Name: שורש יבש רוט רוט מחלה אומר חומוס: מתודולוגיה מפורטת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: למד מתודולוגיות מפורטות לבדיקת מחלת ריקבון שורשים יבשים בחומוס באמצעות טכניקות נייר ספיגה וסיר חולה. שיטות אלו מאפשרות לחוקרים לסרוק זני חומוס לעמידות בפני Rhizoctonia bataticola ולחץ ביוטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקטים במעבדת M.S.K נתמכים על ידי המכון הלאומי למימון הליבה של מחקר הגנום של הצמח. VI מאשרת DBT-JRF (DBT/2015/NIPGR/430). אנו מודים לסטודנטים מתאמנים, מיס רישיקה, מר ג'ייאכנדריאן ומיס דורגדבי על עזרה טכנית במהלך צילומי וידאו ומר סנדיפ דיקסיט, מיס אנג'אלי וד"ר אווניש ראי על הערכה ביקורתית של נתונים גולמיים וקבצי כתב היד. אנו מודים למר רחים ה. טראפדר ולמר סונדר סולנקי על עזרתם במעבדה. אנו מכירים DBT-eLibrary קונסורציום (DeLCON) ו ספריית NIPGR למתן גישה למשאבים אלקטרוניים ומתקן צמיחה צמח NIPGR עבור תמיכה צמח צמיחה / שטח.

