Name: הכנת פיגומים בכליות Decellularized בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: למדו שיטה להכנת פיגומים מכליות מופרדות מתאים בחולדות. הפרוטוקול מסיר גרעינים תוך שמירה על מבנה המטריצה החוץ-תאית, ומציע יישומים בהנדסת רקמות וברפואת השתלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק מכון מחקר ביו-רפואי מבית החולים האוניברסיטאי הלאומי פוסאן.

מחקר זה אושר על ידי הנהלת האוניברסיטה הלאומית לרפואה של פוסאן ונערך בהתאם להנחיות אתיות לשימוש ולטיפול בבעלי חיים. (תעודה מס' 2017-119). לפני כל מחקר בבעלי חיים, יש לקבל אישור מוסדי. הערה: כל המכשירים/ציוד/ציוד/ריאגנטים הכירורגיים וההרדמה המומלצים להצגה כירורגית מוצלחת והדמיה של איברי בטן מפורטים בטבלה 1.
1. נהלי הכנה לקצירת כליות חולדה
<ol><li>כהכנה לניתוח, מניחים חולדות ספראג-דוולי בנות 8 שבועות (במשקל 200-250 גרם) על כרית חימום. מניחים בדיקה מדחום רקטלי בפי הטבעת כדי לפקח על טמפרטורת הליבה.</li>
	<li>יש למרדים את החולדה עם תערובת של 5% של גז isoflurane (אינדוקציה: 5%, תחזוקה: 3%).</li>
	<li>כדי להתחיל את הניתוח, למקם את החולדה בעמדה על-חושית לאחר ניהול הרדמה. הר את ארבעת הגפיים של החולדה על שולחן הניתוחים עם קלטת.</li>
	<li>לגלח ולנקות את הבטן של החולדה התורם עם סבון germicidal. החל 2% betadine לפחות 1-2 דקות, ולנגב עם פתרון 70% אתנול. חזור על רצף זה שלוש פעמים.</li>
	<li>כסה את השדה האופרטיבי עם וילון סטרילי.</li>
	<li>בצע חתך בטן אנכי ולחשוף את הכליה השמאלית, שופך, בטן כאבי העורקים, ו vena קאווה נחות.</li>
	<li>דמיינו ונתחו את הכליה השמאלית, השופכן, אתאבי הבטן ואת הווריד הנחות רגע לפני חיתוך הפדיקל.</li>
</ol>2. זלוף טרנסקרדיאלי
<ol><li>לפני הניתוח, הכינו את פתרון הזלוף.<ol>
<li>הפוך 50 מ"ל של פתרון זלוף לכל חולדה.</li>
		<li>יש לערבב 1x PBS עם הפרין 10 U/mL בקירוב (בקבוקון 1 25 קילוואט-ואט יעשה 2.5 ליטר של PBS+Hep).</li>
		<li>לערבב כמויות שוות של 8% paraformaldehyde עם 1x PBS כדי להפוך את פתרון 4% PFA/1xPBS. הערה: 8% PFA המיוצר במים יכול להיות מאוחסן ב 4 °C (70 °F) עד 2 חודשים. עם זאת, 4% PFA מדולל PBS הוא יציב רק במשך שבוע אחד ב 4 מעלות צלזיוס. הפוך את הדילול לרענן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מאריכים את החתך הבטן האנכי בגולגולת. הקפד למשוך את המספריים מן האיברים בעת חיתוך, כדי למנוע פגיעה באיברים הפנימיים.</li>
	<li>המשך את החתך דרך כלוב הצלעות, ולאחר מכן לחתוך דרך הסרעפת על ידי הרמת עצם החזה.</li>
	<li>הצמד את דש העור הרופף מהדרך, ושחרר את הלב על ידי קריעת כל רקמת חיבור עם המלקחיים. התראה: אין להשתמש במספריים כדי לשחרר את הלב והדבר עלול לגרום לדימום לא רצוי.</li>
	<li>פתח את קו מלוחים אגירת פוספט (PBS) ולהבטיח כי הקו זורם לפני הנחת המחט לתוך החדר השמאלי. החזק את הלב בעדינות עם מלקחיים קהים, ולהשתמש hemostat כדי לשלוט על המחט. המחט צריכה להיות מוכנסת לא יותר מ 1/4 אינץ '. הערה: הכנסה הגדולה מ- 1/4 אינץ' עלולה לגרום לניקוב לצד השני של הרקמה.</li>
	<li>תוך תמיכה בלב עם המחט והמוסטט, לאתר את האטריום הנכון לצלוח דרכו עם מספריים iridectomy. הניחו את ההמוסטט על גופו של החולדה, וודאו שהמחט עדיין ממוקמת בתוך הלב. הערה: אם החתך מספיק, צריך להיות דם בחלל הגוף כמו הלחץ של PBS זורם לתוך החולדה הוא הקלה.</li>
	<li>בזהירות לבטל את הצמדת הרגליים הקדמיות ואת דש העור.</li>
	<li>המשך perfusing PBS במשך 4 דקות או יותר אם יש עדיין דם גלוי בכליות ובכבד.</li>
</ol>3. קצירת כליות ודקלולריזציה
<ol><li>לקצור את הכליה השמאלית עם כאבי העורקים הבטן ורידים נחותים.</li>
	<li>ליגייט השופרן, פי העורקים החזה, vena קאווה מעולה, וענפים שלאבי העורקים הבטן.</li>
	<li>שמור על האיבר hydrated PBS של Dulbecco (DPBS) בצלחת פטרי 10 ס"מ.</li>
	<li>ניתן לתמצת אתאבי הבטן ואת הווריד הנבוב הנחות עם קטטר 23 מד. כדי להסיר שאריות דם, לחבר את הצינורית עם משאבה peristaltic, ולשטוף עם DPBS (500 מ"ל) ו 16 U / mL הפרין במשך 90 דקות בקצב של 5 סל"ד ב 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>כדי decellularize את הכליה, לחלחל הכליה עם 1% טריטון X-100 (1 L) עבור 3 שעות ולאחר מכן עם 0.75% נתרן דודקיל סולפט (SDS) פתרון (2 L) עבור 6 שעות בלחץ מתמיד של 40 מ"מ היג. הערה: הכליה תהפוך שקופה לאחר 8 שעות.</li>
	<li>כדי להסיר SDS שיורית, לעיין במדגם עם 1% פניצילין במים מזוקקים (6 L) במשך 18 שעות (לילה) ולאחר מכן עם DPBS סטרילי (500 מ"ל) ו 16 U / mL הפרין במשך 90 דקות.</li>
</ol>

