Name: כימות של צפיפות תאית ומאפיינים אנטיגניים באמצעות ריחוף מגנטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: למד טכניקת ריחוף מגנטי לזיהוי אנטיגנים בדם ולהפרדת תאים לפי צפיפות. השיטה מאפשרת זיהוי גורם רזוס ומחלות כמו אנמיה וספסיס בזמן קצר ובאופן מינימלי פולשני.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לד"ר גטוליו פריירה על עזרתו בעבודה צעיפית חוץ-תאית.
עבודה זו נתמכה על ידי המענקים הבאים של המכון הלאומי לבריאות ל- ICG: RO1CA218500, UG3HL147353 ו- UG3TR002881.

הפרוטוקול הניסיוני המשמש במחקר זה אושר על ידי הוועדה לבדיקה מוסדית של המרכז הרפואי בית ישראל דיקונס (IRB).
1. התקנת מכשיר
הערה: הדמיה של תאים מרחפים דורשת שני מגנטים נדירים של ניאודימיום אדמה הממוגנטים על ציר z כדי להיות ממוקמים עם אותו מוט אחד מול השני כדי ליצור שדה מגנטי. המרחק בין המגנטים יכול להיות מותאם אישית בהתאם לעוצמת השדה המגנטי וצפיפות המטרות. במקרה זה המגנטים מופרדים על ידי שטח 1 מ"מ מספיק להחדרה של צינור נימי זכוכית מרובע באורך 50 מ"מ 1x1 מ"מ. ההתקן הודפס בתלת-ממד באמצעות עיצוב AutoCAD, הזמין על פי בקשה.
<ol><li>הנח מיקרוסקופ על צידו, אופקי לחלוטין. הערה: מיקרוסקופ הממוקם בתנוחה זקופה סטנדרטית אינו מתאים ישירות להדמיית עצמים מרחפים בשל מיקומי המגנטים ביחס למחזק ולמטרה. מגבלה זו יכולה להיות עקף על ידי הנחת המיקרוסקופ על צדו, אופקי לחלוטין המאפשר הממקד למקד את האור לתוך נימי, ואת העדשה האובייקטיבית כדי לדמיין את התא מרחף בין המגנטים, תוך שמירה על דרישות תאורת Köhler.</li>
	<li>תמיכה וחלוקת המעמד על שולחן לוח לחם באמצעות 2 או 3 שקעי מעבדה.</li>
	<li>כדי להגביל את התנודות, תמוך בשולחן לוח הלחם עם רגלי שיכוך גומי.</li>
	<li>הסר את הבמה והחלף אותו בשקע מעבדה קומפקטי להתאמת גובה התקן הריחוף (ציר y)ושני שלבי תרגום חד-ציריים; אחד להתאמת המוקד (z-ציר), והשני לסריקת צינור נימי.</li>
	<li>חבר את מכשיר הריחוף המגנטי לשקע המעבדה באמצעות שני עמודים אופטיים מסדרה קטנה.</li>
</ol>2. קשירת נוגדנים למיקרו-חלקיקים/חרוזים קרבוקסיים (שונה מפרוטוקול על ידי PolyAn)
הערה: רק חרוזים בצפיפות נמוכה (1.05 גרם/מ"ל) צריכים להיות מצופים לגילוי Rh(+), אך חרוזי צפיפות גבוהה ונמוכה מצופים לגילוי שלשלות חוץ-תאיות.
<ol><li>מוציאים מ"ג אחד שווה ערך להשעיית חרוזים ומוסיפים ל-0.5 מ"ל של מאגר הפעלה (50 מ"מ MES (MW195.2, 9.72 מ"ג ב-1 מ"ל)) pH 5.0 ו-0.001% פוליסורבט-20).</li>
	<li>הוסף 12 μL של 1.5 M EDC טרי (MW 191.7, 0.28755 גרם ב 1 מ"ל) ו 12 μL של 0.3 M סולפו-NHS (MW 217.14, 0.0651 גרם ב 1 מ"ל) במים קרים כקרח.</li>
	<li>מניחים צינורות על שייקר מסלולי ומנערים במרץ במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר כדי להפעיל את קבוצות הקרוקסיל על חרוזים.</li>
	<li>הפסק את ההפעלה לאחר שעה אחת על-ידי הוספת 0.5 מ"ל של מאגר צימוד (10x PBS, או 0.1 M פוספט pH 7-9).</li>
	<li>גלולה החרוזים על ידי צנטריפוגה ב 20,000 x g במשך 10 דקות, או, אם החרוזים לא ניתן לכדור, להשתמש במסנן צינור צנטריפוגה 0.45 מיקרומטר. שאפו את סופר-טבעי או זרימה דרך.</li>
	<li>לשטוף את החרוזים עם 1 מ"ל של 10x PBS פי 3 כמו בשלב 2.5.</li>
	<li>חשב 25 מיקרוגרם של נוגדן לכל חרוזים מ"ג ולערבב נוגדן הרצוי עם חרוזים מופעלים 0.7-1.0 מ"ג / מ"ל ריכוז נוגדנים סופי ב 10X PBS.</li>
	<li>מניחים צינורות על נדנדת צינור להגדיר על מהירות נמוכה. גלגלו צינורות בעדינות בטמפרטורת החדר למשך הלילה לצימוד.</li>
	<li>חזור על שלב 2.5 ושטוף את החרוזים פעמיים עם 1 מ"ל של 10x PBS.</li>
	<li>לשטוף עם 0.5 מ"ל של 1 M אתנולמין (98% מלאי = 16.2 M) ב- pH 8.0 חיץ עם 0.02% פוליסורבט-20 עבור שעה אחת בטמפרטורת החדר תוך כדי רעדה עדינה.</li>
	<li>חזור על שלב 2.5 ולשטוף את החרוזים פעם אחת ב 1 מ"ל של DPBS. החרוזים ניתן לאחסן ב 200 μL של DPBS ב 4 °C (55 °F) עד הצורך. הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן.</li>
</ol>3. איסוף והכנת דם לגילוי Rh(+)
<ol><li>באמצעות התקן lancing בלחיצה אחת, לדקור את האצבע של תורם Rh(+) ולאסוף 10 μL של דם לתוך 1 מ"ל של DPBS.</li>
	<li>הכתימו את תאי ה-Rh+ בכתם קרום פלזמה פלואורסצנטי. לחלופין, להוסיף 1 μL של צבע פלואורסצנטי השעיה 1 מ"ל של תאי Rh + (1:1000 דילול).</li>
	<li>לדגור על התאים עם צבע פלואורסצנטי ב 37 °C (55 °F) במשך 15 דקות.</li>
	<li>גלולה את התאים על ידי ספינינג ב 5,600 x g עבור 15 s לשטוף 3 פעמים באמצעות 1 מ"ל של DPBS. Resuspend ב 1 מ"ל של HBSS עם סידן ומגנזיום (HBSS++).</li>
	<li>באמצעות מכשיר lancing בלחיצה אחת, לדקור את האצבע של תורם Rh(-) ולאסוף 2 μL של דם. הערה: אם מכינים יותר מ 2 תנאים, לאסוף מספיק דם כדי להוסיף 1 μL של Rh (-) דם לכל צינור.</li>
