Name: מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: למד שיטת האכלה מבוססת קפסולה לקרציות קשות לא בוגרות בעכברי מעבדה. השיטה מאפשרת ניטור רציף, איסוף קל ושימוש חוזר בחיות הניסוי ללא פגיעה משמעותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים בסיוע הטכני של המכון הלאומי הלאומי אלן ברניאר למחקר חקלאי (INRAE), וOcéane Le Bidel (ANSES). המחקר נתמך על ידי דים אחד בריאות - Région איל דה פראנס (ראשי תיבות של הפרויקט: NeuroPaTick). העכברים נרכשו על ידי ANSES. ד"ר ג'פרי ל. בלייר מוכר על סקירת הגרסה הקודמת של כתב היד.

אנא שימו לב כי פרוטוקול זה יכול לחול רק כאשר כל אמצעי הרווחה והבטיחות יתקיימו במעבדה. פרוטוקול זה קיבל אישור להשתמש בעכברים להזנת קרציות על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חייםComEth Anses/ENVA/UPEC, מספרי היתר E 94 046 08. עבור נקודת הקצה, בעלי החיים נחשפו CO2 במשך 9 דקות בשני שלבים של 4 ו 5 דקות כל אחד.
1. הכנת הקפסולה
<ol><li>מקל 2 מ"מ EVA עבה קצף וקצף דביק כפול דביק יחד(איור 1A).</li>
	<li>בעזרת ניקוב חור עור בקוטר 20 מ"מ, חותכים עיגול מחתיכות הקצף הדביקות. לאחר מכן, באמצעות ניקוב חור בקוטר 12 מ"מ, לחתוך את הפנים כדי ליצור את מעגל קצף כפול(איור 1B). הערה: עובי המסגרת של הקפסולה צריך להיות גדול מ-3 מ"מ בגודל כדי להבטיח משטח מספיק לתהליך ההתמהמהות לעור המארח (ראה להלן).</li>
	<li>מקלפים את רצועת נייר המגן מהקצף הדביק הכפול(איור 1C)וצרףו פלסטיק עגול שקוף בקוטר 20 מ"מ(איור 1D). הערה: אם האכלה זחלים, לא להסיר את רצועת נייר ההגנה מקצף דבק ולעבור ישירות לשלב 2 בפרוטוקול. הדבק את טבעת הקצף הכפולה, כולל רצועת נייר מגן לעכבר.</li>
	<li>לעשות ~ 1 ס"מ חריץ בפלסטיק שקוף (איור 1E).</li>
	<li>ליצור לפחות 10 חורים קטנים עם סיכה אנטומולוגית(איור 1F)כדי לאפשר אידוי לחות מוגזם במהלך הניסוי. הערה: הקפסולה(איור 1G)יש גובה כולל של 4 מ"מ (2 מ"מ EVA-קצף יחד עם 2 מ"מ קצף דבק) והוא יכול לשמש כדי להאכיל נימפות וזחלים של כל מיני קרציות קשה. גודל הקפסולה (איור 1H) בקוטר חיצוני של 20 מ"מ מתאים לרוב הזנים של העכבר, אך ניתן לשנותו במידת הצורך.</li>
</ol>2. הכנת העכברים לפני שריצה קרציות
הערה: במחקר זה, 10 - 12 שבועות עכברים ניסיוניים נקבה בת שבועות (זן C57BL/6 ו BALB /cByJ) נשמרו בכלובים סטנדרטיים עם מזון ומים הציעו ליביטום אד (קו ירוק מאוורר מתלים ב -20 הרשות) בסוכנות הצרפתית למזון, בריאות סביבתית ותעסוקתית & בטיחות (ANSES) מתקני בעלי חיים מוכרים ב Maisons-Alfort, צרפת. בעלי חיים היו במעקב פעמיים ביום על ידי טכנאים מנוסים לכל תגובות עור חריגות, בעיות בריאות או סיבוכים.
<ol><li>להניא עכבר עם זופלוראן בתא האינדוקציה. לאחר ההדמה, מניחים את העכבר על משטח המניפולציה וצרףו לקונוס אף לאספקת isoflurane רציפה(איור 2A). נטרו את קצב הנשימה והפחיתו את רמת ההשתסה כדי לוודא שפחות מ-80 נשימות לדקה. הערה: לפני המניפולציה, תייג את העכבר הבודד על-ידי קעקוע או שבב זיהוי תדר רדיו במידת הצורך. מומלץ לשמור על העכברים הבודדים בכלובים נפרדים כדי למנוע נזק כמוסה על ידי נשכוך.</li>
