Name: נתיחת השק האנדולימפטי מעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: חקור שיטת ניתוח מיקרוסקופית של השק האנדולימפטי בעכברים לחקר אוזן פנימית. הפרוטוקול מאפשר בידוד רקמה עדינה לניתוח תעתיקומי ואימונוהיסטוכימיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dror, A. A., Brownstein, Z., Avraham, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+human+and+mouse+genetics+reveals+pendrin+function+in+hearing+and+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Integration of human and mouse genetics reveals pendrin function in hearing and deafness.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 28 (3), 535-544 (2011).</li>
<li>Reardon, W., CF, O. M., Trembath, R., Jan, H., Phelps, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+vestibular+aqueduct%3A+a+radiological+marker+of+pendred+syndrome%2C+and+mutation+of+the+PDS+gene%5BTitle%5D)+AND+%22QJM%22%5BJournal%5D)">Enlarged vestibular aqueduct: a radiological marker of pendred syndrome, and mutation of the PDS gene.</a> QJM. 93 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Griffith, A. J., Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss+associated+with+enlargement+of+the+vestibular+aqueduct%3A+mechanistic+insights+from+clinical+phenotypes%2C+genotypes%2C+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Hearing loss associated with enlargement of the vestibular aqueduct: mechanistic insights from clinical phenotypes, genotypes, and mouse models.</a> Hearing Research. 281 (1-2), 11-17 (2011).</li>
<li>Gurkov, R., Pyyko, I., Zou, J., Kentala, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+Meniere%27s+disease%3F+A+contemporary+re-evaluation+of+endolymphatic+hydrops%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">What is Meniere's disease? A contemporary re-evaluation of endolymphatic hydrops.</a> Journal of Neurology. 263, Suppl 1 71-81 (2016).</li>
<li>Eckhard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+channel+proteins+in+the+inner+ear+and+their+link+to+hearing+impairment+and+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Water channel proteins in the inner ear and their link to hearing impairment and deafness.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (5-6), 612-637 (2012).</li>
<li>Choi, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+enlarged+vestibular+aqueducts+defines+temporal+requirement+of+Slc26a4+expression+for+hearing+acquisition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mouse model of enlarged vestibular aqueducts defines temporal requirement of Slc26a4 expression for hearing acquisition.</a> Journal of Clinical Investigation. 121 (11), 4516-4525 (2011).</li>
<li>Miyashita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+FXYD6+in+the+endolymphatic+sac+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Presence of FXYD6 in the endolymphatic sac epithelia.</a> Neuroscience Letters. 513 (1), 47-50 (2012).</li>
<li>Royaux, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+and+functional+studies+of+pendrin+in+the+mouse+inner+ear+provide+insight+about+the+etiology+of+deafness+in+pendred+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Localization and functional studies of pendrin in the mouse inner ear provide insight about the etiology of deafness in pendred syndrome.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 4 (3), 394-404 (2003).</li>
<li>Kim, H. M., Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+stretching+and+luminal+acidification+lead+to+a+retarded+development+of+stria+vascularis+and+deafness+in+mice+lacking+pendrin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell stretching and luminal acidification lead to a retarded development of stria vascularis and deafness in mice lacking pendrin.</a> PLoS One. 6 (3), 17949(2011).</li>
<li>Dahlmann, A., von During, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endolymphatic+duct+and+sac+of+the+rat%3A+a+histological%2C+ultrastructural%2C+and+immunocytochemical+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The endolymphatic duct and sac of the rat: a histological, ultrastructural, and immunocytochemical investigation.</a> Cell and Tissue Research. 282 (2), 277-289 (1995).</li>
