Name: שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: למד טכניקה כירורגית חדשה להשתלת לב הטרוטופית בבטן עכברים לחקר תגובות אלואימוניות. שיטה זו משפרת את אמינות המודל ומקצרת זמן איסכמיה חמה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לד"ר יון שו על עזרתה כשחקנית קול, ד"ר ים ג'יאנחואה פנג על עזרתה בעריכת וידאו וד"ר אניקה קוקהאן על הערותיה ותמיכתה. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי קרן המחקר הגרמנית (DFG) לקידום שיתופי פעולה בינלאומיים (HO2581/4-1 ל- AH), והקרן הלאומית למדע של סין (NSFC; #81760291 ל- FJ).

כל הניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות ההוראה 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי בנושא הגנה על בעלי חיים המשמשים למטרות מדעיות (ועדת האתיקה אישרה, #G1071/09).
הערה: הכנה ראשונית, הרדמה, טיפול שלאחר הניתוח ועבודת ניטור זהים לביצוע בשיטות כירורגיות מסורתיות1,2,4. עכברי BALB/c שימשו כתורמי לב וכ-C57BL/6J כמקבלי השתלות. עכברים היו בני 8-12 שבועות, שקלו ~ 30 גרם בהשתלה ושוכנו בתנאים סטנדרטיים.
1. צעדי הכנה
<ol><li>להרדמה, תן עכברים שאיפה isoflurane (2%) עד שהם נרדמים, ואחריו זריקות תוך-פיוריטונליות של קטמין (100 מ"ג/ק"ג) + קסילאזין (10 מ"ג/ק"ג) + אצפרומזין (2 מ"ג/ק"ג). עבור משכך כאבים לאחר הניתוח, להחיל Metamizol (200 מ"ג /ק"ג) p.o. ו Carprofen (5 מ"ג / קילוגרם) s.c.. הערה: היישום של אנטיביוטיקה נמנע בכוונה כמו חומרים אלה עשויים להשפיע על תגובות אימונולוגיות.</li>
	<li>לניתוח, יש להשתמש בערכה של מכשירים מיקרוסקופיים הכוללים מיקרו-מספריים, מיקרו-מלקחיים, מחזיק מחט ומהדקים מיקרו-מיוסטטיים. עט אלקטרוכירורגי הוא גם הכרחי. בצע תפרים באמצעות סוגי ניילון 7/0er, 10/0er ו- 4/0er.</li>
	<li>מקם את העכבר בקופסה עבור שאיפת isoflurane (2%) למשך 40-60 שניות. לקבוע את עומק ההרדמה על ידי סחיטת הכף עם פינצטה. אם יש חוסר תגובה מוחלט לגירוי זה, עבור לשלב הבא.</li>
	<li>ברגע שהעכבר נרדם, לשקול את העכבר.</li>
	<li>יש למרוח הזרקה תוך-אישית של קטמין (100 מ"ג/ק"ג) + קסילאזין (10 מ"ג/ק"ג) + אצפרומזין (2 מ"ג/ק"ג) על העכבר המורדם.</li>
	<li>חותכים את פרוות הבטן ומניחים את העכבר על שולחן הניתוחים. בצע חיטוי באמצעות יודיד povidone במשך 3 פעמים, ולאחר מכן כראוי לעטוף את העכבר באמצעות מגבת כירורגית fenestrated.</li>
</ol>2. נוהל ניתוח תורם
<ol><li>השתמש במספריים כדי לחתוך את העור מהצוואר אל הבטן התחתונה, לקלף את השכבה המלאה של העור לקו האמצע של שני בית השחי.</li>
	<li>השתמש במספריים כדי לחתוך את שרירי דופן הבטן ולהזיז בעדינות את הקרביים שמאלה (מנקודת המבט של המפעיל). לעטוף את הקרביים עם גזה מלוחים imbibed לחשוף בבטחה את הווריד הווריד נחות.</li>
	<li>השתמש מזרק 1 מ"ל להזריק 0.4 מ"ל של פתרון הפרין (מכיל 500 U הפרין) לאט לתוך קאווה הווריד התחתון ולחכות 1 דקה לפני מושך את המחט.</li>
	<li>לשלוף את המחט ולהשתמש מיקרו מספריים לחתוך הן את הווריד הווריד נחות ואת העורקים הבטן כדי להאיץ exsanguination.</li>
	<li>השתמש במספריים כדי לפתוח את חלל החזה על ידי ביצוע חתך בצורת u; לחשוף לחלוטין את הלב, הריאות ואת כל כלי הדם בחזה.<ol>
<li>לחשוף את העורקים בבית החזה, לחתוך 1/2 של לומן, ולאחר מכן לחתוך את הווריד ריאתי כדי להקל על השקיה וניקוז.</li>
		<li>הכנס צינור השקיה לתוך הפתיחה של אב העורקים החזה, להזריק לפחות 2 מ"ל של 4 מעלות צלזיוס היסטידין קר-טריפטופן-ketoglutarate פתרון קרדיופלגיה (פתרון HTK Custodiol)9 עד זרימת ורידים ריאתי ברור לחלוטין הלב מפסיק לפעום לחלוטין.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מוציאים את צינור ההשקיה ומנתקים את עצם החזה.</li>
	<li>השתמש מספריים מיקרו כדי להסיר את התימוס כדי להפשיט מעט את השומן סביב קשת אבי העורקים.</li>