1. בידוד ר. באטיקולה ואחסון
<ol><li>פרטים על הגנוטיפ של גרגירי החומוס ותסמיני DRR<ol>
<li>השתמש בצמחי חומוס (גנוטיפ, JG 62) כי בדרך כלל להראות סימפטומים DRR טיפוסי, כגון יבש, שורש ראשי שביר ללא שורשים לחוץ microsclerotia מתחת לקליפה ובתוך pith1,3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>איסוף ושטיפה<ol>
<li>צמחי עקורים המציגים תסמינים כגון בוליאר בצבע קש יבש ושורש ראשי שביר עם מיקרוקלרוטיה מתחת לשכבת האפידרמיס. בעוד העקרוץ, חלק גדול של השורשים יישאר בתוך האדמה כמו השורשים הנגועים הם שבירים. הסר את פסולת האדמה גסה המחוברת לשורש. חותכים את השורשים בנפרד ואספים אותם במעטפות נייר (27.5 ס"מ על 12 ס"מ) עם התווית המתאימה והיכו אותם בתיבת איסוף לדוגמה.</li>
		<li>לאחר העברת דגימות למעבדה, מניחים את השורשים בשקית של 200 מ"ל ומכסים ברשת (רשת ניילון עם גודל נקבוביות בקוטר 3 מ"מ), ושטפו את השורשים ביסודיות עם מי ברז זורמים כדי להסיר חלקיקי קרקע דבקים.</li>
		<li>השתמשו במים הפוכים של אוסמוזה (RO) כדי לשטוף פעם אחת בסוף.</li>
	</ol>
</li>
	<li>עיקור פני השטח<ol>
<li>לשבור את השורשים לארבע חתיכות עם 2 ס"מ אורך כל אחד עם להב אזמל ולשים אותם ב 200 מ"ל נקי במקום.</li>
		<li>להרכיב מי RO autoclaved, 2% NaOCl, צנצנת השלכה, ונייר כתמים autoclaved (5ס"מ 2)בתוך תא זרימת למינאר.</li>
		<li>לשטוף את השורשים עם 50 מ"ל של מי RO autoclaved שלוש פעמים ולאחר מכן עם 50 מ"ל של 2% NaOCl במשך 10 דקות. לשטוף את השורשים עם 50 מ"ל של מים RO שלוש פעמים שוב כדי להסיר את NaOCl.</li>
		<li>כתם לייבש את השורשים על ידי הנחת השורשים על נייר כתמים autoclaved ולהשאיר עד השורשים מיובשים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מדיה ותרירה<ol>
<li>הסר את קצות השורשים עם להב אזמל מחטא. לפצל את השורשים באמצעות הלהב ולהשתמש מפלצות מעוטא למקם אותם על תפוח אדמה דקסטרוז אגר (PDA) צלחת פטרי מדיה המכיל סטרפטומיצין סולפט (50 מ"ג L-1) ואמפוצילין (50 מ"ג L-1).</li>
		<li>סוגרים את הצלחת, אוטמים עם פרפילם, ותדגירה באינקובטור ב-28 מעלות צלזיוס למשך יומיים בחושך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>שיטת קצה מיף<ol>
<li>לאחר יומיים של דגירה, להביא את הצלחות לתוך תא זרימת למינאר. לחתוך את קצה הצמיחה hyphal8 תחת stereomicroscope (Leica EZ4 סטריאומיקרוסקופ חינוכי) ולהעביר אותו לתוך צלחת מחשב כף יד טרי עם סטרפטומיצין סולפט ואאמפצילין.</li>
		<li>דגירה את הצלחות באינקובטור ב 28 מעלות צלזיוס במשך עשרה ימים בחושך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>אחסון ותחזוקה של לאוקולום פטרייתי של ר. באטיקולה<ol>
<li>הפוך את מחשב כף יד במבחנות ולהעביר תקע אגר פטרייתי מצלחת תרבות בת עשרה ימים באמצעות לולאת חיסון עיקור להבה. אטמו את מכסה הבדיקה עם פרפילם.</li>
		<li>דגירה את המשקעים ב 28 ° C במשך עשרה ימים בחושך.</li>
		<li>אטמו שוב את המכסה עם פרפילם ואחסן אותו ב-4 מעלות צלזיוס במקרר לשימוש עתידי.</li>
		<li>תת-תרבות כל שישה חודשים כדי לשמור על הפטרייה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תחזוקת הוויראליות<ol>
<li>להדביק את הצמחים עם inoculum פטרייתי טהור הוכן כאמור בטכניקה סיר חולה3. בודדו את אותה פטריה מהצמחים הנגועים (הקוך מפרסם)9 והשתמשו בהם לניסויים נוספים. הערה: במחקר זה, זן מבודד שדה של הפטריה שימש (GenBank: MH509971.1 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MH509971)</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. טכניקת נייר כתמים
הערה: טכניקת נייר הכתמים כרוכה בהכנת inoculum פטרייתי נוזלי, הכנת שתילים, והערכת מחלות.
<ol><li>הכנת נוזל R. באטיקולה הערה: אינוקולום פטרייתי נוזלי R. bataticola מכיל הן mycelia ו microsclerotia. שני המבנים האלה פועלים כאונוקולום ראשי.<ol>
<li>הכן 500 מ"ל של מדיה PDB בקבוקון 1,000 מ"ל autoclave אותו ב 121 ק ג במשך 15 דקות.</li>
		<li>לאחר שהתקשורת מתקררת, לחסן את המרק עם לולאה של תקע אגר פטרייתי מתרבות שיפוע פטרייתי דגירה ב 28 מעלות צלזיוס במשך חמישה ימים בשייקר ב 180 סל"ד בחושך.</li>
		<li>להרכיב זכוכית autoclaved או משפך פלסטיק (10 ס"מ), בקבוקון חרסי ליטר אחד, ושתי שכבות של רשת (10ס"מ 2 גודל) (ניילון רשת עם גודל הנקבוביות של 3 מ"מ קוטר) על השולחן. לסנן את המיליה פטרייתית ומיקרוקלרוטיה באמצעות הרשת. כתם לייבש את הפטרייה בנייר כתמים autoclaved.</li>
		<li>לשקול 100 גרם mycelia עבור 50% אינקולום ולשמור על טמפרטורת החדר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת צמח חומוס<ol>
<li>בחר 50 זרעים בריאים (במחקר זה, הגנוטיפ JG 62 רגיש DRR היה בשימוש), למקם אותם ב100 מ"ל בפיק, ולכסות עם רשת.</li>
		<li>לשטוף את הזרעים עם מי ברז הראשון כדי להסיר פסולת אדמה.</li>
		<li>קח את הבקת עם זרעים לתוך תא זרימת למינאר ולשטוף אותם עם 50 מ"ל עיקור של מים RO שלוש פעמים במשך 1 דקות לכל שטיפה.</li>
		<li>לחטא את הזרעים עם 50 מ"ל של 2% NaOCl מים במשך 2 דקות עם רעד מתמשך לשטוף את הזרעים עם 50 מ"ל של מים מחטאים חמש פעמים עבור 1 דקות כל אחד.</li>
		<li>מלאו שקית פוליאתילן (47.5 ס"מ על 25 ס"מ) ב-Soilrite (תערובת של גננות מדורגות מורחבות פרלייט, אזוב כבול אירי, ורמיקוליטיס פילינג ביחס שווה כלומר, 1/3:1/3:1/3), לזרוע את פני השטח מעוטר 50 זרעים שני ס"מ עמוק, ולשמור בתא צמיחה / חדר עם 28 °C ± 2 ° C טמפרטורה, 16 שעות photoperiod בעוצמה קלה של 150 μmol-2 s-1, ולחות יחסית של 70%. להשקות אותם עם מי RO ולערוק את הצמחים שמונה ימים לאחר הזורע.</li>
