Name: בידוד והדמיה בזמן-לשגות של תאי מזנשים הפליאטל העוברי הראשי של העכבר כדי לנתח תכונות תנועה קולקטיבית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-13T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: חקור בידוד ותרבית של תאי מזנשים פליאטליים עובריים ראשוניים בעכבר לניתוח תנועה קולקטיבית. שיטת הדמיה בזמן-לשגות מאפשרת מחקר דינמיקת התפתחות הפה והגולגולת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקט זה נתמך בחלקו על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות DE026172 (I.S.) ו- GM102801 (A.C. I.S. נתמך גם בחלקו על ידי מענק המצוינות במחקר ביו-רפואי (COBRE) (המכון הלאומי למדעי הרפואה הכללית P20 GM104936), מענק מצוינות מחקר מחקרי ביו-רפואי של קנזס (המכון הלאומי למדעי הרפואה הכללית P20 GM103418), ומענק המרכז הלאומי למוגבלויות שכליות והתפתחותיות בקנזס (U54 יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם, HD090216).

<ol><li>Bush, J. O., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palatogenesis%3A+morphogenetic+and+molecular+mechanisms+of+secondary+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Palatogenesis: morphogenetic and molecular mechanisms of secondary palate development.</a> Development. 139 (2), 231-243 (2012).</li>
<li>Mossey, P. A., Little, J., Munger, R. G., Dixon, M. J., Shaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Lancet. 374 (9703), 1773-1785 (2009).</li>
<li>Lan, Y., Xu, J., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanisms+of+palatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanisms of palatogenesis.</a> Current Topics in Developmental Biology. 115, 59-84 (2015).</li>
<li>Li, C., Lan, Y., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+mechanisms+of+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular mechanisms of palate development.</a> Journal of Dental Research. 96 (11), 1184-1191 (2017).</li>
<li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate%3A+usefulness+and+caveats+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37(2008).</li>
<li>Meng, L., Bian, Z., Torensma, R., Vonden Hoff, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+mechanisms+in+palatogenesis+and+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Biological mechanisms in palatogenesis and cleft palate.</a> Journal of Dental Research. 88 (1), 22-33 (2009).</li>
<li>Dixon, M. J., Marazita, M. L., Beaty, T. H., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%3A+understanding+genetic+and+environmental+influences%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate: understanding genetic and environmental influences.</a> Nature Reviews Genetics. 12 (3), 167-178 (2011).</li>
<li>Kousa, Y. A., Schutte, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+an+orofacial+gene+regulatory+network%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Toward an orofacial gene regulatory network.</a> Developmental Dynamics. 245 (3), 220-232 (2016).</li>
<li>Jin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+cell+remodeling+during+mouse+secondary+palate+reorientation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal cell remodeling during mouse secondary palate reorientation.</a> Developmental Dynamics. 239 (7), 2110-2117 (2010).</li>
<li>Yu, K., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+study+of+palatal+shelf+elevation+during+murine+secondary+palate+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Histomorphological study of palatal shelf elevation during murine secondary palate formation.</a> Developmental Dynamics. 240 (7), 1737-1744 (2011).</li>
<li>Chiquet, M., Blumer, S., Angelini, M., Mitsiadis, T. A., Katsaros, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+remodeling+during+palatal+shelf+elevation+revealed+by+extracellular+matrix+and+F-actin+expression+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal remodeling during palatal shelf elevation revealed by extracellular matrix and F-actin expression patterns.</a> Frontiers in Physiology. 7, 392(2016).</li>
<li>Paul, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ARHGAP29+mutation+is+associated+with+abnormal+oral+epithelial+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">ARHGAP29 mutation is associated with abnormal oral epithelial adhesions.</a> Journal of Dental Research. 96 (11), 1298-1305 (2017).</li>
<li>Hall, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPECC1L+regulates+palate+development+downstream+of+IRF6%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">SPECC1L regulates palate development downstream of IRF6.</a> Human Molecular Genetics. 29 (5), 845-858 (2020).</li>
<li>Walker, B. E., Fraser, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closure+of+the+secondary+palate+in+three+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">Closure of the secondary palate in three strains of mice.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 4 (2), 176-189 (1956).</li>
<li>Jin, J. Z., Li, Q., Higashi, Y., Darling, D. S., Ding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Zfhx1a+mutant+mice+reveals+palatal+shelf+contact-independent+medial+edge+epithelial+differentiation+during+palate+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Analysis of Zfhx1a mutant mice reveals palatal shelf contact-independent medial edge epithelial differentiation during palate fusion.</a> Cell Tissue Research. 333 (1), 29-38 (2008).</li>