	<li>לגלח את החלק הקדמי של העכבר מאחורי הכתף להבים עד לאזור ממש מאחורי האוזניים(איור 2A). הערה: האזור המגולח צריך להיות גדול יותר משטח הקפסולה.</li>
	<li>למרוח דבק לטקס לא מעצבן על כל אתר קצף EVA של הקפסולה המוכנה ולחכות 1 דקות(איור 2B).</li>
	<li>הדבק את הקפסולה לעכבר על-ידי לחץ קל של 3 דקות עםהאצבעות (איור 2C), במיוחדבצד שמאל וימין של הקפסולה. הרם מעט את הקפסולה כדי לבדוק ויזואלית את הקשר שלה לעור. אם נמצאו אזורים שאינם מחוברים, החל דבק נוסף באמצעות מרית ולחץ למשך 3 דקות נוספות.</li>
</ol>3. שריצה טיק
<ol><li>לשריצה נימפה, להכניס את נימפות בודדות לתוך הקפסולה באמצעות החתך עשה בשלב 1.4(איור 2D). הערה: עבור מינים קרציות Ixodes מקסימום של 20 נימפות מומלץ לכל כמוסה אחת.</li>
	<li>לסחוט מעט את הקפסולה משני הצדדים כדי לאפשר פלסטיק שקוף להתכופף עבור מבוא קל יותר של נימפות בודדות באמצעות מלחציים פירוקבסדר (איור 2D). לדחוף את הנימפות בודדות דרך החתך בתוך הקפסולה. ברגע שנכנסים, הפעל את המקרנים ב-90° ומשוך את המפסים להפקיד קרציות בתוך הקפסולה.</li>
	<li>לשריצה זחלים להסיר את פתק הנייר מהקפסולה המצורפת(איור 2E). מניחים את המזרק, המכיל זחלים(איור 2F),ישירות בתוך הקפסולה ומשקעים על ידי דחיפת בוכנה המזרק. סובבו בעדינות את הבוכנה לכיוון העור כדי להסיר את שאר הזחלים המחוברים. הערה: מניחים זחלים במזרק של 1 מ"ל עם קצה חתוכה שמחובר לחתיכת כותנה לפני הניסוי.</li>
	<li>לאחר שהזחלים מופקדים על העור, סגור את הכמוסה על ידי חיבור הפלסטיק השקוף(איור 2G).</li>
	<li>למרוח את רצועה פלסטיק מגן סביב הכמוסה (איור 2H). הערה: רצועה פלסטיק מגן שיפרה מאוד את העמידות של הקפסולה במשך כל תקופת הניסוי (איור 2I,J). ניתן לחבר שתי כמוסות לעכבר אחד בודד(איור 2K). במקרה זה, יש להגדיל לפחות 3 מ"מ בין הכמוסות ואת האזור המגולח יש להגדיל כראוי.</li>
	<li>החזר את העכברים לכלוב.</li>
</ol>4. אוסף קרציות
<ol><li>להניע את העכבר כמו בשלב 2.1 לעיל.</li>
	<li>לעשות חתך בצורת צלב(איור 3A)לפלסטיק עם אזמל. הערה: חתך בצורת צלב זה מאפשר איסוף קל של קרציות גדושות או ניתוק של קרציות ההאכלה במידת הצורך.</li>
	<li>במידת הצורך, תסתרו מחדש את הכמוסה על-ידי הדבקת מדבקת פלסטיק דביקה לפלסטיק השקוף (קוטר 20 מ"מ, איור 3B). הערה: אם רצוי אוסף קרציות בנקודות זמן מרובות, ניתן להשתמש באותו תיקון פלסטיק דביק. אם הפרוטוקול דורש, אפשר גם להמתת תותן לעכבר, להסיר את הקפסולה ולאסוף/לנתק את הקרציות(איור 3C).</li>
</ol>5. שחזור העכברים
<ol><li>שמור את העכברים בכלוב לשבוע נוסף.</li>
	<li>תן לקפסולה לנתק באופן טבעי. הערה: במקרה זה, זה לוקח בערך 8-9 ימים עבור כמוסות ליפול. כאשר הקפסולה מוסרת, חשוב לבדוק אם יש תגובות חריגות על העור של העכברים. במקרה של גירוי להחיל עלם מרכך, אם כי בדרך כלל אין טיפול נדרש. אם הפרוטוקול האתי מאפשר, ניתן לעשות בהןאפשרות לעשות פעולהנוספת בעכברים השוחזרים (איור תלת-מימד) לצורך התפשטות קרציות אחרת או לניסויים שונים.</li>
</ol>