	<li>הכן את הצינורות הניסיוניים הדרושים: חרוזים לבד, בקרת IgG, מדגם.<ol>
<li>חרוזים בלבד: להוסיף 174 μL של HBSS ++, 1 μL של חרוזי בקרה IgG, 1 μL של חרוזים בצפיפות גבוהה (1.2 גרם / מ"ל), ו 24 μL של 500 mM Gd3 + (60 mM).</li>
		<li>בקרת IgG: להוסיף 172 μL של HBSS ++, 1 μL של חרוזי בקרה IgG, 1 μL של חרוזים בצפיפות גבוהה, 1 μL של דם Rh, 1 μL של השעיית דם מוכתמת Rh + , ו 24 μL של 500 mM Gd3 +.</li>
		<li>צינור מדגם להוסיף 172 μL של HBSS ++, 1 μL של חרוזים מצופים נגד RhD, 1 μL של חרוזים בצפיפות גבוהה, 1 μL של Rh- דם, 1 μL של השעיית דם מוכתמת Rh(+) ו 24 μL של 500 mM Gd3 +. הערה: חרוזי צפיפות גבוהה מתווספים דגימות Rh לעיון.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. בידוד PMNs להדגמת הפרדה סלולרית
<ol><li>בידוד של נויטרופילים<ol>
<li>צייר 40 מ"ל של דם ורידי לתוך מזרק 60 מ"ל המכיל 6 מ"ל של נתרן ציטראט / חומצת לימון (0.15 M, pH 5.5) ו 14 מ"ל של 6% Dextran-70.</li>
		<li>המתן 50 דקות עד שהדם יהיה מ משקעים.</li>
		<li>שכב לאט את תאי מעיל באפי על גבי 20 מ"ל של Ficoll-Paque על ידי דחיפת העליון 18 מ"ל דרך צינורות איסוף הדם לתוך צינור 50 mL, הימנעות זיהום עם RBCs מ משקעים. מומלץ להשתמש בערכת איסוף דם טרי, כדי למזער את הזיהום עם שאריות RBCs שנותרו בצינור איסוף הדם המקורי.</li>
		<li>גלולה את תאי מעיל באפי על ידי צנטריפוגה במשך 20 דקות ב 3,000 x גרם. נויטרופילים ו-RBCs מזהמים יזרקו בתחתית הצינור. PBMC תיצור שכבה לבנה על גבי פיקול-פאק.</li>
		<li>העבר את הנויטרופילים לצינור חדש של 50 מ"ל.</li>
		<li>Lyse כל שאריות RBCs על ידי דגירה נויטרופילים עם 20 מ"ל של 0.2% פתרון NaCl קר במשך 25 שניות, ואחריו 20 מ"ל נוספים של 1.6% NaCl. הקונצרט הסופי של NaCl צריך להיות 0.9% (איזוטוני).</li>
		<li>צנטריפוגה ההשעיה למשך 10 דקות ב 3,000 x g.</li>
		<li>הסר את supernatant ו resuspend הנויטרופילים לריכוז הרצוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בידוד לימפוציטים
	<ol>
<li>צלחת PBMCs ב RPMI עם סרום מומת בחום 5% ב 6 טוב צלחות תרבות.</li>
		<li>לדגור את הצלחות במשך 1 שעה ב 37 °C (50 °F). מונוציטים ידבקו בצלחת, לימפוציטים יצופו בחופשיות.</li>
		<li>הסר את המאגר המכיל את הלימפוציטים ולשטוף אותו פעמיים עם RPMI.</li>
		<li>resuspend הלימפוציטים בריכוז הרצוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
תווית RBCs, PMN, ולימפוציטים.
	<ol>
<li>סמן כל סוג תא בצבע פלואורסצנטי שונה. ודא שכל צבע פלואורסצ'ים בערוץ אחר. בצע את הוראות היצרן עבור כל אחד מהצבעים שנבחרו.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. יצירת שלשלות חוץ-תאיות RBC באמצעות ההפעלה המשלימה
<ol><li>להשיג דם שלם באמצעות venipuncture באמצעות צינורות EDTA.</li>
	<li>להעביר דם דרך מסנן תא דם לבן, ולאחר מכן צנטריפוגה 3 פעמים ב 500 x g במשך 10 דקות כל אחד כדי לבודד תאי דם אדומים. השתמש ב- HBSS+ כמאגר כביסה.</li>
	<li>הפוך aliquots של 100 μL ארוז RBCs ב 1.5 mL צינורות לפצות את הנפח ל 1 מ"ל על ידי הוספת HBSS ++.</li>
	<li>הוסף C5b,6 לריכוז הסופי של 0.18 מיקרוגרם/מ"ל ב- HBSS++, ולאחר מכן מערבולת.</li>
	<li>שמים על שייקר איטי בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות.</li>
	<li>הוסיפו חלבון C7 לריכוז סופי של 0.2 מיקרוגרם/מ"ל. מערבבים על ידי היפוך הצינור בעדינות כמה פעמים. אל תמערבולת מנקודה זו ואילך.</li>
	<li>מניחים את הצינור על שייקר צינור להגדיר במהירות נמוכה במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>הוסיפו חלבון C8 לריכוז סופי של 0.2 מיקרוגרם/מ"ל, וחלבון C9 ל-0.45 מיקרוגרם/מ"ל. מערבבים על ידי היפוך הצינורות בעדינות כמה פעמים.</li>
	<li>דגירה ב 37 °C (50 °F) במשך 30 דקות.</li>
	<li>צנטריפוגה הצינור ב 10,000 x g במשך 10 דקות.</li>
	<li>לאסוף את EV המכיל supernatant בצינור חדש(ים). אין לטרפד את הסופר-טבעי קרוב מדי לכדור התא.</li>
</ol>6. ניתוח תאים במכשיר הריחוף המגנטי
<ol><li>בצע אתחול מכשיר בהתאם להוראות היצרן.</li>
	<li>לטעון 50 μL של מדגם לתוך צינור נימי עד הצינור מתמלא. לאטום את הקצוות של הצינור נימי עם איטום נימי לוודא שאין בועות אוויר נוכחים.</li>
	<li>טען את צינור נימי לתוך המחזיק בין המגנטים העליונים והתחתונים. התאם את הבמה ואת המוקד לצפייה מיטבית. הערה: תאים / חרוזים יכולים לקחת בכל מקום בין 5-20 דקות כדי להגיע למיקום שיווי המשקל המגנטי שלהם בהתבסס על הצפיפות שלהם ואת הריכוז של Gd3 +. ככל שריכוז GD3+גבוה יותר, כך הזמן קצר יותר.</li>
</ol>