<ol><li>Kawai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+report%3A+HLA-mismatched+renal+transplantation+without+maintenance+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Brief report: HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression.</a> New England Journal of Medicine. 358 (4), 353-361 (2008).</li>
<li>Rana, D., Zreiqat, H., Benkirane-Jessel, N., Ramakrishna, S., Ramalingam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+decellularized+scaffolds+for+stem+cell-driven+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Development of decellularized scaffolds for stem cell-driven tissue engineering.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (4), 942-965 (2017).</li>
<li>Fu, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+recellularization+technologies+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Decellularization and recellularization technologies in tissue engineering.</a> Cell Transplantation. 23 (4-5), 621-630 (2014).</li>
<li>Hopkinson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+amniotic+membrane+%28AM%29+denuding+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of amniotic membrane (AM) denuding for tissue engineering.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 14 (4), 371-381 (2008).</li>
<li>Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+decellularization+of+intact+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Method for the decellularization of intact rat liver.</a> Organogenesis. 6 (2), 134-136 (2010).</li>
<li>Petersen, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+lungs+for+in+vivo+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered lungs for in vivo implantation.</a> Science. 329 (5991), 538-541 (2010).</li>
<li>Fernandez-Perez, J., Ahearne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+decellularization+methods+on+extracellular+matrix+derived+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of decellularization methods on extracellular matrix derived hydrogels.</a> Scientific Reports. 9 (1), 14933(2019).</li>
<li>Naik, A., Griffin, M., Szarko, M., Butler, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+the+decellularization+process+of+an+upper+limb+skeletal+muscle%3B+implications+for+muscle+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Optimizing the decellularization process of an upper limb skeletal muscle; implications for muscle tissue engineering.</a> Artificial Organs. 44 (2), 178-183 (2020).</li>
<li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li>
<li>Mason, C., Dunnill, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+definition+of+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">A brief definition of regenerative medicine.</a> Regenerative Medicine. 3 (1), 1-5 (2008).</li>
<li>Guyette, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+decellularization+of+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Perfusion decellularization of whole organs.</a> Nature Protocols. 9 (6), 1451-1468 (2014).</li>
<li>Song, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+experimental+orthotopic+transplantation+of+a+bioengineered+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regeneration and experimental orthotopic transplantation of a bioengineered kidney.</a> Nature Medicine. 19 (5), 646-651 (2013).</li>
</ol>

המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

פרוטוקולים שונים שימשו decellularization של איברים ורקמות אחרות. פרוטוקול decellularization האופטימלי צריך לשמר את הארכיטקטורה התלת מימדית של המטריצה החוץ תאית (ECM). באופן כללי, פרוטוקולים כאלה מורכבים lysing קרום התא על ידי עיבוד פיזי או פתרונות יוניים, ניתוק הציטופלסמה והגרעין מן ECM על ידי עיבוד אנזימטי או חומרי ניקוי, ולאחר מכן הסרת פסולת הסלולר מן הרקמה3. תהליכים פיזיקליים כוללים גירוד, עצבנות פתרון, שיפוע לחץ, הצמדה הקפאה, electroporation קבוע לאthermal, ונוזלים סופר קריטיים<sup class="xref...

טכניקות תרבית תאים מיושמות עבור התחדשות של רקמות ואיברים תפקודיים להחליף איברים חולים או פגומים. השתלת איברים אלוגנית היא כיום הטיפול הנפוץ ביותר לנזק בלתי הפיך לאיברים; עם זאת, גישה זו דורשת שימוש בדיכוי המערכת החיסונית כדי למנוע דחייה של האיבר המושתל. יתר על כן, למרות ההתקדמות באימונולוגיה של ההשתלה, 20% ממקבלי ההשתלה עלולים לחוות דחייה חריפה בתוך 5 שנים, ובתוך 10 שנים לאחר ההשתלה, 40% מהמטופלים עלולים לאבד את השתל המושתל שלהם או למות1.
ההתקדמות בטכנולוגיות להנדסת רקמות הניבה פרדיגמה חדשה להשתלת איברים חדשים ללא דחייה חיסונית באמצעות תאי גזע מובחנים. לאחר בידול תאי גזע, יש צורך בפיגום, הנקרא מטריצה חוץ-תאית סינתטית, כדי להקל על יצירת איברים תלת מימדיים ולאפשר לרקמה החדשה לשגשג בתוך המטופל. פיגומים מאיברים מקומיים decellularized יש יתרונות, כולל סביבה יעילה יותר להקמת תאים ושיפור התפשטות תאי גזע, אם כי מנגנונים אלה לא הובהרו במלואם2. בפרט, הכליה היא איבר מתאים לייצור פיגומים כי יש לה זרימת דם בשפע נישה להקמת תאי גזע. בנוסף, בגלל המבנה המורכב של הכליה, קשה לחדש באופן מלאכותי כליות להשתלת איברים.
בדו"ח זה, אנו מציגים שיטה של פיתוח פיגומים vascularized באמצעות איברים decellularized במודל חולדה כדי להקל על מחקרים עתידיים בבעלי חיים למטרות הנדסת רקמות.

