Name: שמירה על תרביות מעבדה של Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: למד שיטות גידול מעבדה ל-Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ומחקר פיזיולוגי. הפרוטוקולים הסטנדרטיים מבטיחים תוצאות עקביות בגידול חרקים למזון ולמחקר מדעי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המימון לפרויקט זה התאפשר הודות למענקים פנימיים של אוניברסיטת ויסקונסין-מדיסון. תודה כנה לקווין באצ'ובר מ-Bachhuber Consulting Inc. על הגישה למדריך שלו שלא פורסם לגידול קריקט מסחרי ולמייקל ברטלט סמית' על עזרתו בעידון ופתרון בעיות של שיטות אלה.

<ol><li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+a+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Merkel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+temperature+and+food+quality+on+the+larval+development+of+Gryllus+bimaculatus+%28Orthoptera%2C+Gryllidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">The effects of temperature and food quality on the larval development of Gryllus bimaculatus (Orthoptera, Gryllidae).</a> Oecologia. 30 (2), 129-140 (1977).</li>
<li>Bateman, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+preference+for+novel+partners+in+the+cricket+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Ecological+Entomology%22%5BJournal%5D)">Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Ecological Entomology. 23 (4), 473-475 (1998).</li>
<li>Mito, T., Noji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two-spotted+cricket+Gryllus+bimaculatus%3A+An+emerging+model+for+developmental+and+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">The two-spotted cricket Gryllus bimaculatus: An emerging model for developmental and regeneration studies.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Ylla, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricket+genomes%3A+the+genomes+of+future+food%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Cricket genomes: the genomes of future food.</a> BioRxiv. , (2020).</li>
<li>Hanboonsong, Y., Jamjanya, T., Durst, P. B. Six-legged livestock: edible insect farming, collecting, and marketing in Thailand. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org/docrep/017/i3246e00.htm">http://www.fao.org/docrep/017/i3246e00.htm</a> (2013).</li>
<li>Halloran, A., Roos, N., Hanboonsong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricket+farming+as+a+livelihood+strategy+in+Thailand%5BTitle%5D)+AND+%22Geographical+Journal%22%5BJournal%5D)">Cricket farming as a livelihood strategy in Thailand.</a> Geographical Journal. 183 (1), 112-124 (2017).</li>
<li>Wade, M., Hoelle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+edible+insect+industrialization%3A+scales+of+production+and+implications+for+sustainability%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">A review of edible insect industrialization: scales of production and implications for sustainability.</a> Environmental Research Letters. 15, 123013(2020).</li>
<li>EL-Damanhouri, H. I. H. Studies on the influence of different diets and rearing conditions on the development and growth of the two-spotted cricket Gryllus bimaculatus de Greer. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf">https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf</a> (2011).</li>
<li>Ngonga, C. A., Gor, C. O., Okuto, E. A., Ayieko, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+performance+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus+production+reared+under+improvised+cage+system+for+increased+returns+and+food+security%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">Growth performance of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus production reared under improvised cage system for increased returns and food security.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7, 301-310 (2021).</li>
<li>Behrens, W., Hoffmann, K. -H., Kempa, S., Gäßler, S., Merkel-Wallner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diurnal+thermoperiods+and+quickly+oscillating+temperatures+on+the+development+and+reproduction+of+crickets%2C+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Effects of diurnal thermoperiods and quickly oscillating temperatures on the development and reproduction of crickets, Gryllus bimaculatus.</a> Oecologia. 59 (2-3), 279-287 (1983).</li>
<li>Collavo, A., et al. Housecricket smallscale farming. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCollavo%2C+A+%22Ecological+implications+of+minilivestock.+Potential+of+insects%2C+rodents%2C+frogs+and+snails%22">Ecological implications of minilivestock. Potential of insects, rodents, frogs and snails</a>. Paoletti, M. G. , Science Publishers. Enfield, N.H., USA. Chapter 27 (2005).</li>