<li>Kouskoura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+etiology+of+cleft+palate+formation+in+BMP7-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The etiology of cleft palate formation in BMP7-deficient mice.</a> PLoS One. 8 (3), 59463(2013).</li>
<li>Lan, Y., Zhang, N., Liu, H., Xu, J., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Golgb1+regulates+protein+glycosylation+and+is+crucial+for+mammalian+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Golgb1 regulates protein glycosylation and is crucial for mammalian palate development.</a> Development. 143 (13), 2344-2355 (2016).</li>
<li>He, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt5a+regulates+directional+cell+migration+and+cell+proliferation+via+Ror2-mediated+noncanonical+pathway+in+mammalian+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Wnt5a regulates directional cell migration and cell proliferation via Ror2-mediated noncanonical pathway in mammalian palate development.</a> Development. 135 (23), 3871-3879 (2008).</li>
<li>Lan, Y., Qin, C., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+of+hyaluronan+synthase-2+in+craniofacial+and+palate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Requirement of hyaluronan synthase-2 in craniofacial and palate development.</a> Journal of Dental Research. 98 (12), 1367-1375 (2019).</li>
<li>Yonemitsu, M. A., Lin, T. Y., Yu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid+is+required+for+palatal+shelf+movement+and+its+interaction+with+the+tongue+during+palatal+shelf+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid is required for palatal shelf movement and its interaction with the tongue during palatal shelf elevation.</a> Developmental Biology. 457 (1), 57-68 (2020).</li>
<li>Goering, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPECC1L-deficient+palate+mesenchyme+cells+show+speed+and+directionality+defect%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">SPECC1L-deficient palate mesenchyme cells show speed and directionality defect.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1452(2021).</li>
<li>Fantauzzo, K. A., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3K-mediated+PDGFRalpha+signaling+regulates+survival+and+proliferation+in+skeletal+development+through+p53-dependent+intracellular+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">PI3K-mediated PDGFRalpha signaling regulates survival and proliferation in skeletal development through p53-dependent intracellular pathways.</a> Genes and Development. 28 (9), 1005-1017 (2014).</li>
<li>Vasudevan, H. N., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SRF+regulates+craniofacial+development+through+selective+recruitment+of+MRTF+cofactors+by+PDGF+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">SRF regulates craniofacial development through selective recruitment of MRTF cofactors by PDGF signaling.</a> Developmental Cell. 31 (3), 332-344 (2014).</li>
<li>Vasudevan, H. N., Mazot, P., He, F., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+tyrosine+kinases+modulate+distinct+transcriptional+programs+by+differential+usage+of+intracellular+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Receptor tyrosine kinases modulate distinct transcriptional programs by differential usage of intracellular pathways.</a> Elife. 4, 07186(2015).</li>
<li>Gao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C3%2C7%2C8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin+and+TGFbeta3-mediated+mouse+embryonic+palatal+mesenchymal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dose+Response%22%5BJournal%5D)">2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and TGFbeta3-mediated mouse embryonic palatal mesenchymal cells.</a> Dose Response. 17 (1), 1559325818786822(2019).</li>
<li>Iyyanar, P. P. R., Nazarali, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hoxa2+inhibits+bone+morphogenetic+protein+signaling+during+osteogenic+differentiation+of+the+palatal+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hoxa2 inhibits bone morphogenetic protein signaling during osteogenic differentiation of the palatal mesenchyme.</a> Frontiers in Physiology. 8, 929(2017).</li>
<li>Jiang, Z., Pan, L., Chen, X., Chen, Z., Xu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt6+influences+the+viability+of+mouse+embryonic+palatal+mesenchymal+cells+via+the+beta-catenin+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wnt6 influences the viability of mouse embryonic palatal mesenchymal cells via the beta-catenin pathway.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 14 (6), 5339-5344 (2017).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+interplay+of+retinoic+acid+and+TGF-beta+signaling+mediated+by+TG-interacting+factor+to+modulate+mouse+embryonic+palate+mesenchymal-cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+B%3A+Developmental+and+Reproductive+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Negative interplay of retinoic acid and TGF-beta signaling mediated by TG-interacting factor to modulate mouse embryonic palate mesenchymal-cell proliferation.</a> Birth Defects Research Part B: Developmental and Reproductive Toxicology. 101 (6), 403-409 (2014).</li>
