Name: פרוסות היפוקמפוס אופקיות של מוח העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-22T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: למד הכנת פרוסות היפוקמפוס אופקיות ממוח עכבר לשימור מסלולי סיבים נוירונליים. הפרוטוקול מאפשר הקלטות אלקטרופיזיולוגיות וחקר פלסטיות סינפטית בדנטט גירוס.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ליחידה לאלקטרופיזיולוגיה של מרכז VIB-KU Leuven לחקר המוח והמחלות בפיקוחם של ד"ר קימפה וירדה ופרופ' ז'וריס דה וויט על השימוש במתקני המחקר שלהם. יתר על כן, אנו מודים לכל חברי המעבדה לחקר ערוץ היונים ולמעבדה לאנדומטריום, אנדומטריוזיס ורפואת פוריות ב- KU Leuven על הדיונים וההערות המועילים שלהם.
פרויקט זה קיבל מימון מקרן המחקר-פלנדריה (G.084515N ו- G.0B1819N ל- J.V.) ומועצת המחקר של ה- KU Leuven (C1-מימון C14/18/106 ל- J.V.). K.P. היא עמיתת FWO [PEGASUS]2 Marie Skłodowska-Curie וקיבלה מימון מתוכנית המחקר והחדשנות Horizon 2020 של האיחוד האירופי במסגרת הסכם המענק מארי סקלודובסקי-קירי (665501) עם קרן המחקר פלנדרס (FWO) (12T0317N). ק.ה. הוא פוסט דוקטורנט של קרן המחקר פלנדרס, בלגיה (12U7918N).

למחברים אין מה לחשוף.