<ol><li>Sonenshine, D. E., Roe, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSonenshine%2C+DE+%22Biology+of+Ticks%22">Biology of Ticks</a>. , Oxford University Press. (2014).</li>
<li>Kröber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Parasitology%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
<li>Bonnet, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transstadial+and+transovarial+persistence+of+Babesia+divergens+DNA+in+Ixodes+ricinus+ticks+fed+on+infected+blood+in+a+new+skin-feeding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology%22%5BJournal%5D)">Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique.</a> Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).</li>
<li>Bonnet, S., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+artificial+infection+of+hard+ticks%3A+A+tool+for+the+analysis+of+tick-borne+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Acarologia%22%5BJournal%5D)">Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission.</a> Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).</li>
<li>Kohls, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain wood tick, Dermacentor andersoni. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKohls%2C+GM+%22Culture+methods+for+invertebrate+animals%22">Culture methods for invertebrate animals</a>. Galtsoff, P. S., Lutz, F. E., Welch, P. S., Needham, J. G. , Comstock Publishing Co. Ithaca, N.Y. 246-256 (1937).</li>
<li>Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbits+%28Oryctolagus+cuniculus%29+as+experimental+hosts+for+Amblyomma+dubitatum.+Neumann+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arquivo+Brasileiro+de+Medicina+Veterin%C3%A1ria+e+Zootecnia%22%5BJournal%5D)">Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum. Neumann (Acari: Ixodidae).</a> Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).</li>
<li>Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+weight+and+number+of+engorged+Amblyomma+cooperi.+Nuttal+%28sic.%29+and+Warburton%2C+1908+%28Acari%3A+Ixodidae%29+larvae+and+nymphs+and+eggs+from+experimental+infestations+on+domestic+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Veterinary+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic.) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbit.</a> Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).</li>
<li>Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSonenshine%2C+DE+%22Maintenance+of+Human%2C+Animal%2C+and+Plant+Pathogen+Vectors%22">Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors</a>. Maramorsch, K., Mahmood, F. , Science Publishers Inc. Enfield NH. 57-82 (1999).</li>
<li>Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+for+maintenance+of+multi-host+ixodid+ticks+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Applied+Acarology%22%5BJournal%5D)">Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory.</a> Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).</li>
<li>Almazán, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+protective+antigens+for+the+control+of+Ixodes+scapularis+infestations+using+cDNA+expression+library+immunization%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Identification of protective antigens for the control of Ixodes scapularis infestations using cDNA expression library immunization.</a> Vaccine. 21 (13-14), 1492-1501 (2003).</li>
<li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi.+%28Acari%3AIxodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Entomology%22%5BJournal%5D)">Laboratory life cycle of Ixodes woodi. (Acari:Ixodidae).</a> Journal of Medical Entomology. 35, 177-179 (1998).</li>
<li>Almazán, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+three+Ixodes+scapularis+cDNAs+protective+against+tick+infestations%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Characterization of three Ixodes scapularis cDNAs protective against tick infestations.</a> Vaccine. 23 (35), 4403-4416 (2005).</li>
<li>Levin, M. L., Ross, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+different+isolates+of+Anaplasma+phagocytophilum+by+Ixodes+scapularis+from+a+model+animal%5BTitle%5D)+AND+%22Vector+Borne+Zoonotic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Acquisition of different isolates of Anaplasma phagocytophilum by Ixodes scapularis from a model animal.</a> Vector Borne Zoonotic Diseases. 4 (1), 53-59 (2004).</li>
<li>Heinze, D. M., Wikel, S. K., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+the+murine+cutaneous+response+during+initial+and+subsequent+infestations+with+Ixodes+scapularis+nymphs%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of the murine cutaneous response during initial and subsequent infestations with Ixodes scapularis nymphs.</a> Parasites & Vectors. 6 (5), 26(2012).</li>
<li>Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing%2C+Ixodes+scapularis%2C+the+Black-legged+Tick%3A+Feeding+Immature+Stages+on+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rearing, Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55286(2017).</li>