<li>Everett, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+mouse+Pds+provides+insight+about+the+inner-ear+defects+encountered+in+Pendred+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of mouse Pds provides insight about the inner-ear defects encountered in Pendred syndrome.</a> Human Molecular Genetics. 10 (2), 153-161 (2001).</li>
<li>Miller, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+V-ATPase+B1-subunit+promoter+drives+expression+of+Cre+recombinase+in+intercalated+cells+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The V-ATPase B1-subunit promoter drives expression of Cre recombinase in intercalated cells of the kidney.</a> Kidney International. 75 (4), 435-439 (2009).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Wang, L., Jiang, H., Brigande, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+the+developing+mouse+inner+ear+by+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to the developing mouse inner ear by in vivo electroporation.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e3643(2012).</li>
<li>Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+mouse+neural+stem+cell+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Culture of mouse neural stem cell precursors.</a> Journal of Visualized Experiments. (2), 152(2007).</li>
<li>Honda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+underlying+fluid+absorption+by+the+developing+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture underlying fluid absorption by the developing inner ear.</a> Elife. 6, (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>EDTA 0.5 M</td><td>Crystalgen</td><td>221-057</td><td></td></tr><tr><td>מזרק טוברקולין 1 מ"ל עם צלחת זכוכית נקודתית 27G x 13 מ"מ</td><td>BD</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>9 בארות</td><td>Pyrex</td><td>13-748B</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555-phalloidin מצומד</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A34055</td><td></td></tr><tr><td>עורק&nbsp; מספריים&nbsp;- קצה כדורי</td><td>Fine Science Tools</td><td>14080-11</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3059</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה לצילום תמונות באור תקרית</td><td>Leica</td><td>DFC 495</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה לצילום תמונות פלורסנט</td><td>Leica</td><td>DFC 7000 GT</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 15 מ"ל</td> צינורות <td></td> צנטריפוגה 430053 <td></td><td>קורנינג</td></tr><tr><td> 50 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>430829</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז/דיספאז</td><td>רוש</td><td>10269638001</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית</td><td>קורנינג</td><td>2940-223</td><td></td></tr><tr><td>דומונט #4 מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11241-30</td><td></td></tr><tr><td>דומונט #5 מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>מספריים בון עדינים במיוחד</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>אלטרנטיבה: מספריים מיקרו חיתוך עדינים במיוחד; ישר; נקודות חדות; אורך להב 20 מ"מ; 3 1/2 אינץ' אורך כולל</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>עיזים נגד ארנב Alexa Fluor 488-נוגדן משני מצומד</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>MicroSlides Superfrost</td><td>VWR</td><td>48311-702</td><td></td></tr><tr><td>שייקר אורביטלי, למשל מיני שייקר דייגר</td><td></td><td>980275</td><td></td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד (PFA) 16% מיקרוסקופ אלקטרונים תמיסה מימית</td><td> Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט (10X) pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Mountant עם DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>ארנב נוגדנים נגד פנדרין</td><td>RRID</td><td></td><td>:AB_2713943, PB826 (Choi et al., 2011)</td></tr><tr><td>מלקחיים טבעתיים</td><td>כלים</td> <td>מדעיים עדינים11106-09</td><td></td></tr><tr><td>שייקר נדנדה, למשל GyroMini</td><td>Labnet</td><td>S0500</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ מצויד בלהבי קצה יחיד מנירוסטה PlanApo 1.0x אובייקטיבי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, .009 אינץ'</td> <td>GEM Personna</td><td>62-0176</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 60 מ"מ</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>לק</td><td></td><td></td> שקוף<td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>אקרוס אורגניקס</td><td>32737-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