למרות נפוץ בקרב קהילת מדעי המוח, ההכנות פרוסת המוח מתמודדים גם עם מספר חסרונות. לדוגמה, חיבורי קלט ופלט לאזורי העניין במוח אינם מחוברים עוד בפרוסת מוח. יתר על כן, ברגע מבודד, הרקמה מתחילה להשפיל לאט לאורך זמן ותהליך זה יכול לשנות את התנאים הפיזיולוגיים של פרוסת המוח. נושא זה מדאיג מאוד מכיוון שרוב הקלטות פרוסות המוח לוקחות מספר דקות עד שעות, מה שמוביל לימי ניסוי ארוכים עם הקלטות שבוצעו על רקמות שבודדו עד 6-8 שעות לפני תחילת הניסוי. יתר על כן, הנוזל השדרתי ומחזור הדם מופרעים במהלך ההכנות לפרוסות, מה שעלול להוביל להיעדר תרכובות אנדוגניות חשובות בתוך פרוסת מוח. והכי ברור, הליך ההחתכה עצמו עלול לגרום נזק מכני לרקמות שעלול לסכן את התוצאות המתקבלות. עם זאת, היתרונות בפועל של ההכנות פרוסת המוח עדיין עולים על החסרונות שלהם, ולכן הם מציגים טכניקה מוערכת מאוד מועסק במחקר מדעי המוח.
פרוסות מוח היפוקמפוס חריפות מציגות טכניקה רבת עוצמה ולכן בשימוש נרחב כדי לחקור תהליכים עצביים מרמה מולקולרית ועד מחקרים מורכבים במעגל המוח. זה מבוסס על נוירואנטומיה האידיאלית של ההיפוקמפוס שניתן לשמר בקלות בפרוסת הכנה18. כתוצאה מכך, פרוסות מוח בהיפוקמפוס משמשות במגוון רחב של מחקרים מדעיים, כולל הקרנות סמים17, מחקרים על תכונות עצביות וסינפטיות המעורבות בתפקודים קוגניטיביים40,41, וחקירות של מחלות מוח פתולוגיות14,42,43. עם זאת, קשת רחבה של יישומים שונים גורמת גם למגוון רחב של פרוטוקולי הכנת פרוסות זמינים שיכולים להיות שונים בפרמטרים שונים, כגון תנאי ניתוח וחיתוך כיוון המישור, בין היתר. לכן, שאלת המחקר המדויקת של פרויקט מדעי צריכה להיקבע על מנת לבחור פרוטוקול הכנת פרוסה מתאים.
מסוק הרקמות מציג את אחת הטכניקות המשומשות העתיקות ביותר להכנת פרוסות מוח בהיפוקמפוס44,45. היתרונות העיקריים של שיטת הכנה זו כוללים את העלות הנמוכה של המסוק ואת השימוש המהיר והקל46. עם זאת, מסוקי רקמות לגרום ללחץ מכני שתוצאתו שינויים מורפולוגיים ומוותתאים 47. לשם השוואה, הוויברטום הוא מכונה יקרה למדי והזמן להכנת פרוסות גדל באופן משמעותי אשר עשוי להשפיע על איכות הפרוסה. עם זאת, vibratome בדרך כלל מציע אופן עדין יותר של הפרדת הפרוסות מן הרקמה ומאפשר לשמור על המוח מקורר יפה מחומצן על כל הליך הבידוד, ובכך לשפר את תכונות פרוסה46. לכן, מספר קבוצות משתמשות באופן סטנדרטי בטכניקה זו והביאו פרוטוקולים להכנת פרוסות מוח היפוקמפוס חריפות באמצעות vibratome16,30,48. בעוד פרוטוקולים מסוימים מספקים רק כמה פרטים עבור חיתוך עצמו, אלא להתמקד ביישום מסוים של הכנת פרוסה כזו48, אחרים מספקים פרוטוקולי פרוסה מפורטים השונים בחיתוך מישור או פרטי פרוטוקול אחרים (למשל, הטבעה agarose או פרוסה / פתרונות התאוששות) נתון במאמר זה27,30.
הפרוטוקול המתואר כאן מציג שיטה פשוטה על מנת להכין באיכות גבוהה פרוסות מוח עכבר היפוקמפוס אופקי באיכות גבוהה מבעלי חיים צעירים. הפרוטוקול שימושי במיוחד כדי לשמר את הנתיב המחורר (המדיאלי ולרוחב) המציג את מסלול הקלט ההיפוקמפוס, אשר מקרין מן קליפת המוח האנטורינלית אל ההיפוקמפוס8,49,50. קשת, קורנל, כמו גם היפוקמפוס מבודד תכשירים פרוסה רוחבית אינם משמרים כראוי את הנתיב המחורר, שמקורו בעיקר בשכבות II ו- V של קליפת המוח האנטורינלית ופרויקטים למספר אזורים בתוך ההיפוקמפוס18. בשל המיקום האנטומי של קליפת המוח האנטורינלית ביחס להיפוקמפוס, פרוסות מוח אופקיות הן הכרח על מנת לשמור על סיבי נתיב מחורר שלמים לחלוטין בתוך הפרוסה הכנה31. בנוסף, ההחתכה האופקית משמרת באופן אידיאלי את הסיבים הטחובים המקרינים מהgyrus המשקע לנוירונים CA3 בתוך ההיפוקמפוס9,30,50. לכן, שיטת הכנה זו היא בעלת ערך גבוה למחקרים החוקרים מסלולי קלט בהיפוקמפוס ותהליכים הקשורים ל- DG. בנוסף, פרוטוקול זה מאפשר את החקירה של מסלול בטחונות שייפר50. עם זאת, הכנות פרוסות המוח sagittal ו coronal נמצאים בשימוש נפוץ יותר בעת חקירת CA3 כדי CA1 תחזיות סיבים, ככל הנראה בגלל זמן ההכנה שלהם קצת יותר מהר שיכול להגדיל את הסיכוי להשיג פרוסות באיכות גבוהה. עם זאת, ההכנות לפרוסת ההיפוקמפוס האופקי מציגות כלי מחקר רב עוצמה שכן הוא מאפשר שימור וחקירה של כל מסלולי הסיבים בהיפוקמפוס בתוך חצי הכדור פרוסה אחת. זה יכול להיות שימושי במיוחד כאשר תגובות מעגל נחקרות, למשל, בהקלטות מבחני אלקטרודה מרובים.