<li>Wada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+ablation+of+basophils+in+mice+reveals+their+nonredundant+role+in+acquired+immunity+against+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Selective ablation of basophils in mice reveals their nonredundant role in acquired immunity against ticks.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (8), 2867-2875 (2010).</li>
<li>Saito, T. B., Walker, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tick+Vector+Transmission+Model+of+Monocytotropic+Ehrlichiosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A Tick Vector Transmission Model of Monocytotropic Ehrlichiosis.</a> The Journal of Infectious Diseases. 212 (6), 968-977 (2015).</li>
<li>Boppana, V. D., Thangamani, S., Alarcon-Chaidez, F. J., Adler, A. J., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+feeding+by+the+Rocky+Mountain+spotted+fever+vector%2C+Dermacentor+andersoni%2C+induces+interleukin-4+expression+by+cognate+antigen+responding+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">Blood feeding by the Rocky Mountain spotted fever vector, Dermacentor andersoni, induces interleukin-4 expression by cognate antigen responding CD4+ T cells.</a> Parasites & Vectors. 2 (1), 47(2009).</li>
<li>Gargili, A., Thangamani, S., Bente, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+laboratory+animal+hosts+on+the+life+cycle+of+Hyalomma+marginatum+and+implications+for+an+in+vivo+transmission+model+for+Crimean-Congo+hemorrhagic+fever+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Infection+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Influence of laboratory animal hosts on the life cycle of Hyalomma marginatum and implications for an in vivo transmission model for Crimean-Congo hemorrhagic fever virus.</a> Frontiers in Cell and Infection Microbiology. 20 (3), 39(2013).</li>
<li>Almazán, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Versatile+Model+of+Hard+Tick+Infestation+on+Laboratory+Rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), e57994(2018).</li>
<li>Zhijun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+life+cycle+and+biological+characteristics+of+Dermacentor+silvarum+Olenev+%28Acari%3A+Ixodidae%29+under+field+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Parasitology%22%5BJournal%5D)">The life cycle and biological characteristics of Dermacentor silvarum Olenev (Acari: Ixodidae) under field conditions.</a> Veterinary Parasitology. 168 (3-4), 323-328 (2010).</li>
<li>Ahmed, B. M., Taha, K. M., El Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+Hyalomma+anatolicum+Koch%2C+1844+%28Acari%3A+Ixodidae%29+fed+on+rabbits%2C+sheep+and+goats%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Life cycle of Hyalomma anatolicum Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) fed on rabbits, sheep and goats.</a> Veterinary Parasitology. 177 (3-4), 353-358 (2011).</li>
<li>Široký, P., Erhart, J., Petrželková, K. J., Kamler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+tortoise+tick+Hyalomma+aegyptium+under+laboratory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Applied+Acarology%22%5BJournal%5D)">Life cycle of tortoise tick Hyalomma aegyptium under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 54, 277-284 (2011).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+Haemaphysalis+doenitzi+%28Acari%3A+Ixodidae%29+under+laboratory+conditions+and+its+phylogeny+based+on+mitochondrial+16S+rDNA%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Applied+Acarology%22%5BJournal%5D)">Life cycle of Haemaphysalis doenitzi (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions and its phylogeny based on mitochondrial 16S rDNA.</a> Experimental and Applied Acarology. 56, 143-150 (2012).</li>
<li>Jin, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+Cycle+of+Dermacentor+everestianus+Hirst%2C+1926+%28Acari%3A+Ixodidae%29+under+Laboratory+Conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+Journal+of+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Life Cycle of Dermacentor everestianus Hirst, 1926 (Acari: Ixodidae) under Laboratory Conditions.</a> Korean Journal of Parasitology. 55 (2), 193-196 (2017).</li>
<li>Labruna, M. B., Fugisaki, E. Y., Pinter, A., Duarte, J. M., Szabó, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+and+host+specificity+of+Amblyomma+triste+%28Acari%3A+Ixodidae%29+under+laboratory+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Applied+Acarology%22%5BJournal%5D)">Life cycle and host specificity of Amblyomma triste (Acari: Ixodidae) under laboratory conditions.</a> Experimental and Applied Acarology. 30 (4), 305-316 (2003).</li>
<li>Breuner, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+the+Asian+longhorned+tick%2C+Haemaphysalis+longicornis%2C+to+serve+as+an+experimental+vector+of+the+Lyme+disease+spirochete%2C+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto%5BTitle%5D)+AND+%22Ticks+Tick+Borne+Diseases%22%5BJournal%5D)">Failure of the Asian longhorned tick, Haemaphysalis longicornis, to serve as an experimental vector of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi sensu stricto.</a> Ticks Tick Borne Diseases. 11 (1), 101311(2020).</li>
</ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

