אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

מודל זה יכול לשמש לחקר מנגנונים תאיים המערבים את הפתוגנזה של אובאיטיס אחורית אנושית בתיווך מערכת החיסון. המשמעות של טכניקה זו מתרחבת למחקר תרגומי של אובאיטיס אנושית בניטור יעילות תרופות חדשות ובמתן תובנה מכניסטית להתקדמות מחלות כימיות. היתרון העיקרי בשימוש במודל זה הוא האמינות של השראת המחלה ושימוש בטכניקות אנדוסקופיות לא פולשניות המאפשרות לנו לעקוב אחר התקדמות המחלה.

כאן אנו מתארים כיצד לגרום למחלה ולהעריך את הפתולוגיה באמצעות מספר קריאות כדי להכין IRBP 1-20 להשלים את האדג'ובנט של פרוינד או CFA, להשעות כמות מחושבת של הפפטיד בנפח מינימלי של 100% DMSO. כאשר האבקה התמוססה לחלוטין, הוסיפו כמויות קטנות של PBS לצינור עד שתגיעו לנפח המחושב הסופי של PBS בהתאם למספר העכברים שיש להזריק באמצעות תסיסה עדינה כדי לערבב את התמיסה. לאחר הכנת האדג'ובנט המלא של פרוינד, פיפטה בעדינות ובתדירות גבוהה את התמיסה ליצירת ויסקוס ותחליב מפוזר באופן שווה תוך הוספת תמיסת הפפטיד DMSO PBS ביחס של אחד לאחד לתרחיף.

כדי לאוורר את התמיסות, השתמש פיפטה 1000 מיקרוליטר להגדיר 700 מיקרוליטר כדי פיפטה שוב ושוב את התמיסה עד לקבלת תחליב סמיך וקרמי. לפני הזרקת מתלה הפפטידים, הניחו כל עכבר להזרקה לכלוב נפרד והשתמשו במזרק של מיליליטר אחד המצויד במחט 23 מד כדי לספק 1.5 מיקרוגרם של רעלן Bordetella pertussis ב-100 מיקרוליטר של RPMI 1640 בינוני בתוספת נסיוב עכבר 1% לכל חיה. כאשר תמיסת רעלן שעלת מוזרקת, העכבר צריך להיות מוחזק במצב כמו קשקוש ואת העור צובט כדי ליצור מבנה דמוי אוהל על העורף.

השחילו את המחט לרווח שבין האצבע לאגודל, והזריקו 200 מיקרוליטר של תחליב IRBP לעור האוהל, תוך שמירה על לחץ לאחר ההזרקה וסיבוב ראש המחט כדי לסגור את העור לפני הנסיגה. כדי להבקיע את המחלה הקלינית, ביום 21 לאחר ההזרקה, לאשר חוסר תגובה לרפלקס הכותרת בעכבר המוזרק פפטיד מורדם ולרסן את החיה בקשקוש. יש למרוח באופן מקומי 1% טרופיקמיד ו-2% פנילפרין על הקרנית של כל עין מיד לאחר ההזרקה.

כאשר האישונים התרחבו במלואם, הניחו את העכבר על במת מיקרוסקופ ייעודי. מקמו את המיקרוסקופ לגישה מלאה לרשתית. יש לכוונן את פיסת העין לאורך כל תהליך ההדמיה לפי הצורך כדי לראות את הדיסק האופטי והרשתית ולקבל תמונות של כל אזור הרשתית, תוך התאמה וכיסוי של כל פינות הפריפריה.

כדי למדוד דליפת כלי דם, יש לתת 100 מיקרוליטר של 2% פלואורסצאין תת עורית בחלק האחורי של הצוואר ולמקם מחדש את העכבר כך שהרשתית תהיה במרכז התמונה החיה. הגדר את הפונדוסקופ למסנן עירור אור כחול ב 465 עד 490 ננומטר לפני קבלת תמונה של כל אחד מהם ב 1.5 ושבע דקות לאחר הזרקת פלורסנט. לאחר שכל התמונות נרכשו, יש לספק הזרקת אנטי טשטוש להתאוששות ולהניח את העכבר בכלוב על מחצלת שחוממה מראש עם גישה לתזונה רטובה עם ניטור עד שהעכבר חוזר להכרה.

לניקוד המחלה הקלינית של התמונות, בססו את ההערכה הקלינית על חומרת דלקת הדיסק הראייתי, איזוק כלי הדם ברשתית, חדירת רקמת הרשתית ונזק מבני. ציון כל אחד מהפרמטרים הללו בסולם מאחד עד חמישה. הסך הכולל מייצג את המחלה הקלינית לכל העין עם ציון מקסימלי של 20 שניתן להשיג לכל עין.

לאחר הדמיית פונדוס לנקודת הסיום הקלינית הסופית של המחקר, יש להרדים את העכבר. לצורך ניתוח היסטולוגי, יש להפריד בין העפעפיים לגישה לעין כולה, ולאחר מכן להניח מלקחיים מעוקלים מאחורי הגלובוס כדי לתפוס את רקמת החיבור המסלולית ואת עצב הראייה ולחנך את העין. הניחו את העין המוחדרת במיליליטר אחד עד חמישה מיליליטר של 4% גלוטראלדהיד למשך 15 דקות לפחות לפני העברת האיבר לאחד עד חמישה מיליליטר של 10% פורמלדהיד למשך 24 שעות לפחות.

לאחר צביעת רקמות היסטולוגית, על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, הוקצו ציונים בסולם של אפס עד שלוש בהתבסס על רמת חדירת תאי מערכת החיסון ומידת הנזק לרשתית. שינויים פונדוסקופיים מסווגים במהלך התקדמות המחלה כשינויים דלקתיים הכוללים רקמת רשתית ודלקת בכלי דם ודיסק אופטי ונזק מבני ברשתית בנוסף לשינויים היסטולוגיים המבוססים על חדירת תאי מערכת החיסון וליקויים מבניים. שינויים קליניים והיסטופתולוגיים אלה יכולים להיות מדורגים ומדורגים כדי להעריך את התקדמות המחלה ולהעריך את יעילות ההתערבות הטיפולית.

דליפת כלי דם היא גם תכונה פתולוגית של המודל ושל uveitis האדם. כפי שמודגם בניתוח זה, ניתן להשתמש בפלואורסצאין כדי לדמיין דליפת כלי דם כקריאה נוספת של מודל זה. חיוני לחוקרים לוודא שהאמולסיה מוכנה כראוי ללא סימני הפרדה בין התמיסות.

הם צריכים להיות מעורבבים ביסודיות המוצר הסופי צריך להיות חלק במרקם. הליך זה יכול להיות משולב עם שיטות אחרות של מתן תרופות ועם עבור ציטומטריה עבור פנוטיפ חודר אוכלוסיות תאי החיסון ברשתית.