Name: שיטת חיסון יעילה עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: למד שיטת חיסון יעילה ל-Phytophthora capsici בצמחי פלפל שחור באמצעות דקירת הבסיס והכיסוי בפטרייה. שיטה זו משפרת את היציבות והדיוק בדגימה לחקר אינטראקציות צמח-מחולל מחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה כספית על ידי תוכנית המחקר והפיתוח הלאומית של סין (2020YFD1001200), מערכת המחקר החקלאית של סין (CARS-11), קרן המחקר הספציפית של פלטפורמת החדשנות לאקדמאים של מחוז האינאן (YSPTZX202154), הקרן למדעי הטבע של מחוז האינאן בסין (321RC652), והקרן למדעי הטבע של סין (מס '31601626).

1. הכנת צמחי חיתוך פלפל שחור לזיהום
<ol><li>יש לבצע חיתוך של חמישה צמתים, באורך של כ-40 ס"מ בקוטר של 0.5 ס"מ, מענף אורתוטרופי בריא וצומח במרץ של פלפל שחור באמצעות סכין גיזום מחוטאת או פרשיות. גוזמים את שלושת הצמתים התחתונים של הענפים הפלגיוטרופיים, כאשר שני הצמתים העליונים נותרו עם כ-10 עלים שלמים.</li>
	<li>הכינו מצע השתרשות המכיל אדמה וזבל בעלי חיים (גללי פרות או גללי כבשים) ביחס של 1:1. Autoclaveed את מצע ההשתרשות ב 121 °C (66 °F) למשך 20 דקות.</li>
	<li>הכנס את החיתוכים למצע ההשתרשות בזווית של כ-50°, כאשר הצומת השלישי רק נוגע במשטח המצע ובניצן בית השחי בצומת זה מעל המצע. הערה: התיק המשמש כאן הוא בעל המידות הבאות: גובה של 40-60 ס"מ, קוטר של 25-30 ס"מ.</li>
	<li>יוצקים 10-20 ליטר מים על שורשי הצמח. מקם את החיתוכים בחממה עם 90% צל בטמפרטורה של 25-30 מעלות צלזיוס להשתרשות וצמיחה.</li>
</ol>2. התפשטות של פיטופתורה קפסיקי (P. capsici)
הערה: מלאי של תרבית Phytophthora capsici נשמר במעבדה להגנת הצומח של המכון לחקר התבלינים והמשקאות, האקדמיה הסינית למדעי החקלאות הטרופית7.
<ol><li>מברישים ומנקים את פקעות תפוחי האדמה תחת מי ברז זורמים ואז חותכים 200 גרם תפוחי אדמה לקוביות של 1 ס"מ3. מכניסים חלק מהקוביות לכוס המכילה 800 מ"ל של מים מזוקקים כפולים (ddH2O) ומרתיחים במשך 20 דקות.</li>
	<li>סנן את המרק באמצעות גזה כפולה באמצעות סינון כוח הכבידה. הכינו אגר דקסטרוז תפוחי אדמה (PDA) על ידי הוספת 20 גרם דקסטרוז ו-15 גרם אגר לתנין והגדלת הנפח עד 1 ליטר עם ddH2O. אוטוקלאב את התערובת ב-121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקותו-8 דקות.</li>
	<li>יוצקים 20 מ"ל של מחשב כף היד המעוקר בצורה נוזלית לתוך צלחת פטרי עגולה בקוטר 9 ס"מ בתוך מכסה מנוע זרימת אוויר למינרי. השאירו את לוחות ה-PDA עם מכסים פתוחים בתוך מכסה המנוע של זרימת האוויר הלמינרי למשך הלילה כאמצעי למניעת עיבוי.</li>
	<li>השתמשו בלולאת חיסון כדי לאסוף תפטירים ממלאי Phytophthora capsici בתוך מבחנה. הניחו את האינוקולום עם הצד התפטירי במגע עם ה-PDA בצלחת פטרי.</li>
</ol>3. זיהום של פלפל שחור
<ol><li>דגירה<ol>
<li>זהה שטח של 5 ס"מ מעל פני המצע וקרוב לשורשים על הגבעול לצורך חיסון.</li>
		<li>ליבת דיסק של תפטירים בקוטר 0.5 ס"מ בקצה ההולך וגדל של תרבית הקפסולית Phytophthora על מחשב כף יד בצלחת פטרי באמצעות בור פקק.</li>
		<li>פגעו בגבעול באמצעות מחט מזרק ויצרו שלושה חורים בתבנית משולשת באזור החיסון שנבחר. מכסים כל חור בדיסקה תפטירית. מקם את החורים קרוב זה לזה כדי להבטיח שהאזור הפצוע מכוסה במלואו בדיסקות התפטיר.</li>
		<li>מכסים את הדיסקים התפטיריים בכריות כותנה מעוקרות ולחות כאמצעי למניעת ייבוש. קשרו את הפד לגבעול עם רצועת פוליאתילן כדי לשמור על מיקום הדיסקים המחוסנים. הערה: בשעה 8 שעות לאחר החיסון, החורים המחוסנים הפכו שחורים והנגע התארך ככל שחלף הזמן. העלים הפכו צהובים ונשרו, והצמח המחוסן מת 7-10 ימים לאחר החיסון. לא התפתחו נגעים בצמחי הבקרה. רוב הגנים התבטאו באופן שונה לאחר חיסון עם Phytophthora capsici בהשוואה לקבוצת הביקורת. ניתוח היסטופתולוגי של הרקמות הנגועות הראה כי פיטופתורה קפסיצ'י התיישב בקסילם.</li>
	</ol>
</li>
	<li>דגימת החומרים הצמחיים המעניינים ומאחסנת בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס בחנקן נוזלי לשימוש במחקרים הבאים. הערה: חנקן נוזלי, שקיות פלסטיק, עטי טוש, גזירה של ענפים וחומרים אחרים הוכנו לפני הניסויים.</li>
	<li>לאחר שהחומרים הצמחיים הספציפיים נדגמים לשימוש, ציידו באופן אוטומטי את כל החומרים הצמחיים הנותרים, את תרבית הקפסולה של Phytophthora ואת מדיום התרבית, ואת כל המכשירים וכלי המעבדה המשמשים בעבודת חיסון זו.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
<li>Chatterjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+some+phenolic+constituents+from+green+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+fresh+nutmeg+mace+%28Myristica+fragrans%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans).</a> Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).</li>
<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