נתיחת השק האנדולימפטי מעכברים

Dissection of the Endolymphatic Sac from Mice

כל שלב של מיקרודיסקציה זו של שק אנדולימפטי מסוג פרא מעכבר יום 5 (P5) לאחר הלידה מפורט בווידיאו המשויך, ותמונות של שלבי המפתח של הדיסקציה והפתיחה של השק האנדולימפטי מוצגות באיור 1 ובאיור 2. 
תוצאות מייצגות של הנתיחות של השק האנדולימפטי עם פלואורסצנטיות tdTomato ביום העוברי 16.5 (E16.5), P5 ו-P30, בעקבות פרוטוקול זה, מוצגות באיור 3 ובאיור משלים 1 ובאיור משלים 2. באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה עם פלואורסצנטיות, ניתן לדמיין בקלות את השק האנדולימפטי בגולגולת לאחר הסרת המוח בעכברים הנושאים את הטרנסגן Tg(ATP6V1B1-Cre) בנוכחות המדווח של ביטוי Cre: Ai9 (LSL-RCL-tdT) (ראו איור 3A-B, ואיור משלים 1 לתמונות שצולמו באור אירוע ופלואורסצנטיות tdTomato של השק האנדולימפטי בשלבים שונים של הדיסקציה). בעכברים האלה, Cre מבוטא כפסיפס בתאים לכל אורך השק והצינור האנדולימפטי (איור 3, ראו גם איור משלים 2 להדמיה של השק האנדולימפטי עם לעומת ללא כתב פלואורסצנטי). אף על פי שהביטוי של כתב זה אינו ספציפי עבור הביטוי האנדוגני של Atp6v1b1, אשר מוגבל לתאים עשירים במיטוכונדריה של שק אנדולימפטי16, אחד משני סוגי התאים של אפיתל זה (איור 5E), זהו כלי עזר מועיל לזהות ולנתח את השק האנדולימפטי.
אוזניים פנימיות שנותחו ממודל עכברי להגדלת אמת שיווי המשקל מוצגות באיור 4. בהשוואה להמלטות הביקורת, השקים האנדולימפטיים והתעלות של עכברים החסרים SLC26A4 (פנדרין) מוגדלים.
תמונות מייצגות של אימונוהיסטוכימיה של שק אנדולימפטי שלם עם ובלי רקמת לחמית מוצגות באיור 5. תוצאות של אימונוהיסטוכימיה של שק אנדולימפטי פתוח של עכבר מסוג P5 מוצגות גם הן (איור 5F-G). השק האנדולימפטי מורכב משכבה אחת של אפיתל מקופל במבנה בצורת פאוץ', המכיל את הלומן אנדולימפה שלו. אפיתל זה מורכב משני סוגי תאים, תאים עשירים במיטוכונדריה ותאים עשירים בריבוזום (איור 5E). שק אנדולימפטי שלם ישוטח מכיוון שהאנדולימפה כבר לא קיים. השק יופיע כשתי שכבות משולבות של אפיתל, מה שיקשה על קביעת לוקליזציה תת-תאית של חלבונים המבוטאים באפיתל זה. על ידי פתיחת השק האנדולימפטי, ניתן לדמיין בקלות את אפיתל השכבה הבודדת ולקבוע את ההתפלגות היחסית של החלבונים המעניינים, ביחס ללומן השק האנדולימפטי, באופן סופי יותר. אפיקל פוטנציאלי (לומינלי, היכן שהאנדולימפה יהיה) לעומת העשרה בסיסית של חלבונים אלה ניתן לקביעה מדויקת יותר. לדוגמה, SLC26A4 מועשר בצד האפי של תאים עשירים במיטוכונדריה (איור 5F).
<img alt="דיאגרמות דיסקציה של האוזן הפנימית, מיפוי מפורט של שבלול ועצבים, מערך מחקר אנטומי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1. דיסקציה שלמה של השק האנדולימפטי של עכבר מסוג פרא ביום 5 שלאחר הלידה (P5). (A) סכמטיות של המבוך הקרומי של אוזן פנימית מפותחת של עכבר מפותח (מימין). המיקום של השק האנדולימפטי, ואת השבלול ואת מבנים שיווי המשקל מסומנים. נתון זה שונה מ- Honda et al.16. (B) חתך אמצע הקשת המציג את הגולגולת השמאלית של ההמי. המיקום של השק האנדולימפטי מצוין (חץ). (O, עורפית; F, חזיתית) (C) קפסולה אוטית יחד עם החלק הקשקשי של העצם הרקתית. (D) ציוני דרך חשובים על גבי התיבה המנוקדת בלוח C. (ES, שק אנדולימפטי; ED, צינור אנדולימפטי; VA, אמת שיווי משקל; ASC, תעלה חצי עגולה קדמית; PSC, תעלה חצי עגולה אחורית; CC, crus נפוץ; SS, סינוס סיגמואיד) (E) המחשה סכמטית של חתך