<li>Bush, J. O., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ephrin-B1+forward+signaling+regulates+craniofacial+morphogenesis+by+controlling+cell+proliferation+across+Eph-ephrin+boundaries%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Ephrin-B1 forward signaling regulates craniofacial morphogenesis by controlling cell proliferation across Eph-ephrin boundaries.</a> Genes & Development. 24 (18), 2068-2080 (2010).</li>
<li>Mo, J., Long, R., Fantauzzo, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pdgfra+and+Pdgfrb+genetically+interact+in+the+murine+neural+crest+cell+lineage+to+regulate+migration+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pdgfra and Pdgfrb genetically interact in the murine neural crest cell lineage to regulate migration and proliferation.</a> Frontiers in Physiology. 11, 588901(2020).</li>
<li>He, F., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+PDGFRalpha+signaling+in+medial+nasal+process+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">A critical role for PDGFRalpha signaling in medial nasal process development.</a> PLoS Genetics. 9 (9), 1003851(2013).</li>
<li>Fantauzzo, K. A., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+immortalized+mouse+embryonic+palatal+mesenchyme+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Generation of an immortalized mouse embryonic palatal mesenchyme cell line.</a> PLoS One. 12 (6), 0179078(2017).</li>
<li>Wu, K., Gauthier, D., Levine, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+cell+image+segmentation%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Live cell image segmentation.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 42 (1), 1-12 (1995).</li>
<li>Neufeld, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Allee+effect+in+modelling+post+resection+recurrence+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Computational+Biology%22%5BJournal%5D)">The role of Allee effect in modelling post resection recurrence of glioblastoma.</a> PLoS Computational Biology. 13 (11), 1005818(2017).</li>
<li>Zamir, E. A., Czirok, A., Rongish, B. J., Little, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+digital+image-based+method+for+computational+tissue+fate+mapping+during+early+avian+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">A digital image-based method for computational tissue fate mapping during early avian morphogenesis.</a> Annals of Biomedical Engineering. 33 (6), 854-865 (2005).</li>
<li>Czirok, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical-flow+based+non-invasive+analysis+of+cardiomyocyte+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optical-flow based non-invasive analysis of cardiomyocyte contractility.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10404(2017).</li>
<li>Biggs, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+regulatory+factor+6+regulates+keratinocyte+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Interferon regulatory factor 6 regulates keratinocyte migration.</a> Journal of Cell Science. 127, Pt 13 2840-2848 (2014).</li>
<li>Czirok, A., Varga, K., Mehes, E., Szabo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+streams+in+epithelial+monolayers+depend+on+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22New+Journal+of+Physics%22%5BJournal%5D)">Collective cell streams in epithelial monolayers depend on cell adhesion.</a> New Journal of Physics. 15, 75006(2013).</li>
<li>Szabo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+motion+in+endothelial+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell motion in endothelial monolayers.</a> Physical Biology. 7 (4), 046007(2010).</li>
<li>Gulyas, M., Csiszer, M., Mehes, E., Czirok, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Software+tools+for+cell+culture-related+3D+printed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Software tools for cell culture-related 3D printed structures.</a> PLoS One. 13 (9), 0203203(2018).</li>
<li>Soderholm, J., Heald, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratch+n%27+screen+for+inhibitors+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">Scratch n' screen for inhibitors of cell migration.</a> Chemistry & Biology. 12 (3), 263-265 (2005).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 59-65 (2012).</li>
<li>Svensson, C. M., Medyukhina, A., Belyaev, I., Al-Zaben, N., Figge, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untangling+cell+tracks%3A+Quantifying+cell+migration+by+time+lapse+image+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Untangling cell tracks: Quantifying cell migration by time lapse image data analysis.</a> Cytometry Part A. 93 (3), 357-370 (2018).</li>
<li>Fantauzzo, K. A., Soriano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGFRbeta+regulates+craniofacial+development+through+homodimers+and+functional+heterodimers+with+PDGFRalpha%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">PDGFRbeta regulates craniofacial development through homodimers and functional heterodimers with PDGFRalpha.</a> Genes & Development. 30 (21), 2443-2458 (2016).</li>
<li>Rafi, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-epileptic+drug+topiramate+upregulates+TGF%CE%B21+and+SOX9+expression+in+primary+embryonic+palatal+mesenchyme+cells%3A+Implications+for+teratogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Anti-epileptic drug topiramate upregulates TGFβ1 and SOX9 expression in primary embryonic palatal mesenchyme cells: Implications for teratogenicity.</a> PLoS ONE. , In Press (2021).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