במחקר זה, ראש הבסיס ננעץ כדי לגרום נזקים ולספק מערכת חיסונים יעילה בצמח הפלפל השחור. לאחר מכן כיסו כדורי התפטיר את שלושת החורים כדי לשמור על הלחות ולאפשר לפתוגן להדביק את הצמח היטב. לאחר החיסון, העלים הפכו צהובים ונשרו והצמחים המחוסנים מתו. לא התפתחו נגעים בצמחי הבקרה. רוב הגנים התבטאו באופן שונה לאחר חיסון עם Phytophthora capsici בהשוואה לקבוצת הביקורת. מחלות פטרייתיות אחראיות להפרעות מבניות ופיזיולוגיות במספר משמעותי של גידולים, מה שמוביל לירידה בפריון ולהפסדים כלכליים עבור היצרנים שלהן. מחקרים מבניים המשתמשים...

פלפל שחור (Piper nigrum L.) הוא מטפס עצי ואחד מגידולי התבלינים החשובים ביותר. הוא ידוע בשם "מלך התבלינים"1 והוא מעובד ביותר מ -40 מדינות ואזורים ברחבי אסיה, אפריקה ואמריקה הלטינית. ריקבון שורש פיטופתורה הוא המחלה ההרסנית ביותר של פלפל שחור, והוא נגרם על ידי oomycete Phytophthora capsici. פתוגן זה מדביק גם קוקורביטים, חצילים, פלפלי צ'ילי ועגבניות 2,3. עם פלפל שחור, יבול שלם יכול לפעמים להיות מרוסק על ידי מחלה זו. התרחבות אזורי שתילת הפלפלים מוגבלת כתוצאה מחוסר זמינותם של זנים עמידים, מה שעיכב משמעותית את התפתחות תעשיית הפלפל השחור הסינית. חיסון יעיל ומערכת דגימה מדויקת של Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור חיוניים לחקר האינטראקציה בין צמחים לפתוגנים.
זיהוי וסינון של עמידות במשאבי נבט הוא הדרישה הבסיסית לחקר הפתוגניות של הפתוגן וגידול וניצול של זנים עמידים. גישה נפוצה היא שימוש במגוון שיטות זיהוי המבוססות על מיני צמחים וקבוצות פתוגנים. שיטות הזיהוי הנוכחיות כוללות זיהוי אוכלוסייה, זיהוי אישי, זיהוי איברים, זיהוי רקמות, זיהוי תאים, זיהוי ביוכימי וזיהוי מולקולרי, אשר פותחו בשנים האחרונות 4,5. הייתה הצלחה בתחומים אלה, אך יש גם בעיות רבות. לא משנה באיזו שיטה נבחרה, הדרישות הבסיסיות של זיהוי עמידות הצמחים הן עקביות, כולל מטרות ברורות, תוצאות אמינות ושיטות פשוטות, מהירות וקלות לסטנדרטיזציה. עיקרון זה חייב להתבצע גם בזיהוי עמידות פלפל שחור.
בתנאי שדה טבעיים, זיהוי עמידות למחלות יכול להיות מושפע מגורמים סביבתיים רבים. לכן, הוצע כי עלים מנותקים ושורשים מושקים ישמשו במעבדה כדי לזהות עמידות למחלות. עלים צעירים מצמחים בריאים חוסנו במבחנה במעבדה, ואזור העלים החולים נמדד על ידי חיסון הפתוגן על מנת לזהות את עמידותם למחלות של צמחים6. עם זאת, חיסון עלים במבחנה יכול לשמש רק לזיהוי התנגדות כללית ולא למחקרי אינטראקציה מולקולרית. למרות זאת, הסטטוס העמיד למחלה מופיע לעתים קרובות בחיסון השורש המושקה, וגורם לאי-ודאות במחקר המעקב אחר גידול מולקולרי לעמידות למחלות. לכן, שיטות זיהוי מהירות ופשוטות בתוך הבית הן חיוניות. מחקר זה נועד לספק שיטה לזיהוי עמידות במעבדה.