<li>Simmons, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competition+between+larvae+of+the+field+cricket%2C+Gryllus+bimaculatus+%28Orthoptera%3A+Gryllidae%29+and+its+effects+on+some+life-history+components+of+fitness%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Ecology%22%5BJournal%5D)">Competition between larvae of the field cricket, Gryllus bimaculatus (Orthoptera: Gryllidae) and its effects on some life-history components of fitness.</a> Journal of Animal Ecology. 56, 1015-1027 (1987).</li>
<li>Sorjonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant-based+by-product+diets+for+the+mass-rearing+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">The plant-based by-product diets for the mass-rearing of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218830(2019).</li>
<li>Maciel-Vergara, G., Jensen, A. B., Lecocq, A., Eilenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+in+edible+insect+rearing+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">Diseases in edible insect rearing systems.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7 (5), 1-18 (2021).</li>
<li>Alexander, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressiveness%2C+territoriality%2C+and+sexual+behavior+in+field+crickets+%28Orthoptera%3A+Gryllidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Aggressiveness, territoriality, and sexual behavior in field crickets (Orthoptera: Gryllidae).</a> Behaviour. , 130-223 (1961).</li>
<li>Pet food, fish bait, and animal feed. USDA APHIS. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed">https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed</a> (2022).</li>
<li>Donoughe, S., Extavour, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+development+of+the+cricket+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Developmental Biology. 411 (1), 140-156 (2016).</li>
<li>Dobermann, D., Michaelson, L., Field, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+an+initial+high-quality+feeding+regime+on+the+survival+of+Gryllus+bimaculatus+%28black+cricket%29+on+bio-waste%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">The effect of an initial high-quality feeding regime on the survival of Gryllus bimaculatus (black cricket) on bio-waste.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 5 (2), 1-8 (2018).</li>
<li>Lundy, M. E., Parrella, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crickets+are+not+a+free+lunch%3A+Protein+capture+from+scalable+organic+side-streams+via+high-density+populations+of+Acheta+domesticus%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Crickets are not a free lunch: Protein capture from scalable organic side-streams via high-density populations of Acheta domesticus.</a> PLOS ONE. 10, 0118785(2015).</li>
<li>Mazaya, G., Karseno, K., Yanto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+and+phytochemical+activity+of+coconut+shell+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Journal+of+Agriculture+-+Food+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial and phytochemical activity of coconut shell extracts.</a> Turkish Journal of Agriculture - Food Science and Technology. 8 (5), 1090-1097 (2020).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

הפשטות של גישה זו לגידול קריקט יכולה להועיל למגוון תחומי מחקר ומייצגת תבנית גנרית לגידול קריקט מוצלח, הניתנת להתאמה בקלות למגוון צרכים ניסיוניים. בהשוואה למספר מחקרים אחרים על G. bimaculatus, גודל הגוף הבודד המבוגר קטן יותר וההתבגרות איטית יותר14, אותה אנו מייחסים לטמפרטורת גידול תת-אופטימלית המוטלת עלינו על ידי הנסיבות. השיטות שתוארו לעיל שימשו ושוכללו במשך שנתיים. תרביות חזקות נשמרו ללא עדויות לבעיות שנצפו לעתים בחקלאות קריקט מסחרית, כולל תמותה נרחבת מפתוגנים עם סימנים קליניים קלאסיים (...

כפי שאפיין את החרק האייקוני, זבוב הפירות Drosophila melanogaster, השימוש בחרקים כאורגניזמים מודל מעבדה מספק יתרונות מובהקים למחקרים בגנטיקה, טוקסיקולוגיה ופיזיולוגיה1. גודלם הקטן של החרקים מקטין את השטח הדרוש לתרביות ואת כמות המזון והחומרים המתכלים הנדרשים. חרקים רבים מתרבים במהירות והופכים אותם למתאימים באופן ייחודי ליצירת קווים גנטיים מיוחדים ומחקרים הדורשים הערכה של דורות עוקבים מרובים.
מחקרים רבים מתמקדים בחרקים הולומטבוליים כמו דרוזופילה, שמפגינים מטמורפוזה מלאה וגורים. עם זאת, דגמים אחרים זמינים, כולל Gryllus bimaculatus (דה גיר), קריקט השדה בעל שני המקומות. G. bimaculatus הוא חרק פטרומטבולי שעובר בין 7 ל -11 אינסטארים נימפאליים לפני שהוא מגיע לבגרות מינית2. קריקט זה מציג מגוון רחב של התנהגויות הקשורות לברירה מינית, כולל צעידה, תצוגות טריטוריאליות ושמירה על בני זוג3. צרצרים לא בוגרים אינם דומים לזחלים של מיני חרקים הולומטבוליים בכך שהם, בדומה לצעירים רבים של paurometabolous, מסוגלים לחדש גפיים אבודות ופגומות במהלך אקדיסיס4. בנוסף, הגנום המרוצף במלואו של G. bimaculatus פורסם בשנת 20215. מאפיינים אלה הופכים את הצרצרים הללו למושכים כמטרה למחקר בסיסי.