דאגה מרכזית בעת הכנת פרוסות המוח היא שימור נאות של רקמת המוח. זה מושג על ידי מספר צעדים קריטיים בפרוטוקול שלנו, כולל ניתוח מהיר, חמצון מתמשך ומספיק וקירור של הרקמה, והגנה על רקמת המוח על ידי שימוש בשיטת חיתוך מגן עם נתרן נמוך, פתרון חיתוך סוכרוז גבוה39,51. למרות העובדה כי הפרוטוקול המתואר כאן מניב שיעור הצלחה סביב 90%, ייתכן שיידרשו צעדי הגנה נוספים בעת עבודה עם רקמות שמקורן בבעלי חיים מבוגרים או מגוונים גנטית או בעת ניסיון לשמר אוכלוסיית תאים מסוימת. מספר שיטות כבר דווחו כדי להגן על הכנות רגישות רקמת המוח. שיטות אלה כוללות שימוש בפתרונות חותכים מבוססי NMDG להפחתת חדירת הנתרן52, שימוש ברמות מגנזיום גבוהות בתמיסת החיתוך על מנת לחסום את פעילות הקולטן NMDA53, ושימוש ממושך בפתרונות מגן גם בתקופת ההחלמה23. כל האמצעים האלה יגרמו להתרגשות מופחתת. בנוסף, זלוף טרנס-קרדיאלי עם פתרונות ACSF מגן קר כקרח משמש לעתים קרובות והכרחי בעת עבודה עם בעלי חיים מבוגרים27.
פרוסות מוח היפוקמפוס חריפות מתאימות באופן אידיאלי ומשמשות בהרחבה למחקרים אלקטרופיזיולוגיים מסיבות כגון אותות משרעת גבוהים שניתן להשיג מפרוסת מוח חריפה עבה יחסית (300-500 מיקרומטר), המבטיחה אות גבוה ליחס רעש11. יישומים אלקטרופיזיולוגיים הנמצאים בשימוש סטנדרטי כוללים הקלטות שדה חוץ-תאיות והקלטות תאיות של תא שלם במצב מלחציים מתח או זרם. על מנת לרכוש נתונים אלקטרופיזיולוגיים באיכות גבוהה, בריאות הפרוסה היא הדאגה העיקרית וניתן להבטיח על ידי ביצוע קפדני של הפרוטוקול המוצג. עם זאת, כמו ההכנות פרוסה להציג טכניקה רגישה מאוד, בדיקת איכות צריך להיכלל באופן שגרתי לפני תחילת כל ניסוי. ניתן להשתמש במספר פרמטרים כבדיקת איכות של הפרוסה והם מוערכים באופן סטנדרטי באמצעות עקומות קלט-פלט והקלטות fEPSP או EPSC בסיסיות19. עם זאת, יש לציין כי תכונות אלקטרופיזיולוגיות תת-אופטימליות יכולות לנבוע מטעויות ניסיוניות כגון מיקום אלקטרודה, אוריינטציה או אפילו נזק ואינן מייצגות אך ורק את בריאות הפרוסה המוכנה. לכן, מומלץ לבצע פקדי איכות נוספים כגון הדמיה פשוטה והערכה של התאים תחת מטרה 40x או כתם גרעין DAPI. בדיקות איכות כאלה ניתן להשתמש כדי לאשר בריאות פרוסה קבועה על פני מספר מפגשי הכנה פרוסה.
מיקרופלואורימטריית סידן מציגה טכניקה פחות נפוצה לחקר פרוסות מוח בהיפוקמפוס. עם זאת, טכניקה זו היא בעלת ערך מוסף להקלטות האלקטרודה החוץ-תאית והבלתי תאית הסטנדרטיות, שכן היא מאפשרת לדמיין ולכמת שטפי סידן תאיים, בעלי חשיבות גבוהה באיתות עצבי וסינפטי. שינויים בריכוזי סידן תאיים מעורבים שחרור vesicle נוירוטרנסמיטר, הדור הפוטנציאלי postsynaptic, ויסות פלסטיות סינפטית הולכה עצבית אקסון54,55,56. כהמחשה לטכניקה זו (איור 4), עשינו שימוש בצבע סידן זמין מסחרית. באופן בלתי נמנע, טיפול בפרוסות רקמה עם צבעי סידן יכול להניב קשיים כגון מסגרת זמן ניסיונית מוגברת, כמו גם טעינה לא יעילה של תאים עצביים הממוקמים נמוך יותר. עם זאת, וריאציות על טכניקה זו יכול לשמש כדי לעקוף אתגרים טכניים אלה. לדוגמה, ניתן לשלב מדידות סידן והקלטות מהדק תיקון בפרוסות היפוקמפוס. בדרך זו, צבע פלואורסצנטי סידן יכול להיות טעון לתוך תא מסוים דרך פיפטה תיקון, המאפשר את המדידות של דינמיקת סידן בתא אחד ספציפי שלעניין 57. לחלופין, בעלי חיים מהונדסים גנטית המבטאים את מחוון הסידן, GCaMP58, או במוח כולו, או מונע על ידי פרומוטור ספציפי לתא, יכול לשמש. מעניין, רקמת המוח של בעלי חיים GCaMP עם מקשר ישיר חלבון של עניין יכול לספק הזדמנויות לקבוע את דפוס הביטוי העצבי או לחקור את המעורבות ניצוצות סידן וגלים.
בסך הכל, אנו מספקים את ההנחיות להכנה מוצלחת של פרוסות מוח היפוקמפוס אופקיות בריאות ובת קיימא מעכברים להקלטות אלקטרופיזיולוגיות והדמיה. מתודולוגיה זו שימושית מאוד כדי לגשת לשינויים נוירולוגיים המתרחשים פתולוגיות במוח המתוארים gyrus שקע.