		<li>לשטוף את השורשים במים ברז כדי להסיר את חלקיקי Soilrite. לשטוף את השורשים עם מי RO מחטאים, ולשמור אותם במים RO ב1000 מ"ל במקום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת נייר כתמים במגשים<ol>
<li>קח נייר כתמים וחתוך אותם לחתיכות (30 ס"מ × 23 ס"מ) במספרים מספיקים כדי לעמוד בשכפולים.</li>
		<li>אורזים את הסדינים בשקית פוליאתילן הניתנת לעבודה אוטומטית ומקלעים אותם ב-50 ק"ג למשך 15 דקות ולשמור אותם בתנור אוויר חם לייבוש.</li>
		<li>מקפלים כל גיליון נייר מנפח לשניים.</li>
		<li>מניחים את הנייר על מגש פלסטיק נקי ומרוח, כפי המוצג באות 2i-iv.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חסון צמחים על ידי טבילה<ol>
<li>להמיס 100 גרם של inoculum פטרייתי ב 200 מ"ל autoclaved RO מים ב 200 מ"ל בספל כדי להשיג 50% אינקולום.</li>
		<li>טובלים את שורשי הצמח באינוקולום המוכן למשך דקה אחת עם תנועה לסירוגין למעלה למטה כדי להבטיח חיבור אחיד של אינוקולום פטרייתי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הנחת הצמחים בנייר הכתמים<ol>
<li>הרטיבו את הצד התחתון של נייר הכתמים המוצבים על המגש עם מי RO סטריליים. מניחים את הצמחים על הנייר באופן שבו רק השורשים מכוסים על ידי הנייר, ויורה נשאר בחוץ.</li>
		<li>סגור אותו על ידי קיפול הצד העליון של נייר הכתמים ולהרטיב את הנייר כולו כדי לספק מספיק מים כדי לקיים את צמיחת הצמח.</li>
		<li>להשקות את המגש פעם ביום ולשמור את המגשים ב 28 מעלות צלזיוס. שים לב לתסמינים כגון נמק, ריקבון שורש, ועלה צהבהב מדי יום.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. טכניקת סיר חולה
הערה: טכניקת סיר חולה כרוכה בהכנת inoculum ארסי סיר חולה, תחזוקה של רמת לחות, והערכה של תסמיני המחלה.
<ol><li>הכנת תכשיר<ol>
<li>קח ק"ג אחד מכל זרעי חומוס זמינים מבחינה מסחרית. הסר זרעים נגועים (זרעים עם צמיחה פטרייתית, כתמי זיהום, ונזק חרקים). מניחים אותם בשקית פלסטיק של 5 L ושטפו עם מי ברז ביסודיות 3-4 פעמים כדי להסיר פסולת גדולה.</li>
		<li>לשטוף את הזרעים עם 2 L של מים RO שלוש פעמים ולהשרות את הזרעים 1 ק"ג ב 5 L ב 11 עם שלוש יותר מים במשך חמש שעות.</li>
		<li>ברגע שהזרעים זלעו את המים, רחו אותם מחדש במי RO שלוש פעמים כדי להסיר את הזרע מפריך.</li>
		<li>מסירים את המים לחלוטין וארזים את הזרעים בבקבוקי ריבה (300 מ"ל, גובה 12 ס"מ, קוטר 6 ס"מ ו-155 גרם משקל) לקיבולת של חצי ליטר (100 גרם לבקבוקריבה) וסוגרים את הבקבוקים עם פקקים. ארוז עשרה בקבוקי ריבה בשקית פלסטיק הניתנת לשיעבוד אוטומטי (48 ס"מ על 30 ס"מ) אוטוקלב פעמיים ב-121 ק"ג למשך 15 דקות ברציפות.</li>
		<li>מייבשים את הזרעים ב-40 מעלות צלזיוס בתנור למשך הלילה כדי להסיר את טיפות המים בתוך הבקבוק.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת תרבות חולה<ol>
<li>הפעל את תא זרימת ה למינאר ברמה BSL-2. מנגבים את הרצפה ביסודיות עם 70% אתנול, ומפעילים UV למשך 15 דקות. לאחר מכן, לשמור את הזרעים בתוך תא זרימת למינאר.</li>
		<li>קחו את תרבות ר. באטיקולה בת 10 ימים מבודדת (חלק 1). לאחר מכן, יש לקחת שלושה תקעי אגר פטרייתיים (קוטר 4 מ"מ) באמצעות קצה פיפטה סטרילי או בור שעם, ולשים אותם בבקבוקי ריבה באופן באותה פריסה. מכסים את הבקבוקים בפקקים וחותמים בפילם.</li>
		<li>לנער את הבקבוקים כדי לערבב את הדיסק פטרייתי עם זרעי חומוס באופן אחיד.</li>
		<li>דגירה את הבקבוקים ב 30 מעלות צלזיוס במשך 15 ימים בחושך.</li>
		<li>קח בקבוקי ריבה עם צמיחה פטריית שחורה (איור 4iii) ולהעביר את התרבות החולה (זרעים עם microsclerotia) מבקבוקי ריבה לצלחת פטרי זכוכית באמצעות מלקות סטריליות. לייבש אותם בטמפרטורת החדר במשך יומיים בצלחת פטרי זכוכית.</li>
		<li>אבקת מסה פטרייתית באמצעות מרגמה ועלי, ולאחסן את האבקה ב 4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>Autoclave Soilrite פעמיים ב 121 ק"ג במשך 15 דקות.</li>
		<li>ייבשו את תערובת האדמה המשובכת תחת שמש.</li>
		<li>מערבבים את האבקה הפטריתית עם Soilrite ב-50% w/w, ממלאים את הסירים בתערובת, ולשמור אותם בטמפרטורת החדר למשך יום.</li>
		<li>לזרוע זרעי חומוס רגישים ל-DRR לכל סיר (10 ס"מסיריםעגולים) ולשמור על רמת לחות של 80% קיבולת שדה (FC).</li>
		<li>צפה בסימפטומים כגון נמק ודהיב שורש על ידי עקרו את הצמחים לאחר נביטה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הערכת יעילות סיר חולה הערה: צמחים מראים תסמיני פליאר צהוב כאשר השורשים רקובים לחלוטין.<ol>
<li>לפתח ציון מחלה המבוסס על הנגע (נקודות נמק) (דמות משלימה 2C) מספרים וחומרת ריקבון שורש. סירים חולים מראה 90% מוות צמח יכול לשמש עוד יותר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הקרנת גנוטיפ<ol>
<li>הכינו את התרבות החולה בכמויות גדולות ומערבבו אותה עם Soilrite מעוטר או אדמת שדה (5% w/w) בסירים בגובה 30 ס"מ. להשקות את הסירים כדי להרטיב את פני השטח ולהשאיר אותם ללא הפרעה במשך שבעה ימים.</li>
		<li>לזרוע זרע אחד מעוטר פני השטח לכל סיר עגול 10 ס"מ ושלושה זרעים לכל סירים עגולים 30 ס"מ להשקות אותם כראוי.</li>
		<li>שימו לב לתסמיני הפוליאר הצהובים והריקבון של השורש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בצורת משולבת וזיהום ר. באטיקולה<ol>