<table><tbody><tr><td>אבקת אגר</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>ספסל נקי</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Xilong Scientific</td><td>15700501</td><td></td></tr><tr><td>תנור עיקור בטמפרטורה גבוהה</td><td>Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צלחות צלחת</td><td>פטרי Biosharp</td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטת חיסון יעילה עבור phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

פייפר ניגרום ל. (פלפל שחור) הוא גפן עצית טיפוסית שהיא גידול תבלינים חשוב מבחינה כלכלית ברחבי העולם. ייצור הפלפל השחור מושפע באופן משמעותי ממחלת ריקבון השורשים הנגרמת על ידי Phytophthora capsici, אשר השפיעה קשות על התפתחות התעשייה כבעיית "נקודת חנק". עם זאת, המנגנון הגנטי המולקולרי של עמידות בפלפל שחור אינו ברור, מה שמוביל להתקדמות איטית בפיתוח זנים חדשים של פלפל שחור. חיסון יעיל ומערכת דגימה מדויקת עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור חיוניים לחקר האינטראקציה הזו בין צמחים לפתוגנים. המטרה העיקרית של מחקר זה היא להדגים מתודולוגיה מפורטת שבה הראש הבסיסי של פלפל שחור מחוסן עם Phytophthora capsici, תוך מתן התייחסות גם לחיסון של צמחי גפן עציים. הראש הבסיסי של צמח הפלפל השחור ננעץ כדי לפגוע בו, וכדורי תפטיר כיסו את שלושת החורים כדי לשמור על הלחות כדי שהפתוגן יוכל להדביק את הצמח היטב. שיטה זו מספקת דרך טובה יותר לפתור את חוסר היציבות הנגרם על ידי שיטות חיסון מסורתיות כולל סחף אדמה או טבילת שורשים. הוא גם מספק אמצעי מבטיח לחקר אופן הפעולה בין צמחים לבין פתוגנים צמחיים אחרים הנישאים בקרקע בגידול חקלאי מדויק.

איור 1 מראה את הסימפטומים של עלי פלפל שחור בעקבות חיסון P. capsici . איור 2 מראה את הסימפטומים של גבעולי פלפל שחור לאחר חיסון P. capsici . הפתוגן הדביק את הפלפל השחור בגזע הבסיס; תסמינים הכוללים הצהבת עלים, הופעת רטט, השחמה של קסילם והשחרת כלי דם המופיעים בהדרגה. איור 3 מראה שרוב הגנים באים לידי ביטוי באופן שונה לאחר החיסון עם Phytophthora capsici בהשוואה לקבוצת הביקורת. איור 4</strong...

הצמדת הראש הבסיסי של צמח הפלפל השחור היא שיטה קצרה וחסכונית בזמן כדי לפגוע בו. כאן סיפקנו שלבים מפורטים עם סרטון להדבקת צמחי פלפל שחור.