<ol><li>Tasoglu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Levitational+Image+Cytometry+with+Temporal+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Levitational Image Cytometry with Temporal Resolution.</a> Advanced Materials. 27 (26), 3901-3908 (2015).</li>
<li>Durmus, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+levitation+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Magnetic levitation of single cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (28), 3661-3668 (2015).</li>
<li>Knowlton, S., Yu, C. H., Jain, N., Ghiran, I. C., Tasoglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart-Phone+Based+Magnetic+Levitation+for+Measuring+Densities%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Smart-Phone Based Magnetic Levitation for Measuring Densities.</a> PLoS One. 10 (8), 0134400(2015).</li>
<li>Ashkarran, A. A., Suslick, K. S., Mahmoudi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetically+Levitated+Plasma+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Magnetically Levitated Plasma Proteins.</a> Analytical Chemistry. 92 (2), 1663-1668 (2020).</li>
<li>Yaman, S., Tekin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+Susceptibility-Based+Protein+Detection+Using+Magnetic+Levitation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Magnetic Susceptibility-Based Protein Detection Using Magnetic Levitation.</a> Analytical Chemistry. 92 (18), 12556-12563 (2020).</li>
<li>Abrahamsson, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Powders+Containing+Illicit+Drugs+Using+Magnetic+Levitation%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+Internation+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">Analysis of Powders Containing Illicit Drugs Using Magnetic Levitation.</a> Angewandte Chemie Internation Edition in English. 59 (2), 874-881 (2020).</li>
<li>Trajkovic, K., Valdez, C., Ysselstein, D., Krainc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+cell+density+alter+protein+markers+of+multiple+cellular+compartments%2C+confounding+experimental+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in cell density alter protein markers of multiple cellular compartments, confounding experimental outcomes.</a> PLoS One. 14 (2), 02117227(2019).</li>
<li>Hart, A., Edwards, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buoyant+density+fluctuations+during+the+cell+cycle+of+Bacillus+subtilis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Buoyant density fluctuations during the cell cycle of Bacillus subtilis.</a> Archives of Microbiology. 147 (1), 68-72 (1987).</li>
<li>Poole, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+buoyant+density+during+the+cell+cycle+of+Escherichia+coli+K12%3A+significance+for+the+preparation+of+synchronous+cultures+by+age+selection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+General+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in buoyant density during the cell cycle of Escherichia coli K12: significance for the preparation of synchronous cultures by age selection.</a> The Journal General Microbiology. 98 (1), 177-186 (1977).</li>
<li>Cass, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Density-dependent+fluctuations+in+membrane+permeability+in+logarithmically+growing+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Density-dependent fluctuations in membrane permeability in logarithmically growing cell cultures.</a> Experimental Cell Research. 73 (1), 140-144 (1972).</li>
<li>Grover, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+single-cell+density%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Measuring single-cell density.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (27), 10992-10996 (2011).</li>
<li>Bryan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+single+cell+mass%2C+volume%2C+and+density+with+dual+suspended+microchannel+resonators%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Measuring single cell mass, volume, and density with dual suspended microchannel resonators.</a> Lab on a Chip. 14 (3), 569-576 (2014).</li>
<li>Gomer, R. H., Jang, W., Brazill, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+density+sensing+and+size+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Cell density sensing and size determination.</a> Development, Growth and Differentiation. 53 (4), 482-494 (2011).</li>
<li>Neurohr, G. E., Amon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relevance+and+Regulation+of+Cell+Density%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Relevance and Regulation of Cell Density.</a> Trends in Cell Biology. 30 (3), 213-225 (2020).</li>
<li>Maric, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomical+gradients+in+proliferation+and+differentiation+of+embryonic+rat+CNS+accessed+by+buoyant+density+fractionation%3A+alpha+3%2C+beta+3+and+gamma+2+GABAA+receptor+subunit+co-expression+by+post-mitotic+neocortical+neurons+correlates+directly+with+cell+buoyancy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Anatomical gradients in proliferation and differentiation of embryonic rat CNS accessed by buoyant density fractionation: alpha 3, beta 3 and gamma 2 GABAA receptor subunit co-expression by post-mitotic neocortical neurons correlates directly with cell buoyancy.</a> European Journal of Neuroscience. 9 (3), 507-522 (1997).</li>
