה באמצעות תגובות עמידות. הקוטר של AS1411-g-DOX-g-PEI-g-g-PEG@AuNPs מוכן הוא ~ 39.9 ננומטר, עם פוטנציאל זטה של -29.3 mV, המציין כי חלקיקים יציבים במים ובינוני תאים. מבחני ציטוטוקסיות התא מראים כי AuNPs DOX שתוכנן לאחרונה מסוגלים להרוג תאים סרטניים (A549). סינתזה זו מדגימה את הסידור העדין של קופולימרים PEI-g-PEG, aptamers, ו DOX על AuNPs מושגים על ידי תגובות אמיד רציפות. כזה aptamer-PEI-g-PEG פונקציונלי AuNPs לספק פלטפורמה מבטיחה עבור אספקת תרופות ממוקדות בטיפול בסרטן.

1 ספקטרוסקופיית H NMR שימשה לאישור הסינתזה המוצלחת של פולימר CT-PEG וקופולימרים PEI-g-PEG(איור 2). איור 2a מראה כי אות פרוטון מתילן ב- δ = 3.61 עמודים לדקה ואות פרוטון קרבוקסיל ב- δ = 2.57 עמודים לדקה מאשרים את הסינתזה המוצלחת של פולימרים CT-PEG. איור 2b מראה כי אות פרוטון המתילן של PEG ב- δ = 2.6 עמודים לדקה ואות פרוטון של PEI ב- δ = 1.66 עמודים לדקה מאשרים את הסינתזה של קופולימרים PEI...

בפרוטוקול זה, דולסורוביצ'ין טעון AS1411-g-PEI-g-PEG חלקיקי זהב שונה מסונתזים באמצעות תגובות אמיד שלושה שלבים. לאחר מכן, דוסורוביצ'ין נטען ונמסר כדי למקד תאים סרטניים לטיפול בסרטן.

סינתזה של Aptamer-PEI-g-PEG שונה חלקיקי זהב טעון עם וקסורוביצ'ין עבור משלוח תרופות ממוקדות