<li>לכפות לחץ בצורת על ידי ביצוע הפרוטוקולים המוזכרים בSineha ואח '. (2019).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+root+rot+%28Rhizoctonia+bataticola+%28Taub.%29+Butler%29%3A+an+emerging+disease+of+chickpea+-+where+do+we+stand%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Phytopathology+and+Plant+Protection%22%5BJournal%5D)">Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand.</a> Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).</li>
<li>Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://krishikosh.egranth.ac.in/handle/1/93135">http://krishikosh.egranth.ac.in/handle/1/93135</a> (2016).</li>
<li>Sinha, R., Irulappan, V., Mohan-Raju, B., Suganthi, A., Senthil-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+drought+stress+on+simultaneously+occurring+pathogen+infection+in+field-grown+chickpea%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Impact of drought stress on simultaneously occurring pathogen infection in field-grown chickpea.</a> Scientific Reports. 9 (1), (2019).</li>
<li>Nene, Y., Haware, M., Reddy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chickpea+diseases%3A+resistance+screening+techniques%2C+information+bulletins+No.+10.+Patancheru%5BTitle%5D)+AND+%22Information+Bulletin+No.+10.+Patancheru%2C+A.P.%2C+India%3A+International+CroDS+Research+Institute+for+the+Semi-Arid+Tropics%22%5BJournal%5D)">Chickpea diseases: resistance screening techniques, information bulletins No. 10. Patancheru.</a> Information Bulletin No. 10. Patancheru, A.P., India: International CroDS Research Institute for the Semi-Arid Tropics. , 1-10 (1981).</li>
<li>Pande, S., Krishna Kishore, G., Upadhyaya, H. D., Narayana Rao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+sources+of+multiple+disease+resistance+in+mini-core+collection+of+chickpea%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of sources of multiple disease resistance in mini-core collection of chickpea.</a> Plant Disease. , (2006).</li>
<li>Pandey, P., Irulappan, V., Bagavathiannan, M. V., Senthil-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+combined+abiotic+and+biotic+stresses+on+plant+growth+and+avenues+for+crop+improvement+by+exploiting+physio-morphological+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Impact of combined abiotic and biotic stresses on plant growth and avenues for crop improvement by exploiting physio-morphological traits.</a> Frontiers in Plant Science. 8, (2017).</li>
<li>Irulappan, V., Senthil-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morpho-physiological+traits+and+molecular+intricacies+associated+with+tolerance+to+combined+drought+and+pathogen+stress+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnologies+of+Crop+Improvement%2C+Volume+3%3A+Genomic+Approaches%22%5BJournal%5D)">Morpho-physiological traits and molecular intricacies associated with tolerance to combined drought and pathogen stress in plants.</a> Biotechnologies of Crop Improvement, Volume 3: Genomic Approaches. , (2018).</li>
<li>Jensen, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+methods+for+fungal+brood+disease+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Standard methods for fungal brood disease research.</a> Journal of Apicultural Research. 52 (1), 1-39 (2013).</li>
<li>Agrios, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAgrios%2C+G+%22Plant+Pathology%3A+Fifth+Edition%22">Plant Pathology: Fifth Edition</a>. , 9780080473(2004).</li>
<li>Coley-Smith, J. R., Cooke, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+germination+of+fungal+sclerotia%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Survival and germination of fungal sclerotia.</a> Annual Review of Phytopathology. , (1971).</li>
<li>Nagamma, G., Saifulla, M., Sab, J., Pavitra, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNagamma%2C+G+%22Screening+of+chickpea+genotypes+against+dry+root+rot+caused+by+Macrophomina+phaseolina+%28tassi%29+goid%22">Screening of chickpea genotypes against dry root rot caused by Macrophomina phaseolina (tassi) goid</a>. 10 (4), 1795-1800 (2015).</li>
<li>Infantino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+techniques+and+sources+of+resistance+to+root+diseases+in+cool+season+food+legumes%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Screening techniques and sources of resistance to root diseases in cool season food legumes.</a> Euphytica. 147 (1-2), 201-221 (2006).</li>
<li>Khaliq, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+control+of+dry+root+rot+of+chickpea+caused+by+Rhizoctonia+bataticola+under+the+natural+field+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Reports%22%5BJournal%5D)">Integrated control of dry root rot of chickpea caused by Rhizoctonia bataticola under the natural field condition.</a> Biotechnology Reports. 25, 00423(2020).</li>
</ol>