הרוחב יחד עם הקו הלבן הרציף בלוח D דרך השק האנדולימפטי. הצד הפרוקסימלי של השק האנדולימפטי מכוסה בתעלה גרמית הנקראת אמת שיווי המשקל, יחד עם הצינור האנדולימפטי. בצד הדיסטלי, השק האנדולימפטי, מוקף ברקמת הלחמית (CT), משתרע ובולט לחלק החיצוני של המבוך הגרמי והוא דחוק בין הסינוס הדורה מאטר (DM) והסינוס הסיגמואיד עם החלק הקשקשי של העצם הטמפורלית (שחפת). (F) מחט דקה משמשת לחיתוך סביב השק האנדולימפטי (בעקבות הקווים הצהובים המנוקדים בלוח D). (G) התכשיר מוסר בזהירות מהעצם הרקתית על ידי החזקת הרקמה במיקום המוצג בכוכבית (*, מוצג גם בלוח E) וקילוף שלה. (H) שק אנדולימפטי שלם מבודד עם רקמות מסביב. (I) גרסה סכמטית של השק האנדולימפטי המבודד הזה עם הרקמות שמסביב. (J) שק אנדולימפטי מבודד ללא רקמות מסביב. פסי קנה מידה: 2 מ"מ (B), 1 מ"מ (J). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="סדרת דיסקציה, חשיפה לוושט, דיאגרמות אנטומיות, דגימות רקמות, כלים כירורגיים בשימוש." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> איור 2. דיסקציה של השק האנדולימפטי הפתוח של עכבר מסוג P5 פראי. (A) בשלב 2.4, קו החתך על אמת שיווי המשקל ממוקם מעט קדמי (קו אדום מקווקו) כדי לבצע חתך לתוך לומן השק האנדולימפטי. (B) החזיקו את חלק הגבעול של התכשיר, הכניסו מחט באורך 27 מד לתוך הלומן, והזיזו אותה כדי לחתוך את השק האנדולימפטי לשתי יריעות. (C) איור סכמטי של לוח B. (D) החזיקו את קצה כל יריעה במלקחיים והפרידו ביניהן. (E) איור סכמטי של לוח D. (F) השק האנדולימפטי מופרד לשני יריעות, כולל האפיתל והרקמות הסובבות אותו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="התפתחות מוח עכבר, מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, שלבי E16.5 עד P30, הדמיית רקמות עצביות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig3v3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3. דיסקציה של R26LSL-RCL-tdT/+; Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn עכבר שק אנדולימפטי ב-E16.5, P5 ו-P30. כל התמונות המוצגות מראות פלואורסצנטיות tdTomato המתקבלת באמצעות סטריאומיקרוסקופ עם מטרה 1 x מצויד לזיהוי של פלואורסצנטיות tdTomato. (א, ב) חתך אמצע הקשת של הגולגולת של E16.5 R26LSL-RCL-tdT/+; עכבר Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn לפני (A) ואחרי (B) הסרת חצי מוח. פלואורסצנטיות של tdTomato מתארת את מיקום האוזן הפנימית. השק האנדולימפטי נראה בקלות גם ללא דיסקציה (ראש חץ). (ג, ה, ז) אוזניים פנימיות מבודדות מעכברי E16.5, P5 ו-P30, בהתאמה. (ד, ו' ו-ח') תמונות הגדלה גבוהות יותר של השקים והתעלות האנדולימפטיים המיקרו-חתוכים המתאימים. ב-P30, הצינור האנדולימפטי עטוף בעצם ולכן קשה במיוחד לבודד אותו. פסי קנה מידה: 2 מ"מ (A, B, C, E, G), 500 מיקרומטר (D, F, H). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig3v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="שני חלקי האוזן הפנימית, Slc26a4+/- ו-Slc26a4−/-, מוצגים בתמונת מיקרוסקופ למחקר גנטי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> איור 4. אנטומיה גסה של הקפסולה האופטית עם שק אנדולימפטי מוגדל. אוזניים פנימיות של עכברי Slc26a4+/- (משמאל) ו-Slc26a4-/- (מימין) ב-P105. אמת שיווי המשקל והשק והתעלה האנדולימפטיים (קווים מנוקדים שחורים) מוגדלים בעכבר Slc26a4-/- בהשוואה לאלה שבעכבר Slc26a4+/- . סרגל קנה מידה: 2 