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

בגלל העמידות והרעילות לתרופות, השימוש בדוקסורוביצין מוגבל במרפאה. פרוטוקול זה מספק נשא מתכלה לשמירה על שחרור חומר טיפולי זה. היתרון בשיטה זו הוא שניתן להשתמש בנשא המסונתז כדי להעביר את התרופה ישירות לתאים הסרטניים, ולגרום למוות תאי בתאי הסרטן בלבד.לסינתזה של CT-PEG, יש להוסיף תחילה 1.46 גרם אנהידריד סוקסיני ו-209 מיליגרם של 4-דימתילאמינופירידין לבקבוק תחתון עגול של 100 מיליליטר. לאחר מכן, הוסף 15 מיליליטר של טטרהידרופורן נטול מים לבקבוק והכנס פקק זכוכית לבקבוק, לפני הדגירה של התגובה למשך 30 דקות באפס מעלות צלזיוס. במהלך הדגירה מוסיפים לבקבוק חדש 4.208 גרם PEG, 1.8 מיליליטר טריאתילאמין ו -15 מיליליטר טטרהידרופוראן נטול מים וסוגרים את הבקבוק עם פקק זכוכית.בתום הדגירה, השתמש במזרק מתחת לאטמוספירת חנקן כדי להעביר לאט את התמיסה השנייה לבקבוק הראשון. מערבבים את התמיסה החדשה במשך שעתיים באפס מעלות צלזיוס, לפני שממשיכים את התגובה בטמפרטורת החדר למשך הלילה. למחרת בבוקר, השתמש במאייד סיבובי ב-40 מעלות צלזיוס ו-0.1 מגה-פסקל כדי לרכז את תמיסת התגובה ולהסיר את הממס הטטרהידרופורן.לאחר שעה, ממיסים את תמיסת התגובה ב -15 מיליליטר של 1.325 גרם למיליליטר דיכלורומתאן בטמפרטורת החדר, לפני הוספת 15 מיליליטר אתר דיאתיל קר כדי להשיג את תוצר המשקעים הדו-חומצי PEG. לאחר מכן הסר את הממס באמצעות נייר פילטר וייבש את המשקעים בוואקום למשך 48 שעות בטמפרטורת החדר. לסינתזה של קופולימר PEI-g-PEG, הוסף 305.47 מיליגרם של משקעי CT-PEG וחמישה מיליליטר של DMSO לבקבוק חדש וערבב את התגובה בטמפרטורת החדר עד להמסה מלאה של ה-CT-PEG.לאחר מכן, ממיסים 49.46 מיליגרם של EDC בחמישה מיליליטר DMSO ומוסיפים את התמיסה לבקבוק. מערבבים את התגובה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר, לפני שממיסים 29.69 מיליגרם של N-Hydroxysuccinimide וחמישה מיליליטר DMSO ומוסיפים את התמיסה המתקבלת לבקבוק. המשיכו לערבב את התגובה במשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר.לקראת סוף הדגירה, ממיסים 28.6 מיקרוליטר PEI ל -10 מיליליטר DMSO ומוסיפים את התמיסה בחוכמה טיפה לבקבוק. מערבבים את התגובה בטמפרטורת החדר למשך שלושה ימים לפחות. בתום הדגירה, העבירו את התמיסה המגיבה לשקית דיאליזה עם חתך של 1000 משקל מולקולרי והניחו את השקית בכוס ליטר אחד המכילה 500 מיליליטר מים טהורים במיוחד כדיאליזה.בתום הדיאליזה, העבירו את התמיסה לשקית דיאליזה עם חתך של 10,000 משקל מולקולרי והניחו את השקית בכוס ליטר אחד עם 500 מיליליטר מים טהורים במיוחד כדיאליזה. בתום הדיאליזה השנייה, השתמש במאייד סיבובי ב-40 מעלות צלזיוס ו-0.1 מגה-פסקל כדי לרכז את התמיסה ולייבש בהקפאה את הדגימה לקבלת אבקת PEI-g-PEG. לציפוי ננו-חלקיקי זהב במוצר PEI-g-PEG, ממיסים חמישה מיליגרם של ה-PEI-g-PEG המוכן בחמישה מיליליטר מים טהורים במיוחד בבקבוק חדש ומתאימים את הבקבוק עם פקק זכוכית.הוסף לבקבוק 100 מיליליטר של תמיסת כלוריד אורית של 0.3 מילי-מולרית וערבב את התמיסה במשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר. הצבעים צריכים להשתנות מיד מצהוב בהיר לצהוב כהה. בתום הדגירה מוסיפים לבקבוק מיליליטר אחד של מיליגרם אחד למיליליטר של תמיסת נתרן בורוהידריד.