אין לנו מה לחשוף.

טכניקת הנייר הנוהקת מספקת גישה פשוטה לגנוטיפים של חומוס על המסך בתנאי מעבדה. מחיסון מטבל מאפשר חקירה של אינטראקציה על בסיס זמני עם שליטה קלה על עומס inoculum (דמות משלימה 1) ומאפשר בהקרנה חוץית. יתר על כן, אפילו שתילים צעירים יכולים לשמש. תרבות פטרייתית בת חמישה ימים(איור 1B)יכולה להניב מספיק לאנוקולום כדי להדביק את הצמחים. אינוקולום נוזלי מכיל הן מיקליה והן מיקרוסקלרוטציה (איור 1D & E). תסמיני ריקבוןשורש (א...

ריקבון שורש יבש (DRR) היא אחת המחלות המשמעותיות מבחינה כלכלית חומוס1,2. זוהי מחלה ספציפית שורש הנגרמת על ידי רזוקטוניה bataticola (טלומורפ, Phaseomina). צמחים נגועים חסר שורשים לחוץ ויש להם טפירים שבירים ועלווה צהובה1,3. DRR תחת לחץ בצורת דווח להיות איום המתעוררים על גידולחומוס 1,2,3. יתר על כן, שכיחות DRR מדווח להיות מחמיר תחת לחץ בצורת בתנאי שדה1,2,3. DRR נפוץ יותר באזורי גשם מאשר בשדות שוריים4. ניצול זנים עמידים היא הדרך להתגבר על המחלה ולעוקף את השימוש בקוטל פטריות1,13. מכיוון שחיידקי חומוס הזמינים ברחבי העולם מטמינים וריאציהגנטית עבור התכונה 5, ההקרנה והזיהוי של גנוטיפים עמידים/רגישים הם קריטיים לרבייה מולקולרית לשיפור היבול.
תבניות מחלה חזקות, קלות וחסכונית חיוניות כדי לחקור את דפוסי הזיהום של ר. באטיקולה בגוזל. המחלה העיקרית assay משמש כדי לצפות בתגובה של גנוטיפים חומוס לזיהום R. bataticola היא טכניקת ניירכתמים 1,4. זוהי טכניקה פשוטה, ניתן לבצע באמצעות אינוקולום פטרייתי נוזלי, שתילים עם שורשים, ונייר כתם סטרילי. עם זאת, טכניקה זו לא נוצלה למקסימום שלה מכיוון שאין פרוטוקול שלב אחר שלב זמין בספרות.
בינתיים, טכניקת החשיש החולה כרוכה בהכנת תרבות חולה פוטנציאלית והטלת לחץ בצורת. בהתחשב בכך שלחץ בצורת מחמיר אתשכיחותמחלת DRR 3 , זה חיוני כדי ללמוד את האינטראקציה צמח-פתוגן תחתלחץ בצורת 6,7. טכניקת סיר חולה מספקת את הפלטפורמה למחקר כזה בו זמנית, קידום אפשרויות טובות יותר עבור הקרנת חיידקים והבנת הבסיס המכני של האינטראקציה. ניתן לטפל בשינויים פתומורפיים כגון עלייה באורך השורש וצמצום מספר השורשים הניגבים – הטבועים במחלת DRR – באמצעות טכניקתסיר חולה 1,3,7.
בזאת, פרוטוקול מפורט עבור נייר כתמים וטכניקות סיר חולה, אשר ניתן להשתמש כדי ללמוד את האינטראקציה בין חומוס ו R. bataticola ו germplasm חומוס מסך, מוצג. פרטי החומרים המשמשים במחקר ניתנים בטבלת החומרים.

<table><tbody><tr><td>פטריות- Rhizoctonia bataticola</td><td>Pathogen inoculum</td><td>Indian Type Culture Collection No. 8365</td><td>GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article&amp; id=1251&Itemid=1370)</td></tr><tr><td>Soilrite mix</td><td>מדיום אדמה במעבדה</td><td>Keltech Energies Limited, בנגלור, הודו</td><td>http://www.keltechenergies.com/</td></tr><tr><td>נייר סינון</td><td>נייר סופג לתמיכה בצמיחת הצמח</td><td></td><td>Himedia</td></tr><tr><td>http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 Pot</td><td>גידול צמחים</td><td>עציצים בגודל 10 ו-30 ס"מ</td><td>עציצי משתלה בשימוש שגרתי, למשל, https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html</td></tr><tr><td>תפוחי אדמה דקסטרוז אגר/מרק</td><td>תרבות ושמירה על הפטרייה</td><td>Cat# 213400, DifcoTM, MD, USA</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946</td></tr><tr><td>תרבית חממה</td><td>הפטרייה</td><td>LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, אינקובטור ושייקר</td><td>http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131</td></tr><tr><td>תא גידול גידול</td><td>צמחים במצב מבוקר</td><td>דגם מס' A1000, Conviron, קנדה</td><td>https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber</td></tr><tr><td>זרימת אוויר למינרית</td><td>ביצוע תרגילים אספטיים</td><td>Telstar, Bio II advance, ארון Class II, EN-12469-2000</td><td>https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/,</td></tr><tr><td>רשת</td> http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html <td>סינון התפטיר הפטרייתי</td><td>ניילון רשת כילה</td><td> עם גודל נקבוביות בקוטר 0.6-1 מ"מ</td></tr><tr><td>אמצעי</td><td>חיטוי וזרעי חומוס</td><td>מיקרוסקופים http://www.scientificsystems.in/autoclave חיטוי</td><td></td></tr><tr><td></td><td>הדמיית הזיהום בתפטיר פטרייתי</td><td>SMZ25 / SMZ18, סטריאומיקרוסקופים מחקריים, סטריאומיקרוסקופ</td> <td>חינוכי Leica EZ4https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i</td></tr><tr><td>איזון שקילה</td><td>פטריות וכימיקלים</td><td>Sartorius איזון שקילה אלקטרוני, BSA 4202S-CW</td><td>https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances</td></tr><tr><td>WGA-FITC</td><td>מכתים פטריות</td><td>סיגמא</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en&region=IN</td></tr><tr><td>אנילין כחול</td><td>מכתים פטריות</td><td>Himedia</td><td>http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901</td></tr></tbody></table>