המחקר הנרחב של ההיפוקמפוס החל כאשר סקוביל ומילנר דיווחו על חוסר היכולת של חולה (H.M.) ליצור זיכרון חדש, הצהרתי לאחר הסרה כירורגית של ההיפוקמפוס ומבני האונה הרקתית הסמוכים כטיפול באפילפסיה חמורה1. מרגע זה ואילך, ההיפוקמפוס נחקר בהרחבה החל תכונות עצביות כלליות פונקציות עד להתפתחות של הפרעות מוחיות חמורות, כגון אפילפסיה ומחלת אלצהיימר2,3,4,5. ההיפוקמפוס הוא חלק מהמערכת הלימבית, המורכבת מקבוצה של מבני מוח קשורים המעורבים בהיווצרות רגש וזיכרון6,7. רשת צפופה של מספר מסלולי סיבים משיגה קישוריות היפוקמפוס הדוקה למבני מוח פנימיים וחיצוניים. מסלולים אלה כוללים את הנתיב המדיאלי והנקבי לרוחב (קליפת המוח האנטורינלית כדי לכוון gyrus, CA3 – CA1 ו subiculum)8, נתיב סיבים טחב (לכוון gyrus כדי CA3)9 ואת נתיב שייפר בטחונות / שיוכי קומיסרלי (CA3 כדי CA1)10 (איור 1). ההיפוקמפוס מציג את אחד מאזורי המוח הנחקרים ביותר עד כה בגלל הארגון הלמינארי השמור ביותר של היווצרות השכבה העצבית, והאפשרות להשיג תרבויות עצביות חיוניות ופרוסות מוח בקלות יחסית5.
<img alt="דיאגרמת נוירונים בהיפוקמפוס, המציגה מסלולים: CA1, CA2, CA3, DG, subiculum, LPP, MPP, EC." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61753/61753fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: קריקטורה הממחישה את אזורי ההיפוקמפוס השונים ואת מסלולי הסיבים העיקריים. אזורי ההיפוקמפוס השונים מסומנים על ידי קווים צבעוניים: קליפת המוח האנטורינאלית (EC; שחור), gyrus משועבד (DG; כתום), קורנו אמוניס (CA) 3 (ציאן), 2 (צהוב), ו 1 (מגנטה), ואת subiculum (ירוק). מסלולי סיבים מוצגים עם קו מנוקד צבעוני: נתיב ניקוב המדיאלי (MPP, אדום) ולרוחב (LPP, כחול) (מקליפת המוח האנטורינאלית ועד לgyrus משועבד, CA3, CA1, ו subiculum), מסלול סיבים טחב (MF, סגול) (מן gyrus משועבד CA3) ואת בטחונות שייפר (SC, חום) (ipsilateral מ CA3 כדי CA1)/ מסלולי קומיסראלי שיוך (AC, ירוק בהיר) (התווית מ CA3 ל CA1). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61753/61753fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
פרוטוקולים פרוסת המוח לעתים קרובות לגרום לאובדן קשרים מאזורי מוח רחוקים יותר לאזור עניין5. יתר על כן, נימים כבר לא מתפקדים5 ואת זרימת הדם הוא משולל11. למרות מגבלות אלה, פרוסות המוח עדיין משמשות בעיקר לחקירת תפקודים נוירופיזיולוגיים של ההיפוקמפוס בשל מספר יתרונות. ראשית, החילוץ של ההיפוקמפוס הוא מהיר12 ואינו דורש חומרים רבים. המכשירים החיוניים היחידים כוללים ערכת ניתוח, אמבט מים במעבדה, גישה לפרבוגן ומיקרוטום רוטט (ויברטום)13. נכסים אחרים של טכניקת פרוסת המוח הם עקיפת מחסום הדם - מוח (BBB) ואת לשטוף מתוך מולקולות שפורסמו אנדוגני לפני תחילת הניסוי5, מה שמאפשר ללמוד את ההשפעה של תרופות עם בקרת מינון מדויקת יחסית14. יתר על כן, פרוסות המוח משמרות את ארכיטקטורת הציטו והמעגלים הסינפטיים בתוך ההיפוקמפוס15,16, שם הנוירואנטומיה והסביבה המקומית עם קישוריות עצבית ואינטראקציות נוירון-גליה מורכבות נשמרות4,11,17. בנוסף, חיבורי סיבים בהיפוקמפוס הם בעיקר נוירונים חד כיווניים והיפוקמפוסים יש פלסטיות סינפטית גבוהה, אשר מאוד מפשט את האוסף ואת הפרשנות של הקלטות אלקטרופיזיולוגיות באיכות גבוהה על מנת להבין תהליכים נוירולוגיים18,19. חשוב לציין, פרוסות המוח מציגות נכס בעל ערך החל במגוון רחב של טכניקות מדעיות שונות, המשתרעות מטכניקות ביולוגיות מולקולריות על פני הקלטות הדמיה ועד מדידות אלקטרופיזיולוגיות12,20,21,22,23,24,25,26.
כפי שתואר לעיל, פרוסות מוח בהיפוקמפוס מציגות כלי ניסיוני רב עוצמה לחקר תכונות מבניות ותפקודיות של הקישוריות הסינפטית. זה מציע את ההזדמנות להעריך את ההשפעות של כימיקלים או מוטציות על רגישות עצבית פלסטיות16.
ההכנות לפרוסות מוח חריפות מציגות טכניקה רגישה יחסית ואיכות הפרוסה האופטימלית תלויה מאוד בתנאים ניסיוניים אידיאליים, כולל גיל החיה, שיטת המתת החסד, מהירות הניתוח והחתיכה, פתרונות החתכים והפרמטרים (למשל, מהירות ההחתכה) כמו גם התנאים להתאוששות פרוסות4. לכן, פרוטוקול מתוכנן היטב הוא בעל חשיבות עליונה ומבטיח את הרבייה על פני יחידות מחקר שונות13.
כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור הכנות פרוסת היפוקמפוס אופקית חריפה, במטרה לשמור על שלמות המסלול לרוחב ההיפוקמפוס וניקוב המדיאלי ואת מסלול סיבים טחובים, המאפשר חקירה של תהליכים הקשורים gyrus שקע9. נתאר בפירוט את השלבים העיקריים לנתח, לחלץ ולפרוס אופקית את המוח המוריני, ואחריו תוצאות מייצגות של הקלטות סידן-מיקרופלואורימטריות והקלטות פוטנציאליות מעוררות שדה (fEPSPs) בתנאים בסיסיים ובמהלך פרוטוקולי אינדוקציה LTP בפרוסות מוח מסוג בר C57BL/6J עכברים.