שיטת חיסון יעילה עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

הניסוי הבא מציג חיסון יעיל ושיטת דגימה מדויקת עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור. פלפל שחור, שהוא גפן עצית טיפוסית, הוא גידול תבלינים חשוב מבחינה כלכלית. ייצור הפלפל השחור מושפע בעיקר ממחלת ריקבון השורשים הנגרמת על ידי Phytophthora capsici, והשפיע קשות על ההתפתחות התעשייתית.חיסון יעיל ומערכת דגימה מדויקת של Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור חשובים לחקר האינטראקציה בין צמחים לפתוגנים. המטרה העיקרית של מחקר זה היא להדגים מתודולוגיה מפורטת שבה ראש הבסיס של פלפל שחור חוסן עם Phytophthora capsici, וגם לספק התייחסות לחיסון של צמחי גפן עציים. שיטה זו מספקת דרך טובה יותר לפתור את חוסר היציבות שמביאה שיטת החיסון המסורתית, כגון טבילת קרקע או טבילת שורשים.הליכים ניסיוניים. גזרי הפלפלים השחורים נשתלים בסביבה המבוקרת במשך חודשיים. תת-תרבות את הקפסול של פיטופתורה, ודגירה במשך חמישה ימים מתחת ל-25 מעלות צלזיוס.ביום ההדבקה, גושי האגר מכוסים בשלושת החורים שהודבקו על ידי המחט. ולבסוף, לאפיין את הסימפטומים של המחלה. הכנת צמחי חיתוך פלפל שחור לזיהום.חתכו ענפים אורתוטרופיים באורך של 40 ס"מ ובקוטר של 0.5 ס"מ, והסירו ענפים פלגיוטרופיים בצמתים התחתונים על ידי סכין סטרילית וסקטאור. הענף החתוך צריך להכיל שני צמתים וחמישה עלים בחלק העליון כדי להפחית את אובדן המים. חותכים את החלק העליון לחיתוך שטוח ואת החלק התחתון לחיתוך אלכסוני.מצע ההשתרשות של חיתוך הפלפל השחור הוכן לתערובת, המכילה אדמה וזבל בעלי חיים, כגון גללי פרות, גללי כבשים וכו ', ביחס של אחד לאחד. האדמה הייתה אוטוקלבית בטמפרטורה של כ-121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. השתמשו בשקיות הרבייה בקוטר 30 ס"מ ובגובה של 50 סנטימטרים כדי למקם את מצעי ההשתרשות.הכינו שיפוע של 50 מעלות כדי למלא את המצעים. החיתוכים הונחו בזווית של 50 מעלות, עם יותר משלושה צמתים מתחת למצע. הם היו מכוסים במדיום ההשתרשות וחלק העזר צריך להיצמד למדיום.לבסוף, החיתוכים חדרו במלואם. חיתוך ישר אומץ כדי להכניס את החיתוך. הכנת תרביות פיטופתורה קפסיקי.בחרו בתפוחי אדמה ללא מחלות. נקו את תפוחי האדמה וחתכו לריבועים קטנים. מניחים 200 גרם תפוחי אדמה ב 800 מיליליטר של מים מזוקקים כפול, מבושל במשך 20 דקות.לאחר מכן סנן את התערובת. הוסף 20 גרם דקסטרוז. ממלאים את התערובת לליטר אחד במים מזוקקים כפולים.מוסיפים 15 גרם של אבקת אגר בתפיח. מחלקים את המדיום לצלוחיות, ואטמים באמצעות Parafilm. Autoclave את המדיום ב 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.מדיום מחושב של אגר תפוחי אדמה חולק לצלחות כלי הפטרי, והתקרר על הספסל הסטרילי לצורך התמצקות. מחט החיסון עברה חיטוי על ידי חימום באמצעות מנורת שריפת אלכוהול, וקירור למשך מספר שניות. קחו חתיכות קטנות של דגימות פטריות באמצעות חיסון סטרילי והניחו על מחשב כף יד.התפטיר מכסה כשלושת רבעי מהצלחת. תרבויות מוכנות לניסוי נוסף. זיהום של פלפלים שחורים.המיקום של חמישה סנטימטרים הרחק מפני השטח של המצע נחשב כמקום הדגירה. מיקום הדגירה לא צריך להיות רחוק מהשורש, במטרה למנוע הארכת זמן ההדבקה. שלבים מפורטים של pinpricking הם כדלקמן.כדור תפטיר של Phytophthora capsici נאסף באמצעות בור פקק. יש לציין כי כדורי תפטיר שפותחו לאחרונה בקצה הצלחת נבחרו באופן מועדף בגלל פעילותם ההדבקה הגבוהה יותר. מעקרים גבעול באמצעות 75% אתנול ולוקחים שלוש נקבוביות משולשות בתנוחה המעוקרת באמצעות מחט החיסון.שלוש נקבוביות משולשות במקום החיסון נתקעו באמצעות מחט החיסון, וכדורי תפטיר כוסו על שלוש הנקבוביות. לאחר שמונה שעות, הנקבוביות הפכו שחורות באופן כללי. ההתרחבות הורחבה עם הארכת הדגירה.לאחר שבעה עד עשרה ימים, העלים הפכו צהובים ונשרו, עד שמתו פלפל שחור. התוצאות הייצוגיות הן כדלקמן. לאחר ההדבקה, הסימפטומים מופיעים על צמחי הפלפל השחור, כולל הצהבה וליטוף עלים, השחמה של קסילם והשחרת כלי דם.רוב הגנים התבטאו באופן שונה לאחר החיסון עם Phytophthora capsici, בהשוואה לקבוצת הביקורת. הניתוח ההיסטופתולוגי של רקמות נגועות הדגים כי Phytophthora capsici התיישבו בקסילם. מסקנה. במחקר זה, נעשה שימוש בהצמדת ראש הבסיס כדי לגרום לו להינזק כדי לספק חיסון יעיל, ואת מערכת ההכפלה בפלפל שחור.בינתיים, פרוטוקול זה מייצג גם דרך יעילה יותר לספק התייחסות לדגירה עם - השיטה שלנו יכולה לתת יותר זמן ולפעול בקצרה יותר. פרוטוקול זה מספק תוצאה טובה יותר, המאפשרת אינטראקציה חזקה בין צמח אחד לבין הפתוגן הנישא בקרקע. אשר נראה ונוח לזהות את התהליך הדינמי בין צמחים לבין הפתוגנים שלהם.בשיטה שלנו אנו מתחילים להצמיד את הראש הבסיסי של צמח הפלפל השחור כדי לגרום לו להזיק להם. לאחר מכן, האזור הפגוע מכוסה ישירות ב- Phytophthora capsici, ושומר על הלחות. כך שהפתוגן יכול להדביק את הצמח.אנו גם מספקים דרך מבטיחה לחקר אופן הפעולה בין צמחים לבין פתוגנים אחרים של צמחים הנישאים בקרקע ברבייה חקלאית מדויקת.