<li>Maric, D., Maric, I., Barker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buoyant+density+gradient+fractionation+and+flow+cytometric+analysis+of+embryonic+rat+cortical+neurons+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Buoyant density gradient fractionation and flow cytometric analysis of embryonic rat cortical neurons and progenitor cells.</a> Methods. 16 (3), 247-259 (1998).</li>
<li>Wolff, D. A., Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+HeLa+cells+by+colloidal+silica+density+gradient+centrifugation.+I.+Separation+and+partial+synchrony+of+mitotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Separation of HeLa cells by colloidal silica density gradient centrifugation. I. Separation and partial synchrony of mitotic cells.</a> Journal of Cell Biology. 55 (3), 579-585 (1972).</li>
<li>Bienz, K., Egger, D., Wolff, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+replication%2C+cytopathology%2C+and+lysosomal+enzyme+response+of+mitotic+and+interphase+Hep-2+cells+infected+with+poliovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Virus replication, cytopathology, and lysosomal enzyme response of mitotic and interphase Hep-2 cells infected with poliovirus.</a> Journal of Virology. 11 (4), 565-574 (1973).</li>
<li>Baldwin, W. W., Kubitschek, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buoyant+density+variation+during+the+cell+cycle+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Buoyant density variation during the cell cycle of Saccharomyces cerevisiae.</a> Journal of Bacteriology. 158 (2), 701-704 (1984).</li>
<li>Yurinskaya, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymocyte+K%2B%2C+Na%2B+and+water+balance+during+dexamethasone-+and+etoposide-induced+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Thymocyte K+, Na+ and water balance during dexamethasone- and etoposide-induced apoptosis.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 16 (1-3), 15-22 (2005).</li>
<li>Wyllie, A. H., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone-induced+cell+death.+Purification+ad+properties+of+thymocytes+undergoing+apoptosis+after+glucocorticoid+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Hormone-induced cell death. Purification ad properties of thymocytes undergoing apoptosis after glucocorticoid treatment.</a> American Journal of Pathology. 109 (1), 78-87 (1982).</li>
<li>Morris, R. G., Hargreaves, A. D., Duvall, E., Wyllie, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone-induced+cell+death.+2.+Surface+changes+in+thymocytes+undergoing+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Hormone-induced cell death. 2. Surface changes in thymocytes undergoing apoptosis.</a> American Journal of Pathology. 115 (3), 426-436 (1984).</li>
<li>Benson, R. S., Heer, S., Dive, C., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cell+volume+loss+in+CEM-C7A+cells+during+dexamethasone-induced+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of cell volume loss in CEM-C7A cells during dexamethasone-induced apoptosis.</a> American Journal of Physiology. 270 (4), Pt 1 1190-1203 (1996).</li>
<li>Zipursky, A., Bow, E., Seshadri, R. S., Brown, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+density+and+volume+in+normal+subjects+and+in+patients+with+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukocyte density and volume in normal subjects and in patients with acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 48 (3), 361-371 (1976).</li>
<li>Huber, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+the+buoyant+density+distribution+of+normal+and+malignant+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">A comparative study of the buoyant density distribution of normal and malignant lymphocytes.</a> British Journal of Haematology. 40 (1), 93-103 (1978).</li>
<li>Griwatz, C., Brandt, B., Assmann, G., Zanker, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunological+enrichment+method+for+epithelial+cells+from+peripheral+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">An immunological enrichment method for epithelial cells from peripheral blood.</a> Journal of Immunological Methods. 183 (2), 251-265 (1995).</li>
<li>Andersen, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Implementation+of+Magnetic+Levitation+to+Quantify+Leukocyte+Size%2C+Morphology%2C+and+Magnetic+Properties+to+Identify+Patients+with+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">A Novel Implementation of Magnetic Levitation to Quantify Leukocyte Size, Morphology, and Magnetic Properties to Identify Patients with Sepsis.</a> Shock. , (2018).</li>
<li>Felton, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+subtle+changes+in+red+blood+cell+density+using+a+cell+phone%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of subtle changes in red blood cell density using a cell phone.</a> Lab on a Chip. 16 (17), 3286-3295 (2016).</li>
<li>Goldmacher, V. S., Tinnel, N. L., Nelson, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+pinocytosis+in+lymphoid+cells+has+a+low+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Evidence that pinocytosis in lymphoid cells has a low capacity.</a> Journal of Cellular Biology. 102 (4), 1312-1319 (1986).</li>
</ol>

