Name: דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: למדו מודל עכברים לפגיעה איסכמית ברשתית באמצעות חסימת עורקי התרדמה הדו-צדדיים. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלות כלי דם וסינון תרופות בתוך הגוף.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים בסיוע למחקר מדעי (KAKENHI) (18K09424 כדי Toshihide Kurihara ו 20K18393 כדי Yukihiro Miwa) ממשרד החינוך, תרבות, ספורט, מדע וטכנולוגיה (MEXT).

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קיו.
1. הכנת מכשירים כירורגיים ובעלי חיים
<ol><li>אוטוקלאב מכשירים כירורגיים ולשמור אותם 70% אלכוהול אתיל. לפני כל הליך כירורגי חדש, לנקות מכשירים כירורגיים בזהירות באמצעות 70% אלכוהול אתיל.</li>
	<li>הכינו עכברי BALB/cAJc1 זכרים (בני 6 שבועות, 26-28 ק"ג) בחדר ספציפי ללא פתוגן (SPF) לשמירה על מצבים סטריליים לפני הניתוח, במהלכו ואחריו.</li>
</ol>2. חסימת עורקים דו-צדדית דו-צדדית משותפת (tBCCAO)
<ol><li>שים עכבר תחת הרדמה באמצעות הזרקה תוך-אישית עם שילוב של midazolam (40 מיקרוגרם /100 μL), medetomidine (7.5 מיקרוגרם / 100 μL) ו טרטרט butorphanol (50 מיקרוגרם / 100 μL), המכונה "MMB", כפי שתואר קודם לכן8,9. החזק את עורות הגב של העכבר כדי להרחיק את העכבר מלהתנגש בעיניו עד שהעכבר מורדם לחלוטין.<ol>
<li>לשפוט את עומק ההרדמה על ידי צביטה בוהן העכבר עד שאין לו תגובה, של איזו שיטה משמשת בדרך כלל לבדיקת הרדמה מלאה10. הערה: בדרך כלל, פחות מ 5 דקות נדרשים עכברים להירדם. מתכונים מתאימים להרדמה כללית עשויים להיות שונים על ידי מוסדות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>החל טיפה אחת של 0.1% מטוהרים נתרן hyaluronate טיפת עיניים פתרון לעיניים כדי למנוע יובש על העיניים תחת הרדמה.</li>
	<li>הנח את העכבר על גבו ותקן את כפותיו של העכבר באמצעות קלטות דבק.</li>
	<li>לחטא את אזור הצוואר של העכבר באמצעות 70% אלכוהול אתיל לפני הניתוח. הערה: גזיר נוסף של הפרווה לא בוצע מכיוון שהדבר עלול לגרום לדלקת עורעוקבת 11,12.</li>
	<li>בצע חתך קשתי בצוואר באמצעות להב (איור 1). הערה: חתך צריך להתבצע על קו האמצע בין הצוואר, עצם החזה וקנה הנשימה.</li>
	<li>להפריד את שתי בלוטות הרוק בזהירות באמצעות שני מלקחיים לגייס אותם כדי לדמיין את CCAs הבסיסית.</li>
	<li>לבודד את CCA הנכון בזהירות מן העצבים vagal בהתאמה ואת הוורידים הנלווים מבלי לפגוע במבנים שלהם, ומניחים שני תפרים משי 6-0 תחת CCA. קשרו את שני הקשרים בחוזקה כדי לחסום את זרימת הדם (איור 1). הערה: במהלך ההליך, ורידים קטנים עלולים להיפגע. אם דימום נראה, ניגוב נדרש כדי לדמיין את CCAs בבירור.</li>