an-effective-inoculation-method-for-phytophthora-capsici-on-black

Research

JoVE Journal

Genetics

גנטיקה

מקור: רופיאן, י. ס., et.al. ניתוח תא יחיד של ביטוי גני Pseudomonas syringae ברקמת הצמח. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים שיטת חדירה בוואקום להכנסת פתוגן חיידקי לעלי הצמח של ארבידופסיס . הגישה עושה שימוש במתלה חיידקי מוכן ובפולסים של ואקום כדי לאפשר כניסה אחידה דרך סטומטה, מה שמוביל לזיהום עלים מבוקר.

חיסון פתוגן חיידקי לעלים של ארבידופסיס באמצעות חדירת ואקום

סרטון זה מדגים את בדיקת עיכוב צמיחת השתיל בצמח Arabidopsis thaliana . ההשפעה של ריכוז מוגבר של פפטיד חיסוני מעורר על צמיחת שתילים נקבעת.

מדידת עיכוב של צמיחת שתילים על ידי מערכת החיסון

פרוטוקול זה מדגים שתי שיטות חיסון להציג entomopathogen...

הקמת Entomopathogens פטרייתיים כEndophytes: לקראת ההדברה ביולוגית Endophytic

השימוש בשיטת הזרקת מחט לחסן תירס וצמחי teosinte עם פתוגן ביוטרופי Ustilago maydis מתואר.  שיטת החיסון להזרקת מחט מקלה על מסירה מבוקרת של הפתוגן הפטרייתי בין עלי הצמח שבהם הפתוגן נכנס לצמח באמצעות היווצרות appresoria. שיטה זו יעילה ביותר, ומאפשרת חיסונים הניתנים לשחזור עם U. maydis.

שיטה מהירה ויעילה להערכת פתוגניות של מיאדי אוסטילגו על קווי תירס וטוסינטה

אגרואינפיציה ו- PVX agroinfection הם מבחנים תפקודיים שגרתיים לביטוי חוץ רחמי חולף של גנים בצמחים. שיטות אלה הן מבחנים יעילים באסטרטגיות אפקטאורומיות (התנגדות מהירה ותגלית גנים ארסית) וחיוניות למחקר מודרני בפתולוגיה של צמחים מולקולריים. הם עונים על הביקוש לניתוח תפקודי חזק בעל תפוקה גבוהה בצמחים.

