שמירה על תרביות מעבדה של Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות

טכניקות אלה מתארות שיטות מעשיות ומוכחות לגידול Gryllus bimaculatus, מיני מיני בעלי חיים מרכזיים שגודלו עבור מזון לבעלי חיים ומזון לבני אדם ואורגניזם מודל חלופי חשוב יותר ויותר. שיטות מעבדה אלה לתרבות של Gryllus bimaculatus נגזרות מטכניקות הנפוצות ברחבי תעשיית חקלאות הקריקט בצפון אמריקה ומייצגות פקסימיליה בקנה מידה מעבדתי של פעולות חקלאיות קריקט. כדי להתחיל, tared מיכל נקי על איזון, ולשקול מסה של קוקוס יבש coir בערך בגודל של אגרוף אנושי.

לאחר מכן, הכניסו את הקויר למיכל אטום ונקי, שיכול להכיל הרחבה של עד פי שישה מהנפח המקורי. בידיים נקיות, מפרקים בעדינות גושים של קור מהחתיכה שהוסרה מהגוש הגדול יותר. לאחר מכן, באמצעות גליל מדורג של 250 מיליליטר, למדוד את הנפח הנכון של מים שעברו דה-יוניזציה כדי להשיג יחס של חמישה לאחד לפי מסה של חמישה חלקים מים לחלק אחד של coir יבש, ולהוסיף את המים הנמדדים שעברו דה-יוניזציה לאט, תוך הידרציה שווה של כל חלקיקי הקויר.

לאחר מכן, תקעו גושים באופן ידני כדי להבטיח הידרציה אחידה, וטפחו מחדש את המיכל שבו נשקל בעבר הקויר. שוקלים 75 גרם של קויר רטוב, ומעבירים אותו לתבשיל פטרי בגודל 100 מילימטר על 15 מילימטרים באמצעות כף פלסטיק נקייה כדי להבטיח שהקואר מפוזר באופן שווה סביב תחתית המנה ושאין גושים. לאחר מכן, תייגו את הצד של צלחת הפטרי בנייר דבק עם תווית המציינת את מושבת הלידה ואת תאריך אירוע איסוף הביצים.

יש למדוד 45 מיליליטרים נוספים של מים שעברו דה-יוניזציה לתוך גליל מדורג, ולהוסיף מים באופן שווה על פני השטח של הקויר הארוז בצלחת פטרי כדי להבטיח הידרציה אחידה. לאחר שארזו צלחת הפטרי, אטמו את הקויר הרטוב שנותר בכלי אטום לאחסון במינוס 20 מעלות צלזיוס. מכניסים את מצע הצרצרים המיובש לכלובים המכילים את המלאי ההורי הרצוי של צרצרים רחוק ככל האפשר מההזנה, ומתעדים את התאריך והשעה.

לאחר מכן, הניחו כלי קיבול פסולת קטן וניתן לטיפול אוטומטי על משטח העבודה. לאחר מכן, הניחו כלוב פלסטיק נקי, ריק, בנפח 29.3 ליטר, על הספסל ליד כלי הקיבול לפח האשפה. הניחו עוד כלוב בנפח 29.3 ליטרים המכיל את מלאי הקריקט ההורי ואת מצע ההטבעה בצד הנגדי של כלי הקיבול לאשפה מהכלוב הריק.

לאחר 24 שעות, הסירו את מצע הקריקט מכלוב הקריקט האב, ואתרו אותו מעל כלי פסולת אוטוקלאבי. בדקו את החלק העליון של מצע ה-oviposition עבור חלקיקים כלשהם של frass או הזנה שייתכן שהצרצרים בעטו על פני השטח של הקויר. לאחר מכן, מוציאים מזהמים לתוך כלי הפסולת בעזרת כף פלסטיק נקייה, ומכניסים את כף הפלסטיק לכלי הקיבול של הפסולת.

לאחר מכן, הניחו את מצע ה-oviposition המנוקה בכלוב הנקי, בנפח 29.3 ליטר. לאחר מכן, מניחים את הכלוב באינקובטור שנקבע ל-27 מעלות צלזיוס בלחות יחסית של 60% על פוטופריוד בהיר בחושך של 12 שעות ו-12 שעות. החזירו את הכלוב המכיל את מלאי הרבייה למיקום המקורי, ונקו את כל הפריטים ממשטח העבודה.

לאחר מכן, הכניסו את כלי הקיבול לפסולת במקפיא במתקן המוקדש לאחסון פריטים שעלולים להיות מזוהמים בביצי קריקט. לאחר מכן, לחטא את משטח העבודה עם תמיסת אקונומיקה של 10%, ולתת לו לשבת במשך 60 שניות. נגבו את משטח העבודה יבש במגבת נייר נקייה.