<table><tbody><tr><td>מזרק 1 סמ"ק (הזרקת בדיקות ופתרונות רכב</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>305217</td><td></td></tr><tr><td>10-0 אתילון לאנסטומוזה של כלי הדם</td><td>Ethicon</td><td>9032G</td><td></td></tr><tr><td>25 מד אינץ' מחט מדריך (לצנתרים של כלי הדם)</td><td>Becton Dickinson</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>3-0 חולדת סגירת חתך PDS</td><td>Ethicon</td><td>Z316H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 חולדת</td> <td>סגירת חתך פרולןEthicon</td><td>8832H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 גישה/קשירה לכלי דם סליל משי בחולדה</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 110</td><td></td></tr><tr><td>4-0 PDS עכבר סגירת חתך</td><td>Ethicon</td><td>Z773D</td><td></td></tr><tr><td>4-0 עכבר סגירת חתך פרולן</td><td>Ethicon</td><td>8831H</td><td></td></tr><tr><td>5-0 גישה/קשירה לכלי דם סליל משי בעכבר</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 106</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים לחיתוך פאשיה/רקמת חיבור</td><td>Fine Science</td><td>Tools 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Kelly Hemostat לחולדות: מהדק שריר כדי למזער דימום בעת חיתוך</td><td>Fine Science</td><td>Tools 13018-14</td><td></td></tr><tr><td>צינורות פוליאתלין 50, צינורות קטטר 100 רגל</td><td>Braintree Scientific.023</td> <td>אינץ' וזמנים; .038 אינץ'</td><td></td></tr><tr><td>Schwartz microserrefine מהדקי כלי דם</td><td>Fine Science</td><td>Tools 18052-01 (ישר)</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>18052-03 (מעוקל)</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים לחיתוך עור</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-12</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-Tubingen מספריים אביביים לכריתת עורקים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15003-08</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנת פיגומים בכליות decellularized בחולדות

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

הנדסת רקמות היא משמעת חדשנית בביו-רפואה. טכניקות תרבות התא ניתן ליישם עבור התחדשות של רקמות ואיברים תפקודיים להחליף איברים חולים או פגומים. פיגומים נדרשים כדי להקל על הדור של איברים תלת מימדיים או רקמות באמצעות תאי גזע מובחנים vivo. בדו"ח זה, אנו מתארים שיטה חדשנית לפיתוח פיגומים וסקולריים באמצעות כליות חולדה decellularized. במחקר זה נעשה שימוש בחולדות ספראג-דולי בנות שמונה שבועות, והפרין הוזרק ללב כדי להקל על הזרימה לכלי הכליה, מה שאיפשר להפרין לחלחל לכלי הכליה. חלל הבטן נפתח והכליה השמאלית נאספה. הכליות שנאספו היו perfused במשך 9 שעות באמצעות חומרי ניקוי, כגון טריטון X-100 ונתרן דודקיל סולפט, כדי decellularize את הרקמה. פיגומים בכליות Decellularized נשטפו בעדינות עם 1% פניצילין / סטרפטומיצין והפרין כדי להסיר פסולת הסלולר ושאריות כימיות. השתלת תאי גזע עם פיגומי כלי דם decellularized צפוי להקל על הדור של איברים חדשים. לכן, פיגומים vascularized עשוי לספק בסיס להנדסת רקמות של שתלי איברים בעתיד.