גובה מדף פלטאלי מהווה אירוע שיפוץ אנכי עד אופקי1,3,4,9,11. הוא להניח כי תהליך שיפוץ זה דורש תאים mesenchymal מדף palatal להתנהג בתיאום. הניתוחים עם תאי MEPM של סוג פראי מראים שהתנהגות תא זו היא מהותית וניתן הכמות שלה21. לכן, ניתן להשתמש בבחינתנים אלה כדי לחשוף פגמים ראשוניים בגובה מדף פלטאלי במודלים חדשים וקיימים של חיך שסוע. השיטות המת...

התפתחות החיך נחקרה בהרחבה כמו פגמים ב palatogenesis להוביל חיך שסוע - פגם מולד נפוץ המתרחש במקרים בודדים או כחלק ממאות תסמונות1,2. התפתחות החיך העוברי היא תהליך דינמי הכולל תנועה והיתוך של רקמה עוברית. תהליך זה ניתן לחלק לארבעה שלבים עיקריים: 1) אינדוקציה של מדפים palatal, 2) צמיחה אנכית של המדפים palatal ליד הלשון, 3) העלאת המדפים palatal מעל הלשון, ו 4) היתוך של המדפים palatal בקו האמצע1,3,4. במהלך העשורים האחרונים, מוטציות עכבר רבות זוהו כי לחיך שסוע גלוי5,6,7,8. אפיון מודלים אלה הצביע על פגמים באינדוקציה מדף palatal, התפשטות, וצעדי היתוך; עם זאת, פגמים בגובה מדף פלטלי היו נדירים. לכן, הבנת הדינמיקה של גובה מדף פלטלי הוא תחום מסקרן של מחקר.
ניתוח זהיר של כמה מוטציות עכבר עם פגמים בגובה מדף פלטלי הוביל למודל הנוכחי מראה כי האזור הקדמי מאוד של המדף palatal נראה להתהפך, בעוד תנועה אנכית לאופקית או "שיפוץ" של המדפים palatal מתרחשת באמצע לאזורים האחוריים של החיך1,3,4, 9,10,11. האפיתל הקצה המדיאלי של המדף palatal סביר יוזם את האיתות הנדרש עבור שיפוץ זה, אשר מונע לאחר מכן על ידי mesenchyme מדף palatal. לאחרונה, חוקרים רבים זיהו עיכוב בגובה מדף פלטלי במודלים של עכברים שהראו הידבקויות אוראליות חולפות המערבות מדפי palatal12,13. השיפוץ mesenchymal כרוך ארגון מחדש של התאים כדי ליצור בליטה בכיוון האופקי, ובו זמנית לסגת מדף palatal בכיוון האנכי9,10,14. בין מספר מנגנונים המוצעים להשפיע על גובה המדף palatal ואת שיפוץ mesenchymal הבסיסי הם התפשטות תאים15,16,17, שיפועים כימיים18, ורכיבי מטריצה חוץ תאית19,20. שאלה חשובה התעוררה: האם עיכוב גובה המדף palatal נצפה Specc1l-עכברים לקויים גם בחלקו בשל פגם בשיפוץ מדף palatal, והאם פגם שיפוץ זה יכול להתבטא פגם מהותי בהתנהגות של תאי MEPM ראשוניים21?
תאי MEPM ראשוניים שימשו בתחום הקרניופאציאל עבור מחקרים רבים הכוללים ביטויגנים 22,23,24,25,26,27,28,29, וכמה מעורביםהתפשטות 30,31 ונדידה25,31,32 אך אף אחד לא עבור ניתוח התנהגות תא קולקטיבית., הדמיה בזמן-לשגות של תאי MEPM בוצעה בתרבית 2D ובתיקונים לפצעים כדי להראות שתאי MEPM הציגו תנועה כיוונית ויצרו זרמי תאים תלויי צפיפות- תכונות של תנועהקולקטיבית 21. יתר על כן, תאים מוטנטיים Specc1l יצרו זרמי תאים צרים יותר והראו מסלולי העברת תאים משתנים מאוד. חוסר תנועתיות מתואם זה נחשב לתרום לעיכוב גובה החיך בעוברים מוטנטי Specc1l 13,21. לפיכך, בדיקות פשוטות יחסית אלה באמצעות תאי MEPM ראשוניים עשוי לשמש פרוקסי לחקר שיפוץ mesenchymal במהלך העלאת מדף palatal. מאמר זה מתאר את הבידוד והתרבות של תאי MEPM ראשוניים, כמו גם את הדמיה וניתוח זמן לשגות, עבור 2D ופצע תיקון הבדיקות.