הצעד הקריטי ביותר בפרוטוקול הוא ההתגענות איתנה של הקפסולה לעור העכבר. לכן, דבק לטקס צריך להיות מיושם הומוגנית על כל משטח קצף EVA של הקפסולה ולחץ מתמיד במשך 3 דקות יש להחיל, במיוחד בצד שמאל וימין של הקפסולה. כמו כן, אנו ממליצים על מיקום הקפסולה רחוק ככל האפשר על הגב כדי למנוע את הסרתה על ידי העכבר באמצעות כפות רגליו האחוריות. בניסויים שלנו, רק ההדבקה של קצף EVA ודבק לטקס לעור העכבר אומתה ואנחנו לא יכולים להבטיח את ההישג של אותן תוצאות באמצעות חומרים שונים.
במהלך הניסויים שלנו, ניתוק הקפסולה מהע...

קרציות הן וקטורים חשובים של מספר פתוגנים ומייצגים סיכון רציני לבריאות בעלי החיים והאדם1. הקמת מערכת הזנה יעילה היא קריטית כאשר לומדים את הביולוגיה שלהם, אינטראקציות טיק-מארח-פתוגן, או קביעת אמצעי בקרה יעילים. כיום, מספר מערכות הזנה מלאכותיות, הימנעות משימוש בבעלי חייםחיים,זמינות לקרציות2,3,,4, ויש לנצלן בכל פעם שתנאים ניסיוניים מאפשרים זאת. עם זאת, בהגדרות ניסיוניות שונות מערכות אלה אינן מחקות כראוי את התכונות הפיזיולוגיות הספציפיות והשימוש בבעלי חיים הוא הכרחי כדי להשיג תוצאות רלוונטיות.
עכברי מעבדה משמשים בדרך כלל למחקר של מערכות ביולוגיות רבות, הם מנוצלים באופן שגרתי כמארחים עבורקרציות האכלה 5,,6,,7,,8,,9. שתי השיטות הנפוצות ביותר להאכלת קרציות לא בוגרות בעכברים כוללות התפשטות חופשית ושימוש בחדרי כליאה המחוברים לעכבר. התפשטות חופשית משמשים בעיקר עבור שלבי זחל וקרציות גדושות יכול לרדת לאזור שבו הם יכולים להיות התאושש. תאי כליאה מורכבים בדרך כלל מכובעי אקרילי או פוליפרופילן המודבקים על גב העכבר. הטכניקה הראשונה היא מערכת טבעית יעילה להזנת קרציות, אך אינה מאפשרת ניטור צמוד במהלך הניסוי מכיוון שהקרציות הבודדות מפוזרות בחלקים שונים של הגוף המארח. בנוסף, קרציות גדושות שירדו לאזור ההחלמה עלולות להיות מזוהמות בצואהובשתן 10, 11,,12,,,13,14 שעשויות להשפיע קשות על כושר הקרציות או שהעכבר עלול להיפגעאו לאכול אותם אם אין הפרדהבין החיה לאזור ההחלמה 15 .12, מערכות מבוססות תא מאפשרות את כליאה של קרציות לאזור מוגדר, עם זאת, תהליך ההדבקה הוא מייגע ואת הכיפות לעתים קרובות חלשים דבק ולכן הם לעתים קרובות להתנתקבמהלך הניסוי 16,17,18,19. הכובעים גם נוקשים, לא נוחים, והוביל לתגובות עור, אשר למנוע שימוש חוזר בעכברים ומחייב המתת חסד שלהם לאחר הניסוי.
במחקר הקודם שלנו, פיתחנו בהצלחה מערכת יעילה באמצעות תאים עשויים אטילן-ויניל אצטט (EVA) קצף להזנת קרציות עלארנבי מעבדה 20. בזאת, התאמנו את המערכת למודל העכבר ומציעים שיטה פשוטה ונקייה כדי להזין שלבי קרציות קשיחים לא בשלים בכמוסות סגורות עשויות מקצף EVA. באופן ספציפי, המערכת שלנו משתמשת כמוסות קצף אווה אלסטי מודבק עכברים מגולחים בחזרה עם ייבוש מהיר (3 דקות), דבק לטקס לא מעצבן. טכניקה זו מאפשרת חיבור מוצק וארוך של כמוסות לעכבר הניסיוני, כמו גם התפשטות קרציות/אוסף יעיל במהלך כל הניסוי. הכמוסה השטוחה עשויה מחומרים גמישים ואינה מסתבלת במניפולציה של העכבר לצורך איסוף דם או למטרות אחרות. המערכת מתאימה בעיקר לשלבי הקרציות הנימפליות, אך עם שינוי קל ניתן להשתמש בה גם להאכלת זחלים. השיטה יכולה להסתיים על ידי אדם מנוסה אחד אחד והכשרה נרחבת אינה נדרשת.

<table><tbody><tr><td>קצף EVA בעובי 2 מ"מ, (צפיפות נמוכה)</td> <td>חנות קוספליי</td><td>EVA-45 ק"ג (950/450/2 מ"מ)</td> <td>ניתן להזמין אותו גם דרך אמזון (מס' B07BLMJDXD)</td></tr> <tr><td>צינורות לכווץ חום שרוול עטיפת חוט חשמלי 31 מ"מ/1.22 אינץ'</td><td>אמזון</td><td>B0848S3S6T</td><td>קטרים שונים של צינורות כיווץ חום זמינים דרך אמזון.</td></tr><tr><td>עכברים BALB/cByJ</td><td>קוד זן נהר צ'ארלס</td><td>627</td><td></td></tr><tr><td>עכברים C57BL/6</td> קוד זן <td>נהר צ'ארלס</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>דבק לטקס לא רעיל</td> בד <td>מתקן דמעות</td><td>& דבק עור</td><td>זמין גם דרך אמזון (ר' מס' B001RQCTUU)</td></tr> <tr><td>כלי אגרוף כלי אמנות יד</td><td>אמזון</td><td>B07QPWNGBF</td><td>נמכר על ידי אמזון ככלי עבודה מעור 1-25 מ"מ עגול פלדה עור מלאכת חותך עובד עבור רצועת חגורה</td></tr><tr><td>PVC כריכת כיסויים שקופים</td><td>אמזון</td><td>B078BNLSNP</td><td>כל גיליון PVC שקוף של תקתוק בין 0.150 מ"מ ל 0.180 מ"מ מתאים</td></tr><tr><td>כרית דביקה עצמית ספוג סרט קצף מצופה כפול</td><td>אמזון</td><td></td><td>B07RHDZ35J נמכר על ידי אמזון כ-2 גלילים סרט קצף דו צדדי, סרט הרכבה לבן סופר חזק</td></tr><tr><td>מדבקות חותם שקופות (עיגולים בקוטר 20 מ"מ)</td><td>אמזון</td><td>B01DAA6X66</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה

A Capsule-Based Model for Immature Hard Tick Stages Infestation on Laboratory Mice

קרציות הן טפילי הזנת דם חובה בכל שלבי הפיתוח (למעט ביצים) ומוכרות כקטורים של פתוגנים שונים. השימוש במודלים של עכבר במחקר קרציות הוא קריטי להבנת הביולוגיה שלהם ואינטראקציות פתוגן-מארח-קרציות. כאן אנו מדגימים טכניקה לא מייגעת להזנת שלבים לא בוגרים של קרציות קשות על עכברי מעבדה. היתרון של השיטה הוא הפשטות שלה, משך הזמן הקצר, ואת היכולת לפקח או לאסוף קרציות בנקודות זמן שונות של ניסוי. בנוסף, הטכניקה מאפשרת חיבור של שתי כמוסות בודדות באותו עכבר, אשר מועיל עבור מגוון רחב של ניסויים שבו שתי קבוצות שונות של קרציות נדרשים כדי לאכול על אותה חיה. הקפסולה הלא מעצבנת והגמישה עשויה מחומרים נגישים בקלות וממזערת את אי הנוחות של בעלי החיים הניסיוניים. יתר על כן, המתת חסד אין צורך, עכברים להתאושש לחלוטין לאחר הניסוי והם זמינים לשימוש חוזר.

אנו מציעים את השיטה מפורטת שלב אחר שלב עבור הזנת שלבים קרציות קשיחות לא בוגרות בקפסולות אווה-קצף מוחל על גבו של העכבר(איור 2). פרוטוקול לא מיצי זה מתאים לסוגים שונים של ניסויים כאשר נדרש ניטור ואיסוף מדויקים של קרציות. היתרונות העיקריים של שיטה זו הם הפשטות שלה, חומרים חסכוניים הנגישים בקלות ומשך זמן קצר. בנוסף, הצלחנו לחבר שתי כמוסות לאדם עכבר אחד(איור 2K)המאפשר לנו להאכיל שתי קבוצות שונות של קרציות על אותה חיה. השימוש בדבק לטקס יעיל מאוד, ייבוש מהיר ולא מעצבן ...

במחקר זה, מערכת האכלה עבור שלבי נימפה וזחל של קרצייה קשה פותחה באמצעות כמוסה המחוברת לעכבר מעבדה. קפסולת ההאכלה עשויה מחומרים גמישים ונשארת מחוברת היטב לעכבר למשך שבוע אחד לפחות ומאפשרת ניטור נוח של הזנת קרציות.

Ticks are obligatory blood feeding parasites at all stages of development (except eggs) and are recognized as vectors of various pathogens. The use of ...

