מדריך שלב אחר שלב לאלקטרואנטנוגרפיה של יתושים

עבור אלקטרואנטנוגרפיה, שימוש ביתושים במצב פיזיולוגי ספציפי ועקבי הוא קריטי להשגת תוצאות אמינות. פרוטוקול שלב אחר שלב מאפשר הקלטות אלקטרואנטנוגרפיות מתמשכות ביתושים. השיטה יכולה לשמש במספר מיני יתושים, וגם בזכרים ובנקבות.

ניתן להעביר את הטכניקה האלקטרואנטנוגרפית גם למודלים אחרים של חרקים, כולל חיפושיות, זבובים, חרקים מנשקים ונמלים. בתור התחלה, הוציאו את בקבוקוני הענבר בגודל 1.5 מיליליטר המכילים את תערובות הריח ובקרת ממס מהמקפיא בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס שבו הם מאוחסנים כדי למנוע התפרקות. לאחר מכן, פיפטפו 10 מיקרוליטר של תמיסת הריח על פיסת נייר פילטר שהועמסה בתוך מזרק זכוכית מסומן.

בודדו את היתושים ביום הניסוי. עבודה מתחת למיקרוסקופ, לשבור בעדינות את הקצה של שני נימי בורוסיליקט עם חוטים באמצעות זוג מלקחיים. לפני ביצוע ניסוי האלקטרואנטנוגרפיה, או EAG, ודא שמחזיקי האלקטרודות שקופים בפנים, ללא פסולת בורוסיליקט.

לאחר מכן בצעו הכלוריזציה על ידי השריית חוטי הכסף של מחזיקי האלקטרודות באקונומיקה טהורה למשך חמש דקות, עד שהחוטים הופכים לאפורים כהים, מט. לאחר מכן שטפו את החוטים. שחררו את פקק הגומי והשתמשו במחט 20 מד כדי למלא את החלק הפנימי של הנימים בתמיסת מלח.

שוטפים את הנימים ומכניסים את החוטים לשני הנימים. שמור את קצה החוט פחות ממילימטר אחד מקצה הנימים. העבירו את הנימים דרך טבעת הגומי בתוך מחזיק האלקטרודות מבלי לשבור אותו והדקו בעדינות את פקק הגומי, לאחר שווידאתם שאין בועות אוויר.

השתמש בנימים עם הפתח הרחב יותר על מחזיק אלקטרודת הייחוס והפתח הקטן יותר על מחזיק אלקטרודת ההקלטה. השאירו את שני מחזיקי האלקטרודות המותקנים על מגבון ניקוי רטוב כדי למנוע מהקצה להתייבש עד שיהיה מוכן להרכיב את הראש. ודא ששולחן האוויר למעלה.

אין חסימה בחברת התעופה והאוויר דולק. ודא שמיכל האוויר הרפואי מלא כדי למנוע החלפתו באמצע הניסוי ואשר בועות במכשיר האדים. הפעל את המחשבים, את יישומי התוכנה ואת ספק הכוח של השסתום.

לאחר אימות חיבור האינטרנט, ספק דופק בקרה כדי לוודא שהשסתום המספק את הפולסים תקין. מניחים צלחת אלומיניום על קרח עם חתיכת מגבון ניקוי רטוב מעליה ומניחים בובת אלקטרודה קטנה בפינה. הניחו יתושים על קרח כדי לתת ליתוש להתקרר.

גזור את קצה כל אנטנה של היתוש עם מספריים מיקרו. השתמש במלקחיים כדי לגרור את היתוש ליד בובת ג'ל האלקטרודה וטבול את קצה האנטנה בעדינות בג'ל. בעזרת מלקחיים, משכו את אנטנות היתושים החוצה, תוך שמירה עליהן זו ליד זו.

קוצצים את ראש היתוש באמצעות מספריים מיקרו. טבלו בעדינות את קצה אלקטרודת הייחוס בג'ל והניחו אותו במגע עם הצוואר, ותנו לראש להידבק אליו. מקם את אלקטרודת ראש הייחוס על מיקרו מניפולטור.

חבר את שני מחזיקי האלקטרודות למגבר. השתמש במיקרו מניפולטור כדי למקם את אלקטרודת ההקלטה קרוב ככל האפשר לקצות האנטנה. לאחר מכן הכנס את קצות האנטנה לאלקטרודת ההקלטה.

הניחו את צינורות חברת התעופה קרוב להכנת ראש היתוש, בסנטימטר אחד. הפעל את המגבר ואת מפחית הרעשים וודא שהאות הבסיסי אינו רועש. ברגע שרמת הרעש משביעת רצון, הכניסו את מזרק הריח הראשון לחור חברת התעופה כדי לבצע את הבדיקה וסגרו את כלוב פאראדיי.

לאחר מכן לחץ על הקלט בתוכנת EAG כדי לספק את הדופק. מדוד את תגובות EAG כמשרעת במיליוולטים ולאחר מכן המשך עם הריח או הריכוז הבא. הניסוי מדגים בהצלחה כי מיני יתושים יכולים להציג תגובות ריח משתנות לכימיקלים שונים.

היה חוסר תגובה לשמן המינרלי, ששימש כבקרה שלילית. טעות בתוצאות עקב רעש חשמלי יכולה להיות מופחתת על ידי הארקת האלמנטים לכלוב פאראדיי, באמצעות קליפסים תנין. סף התגובה לאותו ריח יכול להשתנות בעוצמתו עבור מינים שונים של יתושים.

לדוגמה, יתושי Toxorhynchites rutilus septentrionalis מייצרים EAG גדולים מאוד, בהשוואה ל-Aedes aegypti, Anopheles stephensi ו-Culex quinquefasciatus. נצפתה סטייה גדולה בתגובה לבקרה החיובית, בנזלדהיד. אמנם היה חוסר תגובה לשליטה השלילית, שמן מינרלי.

תגובות אנטנה ממוצעות אלה מוצגות בדיאגרמת עמודות. בנוסף, סף הגילוי של כימיקל ספציפי לכל מין יתוש נקבע על ידי הצגת האנטנה, הריכוזים ההולכים וגדלים של הכימיקל והתוויית עקומת תגובת מינון. חשוב להתחיל את ההקלטה בהקדם האפשרי לאחר שהראש נחתך והורכב, כדי להבטיח היענות רבה של ההכנה.

EAG מאפשר לקבוע אם אנטנות היתושים מגיבות לכימיקל נתון בריכוז נתון. עם זאת, הוא אינו מאפשר לקבוע את האיזון של כימיקל זה. למשל, אם זה מושך או חוזר בתשובה.