לאחר פתיחת המקפיא, השליכו את מגבת הנייר לכלי הקיבול לפסולת. בחר שני משטחי קרטון ביצים מסחריים בגודל 30.8 ס"מ על 30.8 ס"מ שאינם בשימוש. ועם סכין שירות או גזירה חזקה, חותכים אותם לשש רצועות נפרדות ברוחב 10.1 ס"מ בגודל שווה.

לאחר מכן, הברישו את הקצוות החתוכים בידיים כדי להסיר חלקיקים משתלשלים של קרטון. לאחר מכן, מקם את שש חתיכות הקרטון הבודדות בגודל 10.1 ס"מ על 30.8 ס"מ אנכית לתוך תחתית הכלוב, כאשר הציר הארוך יותר של הקרטון משתרע על הציר האופקי הצר יותר של כלוב 29.3 ליטר. הניחו חתיכת קרטון שביעית שטוחה על פני החלק העליון של ששת החלקים הזקופים.

לאחר בחירת שלוש חתיכות של מגבת נייר מחוספסת וחומה בגודל של כ-25 ס"מ על 25 סנטימטרים, יש לקפל כל אחת לחצי. לאחר מכן, הניחו שניים כך שהם יכסו את החלק העליון של הצד הפרוקסימלי של מבנה הקרטון, והניחו אחד מעל ערימת הקרטון בצד הדיסטלי. ביום ה-11 שלאחר האוביפוזיציה, הזיזו את מצע ה-oviposition לפינה הימנית הפרוקסימלית של הכלוב.

כאשר צופים בבקיעה, מערפלים את מגבות הנייר המונחות על גבי הקרטונים פנימה, עד שהם נרטבים, אך לא שופכים מים באופן פעיל. לאחר מכן, נגבו היטב את שני הצדדים של מכסה פטרי בקוטר 100 מ"מ עם 70% אתנול, והניחו לו להתייבש. לאחר מכן, מכניסים 50 גרם מההזנה לבלנדר של 60 וואט בהגשה יחידה, ומטחנים ב-10, 000 סל"ד למשך דקה אחת.

לאחר מדידת גרם אחד של ההזנה, לנער אותו על מכסה צלחת הפטרי בכלוב. בעזרת הקצה הנקי של כף או סקופולה, מפזרים את ההזנה בצורה אחידה ככל האפשר על תחתית המנה. לאחר מכן, החלף את ההזנה כל יומיים.

השליכו את ההזנה הישנה במיכל הפסולת הניתן להפרדה אוטומטית. עקוב אחר צמיחת עובש בהזנה. ואם ההזנה מתחילה להיראות לבנה או ירקרקה, השליכו את צלחת הפטרי והאכילו מיד.

לאחר 14 יום, השתמשו במכחול באורך 2.54 ס"מ כדי להסיר צרצרים הנצמדים למצע הקויר המולד על ידי הברשה של כל הצרצרים ממשטח הקויר והצדדים של צלחת הפטרי לתוך הכלוב. לאחר מכן, מניחים את מצע הפסולת שהוסר לתוך כלי הקיבול של הפסולת האוטוקלבית, ומאחסנים אותו במקפיא עד לעיסוק באוטוטלביזציה. לאחר מכן, החליפו את מצע הלידה בצלחת קויר טרייה להידרציה.

באמצעות בקבוק שטיפת מים שעבר דה-יוניזציה, מוסיפים מים עד שפני השטח של הקויר מנצנצים, אך אינם מתמזגים. צרצרים היו מלאים מאוכלוסייה עם מסה ממוצעת של 21 מיליגרם. בסוף הניסוי, המסה הממוצעת של כל הצרצרים הצעירים והבוגרים המשולבים הייתה 0.724 גרם.

בגיל 65 ימים, כאשר הניסוי הסתיים, נכחו 30 זכרים בוגרים, והמסה הממוצעת הייתה 0.721 גרם, בעוד שעבור 58 הנקבות הבוגרות, המסה הממוצעת הייתה 0.841 גרם. שיעור הניצולים בין המלאי לקציר היה 89% ונמדד מדי שבוע על ידי הספירה הכוללת של כל הצרצרים הבודדים בכל הכלובים. ביום ה-65, כ-68% מכלל הצרצרים הגיעו לכוכב הבוגר.

הימנע היווצרות של טיפות מים על קרקעית המתחם בעת השקיה או ערפל. הנחת מגבת נייר על רפוגיה מאפשרת שיפוע לחות וסופגת טיפות מים מערפל. הליך זה משמש כתבנית לחוקרים בתחומים רבים של מדעי החיים כדי לגדל את Gryllus bimaculatus כאורגניזם מודל.

עד כה פורסמו פרוטוקולים רשמיים מעטים לגידול Gryllus bimaculatus או כל אורגניזם אחר במודל פאורומטבולי. קודיפיקציה וסטנדרטיזציה של שיטות גידול לחרקים המשמשים בחקלאות חרקים יאפשרו טוב יותר להשוות תוצאות בין קבוצות מחקר.