למחברים אין קונפליקטים לחשוף.

צנטריפוגה הדרגתית היא כיום הטכניקה הסטנדרטית לבידוד רכיבים תת-תאיים בהתבסס על הצפיפות הייחודית שלהם. גישה זו, לעומת זאת, דורשת שימוש במדיה הדרגתית מיוחדת, כמו גם ציוד צנטריפוגות. גישת הריחוף המגנטי המוצגת כאן מאפשרת חקירה מפורטת של התכונות המורפולוגיות והתפקודיות של תאים במחזור, עם מינימום, אם בכלל מניפולציה של התאים, המספקת גישה כמעט in vivo לתאים במחזור.
עם זאת, בעת שימוש בריחוף מגנטי מספר נקודות ראוי להזכיר. ראשית, המיקרוסקופ המשמש להדמיה חייב להיות מוקדש לשיטה זו, שכן ההתקנה גוזלת...

ריחוף מגנטי הוא טכניקה שפותחה כדי להפריד, לנתח ולזהות סוגי תאים1,2,3, חלבונים4,5 ואופיואידים6 המבוססים אך ורק על הצפיפות הספציפית שלהם ואת המאפיינים paramagnetic. צפיפות תאים היא מאפיין ייחודי ומהותי של כל סוג תא הקשור ישירות לקצב חילוף החומרים שלו ומצב הבידולשלו 7,8,9,10,11,12,13,14. כימות שינויים עדינים וחולפים בצפיפות התאים בתנאי מצב קבועים, ובמגוון תהליכי תאים, יכול להרשות לעצמו תובנה שאין שני לה על פיזיולוגיה של תאים ופתופיזיולוגיה. שינויים בצפיפות התא קשורים לבידול תאים15,16, התקדמות מחזור התא9,17,18,19, אפופטוזיס20,21,22,23, ושינוי ממאיר24,25,26 . לכן, כימות של שינויים ספציפיים בצפיפות התא, יכול לשמש כדי להבדיל בין תאים מסוגים שונים, כמו גם להפלות בין אותו סוג של תאים העוברים תהליכי הפעלה שונים. זה מאפשר ניסויים המתמקדים תת-אוכלוסיית תאים מסוימת, שבו שינויים דינמיים בצפיפות משמש אינדיקטור של חילוף החומרים התא שונה27. כפי שנקבע כי תא עשוי לשנות את צפיפותו בתגובה לסביבה משתנה7, זה הכרחי למדוד את הקינטיקה של התא ביחס לצפיפותו כדי להבין אותו באופן מלא, אשר השיטות הנוכחיות לא יכול לספק12. ריחוף מגנטי לעומת זאת, מאפשר הערכה דינמית של תאים ומאפייניםשלהם 28.
תאים הם דיאמגנטיים כלומר אין להם רגע דיפול מגנטי קבוע. עם זאת, כאשר נחשפים לשדה מגנטי חיצוני, נוצר רגע דיפול מגנטי חלש בתאים, בכיוון ההפוך של השדה המיושם. לכן, אם תאים מושעים בתמיסה פרמגנטית ונחשפים לשדה מגנטי אנכי חזק, הם ירחפו הרחק מהמקור המגנטי ויעצרו לגובה, אשר תלוי בעיקר בצפיפות האישית שלהם. ריחוף דימגנטי של עצם המרותק למינימום של שדה מגנטי אינומוגני אפשרי כאשר שני הקריטריונים הבאים מתקיימים: 1) הרגישות המגנטית של החלקיק חייבת להיות קטנה מזו של המדיום שמסביב, ו -2) הכוח המגנטי חייב להיות חזק מספיק כדי לאזן את כוח הציפה של החלקיק. שני הקריטריונים יכולים להתממש על ידי השעיית RBCs במאגר מגנטי ועל ידי יצירת שיפועי שדה מגנטי חזקים עם מגנטים קבועים קטנים, זולים וזמינים מסחרית1. מיקום שיווי המשקל של חלקיק לכוד מגנטית על ציר לאורך כיוון הכבידה נקבע על ידי צפיפותו (ביחס לצפיפות המאגר), הרגישות המגנטית שלו (ביחס לרגישות המגנטית של המאגר) וחתימת השדה המגנטי המיושם. מכיוון שהצפיפות והמאפיינים המגנטיים של הפתרון קבועים בכל המערכת, תכונות הצפיפות המהותיות של התאים יהיו הגורם העיקרי הקובע את גובה הריחוף של התאים, כאשר תאים צפופים יותר מרחפים נמוך יותר בהשוואה לתאים צפופים פחות. גישה זו משתמשת בערכה של שני חרוזי התייחסות בצפיפות (1.05 ו- 1.2 גרם/מ"ל) המאפשרים לנו להשתמש בניתוח מדויק ויחסי למדידות צפיפות. שינוי הריכוז של הפתרון המגנטי מאפשר לבודד אוכלוסיות תאיות שונות, כגון RBCs מ- WBCs, שכן צפיפות התאים במחזור היא ספציפית לתא, הסרת הצורך בפרוטוקולי בידוד או מניפולציה אחרת של תאים.
רוב שיטות הזיהוי המשמשות במחקר ביולוגי מסתמכות על אקסטרפולציה של אירועים מחייבים ספציפיים לאותות ליניאריים קלים לכימות. שיטות קריאה אלה הן לעתים קרובות מורכבות וכוללות ציוד מיוחד ואנשי צוות מדעיים ייעודיים. גישה שמטרתה זיהוי של אנטיגנים שנמצאו על קרום הפלזמה של תאים או שלל חוץ תאי או כי הם מסיסים בפלזמה, באמצעות אחד או שניים חרוזים מצופים נוגדן, מתואר בזאת. החרוזים חייבים להיות בצפיפות שונה זה מזה וממטרות שנחקרו. נוכחותו של אנטיגן היעד בכל ביופלואיד נתון מתורגמת לשינוי ספציפי, מדיד בגובה הריחוף של תא אנטיגן חיובי כי הוא קשור חרוז זיהוי. במקרה של אנטיגנים מסיסים או שלל חוץ-תאי, הם קשורים הן לחרוזים ללכוד ולזיהוי, ויוצרות קומפלקס חרוזים ולא קומפלקס של תאי חרוזים. השינוי בגובה הריחוף תלוי בצפיפות החדשה של מתחמי חרוזים או חרוזים. בנוסף לשינוי בגובה הריחוף של המתחמים, המציין את נוכחות האנטיגן בביופלואיד, מספר המתחמים תלוי גם בכמות היעד, מה שהופך את הריחוף המגנטי גם לגישה כמותית לזיהוי אנטיגן24.