המורפולוגיה הגולמית של כליות חולדה הייתה אדומה כהה (איור 1A). לאחר דקלולריזציה, הכליה הפכה חיוורת ושקוף (איור 1D). שאריות DNA גנומי הוערך עם ערכה מסחרית על פי הוראות היצרן, בפיגומים כליות decellularized לעומת זה בכליות מקומיות (שליטה). ניתוח כמותי אישר כי DNA גנומי רקמה כמעט בוטל לאחר decellularization. מ-14 מקרים, תכולת הדנ"א הממוצעת הייתה 115.05 ננוגרם/μL לבקרה ו-1.96 ננוגרם/μL לפיגום הנקוב. בסך הכל הוסרו 98.3% מהדנ"א (איור 2),אם ...

פרוטוקול זה מציג שיטה לפיתוח פיגום באמצעות כליות חולדה decellularized. הפרוטוקול כולל תהליכי דקלולריזציה ורסקולריזציה כדי לאשר זמינות ביולוגית. Decellularization מבוצעת באמצעות טריטון X-100 ונתרן דודקיל סולפט.

הכנת פיגומים בכליות Decellularized בחולדות

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

פרוטוקול זה מאפשר לפתח פיגומים וסקולריים באמצעות כליות במודל חולדה. הכליה היא האיבר המתאים ביותר לפיגומים של תאי גזע מובחנים. זהו פרוטוקול מוצלח מאוד עבור decellularization של הכליה.זה מסיר ביעילות את הגרעינים עם הרס מינימלי של מבנה אולטרה ECM. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת על רפואת השתלה והנדסת רקמות. הדגמת ההליך יהיה קים ג'ו היונג, MD / PhD פרופסור לכירורגיה פלסטית מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, הניחו את עכברוש ספראג דולי בן השמונה שבועות על כרית חימום, והניחו בדיקת מדחום רקטלי בפי הטבעת כדי לפקח על טמפרטורת הליבה. לאחר הרדמה החולדה, מניחים אותה בתנוחה על-חושית, ומאבטחים את ארבעת הגפיים לשולחן עם סרט הדבקה. לגלח ולנקות את הבטן עם סבון germicidal.החל 2%Betadine במשך דקה עד שתי דקות לפחות, ולאחר מכן לנגב אותו עם פתרון 70%אתנול. חזור על רצף זה שלוש פעמים. כסה את השדה האופרטיבי עם וילון סטרילי ופנסטי.בצע חתך אנכי בבטן, ולחשוף את הכליה השמאלית, שופך, בטן כאבי העורקים, ו vena קאווה נחות. לנתח את הרקמה ממש לפני חיתוך הפדיקל. הכן 50 מיליליטר של פתרון זלוף לכל חולדה על ידי ערבוב PBS עם כ 10 יחידות לכל הפרין מיליליטר.ערבב כמויות שוות של 8%PFA עם PBS כדי להפוך את פתרון 4%PFA. להאריך את החתך הבטן אנכית גולגולתית, הקפד למשוך את המספריים מן האיברים בעת חיתוך, כדי למנוע נזק. המשך את החתך דרך כלוב הצלעות, ולאחר מכן לחתוך דרך הסרעפת על ידי הרמת עצם החזה.לסגת דש רופף של העור מהדרך עם מהדק אליס, ולשחרר את הלב על ידי קריעת כל רקמת חיבור עם מלקחיים. פתח את קו PBS, ולהבטיח כי הוא זורם לפני הנחת המחט לתוך החדר השמאלי. החזק את הלב בעדינות עם מלקחיים קהים, ולהשתמש hemostat כדי לשלוט על המחט.יש להכניס את המחט לא יותר מרבע אינץ'. תוך תמיכה בלב עם המחט והמוסטט, לאתר את האטריום הנכון, ולצלוח דרכו עם מספריים iridectomy. הניחו את ההמוסטט על גופו של החולדה, וודאו שהמחט עדיין ממוקמת בתוך הלב.המשך perfusing PBS במשך ארבע דקות או יותר אם יש עדיין דם גלוי בכליות ובכבד. לקצור את הכליה השמאלית עם כאבי העורקים הבטן ורידים נחותים. ליגייט השופרן, פי העורקים החזה, vena קאווה מעולה, וענפים שלאבי העורקים הבטן.שמור על האיבר hydrated ב DPBS בצלחת פטרי 10 ס"מ. ניתן ללטף אתאבי הבטן ואת הווריד הנבוב הנחות עם קטטר 23-מד. כדי להסיר שאריות דם, לחבר את הצינורית עם משאבה peristaltic, ולשטוף את האיבר עם 500 מיליליטר של DPBS ו 16 יחידות לכל הפרין מיליליטר במשך 90 דקות בחמישה סל"ד ו 37 מעלות צלזיוס.כדי decellularize הכליה, לחלחל אותו עם 1%טריטון X-100 במשך שלוש שעות ולאחר מכן עם 0.75% פתרון SDS במשך שש שעות בלחץ מתמיד של 40 מיליליטר של כספית. כדי להסיר SDS שיורית, לחלחל המדגם עם 1%פניצילין במים מזוקקים במשך 18 שעות ולאחר מכן עם DPBS סטרילי 16 יחידות לכל הפרין מיליליטר במשך 90 דקות. המורפולוגיה הגסה של כליות חולדה הייתה אדומה כהה.לאחר דקלולריזציה, הכליה הפכה חיוורת ושקוף. שאריות DNA גנומי היה לכמת פיגומים כליות decellularized לעומת זה בכליות יליד, המאשר כי DNA גנומי רקמה כמעט בוטלה לאחר decellularization. מ-14 מקרים, תכולת הדנ"א הממוצעת הייתה 115.05 ננוגרם למיקרוליטר לבקרה ו-1.96 ננוגרם למיקרוליטר לפיגום decellularized.בסך הכל, 98.3% מהדנ"א הוסר. המבנה התלת מימדי נשמר, וגלומרולי תאי השתמר בפרנצ'ימה הקורטיקלית. בעת החדרת המחט לתוך החדר השמאלי, זה צריך להיות מוכנס לא יותר מרבע אינץ '.כל הכנסה נוספת עלולה לצאת מהצד השני. יש לנו ביטחון כי טכניקה זו תפתח פרוספקט חדש בתחום הנדסת רקמות.