	<li>השתמש במלקחיים ישרים ומעוגלים כדי לחשוף ולחשוף את תא המטען של pulmonalis העורקים (בצד ימין של קשת העורקים) עם תפר 10/0.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מיקרו כדי להפריד את השומן ואת רקמת החיבור המצורפת IIVC, לחשוף ולשחרר את קאווה vena מעולה (בצד שמאל של קשת העורקים) עם תפר 7/0 ולהשתמש מספריים מיקרו לחתוך אותו מאחורי הקשירה.</li>
	<li>הפוך תפר 7/0 סביב הבסיס של הלב מתחת לקשת העורקים, IIVC, ושני auricles. ואז ligate ענפי עורק הריאה וכלי ריאות ורידיים.</li>
	<li>השתמש מספריים מיקרו כדי להעביר את קשת העורקים כמו distal ככל האפשר, כלי הריאה מתחת קשירה ו IIVC ליד הסרעפת. תוציא את הלב מהחזה.</li>
	<li>מניחים את הלב של התורם explanted לתוך 4 מעלות צלזיוס קר HTK פתרון cardioplegia ולשמור באופן זמני.</li>
</ol>3. הליך הפעולה של הנמען
הערה: שלבי הפעולה הראשוניים דומים לאלה שהוצגו בעבר עבור עכבר התורם, כולל הרדמה וחיטוי.
<ol><li>בצע את העור הבטן לחתוך באופן רוחבי, לכסות את איברי הבטן עם גזה רטובה באמצעות תמיסת מלח.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מיקרו כדי לחשוף את הווריד הווריד נחות ואבי העורקים הבטן ולשחרר אותם מרקמת השומן שמסביב.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מיקרו כדי ligate או electrocauterize כלי ענף בצד (לרוחב או מתחת לווריד / אב העורקים) מתחת לכלי הכליה.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מוליך קליפ למקם שני מלחציים hemostatic מיקרו בחלק הבטן של וריד / aorta מגיע מימין עוזב יותר מ 1 ס"מ מרחק עבור שני aorta / וריד כדי להבטיח מקום לבניית anastomosis ביניהם.</li>
	<li>השתמש מספריים מיקרו לעשות חתך לתוך העורקים קצת יותר קרוב מהדק התחתון מאשר מהדק העליון. לחלופין, השתמש במחט 30 G כדי ליצור חור קטן ולפתוח אותו עם מספריים מיקרו.</li>
	<li>מקם את עכבר הנמען כך שאבי העורקים יפנה לאופרטור עם ה- vena cava בצד השני. לאחר מכן מניחים את הלב לתוך חלל הבטן ומכסים אותו עם כרית גזה רטובה קטנה.</li>
	<li>השתמש תפר 10/0 כדי להתאים ולתפור את העורקים התורם לאבי העורקים הנמען מתחיל caudally, לעשות קשר ולהמשיך עם תפר ריצה לחלק העליון של החתך (כ 4-5 תפרים). לאחר מכן, הופכים את הלב ימינה (מנקודת המבט של הנושא), מכסים אותו שוב וממשיכים את התפירה בצד שמאל עד להגעה לקצה הקאודל וקושרים אותו.</li>
	<li>השתמש בצינור השקיה כדי להזריק לפחות 0.5 מ"ל של 4 °C HTK פתרון לב-חזה כדי לשטוף IIVC של התורם.</li>
	<li>השתמש מיקרו ומספריים כדי לחתוך חור עגול על הבטן נחותה vena cava של המטופל, אשר צריך להיות באותו גודל של לומן IIVC התורמים. החתך צריך להיות ממוקם מעל פתח anastomotic אב העורקים. הפוך את חתך הוורידים לגדול יותר מהחתך בגור העורקים.</li>
	<li>השתמש תפר 10/0 כדי לתפור את IIVC התורם לנמען vena קאווה החל caudally. לקשור קשר ולבצע תפר ריצה עד החלק העליון של החתך הוא הגיע. השתמש חמישה תפרים ולהמשיך את התפר בצד שמאל. לבסוף, לקשור קשר בפינת הזנב, בזהירות להדק (להיזהר לא למשוך חזק מדי).</li>
	<li>מניחים את החלקים הקטנים של הספוג hemostatic סביב הווריד ואת anastomoses בגור העורקים.</li>
	<li>השתמש מלקחיים אפליקטור קליפ כדי להסיר תחילה את התחתון ולאחר מכן את המהדקים מיקרו hemostatic העליון ולשטוף את חלל הבטן עם 38.0 מעלות צלזיוס מחוסמת 0.9% נתרן כלורי.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מיקרו לקחת את הספוג hemostatic.</li>
	<li>שימו לב לפעימות הלב המושתלות.</li>
	<li>השתמש מלקחיים כדי להחזיר את המעיים לתוך חלל הבטן ותפרים דו שכבתיים (שרירי הבטן ואחריו העור) כדי לסגור את פצע הבטן עם תפר 4/0.</li>
	<li>שים את העכברים לתוך תא תחנת עבודה בקרת חמצן וטמפרטורה (למשל, INVIVO2-400) כדי לספק סביבה חמה ועשירה בחמצן עבור העכברים המושתלים להתאושש, לחכות לעכברים להתעורר.</li>