<table><tbody><tr><td>2-(N-Morpholino) הידרט חומצה אתנסולפונית</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M-2933</td> <td>(MES); רכיב מגנטים של מאגר הפעלה</td></tr><tr><td>50x2.5x1 מ"מ, מצופה ניקל (Ni-Cu-Ni), דרגה N52, ממוגנט בעובי 5 מ"מ (0.197 אינץ')</td><td>K& J Magnetics</td><td>מגנטים מותאמים אישית</td><td>המשמשים למכשיר הריחוף המגנטי</td></tr><tr><td>איטום צינורות נימי (Critoseal)</td><td>Leica Microsystems</td><td>267620</td><td>משמש לכיסוי קצות הצינורות הנימים</td></tr><tr><td>מסנני צינור צנטריפוגה (Corning Costar Spin-X)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>CLS8163</td><td>משמש לשטיפת חרוזים</td></tr><tr><td>מעבדה קומפקטית ג'ק</td><td>Thorlabs</td><td>LJ750</td><td>משמש להתאמת מכשיר הריחוף המגנטי</td></tr><tr><td>DPBS, ללא סידן, ללא מגנזיום</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>תמיסה לתרחיפים חרוזים</td></tr><tr><td>אתנולמין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>E9508-100ML</td><td>משמש במהלך שלב כביסה לחרוזים</td></tr><tr><td>כתם קרום פלזמה פלורסנט (CellMask Green)</td> <td>Invitrogen</td><td>C37608</td><td>משמש להכתמת תאי Rh +</td></tr><tr><td>הזרקת Gadoteridol</td><td>ProHance</td><td>NDC 0270-1111-03</td><td>גדוליניום (Gd3+); תמיסה מגנטית המשמשת להשעיית תאים</td></tr><tr><td>HBSS++</td><td>Gibco</td><td>14025-092</td><td>פתרון להכנת דגימה</td></tr><tr><td>אנושי C5b,6 קומפלקס</td><td>Complement Technology, Inc</td><td>A122</td><td>משמש לייצור RBC Evs</td></tr><tr><td>Human C7 חלבון</td><td>Complement Technology, Inc</td><td>A124</td><td>משמש לייצור RBC Evs</td></tr><tr><td>Human C8 חלבון</td><td>Complement Technology, Inc</td><td>A125</td><td>משמש לייצור RBC Evs</td></tr><tr><td>Human C9</td><td>protein Complement Technology, Inc</td><td>A126</td><td>משמש לייצור RBC Evs</td></tr><tr><td>Mini Series Post Collar</td><td>Thorlabs</td><td>MSR2</td><td>משמש לאבטחת מכשיר ריחוף מגנטי לשקעי מעבדה</td></tr><tr><td>N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&prime;-ethylcarbodiimide hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E1769-10G</td> <td>(EDC); משמש בתגובת צימוד נוגדנים</td></tr><tr><td>בקרת IgG רגילה של ארנב</td><td>מו"פ D Systems</td><td>AB-105-C</td><td>משמש לציפוי חרוזים כתנאי בקרה</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (תמיסה 10X, pH 7.4)</td><td>Boston Bioproducts</td><td>BM-220</td><td>רכיב של מאגר צימוד, המשמש לשלבי כביסה</td></tr><tr><td>פוליסורבט 20 (Tween 20)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P7949-500ML</td><td>רכיב של מאגר הפעלה</td></tr><tr><td>פוליסטירן קרבוקסיל</td><td>פולימר Bangs Laboratories</td><td>PC06004</td><td>חרוזים בצפיפות עליונה (1.05 גרם/מ"ל), המשמשים לצימוד נוגדנים</td></tr><tr><td>ארנב RhD נוגדן פוליקלונלי</td><td>Invitrogen</td><td>PA5-112694</td><td>משמש לציפוי חרוזים להסרת גורם Rh בתאי דם אדומים</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ בדרגת מחקר</td><td>אולימפוס</td><td>פרוביס AX-70</td><td>מיקרוסקופ המשמש להרכבה של מכשיר ריחוף מגנטי וצפייה בתאים מרחפים</td></tr><tr><td>רגלי שיכוך גומי</td><td>Thorlabs</td><td>RDF1</td><td>משמש לתמיכה בשולחן לוח הלחם</td></tr><tr><td>צינורות בורו מרובעים</td><td>VitroTubes</td><td>8100-050</td><td>צינור נימי המשמש להעמסת דגימה לתוך Maglev</td></tr><tr><td>Sulfo-NHS</td><td>Thermoscientific</td><td>24510</td><td>משמש בתגובת צימוד נוגדנים</td></tr><tr><td>שלב תרגום</td><td>Thorlabs</td><td>PT1</td><td>משמש למיקוד ולסריקת צינור נימי</td></tr></tbody></table>

כימות של צפיפות תאית ומאפיינים אנטיגניים באמצעות ריחוף מגנטי

Quantification of Cellular Densities and Antigenic Properties using Magnetic Levitation

השיטה המתוארת פותחה על בסיס עקרונות הריחוף המגנטי, המפריד בין תאים וחלקיקים על סמך צפיפותם ומאפייניהם המגנטיים. Density הוא מאפיין מזהה סוג תא, הקשור ישירות לקצב חילוף החומרים שלו, לבידול ולמצב ההפעלה שלו. ריחוף מגנטי מאפשר גישה חד-שלבית כדי להפריד, לדם ולאפיין בהצלחה תאי דם במחזור, ולזהות אנמיה, מחלת חרמשית ותאי גידול במחזור המבוססים על צפיפות ומאפיינים מגנטיים. גישה זו מקובלת גם על זיהוי אנטיגנים מסיסים הנמצאים בפתרון באמצעות סטים של חרוזים בצפיפות נמוכה וגבוהה מצופים בנוגדנים ללכידה וזיהוי, בהתאמה. אם האנטיגן נמצא בתמיסה, הוא יגשר בין שני סטים של חרוזים, יצירת קומפלקס חרוזים חדש, אשר מרחף בין השורות של חרוזים מצופים נוגדנים. ריכוז מוגבר של האנטיגן היעד בפתרון יפיק מספר גדול יותר של מתחמי חרוזים בהשוואה לריכוזים נמוכים יותר של אנטיגן, ובכך יאפשר מדידות כמותיות של אנטיגן היעד. ריחוף מגנטי הוא יתרון לשיטות אחרות בשל זמן הכנת המדגם הירידה שלה וחוסר תלות בשיטות קריאה קלאסיות. התמונה שנוצרת נלכדת ומנותחת בקלות באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי או מכשיר נייד, כגון טלפון חכם או טאבלט.