צרצרי שדה דו-נקודתיים מגודלים באופן נרחב למאכל אדם ולמזון לבעלי חיים. היקף הפעולות הללו הוא לעתים קרובות הרבה יותר גדול מאשר עבור מחקר מעבדה 6,7. למרות ההבדל בקנה המידה, האתגרים העומדים בפני החוקרים חופפים מאוד לאלה שנתקלים בהם חקלאי קריקט מסחריים. שיקולים אלה מתכנסים בהקשר של מחקר מבוסס מעבדה שמטרתו לשפר את ייצור החרקים האכילים. ככל שתעשיית החרקים האכילים ממשיכה להתפתח ולצמוח, אופטימיזציה של תשומות מזון ואינספור היבטים אחרים של הייצור היא המטרה העיקרית8. למחקרי מעבדה המוכיחים שיפורים מדודים ביעילות הגידול, בשורדים או בזמן הייצור של צרצרים אלה יש פוטנציאל לסייע בהגדלת הרווחיות של פעולות גידול הקריקט בטווח הארוך.
פרוטוקולי גידול סטנדרטיים מאפשרים השוואה מדוקדקת יותר בין מחקרים שבחנו אופטימיזציה של גידול. עד כה פורסמו מעט פרוטוקולים מעמיקים לגידול G. bimaculatus במעבדה. פרוטוקול אידיאלי ישקף את התנאים שבהם נתקלים בפעולות חקלאיות קריקט בעולם האמיתי, תוך שמירה על התנאים המבוקרים בקפידה הדרושים למדידה מדויקת של שינויים בביצועי הצמיחה הנובעים מטיפולים ניסיוניים והדגשת אסטרטגיות להפחתת סיכונים. השיטות המתוארות במאמר זה פותחו על סמך פרוטוקולים, טכניקות ומכשירים שפורסמו ששימשו לגידול מגוון מיני קריקט במגוון רחב של קני מידה של ייצור מעבדתי ומסחרי 2,9,10,11,12. שיטות אלה מבוססות גם על מספר מקורות שאינם עוברים ביקורת עמיתים, כולל עלונים טכניים שלא פורסמו ותקשורת אישית עם חקלאי קריקט מסחריים בצפון אמריקה. פרוטוקול זה פותח מתוך כוונה להקל על הקמת תרביות מעבדה של G. bimaculatus במיוחד לשימוש בניסויים הקשורים לחקלאות חרקים.

<table><tbody><tr><td>פח 31 ליטר (29.3 ליטר) עם מכסה הצמד עם מכסה</td><td>HOMZ</td><td>3430CLBL</td><td>משמש לאחסון מלאי רבייה</td></tr><tr><td>3 שכבות/12 מגשים מעמד אור גידול</td><td>Fischer Scientific</td><td>NC1938548</td><td></td></tr><tr><td>50 גל (189.27 ליטר) פח עם מכסה</td><td>סטריליט</td><td>#14796603</td><td>משמש כבלימה משנית בעת טיפול בצרצרים</td></tr><tr><td>50 מ"ל צילינדר בוגר פוליפרופילן</td><td>Fischer Scientific</td><td>S95171</td><td></td></tr><tr><td>פח תיק 7.5 ליטר (7.1 ליטר) עם מכסה הצמד עם מכסה</td><td>HOMZ</td><td>3410CLBL</td><td>משמש לאחסון מלאי אקספרימנטלי</td></tr><tr><td>Accuris 500 גרם x 0.01 גרם איזון</td><td>מיוצר על ידי Accuris, חברת בת של Benchmark Scientific</td><td>W3300-500</td><td>נרכש מ-Dot Scientific דרך שירות רכישת מערכת של אוניברסיטת ויסקונסין "ShopUW+"</td></tr><tr><td>Ace Premier 1 אינץ' מברשת שבב שטוח</td><td>Ace Hardware&nbsp;</td><td>#1803261</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art SP Scienceware בקבוק שטיפת מים נטול יונים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>03-421-160&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מסך חלון אלומיניום בהיר&nbsp;</td><td>Phifer</td><td>UNSPSC# 11162108</td><td>גודל רשת 18 x 16 אינץ'</td></tr> <tr><td>כוסות מנות פלסטיק חד פעמיות שקופות 5.5 אונקיות עם מכסים</td><td>וול-מארט</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>מים</td><td></td><td></td><td></td>נטולי