	<li>למשככי כאבים לאחר הניתוח, יש לתת ישירות למטמיזול 200 מ"ג/ק"ג למערכת ההפעלה לאחר הניתוח. ארבע ו -16 שעות לאחר הניתוח לתת Metamizol 200 מ"ג / קילוגרם לכל os + Carprofen (5mg /kg) s.c. במעקב נוסף, תן Carprofen (5 מ"ג / קילוגרם) s.c לעכברים המושתלים כל 24 שעות במשך שלושה ימים רצופים לאחר הניתוח.</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R., Winn, H., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li>
<li>Habertheuer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+tissue-specific+exosome+profiling+enables+noninvasive+monitoring+of+acute+rejection+in+mouse+allogeneic+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Donor tissue-specific exosome profiling enables noninvasive monitoring of acute rejection in mouse allogeneic heart transplantation.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (6), 2479-2489 (2018).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26, 223-228 (2013).</li>
<li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li>
<li>Alamran, F. G., Shahkolahi, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+arterial+anastomosis+heterotopic+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Total arterial anastomosis heterotopic heart transplantation model.</a> Transplantation Proceedings. 45, 625-629 (2013).</li>
<li>Melanie, L., et al. Potential of Heterotopic Cardiac Transplantation in Mice as a Model for Elucidating Mechanisms of Graft Rejection. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMelanie%2C+L+%22Cardiac+Transplantation%22">Cardiac Transplantation</a>. Moffatt-Bruce, S. D., et al. , IntechOpen (2012).</li>
<li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure%2C+perioperative+management+and+postoperative+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513(2019).</li>
<li>Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modified+Method+for+Heterotopic+Mouse+Heart+Transplantion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51423(2014).</li>
<li>Mokbel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate+Solution+for+Donor+Heart+Preservation+Is+Safe+for+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate Solution for Donor Heart Preservation Is Safe for Transplantation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 109 (3), 763-770 (2020).</li>
<li>Song, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Suture+Technique+in+a+Mouse+Heart+Transplant+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Suture Technique in a Mouse Heart Transplant Model.</a> Asian Journal of Surgery. 34 (2), 86-91 (2011).</li>
<li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li>
<li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cold+storage+using+a+new+histidine-tryptophan-ketoglutarate-based+preservation+solution+in+isogeneic+cardiac+mouse+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">cold storage using a new histidine-tryptophan-ketoglutarate-based preservation solution in isogeneic cardiac mouse grafts.</a> European Heart Journal. 32 (4), 509-516 (2011).</li>
<li>Türk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+chronic+graft+injury+with+a+new+HTK-based+preservation+solution+in+a+murine+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Reduction of chronic graft injury with a new HTK-based preservation solution in a murine heart transplantation model.</a> Cryobiology. 64 (3), 273-278 (2012).</li>
</ol>

