Name: קוונפיקציה של אזור הדבקה בתשתית התא והפצות צורות התא ב-MCF7 Cell Monolayers (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: חקור שיטה לכימות אזורי הדבקה וצורת תאים בשכבות MCF7 באמצעות מיקרוסקופיית קונפוקל ותוכנת ImageJ. הפרוטוקול מאפשר ניתוח מורפולוגי מדויק לחקר סרטן השד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי המרכז הלאומי למדע הפולני תחת מענק מס ' 2014/14/M/NZ1/00437.

<ol><li>Li, D. S., Zimmermann, J., Levine, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+closure+of+circular+wounds+through+coordinated+collective+motion%5BTitle%5D)+AND+%22Search+Results%22%5BJournal%5D)">Modeling closure of circular wounds through coordinated collective motion.</a> Search Results. 13 (1), 016006(2016).</li>
<li>Ilina, O., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+collective+cell+migration+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of collective cell migration at a glance.</a> Journal of Cell Science. 122, Pt 18 3203-3208 (2009).</li>
<li>Ladoux, B., Mege, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanobiology+of+collective+cell+behaviours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanobiology of collective cell behaviours.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 18 (12), 743-757 (2017).</li>
<li>Stossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+microscopy+identifies+bisphenol+AP%2C+a+bisphenol+A+analog%2C+as+a+novel+AR+down-regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">High throughput microscopy identifies bisphenol AP, a bisphenol A analog, as a novel AR down-regulator.</a> Oncotarget. 7 (13), 16962-16974 (2016).</li>
<li>Legland, D., Arganda-Carreras, I., Andrey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MorphoLibJ%3A+integrated+library+and+plugins+for+mathematical+morphology+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">MorphoLibJ: integrated library and plugins for mathematical morphology with ImageJ.</a> Bioinformatics. 32 (22), 3532-3534 (2016).</li>
<li>Balcerak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAX1+impact+on+collective+cell+migration%2C+cell+adhesion%2C+and+cell+shape+is+linked+to+the+regulation+of+actomyosin+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">HAX1 impact on collective cell migration, cell adhesion, and cell shape is linked to the regulation of actomyosin contractility.</a> Molecular Biology of the Cell. 30 (25), 3024-3036 (2019).</li>
<li>Buskermolen, A. B. C., Kurniawan, N. A., Bouten, C. V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+quantitative+analysis+of+cell%2C+nucleus+and+focal+adhesion+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An automated quantitative analysis of cell, nucleus and focal adhesion morphology.</a> PLoS One. 13 (3), 0195201(2018).</li>
<li>Fokkelman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+adhesome+screen+identifies+critical+modulators+of+focal+adhesion+dynamics%2C+cellular+traction+forces+and+cell+migration+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Cellular adhesome screen identifies critical modulators of focal adhesion dynamics, cellular traction forces and cell migration behaviour.</a> Scientific Reports. 6, 31707(2016).</li>
<li>Horzum, U., Ozdil, B., Pesen-Okvur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+quantitative+analysis+of+focal+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Step-by-step quantitative analysis of focal adhesions.</a> MethodsX. 1, 56-59 (2014).</li>
<li>Kim, D. H., Wirtz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+size+uniquely+predicts+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion size uniquely predicts cell migration.</a> FASEB Journal. 27 (4), 1351-1361 (2013).</li>
<li>Pincus, Z., Theriot, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+quantitative+methods+for+cell-shape+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Comparison of quantitative methods for cell-shape analysis.</a> Journal of Microscopy. 227, Pt 2 140-156 (2007).</li>
<li>Tsygankov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellGeo%3A+a+computational+platform+for+the+analysis+of+shape+changes+in+cells+with+complex+geometries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">CellGeo: a computational platform for the analysis of shape changes in cells with complex geometries.</a> Journal of Cell Biology. 204 (3), 443-460 (2014).</li>
<li>Tiryaki, V. M., Adia-Nimuwa, U., Ayres, V. M., Ahmed, I., Shreiber, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Texture-based+segmentation+and+a+new+cell+shape+index+for+quantitative+analysis+of+cell+spreading+in+AFM+images%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Texture-based segmentation and a new cell shape index for quantitative analysis of cell spreading in AFM images.</a> Cytometry A. 87 (12), 1090-1100 (2015).</li>
<li>Tong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+micropatterning+reveals+the+modulatory+effect+of+cell+shape+on+proliferation+through+intracellular+calcium+transients%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Cell micropatterning reveals the modulatory effect of cell shape on proliferation through intracellular calcium transients.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1864 (12), 2389-2401 (2017).</li>
<li>Vartanian, K. B., Kirkpatrick, S. J., Hanson, S. R., Hinds, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+cytoskeletal+alignment+independent+of+fluid+shear+stress+on+micropatterned+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell cytoskeletal alignment independent of fluid shear stress on micropatterned surfaces.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 371 (4), 787-792 (2008).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