<table><tbody><tr><td>תא הרדמה</td><td>תוצרת בית - גנרי</td><td>N/A</td><td>פרספקס</td></tr><tr><td>וופורייזר הרדמה</td><td>Dr&auml; גר & MSS אינטרנשיונל בע"מ</td><td>Isoflurane Vapor 19.3 & MSS Isoflurane</td><td>לאידוי איזופלורן להרדמת מכרסמים</td></tr><tr><td>חביות למערכת הזלוף</td><td>TERUMO</td><td>מזרקים היפודרמיים ללא מחט</td><td>https://www.terumotmp.com/products/hypodermics/terumo-hypodermic-syringes-without-needle.html</td></tr><tr><td>Bicuculline methiodide</td><td>hellobio</td><td>HB0893</td><td></td></tr><tr><td>https://www.hellobio.com/bicuculline-methiodide.html נימי זכוכית Borosilcate</td><td>Science Products</td><td>GB150F-8P</td><td>https://science-products.com/en/shop/micropipette-fabrication-1/capillary-glass-for-micropipette-pullers/borosilicate-glass-capillaries/borosilicate-filament-polished</td></tr><tr><td>סידן כלוריד דיהידרט</td><td>Merck</td><td>102382</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Calcium-chloride-dihydrate,MDA_CHEM-102382?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td></tr><tr><td>תוכנת הדמיית סידן</td><td>Till Photonics</td><td>LiveAcquisition v2.3.0.18</td><td></td></tr><tr><td>מיכל קרבוגן</td><td>אוויר נוזלי</td><td>Alphagaz תערובת B50</td><td>תערובת גז CO2 / O2: 5/95, טוהר 5</td></tr><tr><td>אשכול מיקרואלקטרודה</td><td>FHC</td><td>CE2C55</td><td></td></tr> <tr><td>https://www.fh-co.com/product/cluster-microelectrodes/ צלחת תרבות (35 מ"מ)</td><td>קורנינג מדעי החיים</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית https://ecatalog.corning.com/life-sciences/b2c/US/en/Cell-Culture/Cell-Culture-Vessels/Dishes%2C-Culture/Falcon&reg;-Cell-Culture-Dishes/p/353001 (90 מ"מ)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>101VR20</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/101R20#/101R20</td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים</td><td>כלי מדע עדין</td><td>11270-20</td><td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-7b-Forceps/11270-20</td></tr><tr><td>D-AP5</td><td>hellobio</td><td>HB0225</td><td>https://www.hellobio.com/dap5.html</td></tr><tr><td>D-(+)-גלוקוז מונוהידראט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>16301</td><td></td></tr><tr><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/16301?lang=en&region=BE מצלמת CMOS דיגיטלית</td><td>HAMAMATSU</td><td>ORCA-spark C11440-36U</td><td>https://www.hamamatsu.com/eu/en/product/type/C11440-36U/index.html</td></tr><tr><td>מספריים לדיסקציה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-ToughCut&reg;/14058-09 DNQX</td><td>hellobio</td><td>HB0262</td><td></td></tr><tr><td>https://www.hellobio.com/dnqx-disodium-salt.html מצלמת EMCCD</td><td>Andor</td><td>iXon TM + DU-897E-CSO-#BV</td><td>https://andor.oxinst.com/products/ixon-emccd-cameras?gclid=CjwKCAjw97P5BRBQEiwAGflV6ULsKjXfhN2YZxtvsWAmF4QghyXZKuqYHVMa6KU9JyS80ATQkSKeBBoCIM0QAvD_BwE</td></tr><tr><td>EPC10 USB כפול תיקון מהדק</td><td>מגבר HEKA Elektronik</td><td>895278</td><td></td></tr><tr><td>https://www.heka.com/sales/brochures_down/bro_epc10usb.pdf נייר סינון</td><td>VWR</td><td>516-0818</td><td>כיתה 413</td></tr><tr><td>מברשת עדינה</td><td>רפאל Kaerell</td><td>8204</td><td>גודל #1</td></tr><tr><td>18 גרם מחט</td><td>Henke Sass Wolf Fine-Ject</td><td>18G X 1 1/2 אינץ' 4710012040</td><td>https://www.henkesasswolf.de/cms/de/veterinaer_produkte/produkte_vet/einmalkanuelen/hsw_henke_ject_einmalkanuelen/</td></tr> <tr><td>Isoflurane</td><td>Dechra מוצרים וטרינריים</td><td>Iso-Vet 1000 מ"ג/גרם</td><td>250 מ"ל בקבוק</td></tr><tr><td>Loctite 406</td><td>Henkel Adhesive Technologies</td><td>Loctite 406</td><td>Super דבק</td></tr><tr><td>מגנזיום סולפט הפטהידראט</td><td>Merck</td><td>105886</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Magnesium-sulfate-heptahydrate,MDA_CHEM-105886?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור</td><td>Luigs & נוימן</td><td>SM-10 עם מערכת שלט רחוק SM-7</td><td>https://www.luigs-neumann.org</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ (להדמיית סידן)</td><td>אולימפוס</td><td>BX51WI</td><td>https://www.olympus-lifescience.com/de/microscopes/upright/bx61wi/</td></tr> <tr><td>מיקרוסקופ (להקלטות אפיס)</td><td>Zeiss</td><td>Axio Examiner.A1</td><td>https://www.micro-shop.zeiss.com/de/de/system/axio+examiner-axio+examiner.a1-aufrechte+mikroskope/10185/</td></tr><tr><td>מקור אור מיקרוסקופ</td><td>CAIRN Research</td><td>ספק כוח OptoLed כפול</td><td>https://www.cairn-research.co.uk/product/optoled/</td></tr> <tr><td>מונוכרומטור</td><td>עד פוטוניקה</td><td>פוליכרום V</td><td></td></tr><tr><td>N-מתיל-D-חומצה אספרטית (NMDA)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M3262</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m3262?lang=en&region=BE</td></tr><tr><td>אורגון גרין&reg; 488 BAPTA-1</td><td>בדיקות מולקולריות Invitrogen</td> <td>#06807</td><td>10x50ug</td></tr><tr><td>אוסמומטר אוסמומטר</td><td>Wescor</td><td>5500 אוסמומטר לחץ אדים</td><td>לאימות אוסמולריות של תמיסות מלח</td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>Masterflex C / L 77120-62</td><td></td></tr><tr><td>מד pH</td> https://www.fishersci.be/shop/products/masterflex-peristaltic-c-l-dual-channel-pump-2/p-8004229 <td>סדרת WTW</td><td>inoLab pH 720</td><td></td></tr><tr><td>https://www.geminibv.nl/wp-content/uploads/manuals/wtw-720-ph-meter/wtw-inolab-ph-720-manual-eng.pdf מושך פיפטות</td><td>מכשיר סאטר</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>https://www.sutter.com/MICROPIPETTE/p-1000.html אשלגן כלוריד</td><td>Chem-lab</td><td>CL00.1133</td><td>https://www.chem-lab.be/#/en-gb/prod/1393528</td></tr><tr><td>אשלגן דימימן פוספט</td><td>Merck</td><td>104873</td><td></td></tr><tr><td>סכין גילוח https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Potassium-dihydrogen-phosphate,MDA_CHEM-104873?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F להכנת חצאי כדור</td><td>SPI מספק</td><td>מחסנית בטיחות מתקן - Pkg/10</td><td>GEM Scientific Single Edge סכיני</td></tr><tr><td>גילוח סכין גילוח לרטט</td><td>טד פלה בע"</td>מ <td>121-6</td><td>סכיני גילוח בסגנון שביר קצה כפול (נירוסטה מצופה PTFE)</td></tr><tr><td>תא התאוששות</td><td>תוצרת בית -</td><td>Gnic N/A</td><td>לאיסוף ואחסון פרוסות מוח (ראה פרטים בכתב היד)</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>כל חברה</td><td>N/A</td><td>להב צריך להיות מושחז היטב ובאורך של לפחות 15 ס"מ לעריפת ראש קלה</td></tr><tr><td>חוט אלקטרודה כסף</td><td>כל חברה</td><td></td><td>לרישום ואלקטרודות ייחוס</td></tr><tr><td>נתרן דימימן פוספט דיהידראט</td><td>Merck</td><td>106342</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Sodium-dihydrogen-phosphate-dihydrate,MDA_CHEM-106342?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td></tr><tr><td>נתרן מימן פחמתי</td><td>אלפא Aesar</td><td>14707</td><td>https://www.alfa.com/en/catalog/014707/</td></tr> <tr><td>נתרן כלוריד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S/3160/60</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.co.uk/shop/products/sodium-chloride-certified-ar-analysis-meets-analytical-specification-ph-eur/10428420 תוכנה להקלטות שטח</td><td>HEKA Elektronik</td><td>PatchMaster</td><td>https://www.heka.com/downloads/software/manual/m_patchmaster.pdf</td></tr><tr><td>Spatula</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9147-12EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s9147?lang=en&region=BE</td></tr><tr><td>ממריץ</td><td>A.M.P.I</td><td>ISO-FLEX</td><td></td></tr> http://www.ampi.co.il/isoflex.html <tr><td>סוכרוז</td><td>VWR אינטרנשיונל בע"מ</td><td>צינורות https://es.vwr-cmd.com/ex/downloads/magazine/lupc_userguide_uk.pdf 102745C</td><td></td></tr><tr><td>לקווי קרבוגן, זלוף ויניקה 1</td><td>וורנר אינסטרומנטס</td><td>64-0167</td><td>צינורות טיגון (TY-50) למערכות שסתומים</td></tr><tr><td>סטנדרטיות צינורות לקווי קרבוגן, זלוף ויניקה 2</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>800/100/200 ו-800/100/280</td><td>סמיתס רפואי פורטקס משאבת ואקום LDPE משאבת</td></tr> <tr><td></td><td>ואקוםתוצרת בית -</td> מערכת זלוף רב-חבית גנרית <td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>8 שסתומים</td><td>תוצרת בית</td><td>N/A</td><td>מורכבת מחביות, צינורות ובקרת שסתומים אוטומטית מתוצרת עצמית (ניתן למצוא מפרטים של כל החלקים שנרכשו בטבלה זו)</td></tr> <tr><td>שסתומים מגנטיים (לשליטה בקווי הזילוף)</td> <td>NResearch Inc.</td><td>p/n 161P011</td><td>https://nresearch.com/</td></tr> <tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>14912000001</td><td>להב רוטט חצי אוטומטי microomei VT1200</td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>Memmert</td><td>WNB 7</td><td>https://www.memmert.be/wp-content/uploads/2019/09/Memmert-Waterbath-WNB-7.en_.pdf</td></tr><tr><td>מערכת טיהור מים</td><td>Merck</td><td>Synergy millipore</td><td>להשגת מים מטוהרים במיוחד</td></tr><tr><td>12 בארות צלחות</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>CELLTAR, 665180</td><td>http://www.greinerbioone.com/UserFiles/File/Catalogue%202010_11/UK/3680_005-Kapitel1_UK.pdf</td></tr></tbody></table>