הטכניקה הכירורגית של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכברים היא מאתגרת מאוד וזה מסבך הגבלה לשימוש הנרחב במודל זה.
אחד החסרונות של הטכניקה הקונבנציונלית הוא האורך המגביל של עורק הריאה של התורם. אורכו בדרך כלל כ-2 מ"מ, ואילו אורך ה-IIVC של הלב התורם המשמש במודל שלנו הוא בדרך כלל כ-1 ס"מ(איור 2). משמעות הדבר היא כי במודל שונה, anastomosis IIVC מציע מראה ברור יותר של situs המבצע המאפשר ניתוח משופר של anastomoses ומניעת התפתחות לא רצויה של תפרים קפדניים מדי או אפילו נגעים מזיק...

הטכניקה הכירורגית של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכברים מייצגת מודל סטנדרטי למחקר באימונולוגיה של השתלות1,2,3. עם זאת, זה מאוד מאתגר לבצע וזה מסבך הגבלה לשימוש הנרחב של מודל זה4,5.
בהשתלת לב עכבר מסורתית (THTx), העורקים התורמים ואבי העורקים הבטן של המטופל הם anastomosed בעוד עורק הריאה הוא anastomosed למקבל ורידים נחותים6,7,8.
בטכניקה זו של השתלת לב עכבר שונה, העורקים התורמים מווסתים לאבי העורקים הבטן של המטופל והתורם IIVC הוא anastomosed למקבל ורידיםנחותים (3,4,6) ( איור2 ואיור 3).

<table><tbody><tr><td>30G-מחטים</td><td>בראון</td><td>456300</td><td></td></tr><tr><td>acepromazine</td><td>CP Pharma</td><td>Tranquisol P</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c AnNCrl עכברים</td><td>צ'ארלס ריבר. גרמניה</td><td>ללא מספר</td><td></td>קטלוגי</tr><tr><td>משחת עיניים Bepanthen</td><td>Haus-Apotheke</td><td>PZN 01578675</td><td></td></tr><tr><td>Bonn Micro Forceps</td><td>FST</td><td>11083-07</td><td></td></tr><tr><td>קופסה לבידוד ומכשיר אספקת חמצן</td><td>RUSKINN</td><td>INVIV</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp; עכברים</td><td>נהר צ'ארלס. גרמניה</td><td>ללא מספר</td><td></td>קטלוגי</tr><tr><td>קרפרופן</td><td>Zoetis</td><td>Rimadyl 50 מ"ג/מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>קטטר-FEP 26G</td><td>TERUMO</td><td>Surflo-W</td><td></td></tr><tr><td>קליפ מוליך מלקחיים בסגנון</td><td>FST</td><td>18057-14</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים</td><td>WPI</td><td>14114-G</td><td></td></tr><tr><td>custodiol/HTK</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie</td><td>ללא מספר</td><td></td>קטלוגי</tr><tr><td>Cutasept חיטוי עור</td><td>VWR</td><td>BODL980365</td><td></td></tr><tr><td>עט אלקטרו-כירורגי</td><td>Bovie</td><td>CHANGE-A-TIP</td><td></td></tr><tr><td>רפידות גזה, צמר גפן</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td>13353</td><td></td></tr><tr><td>מחצלת חימום</td><td>THERMO MAT PRO 30W</td><td>HTP-30</td><td></td></tr><tr><td>ספוג המוסטטי</td><td>CuraSpon</td><td>J1276A</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת הפרין</td><td>Haus-Apotheke</td><td>PZN 03029820</td><td></td></tr><tr><td>קופסת קרח</td><td>PETZ</td><td>אין מספר קטלוגי זמין</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר הרדמה אינהלציה</td><td>GROPPLER</td><td>BKGM 0616</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר בידוד ואספקת חמצן</td><td>RUSKINN</td><td>INVIV</td><td></td></tr><tr><td>isoflurane</td><td>CP Pharma</td><td>Isofluran CP 1 מ"ל/מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>Zoetis</td><td>ללא מספר</td><td></td>קטלוגי</tr><tr><td>metamizole</td><td>WDT</td><td>ללא מספר</td><td></td>קטלוגי</tr><tr><td>מספריים מיקרו</td><td>FST</td><td>15000-00,15000-10</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו Serrefine ( מהדק ) זוויתי / 16 מ"מ</td><td>FST</td><td>18055-06</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>LEICAMZ6</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור</td><td>SCHOTT</td><td>KL2500LED</td><td></td></tr><tr><td>מלח תמיסה (NaCl 0.9%)</td><td>Haus-Apotheke</td><td>מספריים 06178437</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Peha Instruments</td><td>991083/4</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי קטנה</td><td>Sarstedt</td><td>833900</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים</td><td>WPI</td><td>14113-G</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי</td><td>BSN</td><td>4120</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לקשירת תפרים - 10 ס"מ</td><td>FST</td><td>18025-10</td><td></td></tr><tr><td>תפרים(10-0)</td><td>תפרים של Medtronic</td><td>N2540</td><td></td></tr>(<tr><td>4-0)</td><td>תפרים ETHILON</td><td>V4940H</td><td></td></tr><tr><td>(7-0)</td>מזרק <td>ETHILON</td><td>1647H</td><td></td></tr><tr><td>(0.3 מ"ל)</td>מזרק <td>BD</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>(1 מ"ל)</td><td>BD</td><td>320801</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>באייר</td><td>רומפון</td><td></td></tr></tbody></table>