תא תא ותא הדבקה של תא מהווים תכונות הטבועה של התאים אפיתל לשחק את התפקיד הקריטי ברקמות מורפולגנזה ו embriogenesis. ברקמות למבוגרים את הרגולציה הנכונה של תכונות מכניות של שכבת התא היא חיונית לשמירה על הומאוסטזיס ומניעת תגובות פתולוגיים כמו התקדמות הגידול גרורות. הגודל והמספר של הידקויות מיקוד תלויים בחוזק של הדבקה בתאים, בעוד שצורת התא תלויה בכוחות הקונקטילה וקשורה למצב של אנשי קשר תא-תא.
כאן, אנו מתארים שתי שיטות פשוטות של ניתוח כמותי של האזור, מספר וצורה של מבנים סלולריים מוכתם על ידי immunof...

תאי אפיתל monolayers לפעול כקולקטיב שבו תא תא ותא הדבקה, כמו גם כוחות ומתחים והמתיחות מייצגים פרמטרים חשובים האיזון הנכון שלהם תורמת השלמות הכוללת של היחידה1,2,3. לפיכך, הערכת פרמטרים אלה מייצגת דרך ליצירת המצב הנוכחי של שכבת התא.
שתי השיטות המתוארות כאן מייצגות ניתוח דו מימדי של המונאולאיירס הקונקולני של חסיד, תאי אפיתל (במקרה זה MCF7 סרטן השד קו התאים). הניתוח מבוצע באמצעות תמונות מיקוד (Z-פרוסות בודדות) מאזורים שונים על ציר Z; אזור בסיס ליד מצע למדידות מיקוד (FA) ולאזור אפיפיורי למדידות בצורת תא. השיטות המוצגות פשוטות יחסית ודורשות טכניקות סטנדרטיות של מעבדה ותוכנות קוד פתוח. מיקרוסקופ confocal וקד מספיק עבור פרוטוקול זה, כך שניתן לבצע מבלי להעסיק TIRF מיוחדים יותר (כולל השתקפות פנימית השתקפויות פלואורסצנטית) מיקרוסקופ. לפיכך, ניתן ליישם את הפרוטוקול במסגרת מעבדה סטנדרטית יחסית. למרות שרמת הדיוק של השיטות מוגבלת, הם יכולים להבחין בין הבדלים בסיסיים בצורה מוקד ובצורת תא.
שתי השיטות המתוארות כאן כוללות את ההליכים הניסיוניים הסטנדרטיים כגון כגון תא, כתמים, דימות ממוקד וניתוח תמונה שבוצעו באמצעות ImageJ. עם זאת, ניתן להשתמש בכל תוכנה לעיבוד תמונה עם הפונקציות המתאימות. השיטות שהוצגו יכול לעקוב ולהשוות שינויים שנגרמו על ידי טיפול תרופתי או שינוי גנטי מינימלי. השגת ערכים מסוימים אינה מומלצת, בשל הדיוק המוגבל של שיטות אלה. שתי פקודות מאקרו אוטומטיות נכללו, כדי להקל על המדידות של תמונות רבות.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A32740</td><td>אנטי ארנב עיזים, 1:500</td></tr><tr><td>אמוניום כלוריד</td><td>סיגמא</td><td>A9434</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.500</td><td></td></tr><tr><td>קולגן מעור עגל</td><td>סיגמא</td><td>C9791-10MG</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542</td><td>1:10000 (מלאי 1 מ"ג/מ"ל ב-H2O), חומצת גרעין מכתים</td></tr><tr><td>DMEM + GlutaMAX, 1 גרם/ליטר D-גלוקוז, פירובט</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10270-136</td><td></td></tr><tr><td>צומת פלקוגלובין</td><td>איתות תאים</td><td>2309S</td><td>ארנב, 1:400</td></tr><tr><td>ארון זרימה למינרית Class 2</td><td>ציוד סטנדרטי</td> <td>Alpina</td><td></td></tr> <tr><td>MCF7-basedקו תאים HAX1KD</td><td>קו תאים שהוקם במכון הלאומי לאונקולוגיה, ורשה, מתואר ב- Balcerak et al., 2019</td><td></td><td>MCF7 קו תאים עםHAX1knockdown</td></tr><tr><td>קו תאים MCF7 (בקרה)</td><td>ATCC</td><td>ATCC HTB-22</td><td>אפיתל, קו תאים דבק בסרטן השד</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור אולימפוס CK2</td><td>אולימפוס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פקסילין</td><td>Abcam</td><td>ab32084</td><td>ארנב, 1:250, Y113</td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>מצומד Phalloidin-TRITC</td><td>Sigma</td><td>P1951</td><td>1:400 (מלאי 5 מ"ג/מ"ל ב-DMSO), תווית אקטין</td></tr><tr><td>PTX</td><td>Sigma</td><td>T7402-1MG</td><td></td></tr><tr><td>TBST &ndash; NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>TBST &ndash; בסיס Trizma</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9002-93-11</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM800 מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