הטכניקה שלנו מתאימה לסוגים שונים של ניסויים אך מודל העכבר שלנו נדרש להאכלת קרציות ויש צורך לשמור את הקרציות באזור סגור לאיסוף וניטור קלים. היתרון של שיטה פשוטה זו הוא יעילות, משך זמן קצר, ואת היכולת לפקח או לאסוף קרציות בנקודות זמן שונות של ניסוי. המערכת שלנו מתאימה לחקר ביולוגיה של קרציות, אינטראקציות פתוגן וקטור מארח או הערכת מדדי בקרה שונים של פרוקי רגליים חשובים מבחינה רפואית אלה.שיטה זו דורשת דיוק ותשומת לב לפרטים הקטנים כתוצאה מקטנת לא בוגרת, והאכלתם בעכברים מחייבת את הקפסולה המצורפת להיות מחוברת היטב לעכבר במשך מספר ימים. התחל על ידי דבק יחד קצף EVA שני מילימטר, קצף דבק כפול דביק. השתמש ניקוב חור עור בקוטר 20 מ"מ כדי לחתוך עיגול חתיכות קצף.לאחר מכן, השתמש ניקוב חור 12 מילימטר לחתוך את הפנים. מקלפים את רצועת הנייר המגן מהקצף הדביק הכפול הדביק ומצמידים עיגול פלסטיק שקוף באורך 20 מ"מ לקצף. אם מאכילים זחלים, אין להסיר את רצועת הנייר המגן מקצף ההיצמדות ולהמשיך ישירות עם חיבור הקפסולה.הפוך חתך סנטימטר אחד בפלסטיק שקוף ולאחר מכן להשתמש סיכה אנטומולוגית כדי ליצור לפחות 10 חורים קטנים עבור אידוי לחות במהלך הניסוי. לאחר שהעכבר כבר הרדמה למקם אותו על כרית מניפולציה ולצרף חרוט האף עבור אספקה isoflurane מתמשך. ודא כי קצב הנשימה הוא פחות מ 80 נשימות לדקה על ידי התאמת רמת isoflurane.לגלח את החלק האחורי של העכבר מאחורי השכמות עד לאזור ממש מאחורי האוזניים יצירת אזור מגולח כי הוא גדול יותר משטח הקפסולה. החל דבק לטקס לא מעצבן על כל אתר קצף EVA של הקפסולה ולחכות דקה אחת. מניחים את הקפסולה על גב העכבר ומפעילים לחץ מתמיד במשך שלוש דקות במיוחד בצד שמאל ויימין של הקפסולה.הרם מעט את הקפסולה כדי לבדוק באופן חזותי את ההחזקה שלה לעור. כדי להבטיח את ההחזקה המשרדית של הקפסולה להחיל לחץ קבוע קל שלוש דקות עם האצבעות במיוחד בצד שמאל ויימין של הקפסולה. אם נמצאים אזורים שאינם מחוברים, יש למרוח יותר דבק עם מרית וללחוץ במשך שלוש דקות נוספות.אם אזור שאינו קובץ מצורף נוצר במהלך הניסוי, תקן אותו באותו אופן. מכניסים נימפות בודדות לתוך הקפסולה דרך חריץ סנטימטר אחד. לסחוט מעט את הקפסולה משני צדדים כדי לאפשר לפלסטיק השקוף להתכופף ואז לדחוף את הנימפה בתוך הקפסולה.סובב את המדפים ב-90 מעלות ומשוך אותם החוצה. עבור התפשטות זחלים, להסיר את החלקת הנייר מן הקפסולה המצורפת מניחים את המזרק עם הזחלים ישירות בפנים. להפקיד את הקרציות על ידי דחיפת הבוכנה מזרק ואז בעדינות להפוך את הבוכנה לכיוון העור כדי להסיר את הזחלים המחוברים הנותרים.לאחר הזחלים מופקדים על העור לסגור את הקפסולה על ידי חיבור עיגול פלסטיק שקוף. חותכים רצועה 3.5 מילימטר של רצועת פלסטיק מגן ולהחיל את רצועת פלסטיק מגן סביב הקפסולה ואז להחזיר את העכבר לכלוב. כדי לאסוף את הקרציות, ליצור חתך בצורת צלב בפלסטיק עם אזמל ולהשתמש מדפים כדי לאסוף את הקרציות.במידת הצורך, יש לבודד את הקפסולה על ידי דבק טלאי פלסטיק דבק על הפלסטיק השקוף. ניתן להשתמש באותו תיקון פלסטיק אם נדרש אוסף של קרציות בנקודות זמן מרובות. לחלופין, העכבר יכול להיות המתת לחץ ואת הקרציות שנאספו או מנותק באופן ידני לאחר הסרת כמוסה.להתאוששות מוצלחת של העכברים, שמור אותם בכלוב לשבוע נוסף ותן לקפסולות להתנתק באופן טבעי. לאחר הקפסולה כבויה, לבדוק תגובות חריגות על העור. יש למרוח כל גירוי אם יש גירוי כלשהו.פרוטוקול זה מאפשר להאכיל קרציות קשות לא בוגרות בכמוסות קצף EVA המוחלות על גב העכבר. השימוש בדבק לטקס מהיר ולא מעצבן מבטיח כי הקפסולה מחוברת היטב תוך שלוש דקות ונשארת מחוברת לפחות שבעה ימים. הצמדת שתי כמוסות מאפשרת להאכיל שתי קבוצות שונות של קרציות על אותה חיה.יתר על כן, התאוששות מלאה של העכברים לאחר הניסויים, מאפשר לעשות שימוש חוזר בבעלי החיים ולהימנע המתת חסד. מערכת זו שימשה בהצלחה כדי להאכיל את נימפות ריצינוס Ixodes. שיעור הצלחה בינוני עד גבוה הושג בשני זנים שונים של עכברים.בשני הזנים, כל הנימפות סיימו את ההאכלה בתוך ארבעה עד חמישה ימים בעוד הרוב ירד ביום הרביעי. בעת ניסיון פרוטוקול זה, חשוב לגלח שטח מספיק של העור של העכבר ביעילות לחבר את הקפסולה, כדי למנוע ניתוק מקרי שלה במהלך הניסוי. מלבד המחקר של ביולוגיה בסיסית של קרציות, שיטה זו יכולה לשמש כדי לחקור העברת פתוגן מתקתק למארח או מארח לקרציות.בנוסף, האפשרות לעשות שימוש חוזר בעכבר מציעה אפשרות להתפשטות חוזרת מרובה שיכולה להועיל למחקרים אימונולוגיים או לחקירת שידורי פתוגן שונים המועברים בקרציות.

a-capsule-based-model-for-immature-hard-tick-stages-infestation-on

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

זיהום Trichuris muris הוא מודל מעיים של חסינות Th2 שבו עכברים עמיד ליצור תגובת Th2 מגן עכברים רגישים ליצור תגובה פתולוגית Th1.