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

הטכניקה הכירורגית של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכברים היא מודל סטנדרטי למחקר באימונולוגיה של השתלות. כאן, הטכניקה הוקמה לשחזור מעגל הדם שונה במודל השתלת לב בטן הטרוטופי מוצג. שיטה זו משתמשת vena cava נחותים intrathoracic (IIVC) במקום עורק הריאה של הלב התורם עבור anastomosis כדי הווריד הנבוב הנחות של המטופל. זה להקל ולשפר את שיעורי ההצלחה עבור השתלת לב הבטן בעכברים.

כאן, טכניקה שונה של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכברים שפותחה בעבר במעבדה שלנו הוכיחה שימושית במשך 16 השנים האחרונות מוצג. בעבר, דווח כי בסך הכל 40 מקרים של vena cava כדי vena cava (V-V הקבוצה) לעומת 40 מקרים של עורק הריאה המסורתי כדי vena cava (קבוצת P-V) הליך anastomosis4 (טבלה 1)anastomosis כלי לקח 20.8±1.3 דקות בקבוצת V-V, שהיה קצר משמעותית מקבוצת P-V (27.5±1.3 דקות, עמ'&lt;0.01). זמן האיסכמיה החם, זמן הפעולה הכולל של המטופל וזמן החזרה על הלב לאחר הניתוח, שהיו 25.5±1.2 דק...

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...