preparation-of-decellularized-kidney-scaffolds-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר את ההכנה של כליה של חולדה שעברה דה-צלולריזציה. פיגום כלי הדם האצלולרי המתקבל יכול לשמש פלטפורמה מבטיחה להנדסת רקמות של שתלי איברים.

הכנת כליה של חולדה דה-צלולרית: הליך ליצירת פיגום אצלולרי של איברים שלמים מכליות חולדה שנקטפו

הטכניקות המוצגות לקצירת כבד, קנולציה וזלוף באמצעות המכשיר הקנייני שלנו מאפשרות מערכי זלוף מתוחכמים לשיפור ניסויי דה-סלולריזציה ורה-סלולריזציה בכבד של חולדות.

נוהל Decellularization של כבדי עכברוש בהתקן זלוף נדנוד לחץ

פרוטוקול זה מתאר דה-סלולריזציה של כליות חולדות Sprague Dawley על ידי זלוף קדמי של חומרי ניקוי דרך כלי הדם, ויוצר מטריצות חוץ-תאיות של כליות המשמשות כתבניות לאכלוס מחדש עם תאי אפיתל כליה אנושיים. רסלולריזציה ושימוש בבדיקת זלוף רזזורין לניטור הצמיחה מבוצעים בתוך ביו-ריאקטורים זלוף שתוכננו במיוחד.

Repopulation תאי אפיתל והכנה של מכרסמים תאיים מטריקס פיגומים לפיתוח רקמות כליה

רקמות מהונדסים בונה כליות לספק פתרון מצוקת איברים, השפעות מזיקות של דיאליזה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מיקרו לנתח הכליות מאתר עבור בידוד של מקטעי מדולרי-cortico. מקטעים אלה מושתלים לתוך המבנים לגרדום ללא הסלולר, ויוצרים organoids כליות.