<table><tbody><tr><td>, 250 מ"ל (x2)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB-100-250</td><td></td></tr><tr><td>CO2</td><td>Matheson Gas</td><td>UN1013</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים, 15 מ"ל (x1)</td><td>Midwest Scientific</td><td>C15B</td><td></td></tr><tr>ניתוח חישובי של מערכת <td></td><td></td><td>ההפעלה דביאן</td><td>של תמונות זמן-lapse</td></tr><tr><td>גלוקוז בינוני/גבוה של Dulbecco עם 4 מ"מ L-גלוטמין ונתרן פירובט</td><td>Cytiva מדעי החיים</td><td>SH30243.01</td><td></td></tr><tr><td>EtOH, 100%</td> <td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Auto</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMAFD1000</td><td></td></tr><tr><td>EVOS Onstage Incubator</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMC1000</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק כלי EVOS על הבמה, צלחות מרובות בארות</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AMEPVH028</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר</td><td>עוברי קורנינג</td><td>35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>נקודה עדינה #5 מלקחיים מנירוסטה (x2)</td> <td>כלי מדע עדינים</td><td>11295-10</td> מכשיר <td>דיסקציה</td></tr><tr><td>אמבט חרוזים מעקר</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצטריפוגה, 1.5 מ"ל</td><td>Avant</td><td>2925</td><td></td></tr><tr><td>מספריים נירוסטה מיקרו-ניתוחים, ישר</td><td>Roboz</td><td>RS-5910</td><td>Dissection</td></tr><tr><td>NucBlue (Hoechst) Live Ready Tests</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R37605</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת סטרפטומיצין פניצילין, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>תוספת סיליקון, 2 בארות</td><td>Ibidi</td><td>80209</td><td></td></tr><tr><td>כף נירוסטה מחוררת קטנה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>MC17C</td><td>דיסקציה</td></tr><tr><td>קפיץ מספריים, 4 מ"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי 10 ס"מ</td> <td>קורנינג</td><td>430293</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי 12 בארות צלחות</td> <td>PR1MA</td><td>667512</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי 6 בארות צלחות</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>140675</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה</td> <td>סטרילית להעברת נורת פלסטיקThermoFisher Scientific</td><td>202-1S</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין, 0.25%</td> <td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד והדמיה בזמן-לשגות של תאי מזנשים הפליאטל העוברי הראשי של העכבר כדי לנתח תכונות תנועה קולקטיבית

Isolation and Time-Lapse Imaging of Primary Mouse Embryonic Palatal Mesenchyme Cells to Analyze Collective Movement Attributes

פיתוח החיך הוא תהליך דינמי, הכולל צמיחה אנכית של מדפי חיך דו-צדדיים ליד הלשון ואחריו גובה והיתוך מעל הלשון. פגמים בתהליך זה מובילים לחיך שסוע, מום מולד נפוץ. מחקרים אחרונים הראו כי גובה מדף פלטלי כרוך בתהליך שיפוץ שהופך את כיוון המדף מאנכי לאופקי. קשה ללמוד את תפקידם של תאי המדף המנשימליים בשיפוץ דינמי זה. ניתוח כמותי מבוסס הדמיה בזמן שימש לאחרונה כדי להראות כי תאי מזנכימלים הפליאטוניים עכבר ראשוניים (MEPM) יכולים לארגן את עצמם לתנועה קולקטיבית. ניתוחים כמותיים יכולים לזהות הבדלים בתאי MEPM מוטנטיים ממודל עכבר עם פגמים בגובה החיך. מאמר זה מתאר שיטות לבודד ולתרבות תאי MEPM מעוברי E13.5 - במיוחד להדמיה בזמן-לשגות- ולקבוע תכונות תאיות שונות של תנועה קולקטיבית, כולל אמצעים להיווצרות זרם, יישור צורה והתמדה של כיוון. הוא מניח שתאי MEPM יכולים לשמש מודל פרוקסי לחקר תפקידו של mesenchyme מדף פלטלי במהלך התהליך הדינמי של גובה. שיטות כמותיות אלה יאפשרו לחוקרים בתחום הקרניופאציה להעריך ולהשוות תכונות תנועה קולקטיבית בתאי שליטה ומוטנטים, אשר יגבירו את ההבנה של שיפוץ mesenchymal במהלך העלאת מדף פלטאלי. יתר על כן, תאי MEPM מספקים מודל תאים מזנכימלי נדיר לחקירה של תנועת תאים קולקטיבית באופן כללי.