הצבע צריך להשתנות מיד מצהוב כהה לצהוב זהוב, ולערבב את התמיסה למשך שלוש שעות נוספות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן יש לבצע דיאליזה של תוצר התגובה עם שקית דיאליזה במשקל מולקולרי של 1000 למשך שלושה ימים כפי שהודגם כדי להשיג את תמיסת ננו-חלקיקי הזהב המצופה PEI-g-PEG. להשתלת דוקסורוביצין לננו-חלקיקי זהב מצופים PEI-g-PEG.הוסף מיליליטר אחד של 2.2 מיליגרם לתמיסת דוקסורוביצין מיליליטר ו-20 מיליליטר של תמיסת ננו-חלקיקי זהב מצופה PEI-g-PEG לבקבוק חדש והתאם את הבקבוק עם פקק זכוכית. לאחר מכן, ממיסים 0.727 מיליגרם של EDC במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד ומוסיפים את תמיסת ה-EDC לבקבוק. ממיסים 0.437 מיליגרם של N-Hydroxysuccinimide במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד, ומוסיפים את תמיסת N-Hydroxysuccinimide לבקבוק למשך שעה אחת תוך ערבוב בטמפרטורת החדר.בתום הדגירה, יש לבצע דיאליזה של תוצר התגובה בשקית דיאליזה במשקל מולקולרי של 1000 למשך שלושה ימים כפי שהודגם כדי להשיג את תמיסת ננו-חלקיקי הזהב המצופה דוקסורוביצין g-PEI-g-PEG. להשתלת אפטמר AS1411 ל-DOX-g-PEI-g-PEG. הוסף 20 מיליליטר של תמיסת ננו-חלקיקי זהב מצופה דוקסורוביצין DOX-g-PEI-g-PEG לריכוז צפיפות אופטית של כארבעה של AS1411.ממיסים 28.76 מיליגרם של EDC במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד ומוסיפים את תמיסת ה-EDC לבקבוק. ממיסים 17.27 מיליגרם של N-Hydroxysuccinimide במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד ומוסיפים את תמיסת N-Hydroxysuccinimide לבקבוק למשך שעה של דגירה תוך ערבוב בטמפרטורת החדר. לאחר מכן יש לבצע דיאליזה של תוצר התגובה בשקית דיאליזה במשקל מולקולרי של 1000 למשך שלושה ימים כפי שהודגם כדי להשיג ננו-חלקיקי זהב מצופים AS1411-g-Doxorubicin-g-PEI-g-PEG.ניתן להשתמש בספקטרוסקופיה של תמ"ג פרוטון כדי לאשר את הסינתזה המוצלחת של פולימר CT-PEG וקופולימרים PIE-g-PEG. ניתן לבצע ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה כדי לקבוע את הפונקציונליזציה המוצלחת והטעינה ההדרגתית של קופולימר מוכן על ננו-חלקיקי זהב. ניתן להשתמש בספקטרוסקופיה של אלקטרונים צילום רנטגן כדי לחקור את הקשר הכימי של קו-פולימר על ננו-חלקיקי זהב.ניתן לבצע פיזור אור דינמי כדי לקבוע את התפלגות הגודל של הננו-חלקיקים המוכנים. בניתוח זה, מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה חשף ננו-חלקיקים לא מקובצים עם מורפולוגיה אחידה. ניתוח כדאיות התא חשף ירידה במספר תאי A549 לאורך זמן ובתגובה לעלייה בריכוזים של ננו-חלקיקים.בהשוואה לקבוצת הדוקסורוביצין החופשית, מספר התאים גדל, עם זאת, מה שמעיד על רעילות מופחתת. יתר על כן, ניתוח פרופיל שחרור הדוקסורוביצין מגלה כי שחרור מתמשך של דוקסורוביצין מננו-חלקיקים פונקציונליים גרם לירידה בתאי A549. הכנת הקופולימר PEI-g-PEG ושלבי ההשתלה AS1411 חשובים להצלחת יישום ההליך.ניתן להשיג את אותו נשא תרופה על ידי השתלת AS1411 לפני השתלת תרופות, אך יעילות העמסת התרופות תפחת.