Microdissection של מקטעי רקמת הכליה העיקרי, התאגדות עם טכנולוגיית הרומן לבנות בפיגומים-חופשית

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לבדות של הכליה קורטקס חוץ-תאית מטריקס-derived הידרוג כדי לשמור על הכליה יליד מטריצה חוץ-תאית (ECM) הרכב הביוכימי מבניים. תהליך ייצור ויישומיה מתוארים. לבסוף, נדון פרספקטיבה על שימוש זה הידרוג לתמיכה ספציפית כליות הסלולר ורקמות רגנרציה ומחזור בביו-הנדסה.

בדיית כליות קורטקס חוץ-תאית מטריקס-Derived הידרוג

פרוטוקול זה מתאר שיטה ליצירת רקמות ריאה מהונדסות בקנה מידה קטן הניתנות לשחזור, על-ידי אכלוס מחדש של פרוסות ריאה שעברו דה-תאיזציה מדויקת עם תאי אפיתל מסוג 2, פיברובלסטים ותאי אנדותל.

רקמות ריאה מהונדסות שהוכנו מפרוסות ריאה נטולות תאים

אנו מתארים את הטכניקה הכירורגית ואת תהליך הדה-סלוליזציה של חולדות מרוכבות. דה-סלוליזציה מתבצעת באמצעות נתרן דודציל סולפט בריכוז נמוך באמצעות מערכת פרפוזיה של מכונת ex vivo.

רכש ודה-סלוליזציה של חולדות אחוריות באמצעות ביוריאקטור מבוסס ex vivo perfusion עבור allotransplantation מרוכב וסקולרי

בעבודה זו, פרוטוקול דה-צלולריזציה עבר אופטימיזציה להשגת מטריצות דה-צלולריות של שרירי השלד של עכבר העובר. מיובלסטים C2C12 יכולים ליישב מטריצות אלה, להתרבות ולהבדיל. מודל זה במבחנה יכול לשמש לחקר התנהגות התא בהקשר של מחלות שרירי שלד כגון ניוון שרירים.

הכנת מטריצות תלת ממדיות דה-צלולריות משריר השלד של עכבר העובר לתרבית תאים

במחקר זה אנו מפרטים שיטות של דה-צלולריזציה, אפיון פיזיקלי, הדמיה והשתלת in vivo של ביו-חומרים צמחיים, כמו גם שיטות לזריעה והתמיינות של תאים בפיגומים. השיטות המתוארות מאפשרות הערכה של ביו-חומרים מבוססי צמחים עבור יישומי הנדסת רקמת עצם.

פיגומים תפוחים שמקורם בתאים להנדסת רקמות עצם במבחנה וב-Vivo

מטריצת הטחול הדה-צלולרית (DSM) טומנת בחובה יישומים מבטיחים בתחום הנדסת רקמת הכבד. פרוטוקול זה מתאר את ההליך להכנת DSM של חולדות, הכולל קצירת טחול של חולדות, דה-צלולריזציה שלהם באמצעות זילוח והערכת ה-DSM המתקבל כדי לאשר את מאפייניו.

ייצור מטריצת טחול דה-צלולרית שמקורה בחולדות

פרוטוקול זה מתאר את ההזרמה במכונה נורתורמית אקס ויבו לכליית עכברוש להשתלה מאוחרת בעכבר המקבל.

פרפוזיה נורמותרמית של כליות עכברוש להשתלה

למדו שיטה להכנת פיגומים מכליות מופרדות מתאים בחולדות. הפרוטוקול מסיר גרעינים תוך שמירה על מבנה המטריצה החוץ-תאית, ומציע יישומים בהנדסת רקמות וברפואת השתלות.

הכנת פיגומים בכליות Decellularized בחולדות

גלה סרטונים נוספים