קוונפיקציה של אזור הדבקה בתשתית התא והפצות צורות התא ב-mcf7 cell monolayers

Quantification of Cell-Substrate Adhesion Area and Cell Shape Distributions in MCF7 Cell Monolayers

השיטות המוצגות כאן מכמת כמה פרמטרים של תא מדומה מונואולאן מדומה מספר תמונות ויטראז ' מרובים: הדבקה למצע כפונקציה של מספר וגודל של מיקוד מוקד, וצורה תא, מאופיין על ידי מדד צורת התא ומתארי צורה אחרים. הידקויות מיקוד היו מדמיינו על ידי כתמים פקעבלין וגבולות תא התא סומנו על ידי הצומת פלקוטין ו actin. השיטות לתרבית תאים וכתמים היו סטנדרטיים; תמונות מייצגות מטוסי מוקד יחידים; ניתוח תמונה בוצעה באמצעות תוכנת עיבוד תמונה זמינה לציבור. הפרוטוקולים המוצגים משמשים כדי לכמת את מספר וגודל של הידקויות מיקוד ואת ההבדלים בפיזור הצורה התא ב monolayers, אבל הם יכולים להיות מחדש עבור כימות של גודל וצורה של כל מבנה הסלולר ברורים אחרים, כי יכול להיות מוכתם (למשל, המיטוa או גרעיני). הערכת פרמטרים אלה חשובה באפיון הכוחות הדינמיים בשכבת התא החסיד, כולל הדבקה בתאים וכיוונון actomyosin המשפיע על צורת התא.

ניתוח הדבקה מוקד הנוק-אין HAX1 ג'ין הוצגה בעבר כדי להשפיע על הידקויות מיקוד6. תאים היו מתורבתים על משטח קולגן I-מצופה עבור 48 h. תמונות של תאים בקרה MCF7 ותאים MCF7 עם מיקוד HAX1 (HAX1 KD) מתוך שלושה ניסויים עצמאיים ויטראז ' מוקד הדבקה ממוקד חלבון מושגת באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלית וקד (תמונה ממטוס מוקד יחיד/Z-פרוסה מאזור בסיס). החל מ-2000-2500 תאים מכל קו בתא, כולם בשימוש בפרוטוקול המתואר. הערך הממוצע להדבקה הקטנה ביותר הוגדר כ-50 (פיקסל<sup class="xr...