synthesis-aptamer-pei-g-peg-modified-gold-nanoparticles-loaded-with

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

סוג B ג'לטין מערכת מבוססת nanovectors מהונדסים (גנס) פותחה עבור משלוח גן transfection מערכתית בטיפול בסרטן הלבלב. על ידי שינוי עם קולטן גורם הצמיחה אפידרמיס (EGFR) פפטיד מסוים על פני השטח של nanparticles, הם יכולים למקד על הקולטן EGFR ולשחרר פלסמיד תחת צמצום הסביבה, כגון ריכוזים גבוהים גלוטתיון תאיים.

משלוח ין transfection ב אדם בתאי סרטן הלבלב באמצעות גורם גדילה עוריות קולטן במיקוד לטין מבוסס Nanovectors מתוכנן

מאמר זה מפרט את הנהלים לניתוח הדמיה אופטי של nanoparticle גידול הממוקד, HerDox. בפרט, שימוש מפורט של מכשיר ההדמיה multimode לאיתור גידול מיקוד והערכת חדירת גידול מתואר כאן.

ניתוח של חלבון נגיפי ממוקד חלקיקים מובא לHER2 + גידולים

דוגמא של תרופה הננו על בסיס חומצת polymalic מוצגת לקראת תכנון רציונלים של רפואה אישית כי הוא ישים לסרטן. הוא מתאר את הסינתזה של תרופת ננו לטיפול בסרטן השד אנושי מסוג HER2 חיובי בעכבר בעירום.

Biopolymers מבוסס חומצת Polymalic ננו עבור מיקוד של גידול סמנים מרובים: הזדמנות לרפואה מותאמת אישית?

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לסינתזה של חלקיקי מגנטים plasmonic עם מומנט מגנטי חזק וספיג חזק קרוב אינפרא אדום (NIR). הפרוטוקול כולל גם נטיית נוגדן לחלקיקים דרך מחצית Fc עבור יישומים ביו שונים הדורשים מיקוד ספציפי מולקולרי.

Nanoclusters סינתזה של Immunotargeted מגנטתי plasmonic

אנו מראים את ההכנה ומתייחסים להיתכנות של כלי רכב סלולריים המכילים ננו-מוטות זהב להדמיה פוטו-אקוסטית של סרטן.

ניתוח הכנת photoacoustic של כלי רכב ניידים המכילים Nanorods הזהב

פרוטוקול עבור ההכנה והאפיון של סמי פרו דוקסורוביצין lipophilic טעון 1,2-distearoyl- SN -glycero-3-phosphoethanolamine- N - [אמינו (פוליאתילן גליקול) -2000] (DSPE-PEG) מיצלות מתוארת.

הכנה ואפיון של דוקסורוביצין lipophilic Micelles פרו-סמים

ננו-חלקיק גביש נוזלי (LCNP) nanocarrier מנוצלת ככלי עבור במסירה מבוקרת של מטען הידרופובי אל קרום הפלזמה של תאים חיים.

משלוח הממברנה ממוקד על Encapsulated מטענים הידרופובי בנושאת Nanoparticle קריסטל נוזלת

פרוטוקול זה מתאר תהליך אנליטי יעיל ונוח של חילוץ מדגם ונחישות סימולטני של סמים מרובים, דוקסורוביצין (DOX), מיטומיצין C (MMC), מטבוליט רעיל אירובי DOX, doxorubicinol (DOXol), בהביולוגי דוגמאות של המודל הגידול השד פרה שטופלו nanoparticle ניסוחים שילוב סינרגטי סמים.

חילוץ מדגם, כימות כרומטוגרפי סימולטני של דוקסורוביצין, מיטומיצין C שלאחר משלוח סמים בשילוב של חלקיקים נושאות לעכברים

אנו מתארים שיטה של סינתזה ביולוגית חלקיקי זהב 10 ננומטר, functionalized על ידי ציפוי פולי-אתילן גליקול על גבי המשטח. חלקיקים אלה יכולים להיות בשימוש במבחנה , ויוו להעברת הרפוי לחללים הסלולר, חוץ-תאית ננו אשר קשות לגישה עם גדלים nanoparticle קונבנציונלי.

סינתזה של Functionalized 10-nm פולימר מצופה זהב חלקיקים אנדותל הכוונת משלוח סמים

בעבר השתמשנו היברידית פפטיד nanoparticle זהב להעביר דרך הווריד של פפטיד סינתטי, חלבון קינאז C-דלתא מעכב, אשר מופחת איסכמיה-פגיעה reperfusion-induced ריאות חריפה פציעה. הנה אנחנו מראים את פרוטוקול מפורט של ניסוח סמים. פפטידים תאיים אחרים יכול לנסח באופן דומה.

חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

למדו סינתזה של ננו-חלקי זהב מצופים AS1411-g-PEI-g-PEG לשחרור ממוקד של דוקסורוביצין לתאי סרטן. שיטה זו מפחיתה רעילות ומגבירה יעילות טיפולית בטיפול בסרטן.

סינתזה של Aptamer-PEI-g-PEG שונה חלקיקי זהב טעון עם וקסורוביצ'ין עבור משלוח תרופות ממוקדות

גלה סרטונים נוספים