מודל מכרסם איסכמי שלם של קרום הלב

שיטה זו תאפשר לנו להעריך את תפקידו של חלל קרום הלב המקיף את הלב ותכולתו בתיקון לב לאחר אוטם שריר הלב. בהשוואה לשיטות קשירה כליליות קונבנציונליות למידול אוטם שריר הלב, השיטה שלנו שומרת על חלל קרום הלב שלם, המאפשר קביעת תוכן ומעקב אחר תפקידיהם לאחר פגיעה איסכמית לבבית. הבנת התרומה של חלל קרום הלב ותגובת הפציעה של הלב תספק תובנות חשובות לגבי אסטרטגיות טיפוליות המכוונות אל קרום הלב כדי לשפר את ריפוי הלב.

כדי להתחיל עם הרדמה, לרסן את כפות העכבר ולמקם אותו על שולחן הניתוחים. לאחר הכנת העכבר לניתוח כמתואר בכתב היד, אווררו את העכבר ב-2% איזופלוראן וב-100% חמצן כגז נשא באמצעות מכונת הנשמה מסחרית. לאחר מכן קבע קצב של 110 נשימות לדקה, נפח גאות של 250 מיקרוליטרים, ולחץ פקיעה חיובי של ארבעה מילימטרים של כספית.

גלגלו את העכבר 30% על צדו הימני כדי למקם את צדו השמאלי של החזה לניתוח. לאחר מכן בצע חתך רוחבי של שניים עד שלושה סנטימטרים בעור החזה כדי לדמיין את שרירי החזה בצד שמאל. בצע חתך של סנטימטר אחד מקו האמצע כלפי חוץ לחיתוך החזה מז'ור ומינור.

הימנע דימום מוגזם לאורך צריבה של כלי דימום. דמיינו את השרירים הבין-קוסטליים בין הצלעות השלישית והרביעית. בצע חתך של שני סנטימטרים בשריר האינטרקוסטלי השמאלי כדי להכניס אוויר לחלל החזה ולאפשר ללב ולריאות ליפול מהחתך.

כדי לחדור את intercostal ללא דימום, לעצור באופן זמני את מכונת ההנשמה ולהרחיב את הפתח באמצעות מכשיר cautery. באמצעות retractors, לסגת את הצלעות כדי לחשוף את הלב. לאחר מכן התבונן בקרום הלב ובלב שמתחתיו תחת מיקרוסקופ סטריאו.

הניחו בעדינות את המלקחיים על משטח קרום הלב כדי להפחית את קרום הלב ואת תנועת הלב הבסיסית. ציון דרך חזותית של העורק הכלילי LAD על ידי התחקות אחר הופעתו מתחת לתוספת השמאלית. באמצעות דרייבר microneedle, להנחות תפר מתאים דרך קרום הלב תחת LAD.

שימו לב לתפר המגיח בצד השני של ה- LAD וקרום הלב. המייצגים את מודל הקשירה הקבועה, קושרים את התפר כדי להגביל את זרימת הדם דרך העורק הכלילי, מה שהופך את ההבלגה של החלק הקדמי של החדר השמאלי לגלויה. ואז לקצץ את התפר עודף בעזרת מספריים.

לספק זריקות תחזוקה של משכך כאבים תת עורית כל 12 שעות במשך 72 שעות לאחר הניתוח. לאחר הפחתת האיזופלוראן ל-1% מכבים את האיזופלוראן תוך שמירה על אוורור עם חמצן. ברגע שהחיה מראה סימני נשימה, הסר את צינור קנה הנשימה בן 23 המדים מהפה והנח את העכבר בכלוב התאוששות כדי לפקח על חידוש הנשימה.

אפשרו לעכבר להתאושש בכלוב כאשר חלק מהכלוב מונח על כרית חימום כדי לספק מקור חום חיצוני. עקוב אחר מצב הבריאות של העכבר מדי יום במשך שבעה ימים על ידי הערכת החתכים ואי הנוחות של בעלי החיים. במידת הצורך, לתת אנטיביוטיקה להחלמה מוצלחת לאחר הניתוח הפולשני.