שורש יבש רוט רוט מחלה אומר חומוס: מתודולוגיה מפורטת

Dry Root Rot Disease Assays in Chickpea: a Detailed Methodology

מחלת ריקבון שורש יבש (DRR) היא איום לחץ ביוטי המתעוררים על גידול חומוס ברחבי העולם. היא נגרמת על ידי פתוגן פטרייתי הנישא בקרקע, ריזוקוניה באטיקולה. בספרות, פרוטוקולים מקיפים ומפורטים שלב אחר שלב על מחלות הם דלים. מאמר זה מספק פרטים מלאים על השלבים המעורבים בהגדרת טכניקת נייר משתקת להקרנה מהירה של גנוטיפים להתנגדות ל-DRR. טכניקת הנייר הנוהקת קלה ופחות יקרה. שיטה נוספת, המבוססת על גישת החשיש החולה, היא חיקוי של זיהום טבעי וניתן ליישם אותה כדי ללמוד את הרכיבים המקיימים אינטראקציה – צמח, פתוגן וסביבה – המעורבים במשולש המחלה.
יתר על כן, בטבע, DRR מתרחשת בעיקר באזורי גידול חומוס ים, שם לחות הקרקע נסוגה ככל שצמיחת היבול מתקדמת. לחץ בצורת ידוע נטייה צמחי חומוס למחלת DRR. הבנה פתומורפולוגית ומולקולרית של אינטראקציה בין צמחים לפתוגן תחת לחץ בצורת יכולה לסלול את הדרך לזיהוי זנים עמידים בפני DRR מבריכת החיידקים של גרגירי החומוס. מאמר זה מספק מתודולוגיה צעד קדימה להכנת סיר חולה ואסה מחלה לאחר מכן. בסך הכל, המידע המוצג בזאת יסייע לחוקרים להכין את האנוקולום פטרייתי R. bataticola, לשמור על פתוגן זה, להגדיר את טכניקת נייר הכתמים, להכין תרבות חולה וסיר חולה, ולהעריך זיהום פתוגן בצמחי חומוס.

מחקר זה נועד להפגין טכניקות כגון נייר כתמים וטכניקות סיר חולה כדי להקל על הבנה פתומורפולוגית ומולקולרית של אינטראקציה צמח-פתוגן תחת לחץ בצורת. כדי להשיג זאת, צמחים המציגים תסמיני DRR1,3,4 נאספומתוך שדה חומוס, והפטרייה הייתה מבודדת באמצעות שיטת קצה hyphal8. תרבות פטרייתית באטיקולה מופיעה אפור כהה על צלחת מחשב כף יד ושיפוע על ארבעה ימים לאחר הדגירה (איור 1A &am...

מחקר זה מציג מתודולוגיות כדי ללמוד את המנגנונים הפתומורפולוגיים והמולקולריים הבסיסיים חומוס –אינטראקציה בטיקולה Rhizoctonia. שיטת נייר הכתמים שימושית כדי ללמוד במהירות תגובות גנוטיפ חומוס, בעוד השיטה מבוססת סיר חולה יכול לשמש בו זמנית לכפות בצורת וזיהום R. bataticola ומסנן עבור גנוטיפים סובלניים.

Dry root rot (DRR) disease is an emerging biotic stress threat to chickpea cultivation around the world. It is caused by a soil-borne fungal pathogen, ...