	<li>מצא את CCA השמאלי בזהירות מן העצבים vagal בהתאמה ואת הוורידים הנלווים מבלי לפגוע במבנים שלהם, ולחסן את CCA שמאל במשך 2 שניות על ידי מהדק(איור 1). הערה: יש צורך להציב מחט תפר משי 6-0 מתחת ל- CCA השמאלי כדי לסמן אתר להידוק.</li>
	<li>לאחר פתיחה מחדש של CCA השמאלי, פצעי תפר של הצוואר על ידי תפר משי 6-0 ולהחיל טיפה של אנטיביוטיקה (50 μL) על הצוואר כדי לעכב זיהום חיידקי. הערה: הסר בעדינות מלחציים כדי למנוע פגיעה בקיר העורקים בעת פתיחה מחדש של CCA השמאלי.</li>
	<li>להזריק 0.75 מ"ג/ק"ג של atipamezole הידרוכלוריד תוך-אופייני לעכבר כדי לעזור לעכבר התאושש מהרדמה עמוקה במהירות. להחזיר את העכבר לכלוב עכבר עם רפידות מחוממות מראש. הערה: אל תתנו לעכבר להישאר ללא השגחה עד שהעכבר יחזור להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה קשה.</li>
	<li>להזריק 0.4 מ"ג/ק"ג של טרטרט butorphanol לעכבר לניהול הכאב כאשר העכבר מתעורר. הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן. כרמז ראשון ל-tBCCAO מוצלח, ניתן לראות ריר עפעפיים של העכבר (איור 2).</li>
	<li>עבור המתת חסד, להזריק 3x של תערובת MMB לעכברים להקריב אותם לניסויים.</li>
</ol>3. תצפיות כלליות (שיעורי הישרדות וצניחת עפעפיים)
<ol><li>לאחר הניתוח, בדוק את שיעורי ההישרדות של כל סיבות המוות ביום 0 (לאחר הניתוח), 1, 3 ו -7.</li>
	<li>הערכת צניחת עפעפיים בסולם דירוג של 4 נקודות: 1 = ללא ריר, 2 = צניחה קלה (~ 50%), 3 = ריר חמור (מעל 50%), ו- 4 = צניחה חמורה עם הפרשות עיניים.</li>
</ol>4. זלוף דם ברשתית
<ol><li>הזרק 200 μL של FITC-dextran (25 מ"ג / מ"ל) לתוך החדר השמאלי של העכבר, אשר משמש בדרך כלל לתצפית על זלוף הדם בכלי רשתית העכבר13,14.</li>
	<li>2 דקות לאחר זרימת הדם, לאכוף את העיניים ולתקן 4% paraformaldehyde במשך שעה אחת. הרשתיות הושגו בקפידה ורכובות שטוחות, כפי שתואר קודם לכן15, ונבדקו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.</li>
	<li>צלם את כל תושבות הרשתית בהגדלה פי 4 והתמזג ליחיד באמצעות מנתח מיזוג, שתואר בעבר16.</li>
	<li>למדוד את האזורים perfused באמצעות כלי ניתוח כלי בתוכנת NIH פיג'י / ImageJ.</li>
</ol>5. כתם מערבי
<ol><li>3 ו 6 שעות לאחר tBCCAO, לקבל את העיניים של עכברים ומיד להעביר צלחת פטרי המכיל PBS קר כדי לבודד את הרשתית.</li>
	<li>לאחר בידוד הרשתיות, בצעו כתמים מערביים, כפי שתואר קודםלכן 9.</li>
	<li>דגירה עם נוגדנים לגורם היפוקסיה-1α (HIF-1α; סמן היפוקסיה כללי) ועבור β-אקטין (בקרת טעינה פנימית) לילה ואחריו דגירה של נוגדנים משניים מצומדים HRP. דמיין את האותות באמצעות צ'מילומינציה.</li>
</ol>6. PCR כמותי (qPCR)
<ol><li>6, 12 ו 24 שעות לאחר tBCCAO, לעבד את הרשתית שהושגה עבור qPCR, כפי שתואר קודם לכן17.</li>