פרוסות היפוקמפוס אופקיות של מוח העכבר

Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain

ההיפוקמפוס הוא מבנה מאורגן מאוד במוח שהוא חלק מהמערכת הלימבית ומעורב ביצירת זיכרון ואיחוד, כמו גם ביטוי של הפרעות מוחיות חמורות, כולל מחלת אלצהיימר ואפילפסיה. ההיפוקמפוס מקבל רמה גבוהה של קישוריות פנימית ואינטר, המאבטחת תקשורת נכונה עם מבני מוח פנימיים וחיצוניים. קישוריות זו מושגת באמצעות זרימות אינפורמציות שונות בצורה של מסלולי סיבים. פרוסות מוח הן מתודולוגיה נפוצה בעת חקירת תפקודים נוירופיזיולוגיים של ההיפוקמפוס. ניתן להשתמש בפרוסות מוח בהיפוקמפוס עבור מספר יישומים שונים, כולל הקלטות אלקטרופיזיולוגיות, מדידות מיקרוסקופיות קלות וכן מספר טכניקות ביולוגיות והיסטוכימיות מולקולריות. לכן, פרוסות מוח מייצגות מערכת מודל אידיאלית להערכת תפקודי חלבון, לחקור תהליכים פתופיזיולוגיים המעורבים בהפרעות נוירולוגיות כמו גם למטרות גילוי תרופות.
קיימות מספר דרכים שונות של הכנות פרוסה. ההכנות פרוסת המוח עם ויברטום לאפשר שימור טוב יותר של מבנה הרקמה ולהבטיח אספקת חמצן מספקת במהלך חיתוך, אשר מציגים יתרונות על פני השימוש המסורתי של מסוק רקמות. יתר על כן, מטוסי חיתוך שונים ניתן ליישם עבור תכשירים פרוסת המוח vibratome. כאן מסופק פרוטוקול מפורט להכנה מוצלחת של פרוסות היפוקמפוס אופקיות חתוכות ויברטום של מוחות עכברים. בניגוד להכנות אחרות לפרוסות, חתך אופקי מאפשר לשמור על הסיבים של נתיב הקלט ההיפוקמפוסי (נתיב מחורר) במצב שלם לחלוטין בתוך פרוסה, מה שמקל על חקירת אינטראקציות entorhinal-hippocampal. כאן, אנו מספקים פרוטוקול יסודי לניתוח, מיצוי, וקצץ אופקי חריף של המוח המורין, ולדון באתגרים ובמלכודות פוטנציאליות של טכניקה זו. לבסוף, נראה כמה דוגמאות לשימוש בפרוסות מוח ביישומים נוספים.

מאמר זה נועד לתאר פרוטוקול שיטתי כדי להשיג פרוסות מוח היפוקמפוס אופקי בעכברים. מטרת מתודולוגיה זו היא לשמר את השלמות של מסלולי סיבים בהיפוקמפוס, כגון הנתיב המחורר ודרכי הסיבים הטחובים להערכת תהליכים נוירולוגיים הקשורים לgyrus.

The hippocampus is a highly organized structure in the brain that is a part of the limbic system and is involved in memory formation and consolidation as ...