המאמר מתאר את הכמת של 1) את גודל ומספר של הידעיות מיקוד ו 2) אינדקס צורת תא ואת ההתפלגות שלה מתוך תמונות קונפוקלית וקד של המונאולאיירס הקונאולית של תאים MCF7.

קוונפיקציה של אזור הדבקה בתשתית התא והפצות צורות התא ב-MCF7 Cell Monolayers

The methods presented here quantify some parameters of confluent adherent cell monolayers from multiple appropriately stained confocal images: adhesion to ...

פרוטוקול זה מאפשר כימות של האזור, ההיקף והצורה של מבנה תאי מהתמונה הדו-ממדית שלו. טכניקה זו מהירה וקלה, דורשת רק הגדרות מעבדה סטנדרטיות ומיקרוסקופ קונפוקל ומשתמשת בתוכנת opensource. הפגנת ההליך תהיה אנה Balcerak, דוקטורנט מהמעבדה שלי.התחל על ידי זריעת ארבע פעמים 10 לתאים החמישיים ב 0.5 מיליליטר של תרבות בינונית לגם בשקופית תא מצופה ארבע באר אחד לתרבות של 24 שעות ביממה ב 37 מעלות צלזיוס וחמש מעלות פחמן דו חמצני אינקובטור. למחרת בבוקר, השתמש במיקרוסקופ אופטי הפוך כדי לאמת נוכחות של לפחות 90% מונוליאר קונפלונט ולהשתמש במיקרוסקופ קונפוקלי כדי להשיג תמונות בודדות של פרוסת Z. לניתוח הידבקות מוקד, פתחו את התמונות ב-ImageJ ובחרו לנתח, להגדיר קנה מידה, להסיר קנה מידה וגלובלי כדי להגדיר את סולם התמונה בפיקסלים.כדי לכלול את שם הקובץ ואת האזור של אזור העניין באפשרויות המדידה, לחץ על נתח והגדר מידות ובדוק את אפשרויות האזור והצג תוויות. לחסר את הרקע, בחרו 'עבד' ו'חיסור רקע'. הגדר את רדיוס הכדור המתגלגל ל- 50 פיקסלים ובדוק פרבולואיד הזזה.כדי לקבוע את האזור של האזור הקטן ביותר של עניין, מתאר את ההיתוך המוקד הבודד הקטן ביותר ולחץ לנתח ולמדוד כדי למדוד את האזור. כאשר לפחות 20 אזורי עניין נבחרו ונמדדו, חשב ושמור את ממוצע התוצאות שהתקבלו. הגדר את הגבול העליון ל- 25% מאזור תא טיפוסי.כדי להעניק את התמונה לתמונה בינארית, לחץ על תמונה, התאם סף ובדוק את ברירת המחדל, רקע שחור-לבן ורקע כהה. כדי למדוד את המספר ואת האזורים של אזורי העניין, בחר לנתח ולנתח חלקיקים ובדוק יחידות פיקסלים, הצג תוצאות, נקה תוצאות וסכם. העבר את נתוני הגודל הממוצע של הפרוסה, הספירה והגודל הממוצע הכולל מחלון הסיכום לתוכנית ניהול הנתונים הרצויה.עבור כימות הידבקות מוקד, פתח את המאקרו ImageJ הידבקות המוקד ולהיכנס לאזור של האזור הקטן ביותר של עניין כאזור של האזור הקטן ביותר של פרמטר עניין. הגדר את ערך סוג הסף כידני או אוטומטי ושמור את השינויים. לאחר מכן התקשר למאקרו מתוך ImageJ ובחר את התמונה לעיבוד.