יונים</tr><tr><td>דיאבלו 4-4/8 אינץ' x 13 TPI גימור עדין במיוחד להב פאזל דו-מתכת</td><td>הום דיפו</td><td>#313114935</td><td></td></tr><tr><td>מילוי ביצים שטוח-נייר, 12 x 12 אינץ'</td> <td>Uline</td><td>S-5189</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד פטרי כלים עם מכסה שקוף 100 x 15 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB0875714</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד פטרי כלים עם מכסה שקוף 60 x 15 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>ג'ורג'יה-פסיפיק לדמיין מגבות נייר חומות</td><td>הום דיפו</td><td>#205675843</td><td></td></tr><tr><td>אינפיניטי קשוח בחור ביצועים גבוהים מקלות דבק חם נמס</td><td>אינפיניטי בונד</td><td>אינפיניטי IM-קשוח-בחור-12</td><td></td></tr><tr><td>מזורי קריקט דיאט</td><td>ארץ או לייקס אינטרנשיונל</td><td>מק"ט#&nbsp; 3002219-105</td><td></td></tr><tr><td>סטנלי טיים איט תאום 2 שקעים מקורקע מכני 24 שעות טיימר</td><td>וול-מארט</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ורמונט אורגני טיוב אדמה 11 פאונד קוקוס בלוק</td><td>הום דיפו</td><td>#300679904</td><td></td></tr></tbody></table>

שמירה על תרביות מעבדה של gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

גרילוס בימקולטוס (שם מדעי: Gryllus bimaculatus ) הוא מין של קריקט גדול גוף המופץ ברחבי אפריקה ודרום אירואסיה, שם הוא נקטף לעתים קרובות בטבע כמזון אנושי. מחוץ לטווח הטבעי שלו, culturing G. bimaculatus הוא אפשרי בשל הפלסטיות התזונתית שלו, מחזור הרבייה המהיר, חוסר הדרישה לדיאפאוזה, הסבילות לגידול בצפיפות גבוהה וחוסן מפני פתוגנים. לפיכך, G. bimaculatus יכול להיות מודל רב-תכליתי למחקרים של פיזיולוגיה של חרקים, התנהגות, אמבריולוגיה או גנטיקה.
פרמטרים תרבותיים, כגון צפיפות גרב, רפוגיה בתוך הכלוב, פוטופריוד, טמפרטורה, לחות יחסית ותזונה, כולם משפיעים על צמיחת הקריקט, ההתנהגות וביטוי הגנים ויש לתקנם אותם. בספרות המתפתחת על גידול חרקים למאכל אדם, צרצרים אלה משמשים לעתים קרובות כדי להעריך תערובות מזון מועמדות שמקורן בשאריות יבול, תוצרי לוואי של עיבוד מזון וזרמי פסולת אחרים בעלות נמוכה.
כדי לתמוך בניסויים מתמשכים המעריכים את ביצועי הצמיחה של G. bimaculatus ואת האיכות התזונתית בתגובה למצעי הזנה משתנים, פותחה מערכת מקיפה של פרוטוקולים סטנדרטיים לרבייה, תחזוקה, טיפול, מדידה והמתת חסד במעבדה. הזנת קריקט סטנדרטית בתעשייה הוכיחה את עצמה כראויה מבחינה תזונתית ומתאימה מבחינה תפקודית לתחזוקה ארוכת טווח של מלאי גידול קריקט, כמו גם לשימוש כמזין בקרה ניסיוני. גידול צרצרים אלה בצפיפות של 0.005 צרצרים/ס"מ3 בכלובי פוליאתילן 29.3 ליטר בטמפרטורה ממוצעת של 27 מעלות צלזיוס על פוטופריוד 12 בהיר (L)/12 כהה (D), עם קור קוקוס לח המשמש הן כמקור הידרציה והן כמדיום oviposition, שמר בהצלחה על צרצרים בריאים לאורך טווח של שנתיים. בעקבות שיטות אלה, צרצרים בניסוי מבוקר הניבו מסה ממוצעת של 0.724 גרם 0.190 גרם בקציר, עם 89% ניצולים ו-68.2% התבגרות מינית בין מלאי (22 יום) לקציר (65 ימים).

