הערכת הסיכון האגרוכימי למלכות דבורת הדבש המויזות

פרוטוקול זה פותח כדי לשפר את ההבנה כיצד אגרוכימיקלים משפיעים על דבורת הדבש (Apis mellifera) רבייה על ידי יצירת שיטות לחשוף מלכות דבורי דבש ומטפלים העובדים שלהם אגרוכימיקלים בפיקוח, הגדרה מעבדה וניטור קפדני של התגובות הרלוונטיות שלהם.

לחשיפה אגרוכימית יכולות להיות השפעות משמעותיות על כל חברי מושבת דבורי הדבש, כולל החבר החשוב ביותר, מלכות. אבל עד לאחרונה, כמה כלים היו זמינים ללמוד את ההשפעות האלה. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לחשוף מלכות לאגרוכימיקלים בתנאים מבוקרים המדמים תנאים שהם עלולים לחוות בתחום.

זה די קל להפריע התנהגויות הטלת ביצים מלכת דבורי דבש, ולכן חשוב לטפל בעובדים ומלכות לפני ובמהלך הניסוי. הדגמת נהלים אלה יהיו, איימי פלויד ואלייזה ליטסי, טכנאי מעבדה ביחידה לחקר בריאות המינים הפולשים והמאביקים, מעבדת המחקר של דבורי הדבש. כדי להתחיל, להרכיב כלובי ניטור המלכה, או QMCs, על ידי החדרת לוחות הדלת, ולאחר מכן להכניס את המלכה לא נכלל בדלת חדר האכלה מעל תא ההאכלה, כדי למנוע מהמלכה להיכנס ויצירת קשר עם הדיאטה המטופלת.

הוסף ELP יחיד. אין להוסיף צינורות הזנה עד לאחר שהעובדים נוספו לכלוב, וכסו באופן זמני את ארבעת חורי המאכילים בנייר דבק באיכות מעבדה. לאחר איסוף ודגורה של מסגרות מסרק השעווה המכילות את הגוזל העובד הסגור ממושבות דבורי הדבש, הברישו את הדבורים הסגורות למיכל פתוח מרופד בצבע מחסום חרקים, כדי למנוע מהדבורים לזחול החוצה.

מוסיפים לפחות 50 דבורים לפי משקל לתא הטלת הביצים של כל QMC. כדי להבטיח כי מאגר גנטי מגוון הוא הציג, להשיג מספר דומה של דבורים עובדים משלוש מושבות לפחות, ולאפשר להם לערבב לפני הוספת דבורים QMCs. להוסיף את המזינים המכילים תמיסת סוכרוז, מים ותוסף אבקה.

השתמש במלכות שנרכשו ממגדל מסחרי תוך 48 שעות מקבלת. בזמן שהמלכה עדיין בתוך כלוב המשלוחים, הניחו אותו בשקית ניילון שקופה. לאחר מכן הניחו קצה אחד של צינור פלסטיק המחובר למיכל גז דו תחמוצת הפחמן בתוך השקית, ופתחו בעדינות את שסתום המיכל כדי לאפשר לגז הפחמן הדו-חמצני לזרום.

כאשר השקית מנופחת בגז, סגור בו זמנית את שסתום המיכל והחזק את השקית סגורה כדי ללכוד את הגז בפנים. שמור את התיק סגור במשך 30 שניות או עד המלכה הפסיקה לנוע. הסר את המלכה על ידי פתיחת כלוב המשלוח ברגע שהמלכה נצפתה מחוסרת הכרה.

פתחו חלקית את הדלת לתא הטלת הביצים, הניחו בעדינות את המלכה חסרת ההכרה בפנים וסגרו את המכסה. הוסף את ה- ELP השני לכל QMC. הנח פיסת סרט מעבדה על פני החלק העליון של שני ELPs כדי למנוע מהם להפריד ממסגרת QMC, ולמנוע מעובדים לצאת מהכלוב.

מניחים את הכלובים באינקובטור כהה עם תנאים סביבתיים יציבים של 34 עד 35 מעלות צלזיוס, ו 50-70% לחות יחסית. כדי לנהל את הדיאטה מעורבב עם אגרוכימיקלים, להכין את פתרונות המלאי של אגרוכימיה בממס מתאים, כגון אצטון, בריכוז שניתן להוסיף לתזונה כדי להשיג את הריכוז הסופי הרצוי של אגרוכימיה של עניין. לנהל את הטיפולים האגרוכימיים בתמיסת סוכרוז, תוסף אבקה מסחרי, או שניהם.

הכן את הדיאטה הניסיונית לשימוש באותו יום, על ידי הוספת כמות מתאימה של פתרון מלאי לטמפרטורת מצוננת או בחדר, פתרון סוכרוז 50%. מערבבים היטב על ידי מערבולת במהירות בינונית. עבור תוספי אבקה, להוסיף כמות מחושבת של פתרון מלאי אגרוכימיקלים פתרון סוכרוז, מערבולת ביסודיות לפני הוספת אותו תוספת אבקת.