אגרוינפינציה ו- PVX אגרוינבינציה בתפוח אדמה וניקוטיאנה בנתאמיאנה

כימות צמיחת פתוגנים הוא כלי רב עוצמה לאפיון תגובות חיסוניות שונות של Arabidopsis thaliana (להלן: Arabidopsis). השיטה המתוארת כאן מציגה בדיקת חדירת מזרק אופטימלית לכימות Pseudomonas syringae pv. מקוליקולה גידול ES4326 בעלים בוגרים של Arabidopsis.

חיידקי עלה הסתננות Assay עבור אפיון פיין של תגובות הצמחים ביטחון באמצעות<em&gt; Thaliana-Pseudomonas ארבידופסיס syringae</em&gt; Pathosystem

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כדי לבדוק התקפה אלימה צמח עם המחלה צמח Magnaporthe grisea. דוח זה לתרום הקרנת בקנה מידה גדול pathotypes של פטריות מבודד, לשמש נקודת התחלה מצוינת להבנת מנגנוני עמידות הצמחים במהלך ההתרבות מולקולרית.

הבדיקה זיהום צמח: ריסוס, בתיווך הפצע חיסון עם הפתוגן של צמח Magnaporthe Grisea

אנו מציגים פרוטוקול לבניית מערכת הפצת נבגים פשוטה המורכבת מקופסת חיסון עם רשת ~ 50 מיקרומטר ותא פלסטיק שקוף. ניתן להשתמש בו כדי לחסן צמחים באופן שווה בנבגי טחב אבקתיים, ובכך לאפשר הערכה מדויקת וניתנת לשחזור של פנוטיפים של מחלות של צמחים נחקרים.

שיטת חיסון קלה וגמישה להערכה מדויקת של פנוטיפים של זיהום טחב אבקתי של ערבידופסיס וצמחים אחרים

פרוטוקול זה מציג סיכום מפורט של אסטרטגיות לחיסון שורשי צמחים עם מיקרובים הנישאים באדמה. דוגמאות לפטריות Verticillium longisporum ו-Verticillium dahliae, מתוארות שלוש מערכות שונות של זיהום שורשים. יישומים פוטנציאליים וניתוחים אפשריים במורד הזרם מודגשים, ויתרונות או חסרונות נדונים עבור כל מערכת.

אסטרטגיות חיסון להדבקת שורשי צמחים במיקרואורגניזמים הנישאים בקרקע

פרוטוקול זה מציג מערכת ביו-אסאי אופטימלית של עלים מנותקים להערכת היעילות של פטריות אנטומופתוגניות (EPF) נגד כנימת החרדל (Lipaphis erysimi (Kalt.)), חרק פרתנוגנטי. השיטה מתארת את תהליך איסוף הנתונים במהלך ניסויים בצלוחית פטרי, ומאפשרת לחוקרים למדוד באופן עקבי את האלימות של EPF נגד כנימות חרדל וחרקים פרתנוגנטיים אחרים.

הערכת ההשפעה של פטריות אנטומופתוגניות נגד חרק פרתנוגנטי, כנימת חרדל, Lipaphis erysimi (Kalt.)

הוקם פרוטוקול בדיקה ביולוגית של עלים מנותקים לגידול המוני של תריפס צ'ילי בשיטת עלים מנותקים שונה במיכלי זכוכית המכילים אגר, מה שמבטיח הישרדות גבוהה והתפתחות מסונכרנת. מערכת זו מאפשרת סינון יעיל של אלימות פטריות אנטומופתוגניות כנגד זחלי כוכב 2 ומספקת אספקת תריפס אמינה להערכות מעבדה, חממה ושדה.

הקמת מערכת גידול תריפס צ'ילי (Scirtothrips dorsalis Hood) לבדיקת אלימות של פטריות אנטומופתוגניות

למד שיטת חיסון יעילה ל-Phytophthora capsici בצמחי פלפל שחור באמצעות דקירת הבסיס והכיסוי בפטרייה. שיטה זו משפרת את היציבות והדיוק בדגימה לחקר אינטראקציות צמח-מחולל מחלה.

שיטת חיסון יעילה עבור Phytophthora capsici על צמחי פלפל שחור

גלה סרטונים נוספים