ריחוף מגנטי ממקד עצמים בצפיפות שונה בגבהי ריחוף שונים בהתאם לצפיפות האובייקט, החתימה המגנטית שלו, ריכוז התמיסה הפרמגנטית וכוח השדה המגנטי שנוצר על ידי שני מגנטים חזקים ונדירים של כדור הארץ. כששני המגנטים מונחים זה על גבי זה, ניתן לצפות רק בדגימות מרחפות, תוך שמירה על תאורת קולר, באמצעות מיקרוסקופ שהופנה על צידו(איור 1). ניתן לשנות בקלות את גובה הריחוף הסופי אליו מגיע כל סוג תא על ידי שינוי הריכוז של הפתרון הפרמגנטי. איור 2 ממחיש את ההפרדה בין תאי הדם השונים במחז...

מאמר זה מתאר שיטה מבוססת ריחוף מגנטית שיכולה לזהות באופן ספציפי נוכחות של אנטיגנים, מסיסים או קשורים לממברנה, על ידי כימות שינויים בגובה הריחוף של חרוזי לכידה עם צפיפות קבועה.

The described method was developed based on the principles of magnetic levitation, which separates cells and particles based on their density and magnetic ...

טכניקה זו מאפשרת הפרדה של סוגי תאים ותאים שונים העוברים תהליכים שונים המבוססים אך ורק על צפיפות עם מעט מאוד מניפולציה בפרק זמן קצר. היתרונות העיקריים של שיטה זו הם כי זה פולשני מינימלית, דורש נפחים קטנים, מספק תוצאות מהירות, אינו תלוי קריאות קלאסיות, וכוח אדם מיוחד אינו נדרש. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת לאיתור מחלות מרובות, למשל אנמיה ואלח דם.כדי להתחיל להשתמש במכשיר פנס בלחיצה אחת כדי לדקור את האצבע של תורם דם חיובי גורם רזוס, ולאסוף 10 microliters של דם במיליליטר אחד של DPBS. הוסף מיקרוליטר אחד של צבע פלואורסצנטי בהשעיה מיליליטר אחת של רזוס גורם תאים חיוביים כדי להכתים פלואורסצנטית את קרום הפלזמה ודגורה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. גלולה את התאים על ידי ספינינג ב 5, 600 פעמים G במשך 15 שניות לשטוף את הכדור שלוש פעמים באמצעות מיליליטר אחד של DPBS.resuspend הכדור במיליליטר אחד של HBSS עם סידן ומגנזיום. השתמש בהתקן lancing בלחיצה אחת כדי לדקור את האצבע של תורם דם שלילי גורם רזוס ולאסוף שני microliters של דם. כדי להכין את הצינור הניסיוני המכיל רק חרוזים, להוסיף 174 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזי בקרה IgG, microliter אחד של חרוזים כבדים עם 1.2 גרם לצפיפות מיליליטר, ו 24 microliters של 500 מילימטר gadolinium.כדי להכין את צינור הבקרה הניסיוני המכיל IgG, להוסיף 172 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזי בקרה IgG, microliter אחד של חרוזים כבדים, microliter אחד של דם שלילי גורם רזוס, microliter אחד של השעיית דם חיובית גורם רזוס מוכתם, ו 24 microliters של 500 מילימולר גדליניום. כדי להכין את הצינור הניסיוני מדגם, להוסיף 172 microliters של HBSS עם סידן ומגנזיום, microliter אחד של חרוזים מצופים אנטי RhD, microliter אחד של חרוזים כבדים, microliter אחד של רזוס גורם דם שלילי, microliter אחד של השעיית דם חיובית גורם רזוס מוכתם, ו 24 microliters של 500 מילימיליניום מילימולר. תגדיר את מכשיר הריחוף המגנטי.ותטענו 50 מיקרוליטרים של הדגימה לתוך צינור נימי עד שהצינור יתמלא. לאטום את הקצוות של צינור נימי עם איטום נימי להבטיח כי אין בועות. מניחים את צינור נימי במחזיק הנימי בין המגנטים העליונים לתחתונים, מתאימים את הבמה ומתמקדים לצפייה אופטימלית.המתן כחמש עד 20 דקות עד התאים והחרוזים להתיישב בעמדת שיווי המשקל המגנטי שלהם. באמצעות פרוטוקול זה, תאי הדם הופרדו בהתאם לגובה הריחוף באמצעות מכשיר הריחוף המגנטי. חרוזי צפיפות נמוכה וגבוהה שימשו כדי לספק גבהים ריחוף צפיפות והפניות גודל.תאי הפולימורפונוקליר ריחפו מעל תאי הדם האדומים בריכוז יון דוליניום 21 מ"מ. תאי דם ישנים ריחפו בריכוז יון גדליניום 60 מילימולר. תאי הדם האדומים, תאי הפולימורפונוקליר והלימפוציטים הופרדו בריכוז יון גדליניום 40 מילימולארי בהתבסס על הצפיפות המהותית שלהם.אנטיגן גורם רזוס זוהה על תאי הדם האדומים באמצעות חרוזים מצופים נוגדן IgG ו- Anti-RhD. מתחמי התא האדום חרוזים לא נוצרו בדגימת בקרת IgG, אבל תאי הדם האדומים מוכתמים פלואורסצנטית שנתפסו על ידי גורם רזוס חרוזים חיוביים זוהו. הכריכה של האנטי-RHB לתאים החיוביים של גורם הרזוס יצרה קומפלקס תאי חרוזים במרכז בצפיפות לסירוגין של החרוזים הלא מאוגדים ותאי הדם האדומים השליליים.יתר על כן, המבנה המורכב אושר על ידי התבוננות פלואורסצנטיות הנפלטת. מתחמי חרוז B שנוצרו בין חרוזים בצפיפות גבוהה ונמוכה מצופים בנוגדנים עבור CR1 ו- CD47 מצביעים על נוכחות של תאי דם אדומים שמקורם שלפוחיות חוץ תאיות. כיסוי נימי מבלי להציג בועות הוא הצעד המאתגר ביותר ודורש תרגול.שיטה זו יכולה לספק תובנה להמטולוגיה, המתמקדת במיוחד במחלות תאי דם אדומים.

quantification-cellular-densities-antigenic-properties-using-magnetic

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים את זיהוי גורם הרזוס (Rh) בדגימות דם באמצעות מכשיר ריחוף מגנטי. השדה המגנטי מיישר ומרחף חרוזים ותאי דם על סמך צפיפות. טיפול בדגימות עם נוגדנים נגד Rh מביא להיווצרות קומפלקסים של תאי חרוזים בצפיפות בינונית, מה שמאפשר התמיינות של תאי דם אדומים חיוביים ל-Rh ושליליים ל-Rh.