לאחר שמירה על העכבר תחת הרדמה כללית עם חמצן, מניחים את העכבר במצב שכיבה על פלטפורמת במה מחוממת ומחברים את הכפות למוליכי האק"ג. ואז לשפשף את החזה. רכוש תמונות א.ק.ג. באמצעות בדיקה מתמר וג'ל מגע ונתח באמצעות התוכנה המתאימה.

לאחר הערכת א.ק.ג. לא פולשנית, כבו את האיזופלורן והחזירו את העכבר לכלוב. יש לקבע את הלב ב-10% פורמלין למשך 24 שעות לפחות. חותכים את הדגימה באמצעות סכין גילוח ישר דרך החדר הימני, המחיצה הבין-חדרית והחדר השמאלי, כדי להבטיח שהחתך יעבור דרך מרכז אזור האוטם.

ואז פרפין להטביע את דגימות הרקמה. לאחר מכן מניחים את החלקים החתוכים בקלטת הרכבה להטמעת פרפין נוספת ולחתכים הבאים למקטעים בעובי חמישה מיקרומטרים. לאחר מיקום של מקטעי רקמות על מגלשות, deparaffinize באמצעות טולואן ואלכוהול מדורג לשטוף עם מים deionized.

ואז לייבש מחדש. לאחר מכן, מכתימים את הקטע ב-0.1% סיריוס אדום בחומצה פיקרית למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לשטוף את החלק עם 0.5% חומצה אצטית במשך שלוש דקות ולאחר מכן לשטוף עם 70% אתנול במשך דקה אחת.

יש לייבש את החלק באמצעות סדר הפוך של שטיפות עם ריכוזי אתנול עולים ומדורגים לפני העלייה לצורך הערכה מיקרוסקופית. השראת אוטם שריר הלב המוצלחת עם הקשירה הכלילית המתוקנת הוערכה על ידי בחינת הפרמטרים התפקודיים והתכונות המבניות של הלב. לצורך תפקוד, ירידה בשבר פליטת החדר השמאלי הוערכה על ידי אקוקרדיוגרפיה תוך שלושה עד ארבעה שבועות של אוטם לאחר שריר הלב.

הכתמים ההיסטולוגיים הראו כי השינויים התפקודיים לוו בפיברוזיס משמעותי של דופן החדר השמאלי, אשר אושרו עוד יותר על ידי כימות של פיברוזיס מוכתם אדום picrosirius בחתכי הלב בארבעה שבועות לאחר אוטם עם מודלים קשירה כלילית קרום הלב משובש או שלם. שילוב שיטת תיוג החרוזים הפלואורסצנטיים עם ניתוח ציטומטריה של זרימה סיפק גישה למעקב אחר מקרופאגים פריקרדיאליים חיוביים של Gata6. חשוב לציין כי מעט מאוד תיוג זוהה בלב או בדם.

לאחר אוטם שריר הלב, ניתן לעקוב אחר מיקום התאים על ידי ציטומטריה של זרימה והדמיה. כימות של חרוז פלואורסצנטי שכותרתו תאים מיאלואידים קרום הלב עם או בלי אוטם שריר הלב מוצג. יש צורך בזהירות כדי למנוע הפרעה או קרע בשוגג של קרום הלב הדק במהלך ההליך.

שיטה זו יכולה להיות משולבת עם שושלת מעקב אחר מצור תאי או אפקטור, אשר יאפשר מעקב וקביעת ההשפעה של רכיב קרום הלב על תגובת הריפוי בלב האוטם. זיהינו את חלל קרום הלב מגן על הלב לאחר פציעה, אשר מתווכת בחלקה על ידי מקרופאגים קרום הלב המקומי. גישה זו פותחת תחום מחקר חדש למחלות לב וכלי דם.