לניתוח ידני של צורת תא, פתח תמונה בתוכנה מתאימה לעיבוד תמונה ובחר את הפרמטרים שיש למדוד. השתמש בכלי הבחירה ביד חופשית כדי לסמן ידנית את גבולות התא כפי שהם מסומנים בחלבוני הצומת הנבחרים. הפרמטרים שנבחרו יחושבו באופן אוטומטי עבור כל תא.לאחר חלוקה לרמות של כל התאים, בחר עריכה, בחירה והוספה למנהל. יש לבחור רק תאים גלויים לחלוטין עם גבולות ללא הפרעה. כדי לבצע את המדידה, סמן את כל המספרים המופיעים בתיבה הימנית של מנהל אזור העניין ולחץ על מידה.התוצאות יופיעו בתיבת התוצאות ו ניתן לייבא אותן לגיליון האלקטרוני של הבחירה. ניתוח תאים אוטומטי מאפשר כימות של מספר התאים הגדול. עבור כל סוג תא חדש, הפעל תחילה את המאקרו כדי ליצור פרמטרים.לאחר סיום המאקרו, בחר הגדר גבולות גודל תא. לחץ על התווית של התאים הקטנים והגדולים ביותר ולחץ על מידה. הגדר את הערך של התא הקטן ביותר ומשתני התא הגדולים ביותר ושמור את השינויים.סגור את כל חלונות המאקרו ובחר את התמונה לעיבוד בגווני אפור. לאחר מכן הפעל שוב את המאקרו. המאקרו יספק טבלה של התוצאות הכוללות את נתוני הרשימה אינדקס צורת תא, יחס גובה-רוחב ואזורים של בחירות עניין.כאן, תמונות מייצגות של הידבקויות מוקד נספר עם ImageJ כולל קווי המתאר ממוספרים הסופיים ואת שכבות העל של קווי התווה הידבקות המוקד עם התמונה המקורית עבור שני קווי תא שליטה ו knockdown ניתן לראות. כפי שמודגם בניתוח זה, תאי ההפלה הדגימו מספר גבוה יותר של הידבקויות לכל תא, כמו גם הידבקויות שגודלן גדול יותר בהשוואה לתאי קו הבקרה. בתמונות אלה, אזורים מייצגים של מונואירים תאים לא מטופלים וכימותרפיים מוצגים.תאי החלוקה לרמות התאפיינו על פי ערכי מדד צורת התא שלהם, למשל בניתוח זה המראים עלייה בסל האחרון ושיטוח הפסגות העיקריות של התאים המטופלים בתרופה בהשוואה לפקדים לא מטופלים. לאחר מכן ניתן ליצור התפלגות תדירות והתפלגות מצטברת עבור כל תרבות תאים. הדמיה בגווני אפור של המונו-שכבות כפי שהוכח אפשרה ניתוח וכימות של 512 תאים מ-12 שדות תצוגה שחשפו התפלגות תדרים יחסית של אינדקס צורת התא.כדי שפרוטוקול זה יפעל, חשוב להשתמש בתמונות באיכות הטובה ביותר האפשרית. זריעת תאים נכונה, כתמים והדמיה צריכים להבטיח תמונות באיכות ניסיונית מספקת.