ניתוח המדפים הפלטאליים מומחש באיור 1. רצף החתכים נועד למזער את החלקת הרקמה. לאחר הסרת הראש (איור 1A,B),הלסת התחתונה מוסרת (איור 1B,C). החתירה של החלק העליון של הראש (איור 1C, D) נעשית כדי לייצב את הרקמה כאשר היא ממוקמת הפוך ( איור1E) כדי לדמיין (איור 1E,קווים מנוקדים),צביטה (<s...

אנו מציגים פרוטוקול לבידוד ותרבות של תאים מזנכימליים הפליאטוניים של עכבר ראשוניים להדמיה של צמיחה דו-ממדית (2D) ובגידות לתיקון פצעים. אנו מספקים גם את המתודולוגיה לניתוח נתוני ההדמיה של זמן לשגות כדי לקבוע היווצרות זרם תאים תנועתיות כיוונית.

Development of the palate is a dynamic process, which involves vertical growth of bilateral palatal shelves next to the tongue followed by elevation and ...

פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים בתחום הקרניופאציאלי להשוות כמותית תכונות תנועה קולקטיבית בתאי שליטה ותאים מוטנטיים כאמצעי להבנת שיפוץ מזנכימלי במהלך העלאת מדף פלטאלית. השימוש בתאים מזנכימליים הפליאטוניים של עכבר ראשוניים ובהדמיה של זמן-לשגות מספקים שיטת פרוקסי נגישה להערכת דינמיקת העלאת מדף פלטלית. כדי לקצור קליפות פלטאליות מעובר עכבר, השתמש בכף מחוררת מעוקרת כדי למקם יום עוברי 13.5 עובר לתוך צלחת סטרילית 10 ס"מ מלא מדיום תרבות MEPM סטרילי תחת מיקרוסקופ סטריאו.לאחר עריפת ראש, הכנס קצה אחד של מלקחיים מס '5 מעוקרים לתוך הפה ממש בתוך הלחי ולדחוף את קצה המלקחיים עד שהוא יוצא מהחלק האחורי של הגולגולת. כוון את המלקחיים כך שהזרוע השנייה תרחף ממש מעל תעלת האוזן לפני שצבטים את המלקחיים שנסגרו כדי לחתוך את הרקמה. חזור על החתך בצד השני של הראש, המשך הליך לחתוך קמצוץ עד הלסת התחתונה, הלשון, ואת החלק הנחות של הגולגולת הוסרו, חושף את המדפים palatal.עם הראש מונח על צדו, למקם את קצות של זוג מספריים קטנים, סטריליים, נירוסטה מול ומאחורי הגולגולת רק על גובה העיניים של העובר לחתוך רק מעל העיניים כדי להסיר את הגולגולת של הגולגולת, יצירת משטח שטוח. לאחר מכן, למקם את הראש הפוך עם ההיבט העליון נח שטוח על החלק התחתון של המנה ולאתר את המדפים palatal, אשר צריך להיות גלוי כמו שני גשרים מוגבהים משני צדי החריץ המרכזי בחלק האחורי של הראש. כדי לאבטח את הראש לצלחת, הכנס קצה אחד של מלקחיים עדינים דרך הרקמה ליד אזור האף של הקדמי הראש למדפי palatal, והשני דרך הבסיס של הגולגולת אחורי אל המדפים palatal.הכנס את שתי הנקודות של זוג שני של מלקחיים חדים מאוד, עדינים לתוך הרקמה בבסיס המשטח לרוחב של המדף לאט ובזהירות לצבוט כדי לחתוך את הרקמה. חזור על החתכים לאורך בסיס המשטח המהודל של המדף ובקצוות הקדמיים והאחוריים של המדף כדי לנתק את המדף מהקשר שלו לראש, ואז הרם בעדינות את המדף, מה שהופך צביטות נוספות לפי הצורך כדי לשחרר לחלוטין את הקליפה מהרקמה שמסביב. כאשר המדף החיך השני הוסר באותו אופן, השתמש פיפטה העברת נורת פלסטיק סטרילית כדי להעביר את המדפים לתוך צינור microcentrifuge סטרילי 1.5 מיליליטר בכ 500 microliters של PBS על קרח.