	<li>בצע qPCR באמצעות מערכת PCR בזמן אמת. פריימנים המשמשים מפורטים בטבלה 1. חשב שינויי קיפול בין רמות של תעתיקים שונים על-ידישיטת T ΔΔC.</li>
</ol>7. אימונוהיסטוכימיה (IHC)
<ol><li>3 ימים לאחר tBCCAO, לקבל את העיניים של עכברים להטביע פרפין.</li>
	<li>חותכים את העיניים משובצות פרפין על ידי microtome כדי לקבל את חלקי העין.</li>
	<li>דה-פרפין ולהכתים את חלקי העין של 5 מיקרומטר עובי כפי שתואר קודםלכן 13.</li>
	<li>דגירה עם נוגדן לחלבון חומצי פרפור גלי (GFAP; סמן אמין עבור אסטרוציטים ותאי מולר ברשתית) לילה ואחריו דגירה של אלקסה פלואור 555-מצומד נוגדן משני.</li>
	<li>השתמש DAPI (4′,6-diamidino-2-פנילינדול) עבור הכתמת הגרעין ברשתית. דמיין אותות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.</li>
	<li>הערכת ניקוד מורפולוגיה על ידי סולם דירוג של 4 נקודות, כפי שתואר קודם לכן13,18: 0 = אין אות, 1 = כמה רגלי קצה גליה חיוביות בשכבת תא הגנגליון (GCL), 2 = כמה תהליכים מתויגים המגיעים מ- GCL לשכבה הגרעינית החיצונית (ONL), ו - 3 = התהליכים המסומנים ביותר המגיעים מ- GCL ל- ONL.</li>
</ol>8. אלקטרורטינוגרפיה (ERG)
<ol><li>3 ו 7 ימים לאחר tBCCAO, לבצע ERG באמצעות כיפת Ganzfeld, מערכת רכישה וממריצים LED, כפי שתואר קודםלכן 9.</li>
	<li>לאחר הסתגלות כהה בן לילה, הרדמה עכברים עם שילוב של MMB תחת אור אדום עמום.</li>
	<li>השתמש בתמיסה מעורבת של 0.5% טרופיקמיד ו 0.5% פנילפרין כדי להרחיב את האישונים.</li>
	<li>מניחים את האלקטרודות הפעילות על עדשת מגע ומניחים את אלקטרודת הייחוס בפה.</li>
	<li>קבל תגובות ERG משתי העיניים של כל בעל חיים.</li>
	<li>רשום תגובות סקוטיות תחת הסתגלות כהה עם גירויים שונים.</li>
	<li>למדוד את משרעת של גל מקו הבסיס לנקודה הנמוכה ביותר של גל.</li>
	<li>למדוד את משרעת של b-wave מהנקודה הנמוכה ביותר של גל לשיא של b-wave.</li>
	<li>שמור על כל העכברים חמים במהלך ההליך באמצעות רפידות חום.</li>
</ol>9. טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT)
<ol><li>2 שבועות לאחר tBCCAO, לבצע OCT באמצעות מערכת SD-OCT, כפי שדווח בעבר8,9.</li>
	<li>למדידה, נושא עכברים mydriasis על ידי פתרון מעורב של 0.5% טרופיקמיד ו 0.5% פנילפרין, ולהרדמה כללית על ידי תערובת של MMB.</li>
	<li>השג תמונות סריקה B מפרוסות קו המשווה של סריקות en-face.</li>
	<li>בדוק את הרשתית ב 0.2, 0.4 ו 0.6 מ"מ מראש עצב הראייה.</li>
	<li>למדוד עובי הרשתית משכבת סיבי העצב ברשתית (NFL) לקרום המגביל החיצוני (ELM), ולשקול את הממוצע של ערכים נמדדים כעובי הרשתית של עכבר בודד.</li>
	<li>התווה את התוצאות כדיאגרמות עכביש.</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