המטרה העיקרית של מחקר זה היא להדגים מתודולוגיה מפורטת של בדיקה של מחלות ריקבון שורש יבש, כגון טכניקת נייר סופג וטכניקת סיר חולה. טכניקות אלה יהיו מועילות ללמוד את האינטראקציה בין צמח חומוס ו Rhizoctonia bataticola. הבנת האינטראקציה צמח אפרוח עם פתוגן פטרייתי Rhizoctonia bataticola חשוב מבחינה חקלאית.לשם כך, יש צורך בהסטות רב-תכליתיות ומשוחזרות מאוד. כאן, שני בדיקות בשימוש נרחב במעבדה שלנו מוכחות. אחד מהם הוא נייר סופג מבוסס, והשני הוא בדיקה מבוססת סיר חולה.כדי לבצע את הבדיקה נייר סופג, להכין Rhizoctonia bataticola פטריית inoculum על ידי קנה המידה מתרבות שפויה לצלחת פטרי ולאחר מכן לתרבות נוזלית. מכינים משתלת חומוס על ידי, זריעת זרעים בסיר גדול. לעקור אותם ולשים אותם ב inoculum הנוזלי ולשים אותם על נייר סופג.שימו לב לתסמיני מחלה, כלומר נמק על השורש, ריקבון השורש ועלה מצהיב שמונה ימים לאחר החיסון. מוצג כאן הוא קצה המזלג, השלבים בטכניקת נייר סופג. כדי לבצע את ההקדמה סיר חולה, לחסן ארוחת חומוס עם פטרייה.לאחר הדגירה ב 30 מעלות צלזיוס במשך 15 ימים, תרבות החולה מתקבלת. לאחר מכן, אבקת אותם ומערבבים עם תערובת סיר. לזרוע זרעים על סיר שליטה וסיר חולה.בימים הבאים, להתבונן סימפטומים, כלומר נמק על השורש, ריקבון השורש, ועלה מצהיב על הצמחים הנגועים, 10 ימים לאחר זריעה. סיר חולה ניתן לשנות את קנה המידה והוא יכול לשמש הקרנות בקנה מידה גדול. מוצג כאן הוא קצה המזלג של צעדים בטכניקת סיר חולה.ריזוקטוניה באטטיקה היא פתוגן מתפתח. פטרייה זו מייצרת hyphae ו microsclerotia, אשר פועלים כמו inuclum העיקרי במהלך זיהום הצמח. התרבות הטהורה החלה באמצעות השיטה האסולאטית משמשת לראיה.נקודת המפתח לתסקים המוצלחים האלה היא עומס אינוקולום אופטימלי. הדגמה של טכניקת הנייר הנתמה מתחילה כאן. כדי להכין נוזלי Rhizoctonia bataticola inoculum, לחסן את מרק 500 מ"ל עם תקע אגר פטרייתי משלושה ימים תרבות צלחת טריים להדגירה את הבקבוק באינקובטור ב 28 מעלות צלזיוס במשך חמישה ימים.סנן את המיגלה הפטרייתי האפור הכהה עם מיקרו-סקלרוטיה. להשעות במים autoclaved ולהסיר את התקשורת. שוב, לסנן את המיסליה ולהסיר לחות על ידי כתם ייבוש המיקליה במשך כמה דקות.להשעות 100 גרם של אינוקולום פטרייתי ב 200 מ"ל של מים autoclaved בבקבוק ריבה ומערבבים אותו כראוי. לפתח משתלת חומוס על ידי זריעת זרעים מעוכלים משטח סולרנט. לעקור את הצמחים שמונה ימים לאחר זריעה, לשטוף אותם ולשטוף אותם עם RO autoclaved. קח נייר סופג ולקפל אותו פעם אחת ולה מניחים חצי ממנו על המגש.לעשות את זה רטוב עם מים autoclaved. קח צמחים לטבול לתוך inoculum במשך 30 שניות עם תנועה לסירוגין למעלה ולמטה. מניחים את הצמחים בצורה כזו כי השורשים מכוסים בתוך הסדין פוליה נשאר בחוץ.מקפלים את החצי השני ומכופפים את הנייר. לשליטה, לטבול את הצמחים במים autoclaved, לשמור את המגשים בתא צמיחה במשך שמונה ימים. תוצאות. שימו לב לתסמינים כגון הצהבה של עלים, ריקבון שורשים, נמק בשורש וירידה במספר השורשים.הדגמה של טכניקת הסיר החולה מתחילה כאן. קח קילוגרם אחד של זרעי חומוס מסחריים. לשטוף את הזרעים עם מי ברז ולשטוף שוב עם מי RO.משרים את הזרעים במשך חמש שעות. שוב, לשטוף את הזרעים עם מי RO להוסיף 300 גרם בבקבוק ריבה. יש לבודד אותם אוטומטית ב-121 LVS למשך 15 דקות פעמיים ברציפות.לאחר הקירור, מעבירים את הבקבוק דרך זרימת המינאר. לחסן את הבקבוקים עם שלושה אנגרי פטרייתי תקעים כארבעה גדלים רבועים מילימטר לנער אותו היטב לערבב כראוי. עוטפים את הבקבוקים ומטמיע אותם באינקובטור ב 30 מעלות צלזיוס במשך 15 ימים.שימו לב לבקבוקים עם צמיחה מיסליאלית כהה סביב זרעי החומוס ולהסיר את הזרעים. מייבשים אותם בטמפרטורת החדר ואבקתם. מערבבים אבקת ריזוקטיניה באטטולה עם סולוריט ולשמור אותם בטמפרטורת החדר במשך חמישה ימים.פני השטח מעקרים את זרעי GT62 וזורעים אותם בעומק של שני סנטימטרים. תוצאות. שימו לב לתמותה של 90% בסיר חולה. 10 ימים לאחר זריעה, לבחון את הסימפטומים כגון נמק בשורשים וירידה במספר השורשים ההיברטיים ועלה מצהבה בימים הבאים.סיר חולה יכול להיות מוכן באדמת שדה גם כן. בצורת וזיהום ריזוקטוניה באטטולה. לכפות לחץ בצורת בסיר החולה על ידי מניעת המים.המוצגים כאן הם הצמחים נתונים לשליטה, בצורת, פתוגן, ובצורת בו זמנית ומתח פתוגן. שימו לב לתסמינים, כלומר, יותר נמק, ריקבון שורש וירידה במספר השורשים, ואורך השורש בטיפול הלחץ המשולב בהשוואה לטיפול בפתוגן בלבד. מסקנות. טכניקת נייר סופג יכול להתבצע בתנאי ויטרו.טכניקת סיר חולה יכולה להתבצע בתנאי ויוו. בנמל חולה, מתח abiotic, כלומר, מתח בצורת, ניתן להטיל יחד עם זיהום פתוגן. באמצעות טכניקות אלה, אפשר ללמוד את דפוס זיהום פתוגן.רוב השינויים הפיזיולוגיים מתרחשים במהלך האינטראקציה חומוס-Rhizoctonia bataticola, וגם לסנן את גנוטיפים חומוס להתנגדות. הבדיקה של נייר סופג שימושית מאוד ליצירת דגימות איכותיות למחקרי מיקרוסקופיה וביולוגיה מולקולרית. המבדיקה בסיר החולה, המחקה את תנאי הזיהום הטבעיים, ישימה להקרנת נמק חומוס.

dry-root-rot-disease-assays-in-chickpea-a-detailed-methodology

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כימות צמיחת פתוגנים הוא כלי רב עוצמה לאפיון תגובות חיסוניות שונות של Arabidopsis thaliana (להלן: Arabidopsis). השיטה המתוארת כאן מציגה בדיקת חדירת מזרק אופטימלית לכימות Pseudomonas syringae pv. מקוליקולה גידול ES4326 בעלים בוגרים של Arabidopsis.