כדי להגדיר תרבית תא MEPM, כאשר כל המדפים נאספו, לשאוף PBS מבלי להפריע לרקמות ומיד להוסיף 200 microliters של 37 מעלות צלזיוס 0.25%טריפסין לכל שפופרת של רקמת מדף palatal. השתמש 1,000 פיפטה מיקרוליטר להצינור לזמן קצר את הרקמות כמה פעמים ולדגירה את הרקמות במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, pipetting לזמן קצר לאחר חמש דקות. בסוף הדגירה, pipette את הרקמות שוב לפני הוספת 800 microliters של תרבות MEPM מדיום לכל צינור וצנטריפוגה הצינורות כדי לאסוף את התאים.לאחר שאיפת supernatant, resuspened הכדורים במיליליטר אחד של מדיום תרבית MEPM טרי לכל צינור, צלחת התאים לתוך בארות בודדות של צלחת תרבית רקמות שש היטב המכיל שני מיליליטר לבאר לסך סופי של שלושה מיליליטר לבאר, ולאחר מכן לאפשר לתאים לדבוק במשטח הפלסטיק במשך 12 שעות בחממה תרבית תאים סטרילית. כדי להגדיר תפילת הגירה קולקטיבית דו-ממד, הסר את החלק העליון של תוספת סיליקון סטרילית אחת בעלת שתי בארות לגובה של כמילימטר אחד לניתוח כל דגימה ולהשתמש במלקחיים סטריליים כדי לפלס את התוספות המקוצרות והסטרילית של שתי בארות למרכז בארות בודדות של צלחת בעלת שש בארות. לחץ למטה לאורך כל הקצוות כדי להבטיח כי התוספות דבקות באופן מלא תחתיות באר וזרע 300 MEPM תאים למילימטר מרובע של מוסיף סיליקון מקוצר בנפח כולל של 40 עד 50 microliters של מדיום תרבות MEPM לתוך כל להוסיף עבור דגירה לילה בחממת תרבית התא.כדי להגדיר תיקון פצעים, השתמש במלקחיים סטריליים כדי למקם סיליקון סטרילי אחד ללא שינוי שתי בארות במרכז באר אחת של צלחת שש בארות לכל דגימה ולחץ בחוזקה על קצוות ההוספה כדי לחבר את ההוספה ללוח התרבות. ואז לזרוע 1, 400 תאים למילימטר מרובע ב 100 microliters של תרבית MEPM מדיום לתוך כל להוסיף ולדגירה את התאים במשך 48 שעות במדיום תרבית התא. בעת ביצוע נדידת נדידה קולקטיבית דו-מימדית, זריעת התאים בתוספות סיליקון דו-שלבי בצלחת תרבית גדולה בדרך כלל מספקת צפיפות תאים טובה יותר להדמיה.טבעות קטנות בהדפסה תלת-ממדית הממוקמות בצלחת 35 מ"מ יכולות לשמש גם לניתוח תנועתיות 2D. לבדיקות לתיקון פצעים, התאים גדלים בתוספות סיליקון של שתי בארות עד למפגש גבוה. לאחר מכן, התוספות מוסרות והפצע מדמה עד לסגירת מעגל.מסלולי MEPM הם מתמידים ואת הכיוון של תנועתיות התא נשמר במשך כמה שעות. ההעתקה הממוצעת לעומת ניתוח הזמן מצביעה על כך שההתמדה בצורת תזוזה היא פרופורציונלית לזמן שחלף. ניתוח זרימה של נתוני תנועתיות מגלה כי אשכולות תאי MEPM נעים שיתוף הם כ 300 מיקרון בגודל.הבדל תנועתיות עמוק בין סוג פראי ותאי MEPM מוטנטיים הוא ציין גם. הליך זה יכול לשמש על קווי עכבר מהונדסים שונים ולטפל בתאי MEPM עם ריאגנטים ביוכימיים שונים כדי לחקור את השפעתם על תנועת התאים. התמקדנו בתאי מזנכיים הפליאתיים העיקריים, אך ניתן להשתמש בהדמיה בזמן ובניתוחים כמותיים כדי לחקור את תכונות ההעברה של כל סוג תא ססמה בתהליכים התפתחותיים דינמיים.