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="בדיקת אימונופלואורסצנטית, חלבוני SLC26A4 ו- ACTB, דיאגרמת תאי אפיתל, תוצאות מיקרוסקופיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62375/62375fig5v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> איור 5. ביטוי SLC26A4 של תאים עשירים במיטוכונדריה באפיתל השק האנדולימפטי ב-E16.5 וב-P5. (א, ב) שק אנדולימפטי מבודד מעכבר E16.5 המסומן בנוגדן אנטי-SLC26A4 (ירוק) ופאלואדין המסומן β-אקטין (ACTB, אדום). (C) תמונה בהגדלה נמוכה של שק אנדולימפטי פתוח מעכבר P5 המסומן בנוגדן אנטי-SLC26A4 (ירוק). Phalloidin (ACTB, אדום) ניתן להשתמש כדי להדגיש את נוכחותו של השק האנדולימפטי, כמו גם את רקמת הלחמית סביבו. (D) שק אנדולימפטי מבודד המסומן בנוגדן אנטי-SLC26A4 (ירוק). (E) המחשה סכמטית של אפיתל השק האנדולימפטי המדגישה את נוכחותם של שני סוגי תאים: התאים העשירים במיטוכונדריה, שפני השטח האפיים מכוסים במיקרוווילי, והתאים העשירים בריבוזום. (פ-ג) תמונות בהגדלה גבוהה של אפיתל שק אנדולימפטי ב-P5, לאחר שהשק האנדולימפטי נפתח ותויג בנוגדן אנטי-SLC26A4 (ירוק) ופאלואדין (ACTB, אדום). תמונה מייצגת ברמת הממברנה האפיקלית מוצגת ב-G, וחתך רוחב משוחזר מערימת z ברמת הקו הלבן המנוקב מוצג ב-F. גרעין התאים מסומן ב-DAPI (כחול). מוטות קנה מידה: 100 מיקרומטר (A, B); 200 מיקרומטר (C, D) ; 20 מיקרומטר (F, G). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/62375fig5v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
תרשים משלים 1. תאורת אירוע ותמונות פלואורסצנטיות tdTomato תואמות של P5 R26LSL-RCL-tdT/+; Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn אוזן פנימית של עכבר בשלושה שלבים של הדיסקציה. ניתן לדמיין בקלות את השק והצינור האנדולימפטי באמצעות פלואורסצנטיות tdTomato. (א-ב) אזור האוזן הפנימית בחלק האחורי של חצי גולגולת שלמה של P5 R26LSL-RCL-tdT/+; עכבר Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn. (ג-ד) הסרת העור וחלק מהגולגולת מאפשרת הדמיה טובה יותר של אזור השק האנדולימפטי. (ה, ו) אוזן פנימית מבודדת עם השק האנדולימפטי שעדיין קשור לרקמת הלחמית. (א, ג, ה) תמונות שצולמו באור אירוע. (B, D, F) TDTOMATO FLUORESCENCE של הרקמה המתאימה. פסי קנה מידה: 2 מ"מ (A-B), 1 מ"מ (C-F). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/JoVE_HondaLee_SupplementaryFigure1.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
תרשים משלים 2. השוואה של פלואורסצנטיות של שקים אנדולימפטיים מבודדים של R26LSL-RCL-tdT/+; עכברי Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn  ו-R26LSL-RCL-tdT/+ littermate ב-E16.5 וב-P5. tdTomato fluorescence מאוד מקל על זיהוי של שק endolymphatic צינור. (א-ג) שקיות אנדולימפטיות מיקרו-חתוכות של E16.5 R26LSL-RCL-tdT/+; עכברי Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn (A) ו-R26LSL-RCL-tdT/+ ליטרמט עכברים (B, C). (ד-ו) שקיות אנדולימפטיות מיקרו-חתוכות של P5 R26LSL-RCL-tdT/+; עכברי Tg(ATP6V1B1-Cre)1Rnel/Mn (D) ו-R26LSL-RCL-tdT/+ ליטרמט עכברים (E, F). (A, B, D, E) פלואורסצנטיות עגבניות. (ג, ו) תמונות אור אירוע המתאימות ל- B ו- E. פסי קנה מידה: 500 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62375/JoVE_HondaLee_SupplementaryFigure2.pdf" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