במחקר, הראינו כי tBCCAO, באמצעות תפרים פשוטים מהדק, יכול לגרום איסכמיה רשתית נלווית תפקוד הרשתית. יתר על כן, הוכחנו את הפרוטוקול הנוכחי שלנו לפיתוח מודל עכבר של איסכמיה רשתית קל ומהיר יותר בהשוואה לפרוטוקולים קודמים אחרים לפיתוח מודלים של פגיעה איסכמית ברשתית2,3,7.
מבחינה אנטומית, העורקים המוחיים השמאליים והימניים יכולים להיות מחוברים באמצעות עורקים מתקשרים אחוריים (PCAs) המספקים מחזור בטחונות במעגל ו...

הרשתית היא רקמה נוירו-חושית לתפקוד חזותי. מאז כמות משמעותית של חמצן נדרש לתפקוד חזותי, הרשתית ידועה כאחת הרקמות תובעניות חמצן הגבוה ביותר בגוף1. הרשתית רגישה למחלות כלי דם כמו חמצן מועבר דרך כלי הדם. סוגים שונים של מחלות כלי דם, כגון רטינופתיה סוכרתית וכלי דם ברשתית (ורידים או עורקים) חסימה, יכול לגרום איסכמיה ברשתית. כדי לחקור מנגנונים פתולוגיים של איסכמיה ברשתית, מודלים ניסיוניים לשחזור ורלוונטיים קלינית של איסכמיה ברשתית נחשבים הכרחיים. חסימת עורק המוח התיכון (MCAO) על ידי החדרת חוט תוך-אלומיניום היא השיטה הנפוצה ביותר לפיתוח מודלים מכרסמים vivo של איסכמיה מוחית ניסיונית2,3. בשל הקרבה של עורק העיניים (OpA) ל MCA, מודלים MCAO משמשים גם בו זמנית כדי להבין את הפתופיזיולוגיה של איסכמיה ברשתית4,5,6. כדי לגרום איסכמיה מוחית יחד עם איסכמיה ברשתית, חוטים ארוכים מוכנסים בדרך כלל באמצעות חתך של העורק הראשי המשותף (CCA) או עורק הראשי החיצוני (ECA). שיטות אלה קשות לביצוע, דורשות זמן רב כדי להשלים את הניתוח (מעל 60 דקות עבור עכבר אחד), ולהוביל שונות גבוהה בתוצאות לאחר הניתוח7. זה עדיין חשוב לפתח מודל טוב יותר כדי לשפר את החששות האלה.
במחקר זה, פשוט השתמשנו בחסימת CCA דו-צדדית חולפת קצרה (tBCCAO) עם מחטים ומהדק כדי לגרום לאיסכמיה ברשתית בעכברים וניתחנו תוצאות אופייניות של פציעות איסכמיות ברשתית. בסרטון זה, אנו נותנים הדגמה של הליך tBCCAO.

<table><tbody><tr><td>Atipamezole hydrochloride</td><td>Zenoaq</td><td>Antisedan</td><td>לאנטי הרדמה</td></tr><tr><td>יישומי Biosystems 7500 Fast</td><td>Applied Biosystems-For</td><td></td> <td>qPCR</td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>מנתח BZ-II</td><td>KEYENCE-למיזוג</td><td></td> <td>תמונה</td></tr><tr><td>BALB/cAJc1</td><td>CLEA-Mouse</td><td></td><td> מתח</td></tr> <tr><td>ובטא;-אקטין (8H10D10) עכבר mAb</td><td>CST</td><td>3700</td><td>עבור כתם מערבי</td></tr><tr><td>מהדק מלקחיים</td><td>מכשירים מדויקים עולמיים</td><td>WPI 500451</td><td>לניתוח</td></tr><tr><td>מלקחיים דומונט #5</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11251-10</td><td>לניתוח</td></tr><tr><td>תמיסת DAPI</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>עבור מערכת IHC</td></tr><tr><td>Envisu SD-OCT</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td>עבור OCT</td></tr><tr><td>FITC-dextran</td><td>Merk</td><td>FD2000S</td><td>לזלוף דם ברשתית</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>לזיהוי פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>Gatifloxacin hydrate</td><td>Senju פרמצבטיקה</td><td>Gachifuro</td><td>לזיהום אנטי בקטריאלי</td></tr><tr><td>GFAP נוגדן חד שבטי (2.2B10)</td> <td>Thermo</td><td>13-0300</td><td>עבור כרית חימום IHC</td></tr><tr><td></td><td>Marukan</td><td>RH-200</td><td>לניתוח</td></tr><tr><td>HIF-1 ואלפא; (D1S7W) XP ארנב mAb</td><td>CST</td><td>36169</td><td>לכתם מערבי</td></tr><tr><td>ImageQuant LAS 4000 מיני</td><td>GE Healthcare-לכימילומינסנציה</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz K.K</td><td></td><td>SANDOZ להרדמה</td></tr><tr><td>מיקרוטום רקמה-Tek TEC 6</td><td>Sakura-לחתך</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Medetomidine</td><td>Orion Corporation</td><td>Domitor</td><td>למחט הרדמה</td></tr><tr><td> מחזיק</td><td>Handaya</td><td>HS-2307</td><td>לניתוח</td></tr><tr><td>PuREC</td><td>MAYO</td> <td>Corporation-For</td> <td>ERG</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>91460-11</td><td>לניתוח</td></tr><tr><td>נתרן היאלורונאט</td><td>Santen פרמצבטיקה</td><td>היאליין</td><td>לשימון עיניים</td></tr><tr><td>טרופיקמיד/פנילפרין הידרוכלוריד</td><td>Santen פרמצבטיקה</td><td>Mydrin-P</td><td>למידריאזיס</td></tr><tr><td>6-0 תפר משי</td><td>Natsume</td><td>E12-60N2</td><td>לניתוח</td></tr></tbody></table>