הוסף דיאטה צינורות מאכילים להקליט את משקולות המאכיל לפני הצבתם QMC. כדי לכמת את הטלת הביצים, להתחיל על ידי הסרת QMCs מן האינקובטור. בדוק את הגב של ELPs ברור, אם ביצים קיימות, להסיר את לוח הדלת מול צלחת העניין.

הסר את הקלטת מעבר לאלפים והחליקו את לוח הדלת בין ה- ELP לבין דבורים בתוך ה- QMC. עם לוח הדלת במקום, להסיר את ELP ולספור ולתעד את מספר הביצים בתוך תאי ELP. הסר את הביצים על ידי הקשה על קצה הצד הפתוח של ELP כלפי מטה, על משטח קשה.

ברגע שהביצים נופלות, החליפו את ה-ELP הריק ב- QMC. הסר בעדינות והחלף את לוח הדלת שמאחורי ה- ELP בצד החיצוני של ה- QMC. חזור על הפעולה לפי הצורך עם ELP השני והחלף את הקלטת על פני QMC בסיום.

כדי לפקח על צריכת המזון, להחליף את המזון עם דיאטה מוכנה טרי כל יומיים. הכן צינורות הזנה חדשים ושקל אותם לפני תחילת פעילויות ניטור ייצור הביצים. החלף צינורות ישנים עם חדשים, ושוקל צינורות ישנים לפני להיפטר מהם.

השווה את המשקל הסופי של צינור ההזנה ותזונה ללא תזרים למשקל של אותו צינור, כדי להעריך את צריכת הדיאטה. בדוק פעם ביום כדי לוודא שהמאכילים לעולם אינם ריקים. אם צינור מאכיל ריק או כמעט ריק, להסיר אותו, למלא אותו, להקליט את המשקל של הצינור לפני ואחרי, ולהוסיף את ההבדל לצריכת דיאטה של יומיים הכולל עבור QMC.

בנקודה שנבחרה במהלך ניסוי QMC, הסר את ELPs המכיל ביצים טריות שהונחו מן QMC כפי שתואר קודם לכן, אבל לא להוציא את הביצים מן ELP. מכסים תחילה את ה-ELP עם אטם לוחית PCR, ולאחר מכן מכסה מיקרופלסטיק אוניברסלי, ומניחים אותו בתוך חיטוי עם תמיסת אשלגן גופרתי רווי. להעריך את שיעורי הבקיעה כ 78 שעות לאחר הסרת ELPs מן QMC.

זחל בצורת C בתחתית התא מעיד על אירוע בקיעה מוצלח. אם ה- QMCs היו מאוכלסים בעובדים עודפים, דגמו את דבורי העובד בנקודת זמן שנבחרה במהלך הניסוי כדי להעריך את השינויים הנגרמים על ידי הטיפול בפיזיולוגיה שלהם. לפני הדגימה, הנח לוח דלת בין ELP לבין פנים ה- QMC, והסר את ה- ELP.

בזהירות, הרם את לוח הדלת כ 0.5 ס"מ מבסיס הכלוב, ולהסיר דבורה עובד מתוך QMC באמצעות פינצטה במשקל נוצה. לניתוח ביטוי גנים, הצמד להקפיא את דבורים בחנקן נוזלי ולאחסן אותם ב 80 מעלות צלזיוס. שמור על דבורה שנאספה לניתוח מעקב, ולחזור על תהליך זה עד מספר הדגימות הרצוי נאסף.

שינויים תזונתיים הקשורים לטיפול imidacloprid בספירת הביצים היומית הוערכו על ידי יישום יומן פואסון יומן כללי משוואת הערכה כללית, עם מטריצת מתאם רגרסיבית אוטומטית. ייצור הביצים היומי היה נמוך משמעותית ב- QMCs בהתחשב בתוספת אבקה ו סוכרוז המכיל 50 חלקים למיליארד imidacloprid. השפעה תלוית מינון נצפתה על המספר הכולל של ביצים המיוצרות בכל QMC לטיפולים imidacloprid מנוהל הן סוכרוז תוספת אבקה.

עם הירידה הגדולה ביותר שנצפתה QMCs האכיל 50 חלקים למיליארד imidacloprid, ואחריו 10 חלקים למיליארד תוספת אבקה בתוספת סוכרוז. אין הבדל בסך הביצים המיוצרות נצפתה בין שליטה ו QMCs האכיל 10 חלקים למיליארד imidacloprid ותוספת אבקה לבד. תוספת אבקה, מים וצריכת סוכרוז נרשמו כל 48 שעות במשך 10 או 12 ימים.

התעריפים היומיים של צריכת סוכרוז גדלו באופן משמעותי ככל שהניסוי התקדם, אך שיעורי צריכת תוספי האבקה ירדו. שיעורים גבוהים יותר של צריכת אבקה נצפו כאשר 10 חלקים למיליארד imidacloprid נוהלו תוספת אבקה בלבד. והשיעור ירד כאשר 10 או 50 חלקים למיליארד נוהלו תוספת אבקה ופתרון סוכרוז יחד.

שימוש בדבורים בנות יום הוא קריטי כדי להבטיח את קבלת המלכה ולהפחית את העובדים על הפעלה מחדש. גם קריטי, הוא טיפול זהיר של המלכה ולשמור על הכלובים בסביבה יציבה.