חיידקי עלה הסתננות Assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות<em&gt; Thaliana-Pseudomonas ארבידופסיס syringae</em&gt; Pathosystem

תאית גבישית היא מרכיב חשוב בדופן התא של הצמח. עם זאת, הכימות שלו ברזולוציה סלולרית הוא מאתגר מבחינה טכנית.  כאן, אנו מדווחים על שימוש בטכנולוגיית אור מקוטב וחתכי שורש כדי לקבל מידע על הרכב דופן התא ברזולוציה מרחבית-זמנית.

כימות רזולוציה גבוהות של הצטברות צלולוזת גבישים ב<em&gt; ארבידופסיס</em&gt; שורשי לפקח סלולארי רקמות ספציפיות קיר שינויים

מערכת cocultivation הידרופוני שתואר תומך צמחים שלם עם מסכי רשת מתכת cocultivates אותם עם חיידקים. רקמות הצמח, חיידקים, ומולקולות מופרדים אז ניתן לקצור בנפרד עבור ניתוחים במורד הזרם, בו זמנית מאפשר תגובות מולקולריות של שני המארחים צמח אינטראקציה חיידקים או microbiomes להיחקר.

הידרופוני Co- טיפוח מערכת לניתוח סימולטני ושיטתי של הצמח / מיקרובי אינטראקציות מולקולרית איתות

המוצג הוא פרוטוקול עבור assay תחרות הצלחת לזהות אם קומפוסט ספציפי הוא עשוי להכיל חיידקים ופטריות לדיכוי צמיחה של Rhizoctonia solani.

Assay תחרות צלחת כמו הערכה ראשונית מהירה של דיכוי מחלות

ניהול Fusarium wilt של אבטיח דורש ידע על גזעי הפתוגנים הקיימים. כאן נתאר את טבילת השורשים, זריעת הגרעינים שורצי השורשים ושיטות החיסון המתוקנות של טבילת מגשים כדי להדגים את יעילותן בהקלדת גזע של הפטרייה הפתוגנית Fusarium oxysporum f. sp niveum (Fon).

ניגוד בין שלוש טכניקות חיסון המשמשות לקביעת הגזע של פוסאריום אוקסיספורום לא ידוע f.sp. niveum מבודד

פרוטוקול זה מציג סיכום מפורט של אסטרטגיות לחיסון שורשי צמחים עם מיקרובים הנישאים באדמה. דוגמאות לפטריות Verticillium longisporum ו-Verticillium dahliae, מתוארות שלוש מערכות שונות של זיהום שורשים. יישומים פוטנציאליים וניתוחים אפשריים במורד הזרם מודגשים, ויתרונות או חסרונות נדונים עבור כל מערכת.

אסטרטגיות חיסון להדבקת שורשי צמחים במיקרואורגניזמים הנישאים בקרקע

אנו משתמשים בכלי מעבדה פשוטים כדי לבחון את ארכיטקטורת מערכת השורשים (RSA) של Arabidopsis ו- Medicago. העציצים גדלים באופן הידרופוני על גבי רשת ומפוזרים באמצעות מברשת אמנותית כדי לחשוף את ה-RSA. התמונות מצולמות באמצעות סריקה או מצלמה ברזולוציה גבוהה, ולאחר מכן מנותחות באמצעות ImageJ כדי למפות תכונות.

פרוטוקול פשוט למיפוי תכונות ארכיטקטורת מערכת שורש הצמח

מאמר זה מתאר שתי שיטות פנוטיפ ללא שימוש בקליפות אפידרמיס כדי לאפיין את הגנים השולטים בהתפתחות הסטומטלית. השיטה הראשונה מדגימה כיצד לנתח פנוטיפ סטומטלי באמצעות אפידרמיס צמחי מוכתם O כחול טולוידין. השיטה השנייה מתארת כיצד לזהות ליגנדות סטומטיות ולנטר את פעילותן הביולוגית.

זיהוי הגנים המעורבים בהתפתחות סטומאטלית באמצעות ניקוד פנוטיפ אפידרמלי

במאמר זה אנו מתארים כלי מתקדם המיועד לניטור ביוסינתזה של כלורופיל בשלבים המוקדמים של דה-אטיולציה של שתילי ארבידופסיס . המתודולוגיה החדשנית מספקת דימות פלואורסצנטי כלורופיל לא פולשני בזמן אמת ברזולוציה מרחבית וטמפורלית גבוהה.

בדיקה לא פולשנית לביוסינתזה של כלורופיל קביעת קינטיקה בשלבים מוקדמים של דה-אטיולציה של ארבידופסיס

גישות גנטיות הפוך הוכיחו שימושי ביותר לקביעת אילו גנים בבסיס התנגדות לפתוגנים וקטור יתושים. פרוטוקול זה ממחיש וידאו שיטה המשמשת את המעבדה Dimopoulos להזריק לתוך dsRNA אנופלס gambiae יתושים, אשר בנמל טפיל המלריה. הטכניקה מניפולציה ההתקנה הזרקה והזרקת dsRNA לתוך החזה מודגם.

פרוטוקול מבחני RNAi ב למבוגרים יתושים (א gambiae)

למד מתודולוגיות מפורטות לבדיקת מחלת ריקבון שורשים יבשים בחומוס באמצעות טכניקות נייר ספיגה וסיר חולה. שיטות אלו מאפשרות לחוקרים לסרוק זני חומוס לעמידות בפני Rhizoctonia bataticola ולחץ ביוטי.

שורש יבש רוט רוט מחלה אומר חומוס: מתודולוגיה מפורטת

גלה סרטונים נוספים