נתונים המוכיחים גידול קריקט מוצלח מבקיעה לגיל 65 ימים נאספו במהלך ניסוי הזנה בספטמבר 2021. צרצרים גודלו מביצים בעקבות שלבים 1.1.1-2.6.1 של פרוטוקולים אלה, ושישה כלובים משוכפלים היו מלאים ב-24 צרצרים אקראיים בני 22 יום (כוכב שלישי) בעקבות שלב 2.7 לעיל. צרצרים גודלו אז בתנאי חדר סביבה; עם זאת, בשל יחידת טיפול אוויר מתקן לא תקינה, טמפרטורת החדר הממוצעת הייתה 25 ± 1 מעלות צלזיוס ב -20% לחות יחסית במקום 27 מעלות צלזיוס המוצעות. מסת הקריקט נמדדה פעמיים בשבוע בין 22 ל-65 ימים לאחר הבקיעה. התוצאות מניסוי זה מתוארות להלן ומוצגות...

מאמר זה מתאר שיטות בסיסיות לתקנון גורמים חשובים כגון צפיפות, זמינות הזנה, מקור הידרציה ובקרות סביבתיות לגידול ארוך טווח של תרביות מעבדה של הקריקט האכיל, Gryllus bimaculatus.

שמירה על תרביות מעבדה של Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

טכניקות אלה מתארות שיטות מעשיות ומוכחות לגידול Gryllus bimaculatus, מיני מיני בעלי חיים מרכזיים שגודלו עבור מזון לבעלי חיים ומזון לבני אדם ואורגניזם מודל חלופי חשוב יותר ויותר. שיטות מעבדה אלה לתרבות של Gryllus bimaculatus נגזרות מטכניקות הנפוצות ברחבי תעשיית חקלאות הקריקט בצפון אמריקה ומייצגות פקסימיליה בקנה מידה מעבדתי של פעולות חקלאיות קריקט. כדי להתחיל, tared מיכל נקי על איזון, ולשקול מסה של קוקוס יבש coir בערך בגודל של אגרוף אנושי.לאחר מכן, הכניסו את הקויר למיכל אטום ונקי, שיכול להכיל הרחבה של עד פי שישה מהנפח המקורי. בידיים נקיות, מפרקים בעדינות גושים של קור מהחתיכה שהוסרה מהגוש הגדול יותר. לאחר מכן, באמצעות גליל מדורג של 250 מיליליטר, למדוד את הנפח הנכון של מים שעברו דה-יוניזציה כדי להשיג יחס של חמישה לאחד לפי מסה של חמישה חלקים מים לחלק אחד של coir יבש, ולהוסיף את המים הנמדדים שעברו דה-יוניזציה לאט, תוך הידרציה שווה של כל חלקיקי הקויר.לאחר מכן, תקעו גושים באופן ידני כדי להבטיח הידרציה אחידה, וטפחו מחדש את המיכל שבו נשקל בעבר הקויר. שוקלים 75 גרם של קויר רטוב, ומעבירים אותו לתבשיל פטרי בגודל 100 מילימטר על 15 מילימטרים באמצעות כף פלסטיק נקייה כדי להבטיח שהקואר מפוזר באופן שווה סביב תחתית המנה ושאין גושים. לאחר מכן, תייגו את הצד של צלחת הפטרי בנייר דבק עם תווית המציינת את מושבת הלידה ואת תאריך אירוע איסוף הביצים.יש למדוד 45 מיליליטרים נוספים של מים שעברו דה-יוניזציה לתוך גליל מדורג, ולהוסיף מים באופן שווה על פני השטח של הקויר הארוז בצלחת פטרי כדי להבטיח הידרציה אחידה. לאחר שארזו צלחת הפטרי, אטמו את הקויר הרטוב שנותר בכלי אטום לאחסון במינוס 20 מעלות צלזיוס. מכניסים את מצע הצרצרים המיובש לכלובים המכילים את המלאי ההורי הרצוי של צרצרים רחוק ככל האפשר מההזנה, ומתעדים את התאריך והשעה.