The study of mutant mouse models of human hearing and balance disorders has unraveled many structural and functional changes which may contribute to the ...

dissection-of-the-endolymphatic-sac-from-mice

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרט הווידאו הזה מראה כיצד בניתוח לחסום צינור endolymphatic החזיר של ניסיונות לייצר hydrops endolymphatic.

אינדוקציה כירורגי של Hydrops Endolymphatic על ידי מחיקה של צינור Endolymphatic

ניתוח של תפקוד תא שיער שיווי משקל הוא מסובך בשל מיקומם העמוק בתוך החלק הקשה ביותר של הגולגולת, העצם הטמפורלית petrous. רוב מחקרי תא שיער פונקציונליים השתמשו בחריפות תאי שיער מבודד. כאן אנו מתארים הכנה למחצה שלמה של האפיתל שיווי משקל עכבר למחקרי מיקרוסקופיה אלקטרו ושני פוטונים.

הכנה חצי שלמות מבודדת של האפיתל החושית שיווי משקל העכבר למיקרוסקופיה שני הפוטונים אלקטרופיזיולוגיה והרזולוציה גבוהה

ריסים ראשוניים משפיעים על מסלולי איתות שונים. שבלול היונקים אידיאלי לבחינת איתות קוטביות תאים מישוריים (PCP). תפקוד לקוי של ריסים משפיע על צמיחת השבלול, דפוס התאים וכיוון תאי השערה, קריאות של PCP. מטרתנו היא לנתח איתות PCP בשבלול עכבר באמצעות ניתוח פנוטיפי, אימונוהיסטוכימיה ומיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

הערכת פנוטיפים מישורים-Cell-קוטביות ב Ciliopathy עכבר Mutant שבלול

כאן נתאר canalostomy הליך המאפשר משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו neonatal דרך תעלת semicircular במינימום נזקים לפונקציה שמיעה ואת שיווי המשקל. בשיטה זו ניתן לחסן וקטורים ויראלי, פרמצבטיקה, מולקולות קטנות לתוך האוזן הפנימית העכבר.

Canalostomy כמו הגישה כירורגי של משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו Neonatal

מאמר זה מדגים גישה extradural להשמיד את שק השפן גינאה endolymphatic ולפגוע צינור endolymphatic עם בוחר דק כדי לגרום הידרופס ניסיוני endolymphatic.

גישה כירורגית מתוקן כדי לגרום הידרופס הידרו בשפן גינאה

חסימת צינור אנדולימפטי היא שיטה כירורגית חדשה יחסית לחולים הסובלים ממחלת Ménière. לאחר כריתת מסטואידקטומיה רגילה, הצינור האנדולימפטי מזוהה וקשור באמצעות המוקליפ טיטניום רגיל. יעילותו של הליך זה נבחנת כעת בניסוי אקראי.

חסימת צינור אנדולימפטי כאפשרות טיפול כירורגית במחלת Ménière

כאן, אנו דנים במאפיינים קליניים ורדיולוגיים של גידולי שק אנדולימפטי ומדווחים על המתודולוגיה והתוצאות של הסרה כירורגית במקרה המטופל במרכז ההפניות האוטולוגי שלנו.

טיפול כירורגי בגידול שק אנדולימפטי

הסטריה וסקולריס חיונית ליצירת הפוטנציאל האנדוקוכליארי. כאן, אנו מציגים את הדיסקציה של העכבר הבוגר stria vascularis עבור ריצוף גרעין יחיד או immunostaining.

דיסקציה של Stria vascularis עכבר בוגר עבור ריצוף גרעין יחיד או immunostaining

כאן, אנו מתארים טכניקה לקצירת איברי קצה שיווי משקל אנושיים בתנאים פיזיולוגיים במהלך כריתת מבוך וניתוחם באמצעות צביעה חיסונית.

קציר איברי קצה שיווי משקל בתנאים פיזיולוגיים במהלך כריתת מבוך

כאן מוצג פרוטוקול להערכת כלי הלימפה של קרום המוח בעכברים (MLVs), הממלאים תפקיד חשוב במחלות נוירולוגיות מרובות. מטרת הפרוטוקול היא לספק שיטה משולבת המאפשרת הן הערכה פונקציונלית של ניקוז העוקבים והן אפיון מורפולוגי מפורט של רשת ה-MLV הגב.

פרוטוקול משולב להערכת לימפות מנינגיאל: הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה, כריתת מנינגיאל וצביעה שלמה

חקור שיטת ניתוח מיקרוסקופית של השק האנדולימפטי בעכברים לחקר אוזן פנימית. הפרוטוקול מאפשר בידוד רקמה עדינה לניתוח תעתיקומי ואימונוהיסטוכימיה.

נתיחת השק האנדולימפטי מעכברים

גלה סרטונים נוספים