פרוטוקול זה מקל על הכנת פרוסות מוח אופקיות בהיפוקמפוס לשימוש ביישומים מדעיים שונים. טכניקה זו שומרת על שלמותם של כל מסלולי סיבי ההיפוקמפוס בתוך פרוסה אחת של חצי הכדור. פרוטוקול פרוסה זה מתאים באופן אידיאלי להערכת שינויים נוירולוגיים המתרחשים בפתולוגיות מוח המתפתחות ומתבטאות בפיתול המשונן.ההיבט החשוב ביותר של פרוטוקול זה הוא למצוא את האיזון בין ביצוע מהיר ככל האפשר לבין טיפול עדין ברקמת המוח. להכנת ליטר אחד של ACSF, מערבבים לאט את כל הכימיקלים המוצקים כפי שמצוין ב-800 מיליליטר מים תוך ערבוב מתמיד עם מוט ערבוב מגנטי לפני טפטוף איטי בכמויות המתאימות של מגנזיום גופרתי וסידן כלורי. לאחר מכן השתמש באוסמומטר לחץ אדים כדי לאמת את האוסמולריות בין 305 ל-315 מיליאוסמול ולבעבע ברציפות את תמיסת ה-ACSF בטמפרטורת החדר עם קרבוגן כדי להגדיר את ה-pH בין 7.3 ל-7.4.להכנת 250 מיליליטר תמיסת פרוסות עתירות סוכרוז, הוסיפו את התרכובות ל-25 מיליליטר של תמיסה פרוסה מראש כפי שמצוין בטבלה וודאו שהאוסמולריות היא בין 320 ל-325 מיליאוסמול. לאחר מכן מבעבעים את תמיסת הפרוסה העשירה בסוכרוז למשך 10 עד 15 דקות עם קרבוגן כדי לקבוע את ה-pH בין 7.3 ל-7.4 ולאחסן את תמיסת הפרוסה העשירה בסוכרוז למשך 20 עד 30 דקות במינוס 80 מעלות צלזיוס עד שהיא קפואה חלקית. כדי להכין סביבת עבודה לדיסקציה, מלאו תא התאוששות בתמיסת ACSF קרבוגן והניחו את החדר באמבט מים של 32 מעלות צלזיוס.הגדר את הוויברטום לתוכנית החיתוך המתאימה ומלא את המחזיק בקרח, הרכיב אותו על הוויברטום והצמד להב לזרוע הרטט. השתמש במרית כדי לרסק ולערבב את תמיסת פרוסת הסוכרוז הגבוהה הקפואה חלקית עד לקבלת רפש הטרוגני. לאחר מכן מבעבעים את התמיסה בקרבוגן ומשתמשים בתמיסה כדי להרטיב פיסת נייר סינון על גבי צלחת תרבית צוננת של 90 מילימטר ולמלא צלחת תרבית של 35 מילימטר על קרח.כדי לקצור את המוח, השתמש במספריים כדי לחתוך את הקרקפת של עכבר זכר בן שבועיים עד שישה שבועות ולפתוח את הקלווריה לאורך התפר הסגיטלי. השתמש במלקחיים מעוקלים כדי להסיר את הגולגולת עד שכל המוח כולל פקעות הריח נראה לעין והשתמש במרית כדי לגרוף בזהירות את רקמת המוח השלמה. הכניסו את המוח לתוך צלחת התרבית בקוטר 35 מילימטר והשתמשו בפיפטה פסטר מלאה בתמיסת פרוסות עתירת סוכרוז כדי להסיר בעדינות כל שיער או חלקיקי דם מהרקמה.השתמש במרית כדי להעביר את המוח הנקי על פיסת נייר הסינון הספוג והשתמש בלהב כדי לחתוך את המוח לאורך לשניים. הניחו את שתי ההמיספרות בצד המדיאלי הטרי שנחתך והשתמשו בלהב כדי לבצע חתך מקביל בחלק העליון הגבי של כל המיספרה כדי להסיר את האזור הגבי של כל פיסת מוח. הניחו את שתי ההמיספרות בצד הגבי הטרי שנחתך כשהחלק הגחוני של המוח פונה כלפי מעלה והניחו טיפת דבק-על על צלחת דגימה.השתמש בקצה פיפטה כדי לפזר את הדבק לאזור גדול כדי להכיל את שתי פיסות הרקמה וגע בפיסת רצועת נייר סינון בצד הגחון של חצי כדור אחד. השתמש ברצועת נייר סינון נוספת כדי לייבש בזהירות את הצד הגבי של המוח ולמקם את הצד הגבי של חצי הכדור כלפי מטה על הדבק על לוחית הדגימה. השתמש בשתי רצועות נייר סינון נוספות כדי למקם את חצי הכדור השני על הדבק כפי שהודגם זה עתה והנח את לוחית הדגימה בתא החיתוך.לאחר מכן מכסים במהירות אך בזהירות את הצלחת ברפש תמיסת פרוסות סוכרוז קר כקרח. כדי לרכוש חלקים מרקמת המוח, מקם את להב הוויברטום מול הצד המדיאלי של ההמיספרות והרם את שולחן הוויברטום כך שהלהב יהיה באותו גובה כמו הצדדים הגחוניים של ההמיספרות, הפונים כעת כלפי מעלה. השתמש בבקרת הרטט כדי להוריד את הלהב 600 מיקרון עוד יותר בכיוון הגב ולפרוס את הרקמה עד ששתי הפרוסות הראשונות מופרדות לחלוטין משתי ההמיספרות.לאחר קבלת שתי פרוסות הרקמה הראשונות, הפוך את כיוון החיתוך והורד את הלהב עוד 300 מיקרון לפני החיתוך שוב. כאשר ההיפוקמפוס נראה לעין, השתמשו בפיפטת פסטר מפלסטיק מורחבת כדי לאסוף ולהעביר את הפרוסות לתוך תא ההתאוששות באמבט המים. השאירו את הפרוסות בתא ההתאוששות המלא ב-ACSF למשך שעה, ולאחר מכן הניחו את תא ההתאוששות בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות לפני ביצוע הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של דגימות הרקמה.כאן ניתן לצפות בהקלטות פוטנציאליות פוסט-סינפטיות שליליות וחיוביות מייצגות מפרוסות נמוכות ואיכותיות בהתאמה. עקבות הדוגמה השלילית מציגות משרעת מטח סיבים גדולה עם דה-פולריזציה של הסיבים העצביים המגורים שהיא אפילו גבוהה יותר ממשרעת ה-fEPSP בפועל, בעוד שהעקבה האיכותית מדגימה יחס מטח סיבים קטן ל-fEPSP ומשרעת fEPSP גבוהה. ניתן לנתח את הכדאיות של פרוסת מוח גם על ידי התוויית שיפועי פוטנציאל פוסט-סינפטיים מעוררים בשדה לעומת משרעות מטח הסיבים.ניתן להשיג עקומות קלט/פלט המשמשות בדרך כלל לקביעת איכות הפרוסה על ידי החלת גירוי זרם הולך וגדל על פרוסת המוח וניטור תגובות ה-fEPSP הבאות. בשל תכונות ההולכה הלא אופטימליות של רקמת מוח שהשתמרה בצורה גרועה, פרוסות מוח באיכות נמוכה מדגימות עקומות קלט/פלט מופחתות. לפרוסות מוח בנות קיימא יש קווי בסיס יציבים של העברה סינפטית בעוד שפרוסות מוח עם קו בסיס לא יציב לא יכולות לשמש לפרוטוקולי התניה נוספים לחקר הפלסטיות הסינפטית של מעגלי המוח.הקלטות בסיס של fEPSP יכולות להיות שימושיות גם לניטור השפעות תרופות על ההעברה הסינפטית עצמה. נוסף על כך, ניתן להשתמש בפרוסות המוח בשילוב עם אינדיקטור סידן כדי לרכוש הקלטות הדמיה פלואורסצנטיות ולחקור זרמי סידן בתנאי פרוסה או טיפולים שונים. ודא שדיסקציה מוחית מתבצעת תוך לא יותר מ-1.5 דקות מההקרבה וזה עדיין מבטיח שרקמת המוח תהיה רק לזמן קצר ללא קירור ואספקת חמצן.לפרוסות מוח בהיפוקמפוס יש יישומים רבים ושונים, החל מטכניקות ביולוגיות מולקולריות ועד אלקטרופיזיולוגיה. הליך זה מקל על חקירות אינטנסיביות של אנטומיה ותהליכים נוירולוגיים בהיפוקמפוס.