איתור גורם רזוס בדגימות דם אנושיות באמצעות ריחוף מגנטי

סרטון זה מדגים זיהוי חיידקי כמותי מרובה באמצעות מיקרוספרות פוליסטירן מגנטיות קרבוקסיליות הצבועות לקבוצות נפרדות. ההליך כולל היווצרות קומפלקסים של חיידקי חרוזים, הפרדה מגנטית ואנליזה מבוססת זרימה, המאפשרים כימות מדויק וסימולטני של מספר חיידקים באותה תגובה היטב.

זיהוי כמותי של חיידקים באמצעות מיקרוספרות מגנטיות עם תווית צבע

לימפוציטים הם השחקנים העיקריים בתגובות חיסוניות נרכשות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול טיהור לימפוציטים כדי לקבוע את הפונקציות הפיזיולוגיות של המולקולות הרצויות בהפעלת לימפוציטים במבחנה וב-vivo. הליכי הניסוי המתוארים מתאימים להשוואת יכולות תפקודיות בין לימפוציטים בקרה ללימפוציטים מהונדסים גנטית.

בידוד ההפעלה של Murine לימפוציטים

אנו מציגים טכניקת ריחוף מגנטי בשילוב עם הדמיה וניתוח אוטומטיים הן במכשיר תואם סמארטפון והן במכשיר עם הדמיה ועיבוד משובצים. זה מיושם כדי למדוד את התפלגות הצפיפות של תאים עם שני יישומים ביו-רפואיים מוכחים: אבחון מחלת תאי חרמש והפרדת תאי דם לבנים ואדומים.

ריחוף מגנטי יחד עם הדמיה ניידת וניתוח עבור אבחון מחלות

וירוסים או שלפוחיות חוץ-תאיות נלכדו חיסונית עם ננו-חלקיקים מגנטיים של 15 ננומטר יחד עם נוגדנים המזהים אנטיגנים על פני השטח. הנגיפים או השלפוחיות שנתפסו סומנו בנוגדנים פלואורסצנטיים כנגד אנטיגנים אחרים על פני השטח. הקומפלקסים שהתקבלו הופרדו בשדה מגנטי גבוה ונותחו באמצעות ציטומטרים זרימה קונבנציונליים המופעלים על פלואורסצנטיות.

זרימה Virometry לנתח אנטיגני ספקטרה של virions ואת תאי שלפוחית

שיטה פשוטה אך יעילה המעסיקה חלקיקים מגנטיים כדי לזהות ולהעשיר תאי B-reactive אנטיגן לניתוח פונקציונלי פנוטיפי מתואר.

איתור והעשרה של נדיר- אנטיגן ספציפי בתאי B עבור ניתוח של הפנוטיפ ותפקוד

תאי T אנטיגן ספציפי קשים לאפיין או לנצל טיפולים עקב שלהם בתדר נמוך מאוד. במסמך זה, אנו מספקים פרוטוקול לפתח חלקיק מגנטי אשר ניתן לאגד בתאי T אנטיגן ספציפי כדי להעשיר תאים אלה ולאחר מכן להרחיב אותם כמה פי100 אפיון וטיפול.

להעשיר ולהרחיב בתאי T אנטיגן ספציפי נדיר עם חלקיקים מגנטיים

מוצג כאן פרוטוקול לבידוד מונוציט דם אנושי ראשי, כמו גם ההבידול שלהם לתוך מקרופאגים ותאים דנדריטיים והרכבה עם תאים אפיתל לתוך מודל ריאות אנושי רב תאי. תגובות ביולוגיות של cocultures המורכבים תאים חיסוניים מובדלים או חדוציטים מבודדים טריים או מופשרים, עם חשיפה לגירוייםדלקתיים, מושווים.

מודל אדם רב-תאי המורכב מתאי אפיתל ותאי מערכת החיסון העיקריים להערכת סיכונים

חלקיקי תחמוצת ברזל מסונתזים באמצעות הליך ג'ל סול לא רקיקי ומצוידים במולקולות קצרות אניוניות או פולימר. השימוש מגנטומטריה לניטור התאגדות ו biotransformations של חלקיקים מגנטיים בתוך תאי גזע אנושיים מודגם באמצעות מגנטומטר מדגם רוטט (VSM).

שימוש במגנטומטריה לניטור התאגדות תאית והתפרקות ביולוגית של חלקיקי תחמוצת ברזל מסונתטיים כימית

כאן אנו מציגים את הפרוטוקול לשחזור צעדים של תאים סינתטיים המציגים אנטיגן באמצעות Bilayers השומנים הנתמכים על ידי חרוזים ואת השימוש בהם כדי לחקור את הפלט הסינפטי מתאי T מופעלים.

הכנת Bilayers השומנים הנתמכים על ידי חרוזים לחקר תפוקת החלקיקים של הסינפסות החיסוניות של תאי T

למד טכניקת ריחוף מגנטי לזיהוי אנטיגנים בדם ולהפרדת תאים לפי צפיפות. השיטה מאפשרת זיהוי גורם רזוס ומחלות כמו אנמיה וספסיס בזמן קצר ובאופן מינימלי פולשני.

כימות של צפיפות תאית ומאפיינים אנטיגניים באמצעות ריחוף מגנטי

גלה סרטונים נוספים