פרופיל חילוף חומרים כדי לקבוע את ההשפעות Bactericidal או Bacteriostatic של מוצרים טבעיים חדשים באמצעות מיקרוקלורימטריה איזותרמית

הבנת אופן הפעולה של תרכובות אנטיבקטריאליות חדשניות היא משימה חשובה אך קשה. שיטה זו מספקת תובנות על מנגנונים כאלה וקל ליישם אותה. טכניקה זו מאפשרת התבוננות בזמן אמת של השפעות אנטיבקטריאליות באופן לא פולשני המאפשר ניתוח מדגם נוסף.

למרות שהתרגול בטכניקות מיקרוביולוגיות הוא תנאי מוקדם, קל לבצע את הניסוי. לוקח את הזמן שלך עם ניתוח נתונים חשוב מאוד בעת ביצוע מיקרוקלורימטריה בפעם הראשונה. התחל באמצעות ספקטרופוטומטר באורך גל של 600 ננומטר כדי למדוד את הצפיפות האופטית של תרבות הלילה.

לדלל את התרבות 5 פעמים 10 למושבה החמישית להרכיב יחידות למיליליטר של ריכוז בינוני MHB טרי ולהוסיף 150 microliters של תאים לכל 1.5 צינור מיליליטר של אנטיביוטיקה בריכוז העניין. ואז לערבב את המתחם עם התאים על ידי מערבולת. כדי להכין את התוספות, להוסיף 120 microliters של כל תערובת אנטיביוטית חיידקים לתוך מוסיף פלסטיק בודדים בארות המתאימות של צלחת 48 היטב ולהשתמש פינצטה למקם את כל בקבוקוני טיטניום לתוך המחזיקים.

מעבירים בעדינות את המכניסים לתוך בקבוקוני הטיטניום בצלחת המחזיק ומכניסים באופן רופף מכסי טיטניום על כל הבקבוקונים. לאחר שכל המוסיף הועבר, הנח את המחזיק על האזור המיועד בתחנת הדגימה ולהשתמש מפתח ברגים מומנט להגדיר 40 מטרים כדי להדק את כל המכסים. בתוכנת המערכת, התחל ניסוי חדש והתמשוך את זרוע ההכנסה לדוגמה מהמכשיר.

מניחים את מחזיק ה על הגשר עם עמוד שמונה מול פתיחת הכנסה מדגם בעדינות לדחוף את מחזיק ה לתוך המכשיר בעמדה אחת. המתן 10 דקות עד שהמערכת תתייצב לפני שתסמן את בארות הניסוי. לאחר מכן, לדחוף את זרוע החדרת מדגם עד מחזיק ה הוא בעמדה 2.

לאחר מתן אפשרות למערכת להתייצב במשך 20 דקות, לדחוף את זרוע החדרת המדגם למיקום שלוש ולחזור בזרוע החדרת המדגם עד שהוא נמצא במצב ריצה. הדגש את כל בארות התוכנה ובחר להתחיל תגובה, ולאחר מכן להפעיל את הניסוי עד קריאות פליטת החום הם בחזרה בחזרה באפס. בסוף הניתוח, בחר עצור.

לאחר מכן התוכנה תשאל אם אתה בטוח. בחר כן ושמור את הניסוי לניתוח נתונים. לאחר מכן הכנס את זרוע החדרת הדגימה לחלוטין לתוך המכשיר ו לעסוק מגנטים כדי לאחזר את מחזיק ה.

כדי לנתח את הנתונים, פתח את התוכנה ובחר ניסוי פתוח. בחלון המוקפץ, בחר את הניסוי המעניין ולחץ על פתח. לחץ על בחר הכל והגדר תוכנית בסיסית כדי לנרמל את הנתונים בכל מיקום.

בחלון המוקפץ, בחר פרק זמן של יותר מ- 30 דקות בתוך שלב ההשהיה. לאחר הבחירה, תוכנית הבסיס תופיע בירוק בתרמוגרם. סגור את חלון המקטע הגדרת בסיס ולאחר מכן לחץ על שמור וסגור את התוכנה.

לאחר מכן, פתח את יישום ניתוח הקלורימטריה SymCel מבוסס האינטרנט. לחץ על עיון כדי להעלות את קובץ העניין ובחר את הניסוי. הפרמטרים המטבוליים יחושבו באופן אוטומטי עבור 32 הדגימות.

כדי להתאים את נתוני זרימת החום למודלים של Gompertz ו/או Richards Growth, לחץ על פונקציית הצמיחה. מודלי צמיחה יוצגו במקטע המצטבר לשם השוואה לנתונים הגולמיים במקטע הזרימה. כדי להוריד את הפרמטרים המחושבים, לחץ על מידות הורדה, בחר את מיקום הקובץ ולחץ על שמור.

הקובץ ייוצא לגיליון אלקטרוני לצורך ניתוח נוסף. כאן, תרמוגרמים שהושגו על ידי חשיפת A.baumannii DSM-30008 כדי ציפרופלוקסאצין בדילול סדרתי מוצגים. ריכוזים בין 0.005 ו 0.1 micromolar יש השפעה מינימלית על הצמיחה A.baumannii ומטבוליזם.

טיפול בתאים עם ציפרופלוקסאצין מיקרומולרי 0.5, לעומת זאת, מוביל לשינוי משמעותי במשך שלב ההשהיה ולזרימת חום מקסימלית נמוכה יותר. שני שינויים אלה יחד משפיעים על הזמן לשיא, וכתוצאה מכך עלייה של כשש שעות. בנתון זה, החום המצטבר המשוחרר מתווה נגד הזמן עם ההשפעה של כל ריכוז המשתקפת על ידי שיפוע של שיפוע.

כימות של שיפוע תרמוגרם מאפשר חישוב של קצב חילוף החומרים המרבי של A.baumannii בנוכחות ציפרופלוקסאצין עם ירידה במקביל בקצב חילוף החומרים שנצפה בתאים שטופלו 0.5 ציפרופלוקסאצין מיקרומולרי. טיפול ריפאמפיצין יש השפעה דרמטית על תרמוגרמים של A.baumannii DSM-30008. כמו כן נצפתה הפחתה משמעותית של פליטת החום המתואמת עם ירידה בפעילות המטבולית.

שים לב לעלייה בזמן לשיא עבור כל הריכוזים שנבדקו ואת הירידה בקצב חילוף החומרים הנגרמת על ידי ירידה במדרון עבור כל הריכוזים המיוחסים בדרך כלל אפקט bactericidal. כדי להבטיח תוצאות מיטביות, יש להשתמש בצנרת הפוכה ולמנוע נוזל נוסף בצידי ההכנסה בעת העברת הדגימה, גם לוודא כי המכסים סגורים כראוי.