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

מחלות כלי דם מגוונות כגון רטינופתיה סוכרתית, חסימה של ורידים ברשתית או עורקים ותסמונת איסכמית עינית יכול להוביל איסכמיה ברשתית. כדי לחקור מנגנונים פתולוגיים של איסכמיה ברשתית, יש לפתח מודלים ניסיוניים רלוונטיים. מבחינה אנטומית, כלי אספקת דם רשתית עיקרי הוא עורק עיניים (OpA) ו OpA מקורו בעורק הראשי הפנימי של העורק הראשי המשותף (CCA). לכן, שיבוש של CCA יכול לגרום ביעילות איסכמיה ברשתית. כאן, הקמנו מודל העכבר של איסכמיה רשתית על ידי חסימה חולפת של עורק ראשי משותף דו-צדדי (tBCCAO) כדי לקשור את CCA הימני עם 6-0 תפרי משי ולחסום את CCA שמאל לזמן חולף במשך 2 שניות באמצעות מהדק, והראה כי tBCCAO יכול לגרום איסכמיה רשתית חריפה המובילה לתפקוד רשתית. השיטה הנוכחית מפחיתה את ההסתמכות על מכשירים כירורגיים רק באמצעות מחטים כירורגיות ומהדק, מקצרת את זמן החסימה כדי למזער מוות בלתי צפוי של בעלי חיים, אשר נתפס לעתים קרובות במודלים של עכבר של חסימת עורק המוח האמצעי, ושומר על יכולת רבייה של ממצאים איסכמיים ברשתית נפוצה. המודל יכול להיות מנוצל כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של רטינופתיות איסכמי בעכברים, עוד יותר יכול לשמש הקרנת סמים vivo.

לאחר תפוצה מערכתית של FITC-dextran במשך 2 דקות, נבדקו כלי דם ברשתית הרשתית הימנית והשמאלית בעכברים המופעלים על ידי תרמית ועכברים המופעלים באמצעות tBCCAO (איור משלים 1). FITC-dextran היה גלוי לחלוטין בשני הרשתית בעכברים המופעלים על ידי זיוף ואת הרשתית השמאלית בעכברים המופעלים tBCCAO, בעוד זה היה מזוהה חלקית ברשתית הימנית בעכברים המופעלים tBCCAO.
לאחר TBCCAO, נבדקו ריר עפעפיים (איור 2). העיניים הימניות הראו מתון (ציון 2; 75%) ועפעף חמור (ציון 3 ו-4;...

כאן, אנו מתארים דגם עכבר של איסכמיה רשתית על ידי חסימת עורקים דו-צדדית נפוצה חולפת באמצעות תפרים פשוטים ומהדק. מודל זה יכול להיות שימושי להבנת המנגנונים הפתולוגיים של איסכמיה ברשתית הנגרמת על ידי מומים קרדיווסקולריים.