השתלת לב בעכבר הוא מודל בעל ערך לחקר תגובת alloimmune כאן, אנו מציגים טכניקה כירורגית חדשה של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכבר. בהשתלת לב עכבר מסורתית, העורקים התורמים וגורם הבטן של המטופל הם anastomosed. עורק הריאה הוא anastomosed למטופל ורידים נחותים.בהשתלת לב עכבר חדשה זו. העורקים התורם הוא anastomosed למקבל בטן aorta ואת התורם intrathoracic נחות vena קאווה הוא anastomosed למקבל ורידים נחותים. עכשיו אנחנו מתחילים את ההדגמה הניסיונית.לאחר לשים את העכבר בתיבה עבור שאיפת isoflurane והרדמה, לשקול את העכבר. על פי משקל העכבר, לתת הזרקה תוך-אישית של קטמין xylazine acepromacine כדי להרדים את העכבר. תיקון וחיטוי העכבר על שולחן הפעולה כאשר הרדמה השפיעו.חותכים את העור מהצוואר לבטן התחתונה. חותכים את שרירי דופן הבטן ומוציאים בעדינות את הקרביים שמאלה. לאחר מכן, לחשוף את הווריד הנבוב הנחות.להזריק 0.4 מיליליטר של תמיסת הפרין לאט לתוך קאווה הווריד התחתון ולחכות דקה אחת לפני מושך את המחט. מוציאים את המחט וחותכים גם את הווריד הנבוב הנחות וגם את אגם הבטן במספריים כדי להאיץ את ההאצה. פתח את חלל החזה על ידי ביצוע חתך בצורת u.לחשוף לחלוטין את הלב, הריאות, ואת כל כלי הדם בחזה. חשוף את אצופת בית החזה. תחתוך חצי מהלומן.הכנס את צינור ההשקיה לתוך הפתיחה של אציקת בית החזה. חותכים את וריד הריאות כדי להקל על השקיה וניקוז. להזריק לפחות שני מילימטר של פתרון HTK ארבע מעלות.הלב מפסיק לפעום לחלוטין עד שזרימת וריד הריאות ברורה לחלוטין. מוציאים את צינור ההשקיה ומנתקים את עצם החזה. הסר את התימוס.מפשיטים קלות את השומן סביב קשת העורקים. לחשוף ולחשוף את תא המטען של pulmonalis עורקים עם תפר 10 אפס. הפרד את העובדה ואת רקמת החיבור המצורפת על vena cava נחות intrathoracic לחשוף וללהיב את קאווה vena מעולה עם שבעה אפס תפר לחתוך אותו מאחורי הקשירה.לעשות תפר שבע אפס סביב הבסיס של הלב מתחת לקשת העורקים. ורידים נחותים ואת שני auricle, ואז ligate את ענפי עורק הריאה וכלי ריאות ורידיים. החצו את קשת העורקים באופן דיסטלי ככל האפשר, אך ודאו שיש לכם לומן אחד ברור ללא פתחי ענפים צדדיים.כלי הריאה מתחת לקשירה וורידים נחותים תוך-אצ'ורקי ליד הסרעפת. עכשיו, תוציא את הלב מהחזה. מניחים את לבו של התורם הממושכת בתמיסת HDK קרה ב-4 מעלות ולשמר באופן זמני.הקפד לא להאריך זמן איסכמיה קר יותר מ 60 דקות. עכשיו, אנחנו מתחילים להדגים פעולת קולטן. שלבי הפעולה הראשוניים דומים לאלה שהוצגו בעבר עבור עכבר התורם, כולל הרדמה ועיקור.עור בטן חתוך בצורה רוחבית. לאחר ניתוח המעי, לכסות את איברי הבטן עם גזה רטובה באמצעות תמיסת מלח. לחשוף את הווריד הנבוב הנחות ואת בטן העורקים ולשחרר אותם מרקמת השומן שמסביב.במידת הצורך, ligate או electrocauterize כלי ענף בצד מתחת לכלי הכליה. הכנס את המלקחיים המיקרו-מיוסטטיים הראשונים מימין לחלק העליון של המוח וגור העורקים מתחת לכלי הכליה. הכנס את המלקחיים המיקרו-המוסטטיים השניים מימין לחלק התחתון של המוח וגור העורקים.ישנם יותר מסנטימטר אחד הן עבור חלל העורקים והן עבור ורידים עבור anastomosis בין שתי מלקחיים hemostatic. לעשות חתך לתוך העורקים, קצת יותר קרוב להדק התחתון מאשר לתוך המהדק העליון. כמו כן, אתה יכול להשתמש במחט 30G לעשות חור קטן ולפתוח אותו עם מספריים מיקרו.מניחים את הלב לתוך חלל הבטן. העורקים בראייה ואת הווריד הווריד בצד השני ומכסים אותו עם כרית גזה רטובה קטנה. להתאים ולתפור את העורקים התורם לאבי העורקים הנמען, החל caudally.לעשות קשר ולהמשיך עם תפר ריצה לחלק העליון של חתך זה, כארבעה עד חמישה תפרים. לאחר מכן, הופכים את הלב ימינה, מכסים אותו שוב, וממשיכים את התפר בצד שמאל עד להגעה לקצה הקאודל וקושרים אותו. השתמש מספריים מיקרו לחתוך חור עגול על הבטן נחותה vena קאווה של המטופל, אשר צריך להיות באותו גודל של לומן vena נחות intrathoracic של התורם.החתך צריך להיות ממוקם גולגולתי לאנסטומוזיס של העורקים המתוכנן. הפוך את חתך הוורידים לגדול יותר מהחתך בגור העורקים. תאווה ורידים נחותים תוך-תורם של פלאש.לתפור את התורם ורידים נחותים intrathoracic כדי vena קאווה הנמען מתחיל caudally. לקשור קשר ולבצע תפר ריצה עד החלק העליון של החתך הוא הגיע. השתמש חמישה תפרים ולהמשיך את התפר בצד שמאל.לבסוף, לקשור קשר בפינת זנב בזהירות להדק. תיזהר לא למשוך חזק מדי. להניח חלקים קטנים של ספוג hemostatic סביב הווריד ואת anastomosis באבא.הסר תחילה את התחתון ולאחר מכן את המהדקים hemostatic מיקרו העליון ולשטוף את חלל הבטן עם חם 0.9% נתרן כלורי. קח את הספוג המוסטטי. שימו לב לפעימות הלב המושתלות.אם הכל נכון, הלב יתחיל להידבק שוב. מחזירים את המעיים לחלל הבטן וסוגרים אותו עם ארבעה אפס תפרים. לספק סביבה חמה ועשירה בחמצן לעכברים המושתלים להתאושש.בעבודת המחקר הקודמת שלנו, דיווחנו על השוואה של הכולל 40 מקרים של vena cava כדי vena cava לעומת 40 מקרים של עורק הריאה המסורתי כדי vena קאווה הליך אנסטומוזיס. זמן הפעולה של anastomosis כלי בקבוצת ורידים vena cava היה קצר משמעותית בהשוואה לעורק הריאה הקונבנציונלי לקבוצת ורידים. הטכניקה הכירורגית של השתלת לב בטן הטרוטופית בעכברים מייצגת מודל סטנדרטי למחקר באימונולוגיה של השתלות.טכניקה חדשנית זו לשחזור מעגל הדם המוצגת כאן מקלה על השתלת לב בטן בעכברים. וזה נקרא במקביל עם איסכמיה חמה מופחתת זמן rebeating של הלב המושתל, ובכך לשפר את שיעור ההצלחה של מודל זה.