isolation-time-lapse-imaging-primary-mouse-embryonic-palatal

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מאמר זה מתאר תיוג פני...

מעקב אחר דפורמציות המוךפו&quot;גנטי שהולך רקמות בעובר צ&#39;יק מוקדם

מיטוזה העצבית היא פרמטר קריטי הנוירוגנזה. חלק גדול מההבנה של מיטוזה העצבית שלנו מבוסס על ניתוח של רקמה קבועה. הדמיה בשידור חי בפרוסות מוח עובריים היא טכניקה צדדי כדי להעריך מיטוזה עם רזולוציה של זמן ומרחב גבוה בסביבה מבוקרת.

הדמיה חיה של מיטוזה בCortex עכבר עוברי פיתוח

הדמיה חיה של שבלול האוזן של יונקים העובריים היא מאתגרת, כי התהליכים התפתחותיים ביד פועלים על שיפוע זמני על עשרה ימים. כאן אנו מציגים שיטה culturing ולאחר מכן ההדמיה רקמות explant השבלול עוברית שנלקחו מעכבר כתב ניאון בחמישה ימים.

לטווח ארוך זמן פקיעת הדמיה של Explants שבלול העכבר

פיתחנו פרוטוקול ליצירת אגרגטים של תאי גזע עובריים של עכברים המציגים ארגון עצמי, שבירת סימטריה והתארכות במקביל להתפתחות צירית. טכניקה זו מאפשרת לחקור תהליכי התפתחות ציריים ויצירת סוגי תאים שאחרת קשה לבצע בתרבית חד-שכבתית.

דור של אגרגטים של תאי עכבר גזע עובריים שצג שבירת סימטריה, קיטוב והתנהגות קולקטיבית מתהווה<em&gt; במבחנה</em

כאן מוצג כיצד לעקוב ולכמת תהליכי התפתחות ב-C. elegans. השיטות המוצגות מבוססות על כלי קוד פתוח הניתנים ליישום בקלות. הוא מודגם כיצד לשחזר מודלים תלת מימדיים בצורת תא, כיצד לעקוב באופן ידני אחר מבנים תת-תאיים וכיצד לנתח זרימת התכווצות קליפת המוח.

מעקב וכימות תהליכים התפתחותיים ב<em&gt; C. elegans</em&gt; שימוש בכלי קוד פתוח

פרוטוקול זה מציג שיטה לבצע מתחיל מתא בודד כמותי, בניתוח באתרו של ביטוי חלבון ללמוד מפרט השושלת בעוברים preimplantation העכבר. הנהלים הדרושים לאיסוף blastocysts, כל הר זיהוי immunofluorescent של חלבונים, הדמיה של דגימות על מיקרוסקופ confocal, ופילוח גרעיני וניתוח תמונה מתוארת.

ניתוח כמותי של ביטוי חלבון לחקר מפרט Lineage עכבר preimplantation עוברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול הדמיה חיה של היתוך חיך העכבר העכבר באמצעות מיקרוסקופיה confocal. פרוטוקול זה ניתן להשתמש בשילוב עם מגוון רחב של שורות העכבר כתב פלואורסצנטי, עם מעכבי נתיב עבור תובנה מכניסטית. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם עבור הדמיה חיה במערכות התפתחותיות אחרות.

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

אנו מתארים את פעולות השירות עבור תיוג פלורסנט tangentially גידול תאים על-ידי אלקטרופורציה ולאחר עבור הדמיה בצילום מואץ של התנועה תאים עם תוויות בתרבות שטוח-הר כדי להמחיש נודדות תא התנהגות tectum אופטיים לפתח הבחורה .

ויזואליזציה של נדידת תאים העוסקות ב Tectum אופטיים לפתח הבחורה

פרוטוקול זה מתאר את הזיהוי של נדידת תאי גזע שלד periosteal בתיווך CCL5 בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופיה תוך-וינטלית חיה של בעלי חיים.

הדמיה בזמן אמת של הגירה הנגרמת על ידי CCL5 של תאי גזע שלד Periosteal בעכברים

אנו מציגים פרוטוקול מפורט לתרבית והדמיית עוברי עכבר המאפשר הדמיה תלת ממדית + זמן של תאי אב לבביים. ערכת כלי וידאו זו מתייחסת למיומנויות המפתח הנדרשות להדמיה חיה מוצלחת שאחרת קשה לרכוש מפרסומים של טקסט בלבד.

הדמיה חיה של אבות לב מוקדמים בעובר העכבר

במהלך התפתחות קליפת המוח, נוירונים ותאי גלייה מקורם באזור החדר המצפה את החדר ונודדים לעבר פני המוח. גנים רבים מעורבים בתהליך זה. פרוטוקול זה מציג את הטכניקה לדימות בהילוך מהיר של נוירונים נודדים ואבות גלייה.

דימות בהילוך מהיר של נוירונים נודדים ואבות גלייה בפרוסות מוח עובריות של עכבר

חקור בידוד ותרבית של תאי מזנשים פליאטליים עובריים ראשוניים בעכבר לניתוח תנועה קולקטיבית. שיטת הדמיה בזמן-לשגות מאפשרת מחקר דינמיקת התפתחות הפה והגולגולת.

בידוד והדמיה בזמן-לשגות של תאי מזנשים הפליאטל העוברי הראשי של העכבר כדי לנתח תכונות תנועה קולקטיבית

גלה סרטונים נוספים