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

ניתן להשתמש במודל העכבר שהוקם עם פרוטוקול זה כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של רטינופתיה איסכמית ולבדיקת תרופות in vivo. השיטה הנוכחית עשויה להפחית את ההסתמכות על מכשירים כירורגיים שונים ולקצר את זמן הניתוח לגרימת איסכמיה ברשתית. ניתן להבין פתוגנזה של מחלות כלי דם, כגון רטינופתיה סוכרתית, חסימת ורידי הרשתית או העורקים ותסמונת איסכמית עינית.מי שידגים את ההליך יהיה דאוקו לי, הדוקטורנט שלנו מהמעבדה שלי. יוקיהירו מיווה, DVM, דוקטורט ועוזר פרופסור מהמעבדה שלי יעזור להדגים את ההליך. חיטוי כל המכשירים הכירורגיים ושמור אותם ב-70% אלכוהול אתילי לפני ההליך הכירורגי.הכינו עכברי BALB/c זכרים בחדר ספציפי נטול פתוגנים כדי לשמור על תנאים סטריליים לפני, במהלך ואחרי הניתוח. יש למרוח טיפה אחת של תמיסת טיפות עיניים של נתרן היאלורונאט מטוהר 0.1% על עיני החיה כדי למנוע יובש בהרדמה. הנח את העכבר על גבו ותקן את כפותיו באמצעות סרט דבק.יש לחטא את אזור הצוואר באמצעות 70% אלכוהול אתילי לפני הניתוח. בעזרת להב מבצעים חתך סגיטלי בצוואר. הפרד בזהירות את בלוטות הרוק באמצעות שני מלקחיים והניח אותן בצד כדי לדמיין את ה-CCA הבסיסי.בודד את ה-CCA הימני מהעצבים הווגאליים המתאימים והוורידים הנלווים והנח שני תפרי משי 6-0 מתחת ל-CCA. קושרים את שני הקצוות בחוזקה כדי לחסום את זרימת הדם. נגב את הדם הנוטף מהוורידים הקטנים הפגועים במהלך ההליך לנראות ברורה של ה-CCA.מצא את ה-CCA השמאלי מבלי לפגוע בוורידים הנלווים והנח מתחתיו מחט תפר 6-O כדי לסמן אתר להידוק, חסום אותו למשך שתי שניות. הסר בעדינות את ה-clamp כדי למנוע נזק לדופן העורק ופתח מחדש את ה-CCA השמאלי. לאחר הפתיחה מחדש, תפר את הפצעים בצוואר בעזרת תפר משי.בסיום, מרחו טיפה של אנטיביוטיקה על הצוואר כדי לעכב זיהום חיידקי. הזריק לעכבר 0.75 מיליגרם לק"ג של atipamezole hydrochloride תוך צפקי כדי לעזור לו להתאושש מהרדמה עמוקה במהירות, ולאחר מכן החזיר את העכבר לכלוב עם רפידות שחוממו מראש. כאשר העכבר מתעורר, הזריק לו 0.4 מיליגרם לק"ג בוטואורפנול טרטרט לטיפול בכאב.צניחת עפעפיים נבדקה לאחר tBCCAO. בעין ימין נרשמה צניחת עפעפיים קלה וחמורה, בעוד שבעיניים השמאליות לא הייתה צניחה למעט עכבר אחד. אימונו-בלוטים וניתוחים כמותיים עבור HIF-1 אלפא ובטא-אקטין הראו כי HIF-1 אלפא התייצב ברשתית הימנית שלוש ושש שעות לאחר tBCCAO.גליוזיס תגובתי ברשתית נבדק שלושה ימים לאחר tBCCAO. ממוצע ציוני המורפולוגיה עבור תיוג GFAP ברשתית הימנית היה הגבוה ביותר מבין שתי הרשתית בעכברים שעברו דמה והרשתית השמאלית בעכברים שעברו tBCCAO. המשרעת של גל b בעין ימין ירדה שלושה ושבעה ימים לאחר tBCCAO כפי שמוצג ב-ERG מותאם כהה.ואילו ניתוחים כמותיים הראו ירידה באמפליטודות של גל b בעין ימין ללא כל שינוי במשרעת גל a. תמונות OCT מייצגות ברשתית המופעלת על ידי דמה ו-tBCCAO וניתוחים כמותיים הראו כי הייתה עלייה בעובי הרשתית ברשתית הימנית ולא היה שינוי ברשתית השמאלית. כאשר מנסים פרוטוקול זה, חשוב לזכור כי יש לחסום את ה-CCA הנכון בצורה ברורה.ואז יש לחסום בקפדנות את ה-CCA השמאלי. בשיטה זו ניתן ליישם יתר לחץ דם או היפוגליקמיה כדי לחקות מצבים של מחלות עיניים אנושיות. מודל זה מציג את התוצאות של איסכמיה רשתית שכיחה ואת המנגנונים של איסכמיה ברשתית.

a-murine-model-ischemic-retinal-injury-induced-transient-bilateral

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל intraluminal המוח האמצעי, החסימה בעכברים מוצג במסמך זה. ההיקף אוטם מוחית מחושב על ידי ציון נוירולוגים וכתמים סגולים cresyl, מכתים חלופה לTTC, להציע את היתרון הגדול לבדיקה בסמני ריבית רבים במקביל.