quantification-cell-substrate-adhesion-area-cell-shape-distributions

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Micropatterns דבק כי לנרמל ארכיטקטורה הסלולרי יכול לשמש כדי להגביר את הרגישות של זיהוי של השפעות התרופה, לשפר reproducibility ולפשט רכישת התמונה ניתוח אוטומטי. טכנולוגיה זו ייהנו סמים / siRNA מבחני המיון, שבוצעה על התרבות תומך קונבנציונלי התא וכתוצאה מכך סובל השתנות התא אל התא מוגזמת.

ויזואליזציה שיפור ניתוח כמותי של השפעות התרופה באמצעות תאים micropatterned

אנו מתארים את שיטת האבטיפוס לייצור coverslips מיקרוסקופ פלואורסצנטי המצופה ג'לטין להמחשת הפחתת מטריצת invadopodia בתיווך. טכניקות חישוב באמצעות תוכנה זמינה מוצגות לכימות הרמות כתוצאה של proteolysis מטריצה ​​של תאים בודדים בתוך אוכלוסייה מעורבת וקבוצות תאיות המקיפות את השדות מיקרוסקופים שלמים.

מדידת כמותית של Proteolysis מטריקס invadopodia בתיווך בקשרים יחידים ורבים תאיים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכמת ברציפות תהליכי הידבקות התא ודה-הידבקות עם רזולוציה גבוהה זמנית באופן בלתי פולשני על ידי עכבת תא-מצע והדמיה תא חי ניתוחים. גישות אלה חושפות את הדינמיקה של תהליכי הדבקת תא / דה-הידבקות מופעלים על ידי שינוי מטריצה ​​והיחסים הזמני שלהם לאירועי איתות הידבקות תלויה.

שימוש בעכבת Cell-מצע והדמיה של תא חי כדי למדוד שינויים בזמן אמת בסלולרית הידבקות ודה-הידבקות הנגרמים על ידי מטריקס שינוי

אנו מדווחים על שיטה במבחנה המאפשרת לכמת את המספר האמיתי של תאי דבק בתוך חד-שכבת תא אנדותל.

כימות של דביקות תא האנדותל<em&gt; במבחנה</em

assay הידבקות זרימה זו מספק מודל השפעה פשוט, גבוה של אינטראקציות תא אפיתל T. משאבת מזרק משמש להפקת מאמץ הגזירה, וכן במיקרוסקופ confocal לוכדת תמונות כימות. מטרת המחקרים אלה היא לכמת הידבקות תא T ביעילות באמצעות תנאי זרימה.

Assay הדבקה תחת מאמץ גזירה לחקר T לימפוציטים-הדבקה אינטראקציות מולקולה

התמיינות תאים מוסדרת על ידי שורה של גורמי microenvironmental, כוללים שני תכונות חומר רכב מצע מטריקס. אנו מתארים כאן טכניקת ניצול microarrays תא בשיתוף עם מיקרוסקופ כוח המתיחה להעריך הן התמיינות תאי אינטראקציות תא-מצע ביומכנית כפונקציה של הקשר microenvironmental.

פלטפורמת Microarray Cell תפוקה גבוהה עבור ניתוח גומל של התמיינות תאי כוחות המתיחה

מחקר זה מדגים את השירות ואת קלות מדידה הרחבה כמותית קרום התא שלה מתאם קיבולת דבק של תאים. בתור דוגמא מייצגת, אנחנו מראים כאן את הפרוטאין הקשורות Dickkopf 3 (DKK3) מעודד היווצרות מוגברת lobopodia תא adhesiveness ב adrenocortical קרצינומה של תאים במבחנה.

אפיון של קרום התא הרחבות ולימוד תפקידיהם סרטן התא אדהזיה דינמיקה

בפרוטוקול זה, אנו מציגים את ההליכים הניסיוניים של בדיקה מתפשטת של תא המבוססת על מיקרוסקופיה של תאים חיים. אנו מספקים כלי חישובי קוד פתוח עבור פילוח משוחד של תאים בעלי תווית פלואורסצנטית וניתוח כמותי של דינמיקת lamellipodia במהלך התפשטות התא.

ניתוח כמותי של דינמיקת קצה התא במהלך הפצת תאים

פרוטוקול זה מציג את ההליכים הניסיוניים לביצוע טביעת הרגל של הידבקות כדי לדמיין את אירועי ההדבקה במהלך הידבקות מהירה של תאים.

הדמיה הידבקות מולקולרית בתא מתגלגל על ידי הידבקות טביעת רגל אסאי

פרוטוקול זה נועד למדוד את הפרמטרים הדינמיים (בליטות, נסיגה, קפלים) של בליטות בקצה של תאים מתפשטים.

מדידת דינמיקת בליטה בקצה התא במהלך ההתפשטות באמצעות מיקרוסקופיה של תאים חיים

חקור שיטה לכימות אזורי הדבקה וצורת תאים בשכבות MCF7 באמצעות מיקרוסקופיית קונפוקל ותוכנת ImageJ. הפרוטוקול מאפשר ניתוח מורפולוגי מדויק לחקר סרטן השד.

קוונפיקציה של אזור הדבקה בתשתית התא והפצות צורות התא ב-MCF7 Cell Monolayers

גלה סרטונים נוספים