Trichuris muris זיהום: מודל של חסינות סוג 2, דלקת במעיים

מחלת ליים היא המחלה וקטור הנישא ביותר המדווח בדרך כלל בצפון אמריקה. הסוכן סיבתי, Borrelia burgdorferi הוא חיידק החיידק מועבר על ידי קרציות Ixodid. הילוכים וזיהוי של זיהום במודלים של בעלי חיים מותאם על ידי השימוש בהאכלה לתקתק, שאנו מתארים כאן.

האכלה של קרציות בבעלי חיים להילוכים וXenodiagnosis במחקר מחלת ליים

ההפקה של קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. כאן אנו מדגימים פרוטוקול פשוט עבור האכלה לתקתק בשלה כי היא חסכונית ופחות מלחיץ לעכברים.

Rearing<em&gt; Scapularis קרצית,</em&gt; את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי Immature על עכברים

פיתחנו מערכת פשוטה ופסיביות ניזונים קרציות קשה מעבדה ארנבים. פרוטוקול שאינו מפרך שלנו משתמשת בחומרים נגיש בקלות, ניתן להתאים בהתאם לדרישות של ההגדרות ניסיוני שונים. השיטה מאפשרת ניטור נוח ו/או דגימה של קרציות במהלך תקופת האכלה כולה.

מודל רב תכליתי של שנתות קשה שרץ על ארנבים מעבדה

מוצגת כאן שיטה להאכלת קרציות במבחנה באמצעות מערכת ממברנות מלאכותית המאפשרת גודש חלקי או מלא של מגוון שלבי חיים של הקרציות.

קרציות האכלת קרום מלאכותי עבור Ixodes scapularis

מאמר זה מציג את המתודולוגיה לחשיפת בני אדם לזחל Ixodes scapularis לצורך מחקר קליני. הטכניקה פשוטה יחסית, נסבלת על ידי מתנדבי המחקר, וניתנת לשינוי בהתאם לצרכי הניסוי. מחקר כזה בבני אדם חייב להתבצע תחת פרוטוקולי מחקר קליני שאושרו על ידי הרשויות הרגולטוריות המתאימות.

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

סטרונגילואידס ראטי היא נמטודה טפילית הגורמת לזיהומים חולפים בעכברי מעבדה, ומציגה שלבי נדידת רקמות וחיי מעיים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשמירה על מחזור הטפילים בחולדות והדבקה ניסיונית בעכברים, כולל כימות טפילים בראש, בריאות ובמעי.

זיהום ניסיוני של עכברים בנמטודה הטפילית Strongyloides ratti

שיטה זו מתארת את פיתוח מערכת הזנת דם מקרציות במבחנה , המשלבת תא מודפס בתלת-ממד וממברנת סיליקון מעבדתית. המערכת מאפשרת האכלה מלאכותית של קרציות, ומאפשרת דגימה קלה בשלבים שונים של האכלה ושימוש בכמויות דם נמוכות, ומספקת כלי יקר ערך לחקר קרציות איקסודיד.

דם קרציות המזין דרך ממברנה מלאכותית בתא מודפס בתלת-ממד במחקר קרציות איקסודיד

מחקרים גנטיים שמרים יכול להיות מועסק לחקור את הפונקציות מולקולרית תאית של הגנים האנושיים במטבוליזם DNA התאי. מתוארות שיטות לאפיון הגנטי של...

מחקרים גנטיים של חלבונים תיקון דנ&quot;א אנושי באמצעות שמרים כמודל למערכת

בקרת סינתזת חלבונים מתרחשת בעיקר בשלב התחלת התרגום, ליקויים בו קשורים להפרעות מגוונות. כדי להבין טוב יותר את האטיולוגיה שלהם, תיארנו כאן פרוטוקול המשתמש בביציות Xenopus laevis המעריך את התרגום של תעתיק mos בנוכחות מוטציה של גורם התחלת התרגום eIF4G1.

Xenopus laevis כמודל לזיהוי תרגום ירידת ערך

למד שיטת האכלה מבוססת קפסולה לקרציות קשות לא בוגרות בעכברי מעבדה. השיטה מאפשרת ניטור רציף, איסוף קל ושימוש חוזר בחיות הניסוי ללא פגיעה משמעותית.

מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה

גלה סרטונים נוספים