מודל עכבר של MCAO intraluminal: הערכת אוטם מוחית על ידי כתמים סגולים Cresyl

סרטון זה מדגים את ההליך של ביצוע חסימה קבועה של עורק המוח האמצעי הדיסטלי, או MCAO, עם עורק הצוואר המשותף, או קשירת CCA, בחולדות מבוגרות כדי להדגים שבץ איסכמי. זה חוסם את זרימת הדם למוח, מה שמוביל למוות עצבי ויוצר מודל לחקר מנגנוני שבץ וטיפולים פוטנציאליים.

גרימת איסכמיה באמצעות חסימת עורק המוח האמצעי והצוואר המשותף במודל חולדה

ניטור זלוף מוחות הודגם לשיפור דיוק במודלים של שבץ איסכמי. קשיים טכניים לעתים קרובות להגביל את השימוש בכלי חיוני זה למחקר כלי דם במוח. בסרטון הזה, מערכת אופטימיזציה מוצגת להשיג ניטור המודינאמית בודד או מרובה אתרים בחסימת עורק מוח האמצעית intraluminal בחולדות.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

אפיון תאי מיאלואידית מוח לאחר שבץ יכול להתבצע על ידי stereology בשיטת fractionator האופטית, או על ידי ניתוח התזרים cytometric של מוח לויקוציטים השעיות. שניהם טכניקות שימושיות לבצע הבחנה phenotypical מדויקת של תת תא מיאלואידית העיקרי נמצאים במוח איסכמי.

Stereological וcytometry זרימת אפיון תת-אוכלוסיות יקוציט במודלים של חולף או קבוע מוחין איסכמיה

אנו מתארים מודל עכבר של שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות תפר מצופה סיליקון. ניתן ליישם את הפרוטוקול כדי לגרום לחסימה קבועה או איסכמיה זמנית, ואחריה רפרפוזיה.

אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

Intraluminal סגר נימה של עורק המוח התיכון הוא הדגם הנפוצות ביותר בשימוש ב- vivo של שבץ ניסויים בחולדות. גישה כירורגית חלופיים כדי לאפשר תיקון עורק הראש נפוצות מתבצע כאן, מה שמאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני, של פגיעה reperfusion מלא אל השטח עורק המוח התיכון.

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל חולדה של חסימה/רפרפוזיה של עורק המוח האמצעי המשמר את המבנה האנטומי של כלי המוח מבלי לגרום נזק.

מודל חולדה של חסימה/עירוי מחדש של עורק המוח האמצעי מבלי לפגוע במבנה האנטומי של כלי המוח

פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההכנה לרפרפוזיה של חסימת עורק המוח התיכון דרך עורק התרדמה המשותף.

הכנת מודל שונה עבור זילוח חסימת עורק מוחי אמצעי

שיטת המחט של היצרות עורק הצוואר המשותף הדו-צדדית הא-סימטרית מוצעת ליצירת מודל עכבר לפגיעה קוגניטיבית בכלי הדם ודמנציה. זה מביא לתוצאות ארוכות טווח בהשוואה למודלים שנקבעו בעבר ותואם ל-MRI חי. ייצוג חזותי המדגים את ההליך מספק הנחיות לשליטה בניתוח.

מודל עכבר לליקוי קוגניטיבי וסקולרי ודמנציה המבוסס על היצרות עורק צוואר משותף דו-צדדי אסימטרי מונחה מחט

מטרת מחקר זה הייתה לקבוע שיטה שחוזרת לביצוע כריתת גולגולת ואחריה חסימה קבועה וסלקטיבית של עורק המוח האמצעי בחולדות, ליישום במחקרים ניסיוניים של ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי.

סתימה סלקטיבית וקבועה של עורק המוח האמצעי בעכברים: גישה ניסויית לחקר ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי

למדו מודל עכברים לפגיעה איסכמית ברשתית באמצעות חסימת עורקי התרדמה הדו-צדדיים. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלות כלי דם וסינון תרופות בתוך הגוף.

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

גלה סרטונים נוספים