horizontal-hippocampal-slices-of-the-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מאמר זה מתאר פרוצדורות להכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים סינפטיים הקשורים להזדקנות המוח הקשורים לגיל מחלות ניווניות כגון מחלת אלצהיימר.

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

סרטון זה מדגים פרוטוקול מפורט להכנת פרוסות מוח אופקיות בהיפוקמפוס מעכברים, תוך התמקדות בשמירה על שלמות מסלולי סיבי ההיפוקמפוס. התהליך כולל חיתוך ואבטחה קפדניים של המוח, שימוש בויברטומה לחיתוך, ושמירה על תנאי רקמה אופטימליים עם נוזל קרבוגני, וכתוצאה מכך פרוסות מוח בהיפוקמפוס מוכנות לניסויים נוספים.

השגת פרוסות מוח אופקיות של עכבר היפוקמפוס

הסרטון מדגים הליך לרישום פוטנציאל השדה המקומי (LFP) בפרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינלי של עכבר. גירוי חשמלי מסופק ברדיאטום שכבה CA3 של ההיפוקמפוס, אשר גורם לשינויים בפוטנציאל הפוסט-סינפטי בפירמידלה של שכבת CA1. השינוי המשולב בפוטנציאל הממברנה של נוירוני CA1, המכונה פוטנציאל השדה המקומי, נרשם.

רישום פוטנציאל שדה מקומי בפרוסות קליפת המוח של ההיפוקמפוס-אנטורינלי של עכבר

מאמר זה מציג מתודולוגיה שלמה להכין...

הכנה משופרת ושימור פרוסות עכבר היפוקמפוס להקלטה יציבה מאוד ושחזור של הגברה לטווח ארוך

מאמר וידאו זה מתאר הליכים ניסיוניים לחקר פלסטיות לטווח ארוך ותהליכים אסוציאטיביים שלה כגון תיוג סינפטי, לכידה ותיוג צולב בנוירונים הפירמידליים CA1 באמצעות פרוסות היפוקמפוס חריפות ממכרסמים.

חקירה של Synaptic תיוג / לכידה וצלב-לכידה באמצעות חריפות בהיפוקמפוס פרוסות ממכרסמים

נוהל לאיתור ואבחון מדויק סינפסות בהיפוקמפוס פרוסות באמצעות immunofluorescence הוא המתוארים במאמר זה.

הערכה של צפיפות סינפסה פרוסות המוח מכרסמים בהיפוקמפוס

השתמשנו והקליט אלקטרודות של היפוקמאל פרוסות המוח האורך ו longitudinally הקלטה ואלקטרודות גירוי ההיפוקמפוס הראש ב vivo לעורר את הפוטנציאל המיטיות בפוטנציאלים והפגינו הפלסטיות הסינפטית ארוכת הטווח לאורך CA1 האורך האורכי.

חקירת הפלסטיות הסינפטית לטווח ארוך בהיפוקמפוס הCA1 על ידי אלקטרופיזיולוגיה הקלטת שדה

זהו פרוטוקול להכנת פרוסה חריפה מהיפוקמפוס עכבר מבוגר ומזדקן המנצל את התסיסה הקרדיאלית וחיתוך פרוסה עם NMDG-aCSF קר כקרח כדי להפחית את הנזק היפוקסי לרקמות. הפרוסות המתוברות נשארות בריאות במשך שעות רבות, ומתאימים לטלאים ארוכי טווח ולהקלטות שדה.

מזעור היפוקסיה בפרוסות היפוקמפוס מעכברים מבוגרים ומזדקנים

פרוטוקול זה מתאר את הכנת פרוסות קליפת המוח ההיפוקמפוס-סנטורינאלית האופקית (HEC) מעכברים המציגים פעילות אדווה ספונטנית של גל חד. פרוסות מודגרות בתא החזקת ממשק פשוט והקלטות מבוצעות בתנאים שקועים עם נוזל שדרתי מלאכותי זורם במהירות כדי לקדם חמצון רקמות ואת הופעתה הספונטנית של פעילות ברמת הרשת.

חריף המוח עכבר חותכת לחקור פעילות רשת היפוקמפוס ספונטנית

אנו מציגים פרוטוקול להכנת פרוסות חריפות מההיפוקמפוס הגבי-ביניים של עכברים. אנו משווים הכנה רוחבית זו עם חתך קורנל במונחים של איכות הקלטות ושמירה על תכונות מורפולוגיות של נוירונים מוקלטים.

הכנת פרוסות חריפות מהיפוקמפוס הגבי להקלטה של תא שלם ושחזור עצבי בGyrus דנטאטה של עכברים בוגרים

למד הכנת פרוסות היפוקמפוס אופקיות ממוח עכבר לשימור מסלולי סיבים נוירונליים. הפרוטוקול מאפשר הקלטות אלקטרופיזיולוגיות וחקר פלסטיות סינפטית בדנטט גירוס.

פרוסות היפוקמפוס אופקיות של מוח העכבר

גלה סרטונים נוספים