blood-circuit-reconstruction-an-abdominal-mouse-heart-transplantation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.  במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

טכניקה מודגמת עבור ההליך המיקרו-כירורגי להשתלה הטרוטופית של לבבות בעכברים, כולל שיטות פשוטות לקצירת תורם ואנסטומוזיס של כלי הדם המקבל.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

כתב היד מתארת ​​את הצעדים הנדרשים כדי לבצע את השתלת לב heterotopic בעכבר.

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

טכניקת השרוול מקצרת ומקלה על המודל של השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכברים על ידי הימנעות מאנסטומוזות תפרים מאתגרות מבחינה טכנית של כלי דם קטנים. הפרטים הטכניים המוצגים במאמר וידאו זה אמורים לאפשר לחוקרים לבסס מודל זה במעבדותיהם.

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

אנו מתארים מודל של הטרוהנושא השתלת לב הבטן בחולדות, רומז שינויים של אסטרטגיות נוכחיות, אשר להוביל גישה כירורגית פשוטה. בנוסף, אנו מתארים מודל דחייה הרומן על-ידי הזרקה באוזן של תאים חיוניים שרירי הלב, המאפשר ניתוח נוסף השתלת אימונולוגיים בחולדות.

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

בפרוטוקול הנוכחי, מודל השתלת לב עכבר משמש לחקירת מנגנון דחיית אלוגרפט לבבי. במודל השתלת לב הטרוטופי זה, יעילות הניתוח משופרת, והישרדותם של שתלי לב מובטחת על ידי אנסטומוזה מקצה לקצה של צוואר הרחם של השתלת לב באמצעות טכניקת שרוול שונה.

טכניקת שרוול שונה למודל השתלת לב הטרוטופי של עכבר צוואר הרחם

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

אנו מציגים גרסה לא קל ליצור בטכניקה של שתי השרוול קלאסית השתלת כבד orthotopic בחולדה.

השתלת כבד Orthotopic בחולדות

למד טכניקה כירורגית חדשה להשתלת לב הטרוטופית בבטן עכברים לחקר תגובות אלואימוניות. שיטה זו משפרת את אמינות המודל ומקצרת זמן איסכמיה חמה.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

גלה סרטונים נוספים