לאחר מכן, הניחו כלי קיבול פסולת קטן וניתן לטיפול אוטומטי על משטח העבודה. לאחר מכן, הניחו כלוב פלסטיק נקי, ריק, בנפח 29.3 ליטר, על הספסל ליד כלי הקיבול לפח האשפה. הניחו עוד כלוב בנפח 29.3 ליטרים המכיל את מלאי הקריקט ההורי ואת מצע ההטבעה בצד הנגדי של כלי הקיבול לאשפה מהכלוב הריק.לאחר 24 שעות, הסירו את מצע הקריקט מכלוב הקריקט האב, ואתרו אותו מעל כלי פסולת אוטוקלאבי. בדקו את החלק העליון של מצע ה-oviposition עבור חלקיקים כלשהם של frass או הזנה שייתכן שהצרצרים בעטו על פני השטח של הקויר. לאחר מכן, מוציאים מזהמים לתוך כלי הפסולת בעזרת כף פלסטיק נקייה, ומכניסים את כף הפלסטיק לכלי הקיבול של הפסולת.לאחר מכן, הניחו את מצע ה-oviposition המנוקה בכלוב הנקי, בנפח 29.3 ליטר. לאחר מכן, מניחים את הכלוב באינקובטור שנקבע ל-27 מעלות צלזיוס בלחות יחסית של 60% על פוטופריוד בהיר בחושך של 12 שעות ו-12 שעות. החזירו את הכלוב המכיל את מלאי הרבייה למיקום המקורי, ונקו את כל הפריטים ממשטח העבודה.לאחר מכן, הכניסו את כלי הקיבול לפסולת במקפיא במתקן המוקדש לאחסון פריטים שעלולים להיות מזוהמים בביצי קריקט. לאחר מכן, לחטא את משטח העבודה עם תמיסת אקונומיקה של 10%, ולתת לו לשבת במשך 60 שניות. נגבו את משטח העבודה יבש במגבת נייר נקייה.לאחר פתיחת המקפיא, השליכו את מגבת הנייר לכלי הקיבול לפסולת. בחר שני משטחי קרטון ביצים מסחריים בגודל 30.8 ס"מ על 30.8 ס"מ שאינם בשימוש. ועם סכין שירות או גזירה חזקה, חותכים אותם לשש רצועות נפרדות ברוחב 10.1 ס"מ בגודל שווה.לאחר מכן, הברישו את הקצוות החתוכים בידיים כדי להסיר חלקיקים משתלשלים של קרטון. לאחר מכן, מקם את שש חתיכות הקרטון הבודדות בגודל 10.1 ס"מ על 30.8 ס"מ אנכית לתוך תחתית הכלוב, כאשר הציר הארוך יותר של הקרטון משתרע על הציר האופקי הצר יותר של כלוב 29.3 ליטר. הניחו חתיכת קרטון שביעית שטוחה על פני החלק העליון של ששת החלקים הזקופים.לאחר בחירת שלוש חתיכות של מגבת נייר מחוספסת וחומה בגודל של כ-25 ס"מ על 25 סנטימטרים, יש לקפל כל אחת לחצי. לאחר מכן, הניחו שניים כך שהם יכסו את החלק העליון של הצד הפרוקסימלי של מבנה הקרטון, והניחו אחד מעל ערימת הקרטון בצד הדיסטלי. ביום ה-11 שלאחר האוביפוזיציה, הזיזו את מצע ה-oviposition לפינה הימנית הפרוקסימלית של הכלוב.כאשר צופים בבקיעה, מערפלים את מגבות הנייר המונחות על גבי הקרטונים פנימה, עד שהם נרטבים, אך לא שופכים מים באופן פעיל. לאחר מכן, נגבו היטב את שני הצדדים של מכסה פטרי בקוטר 100 מ"מ עם 70% אתנול, והניחו לו להתייבש. לאחר מכן, מכניסים 50 גרם מההזנה לבלנדר של 60 וואט בהגשה יחידה, ומטחנים ב-10, 000 סל"ד למשך דקה אחת.לאחר מדידת גרם אחד של ההזנה, לנער אותו על מכסה צלחת הפטרי בכלוב. בעזרת הקצה הנקי של כף או סקופולה, מפזרים את ההזנה בצורה אחידה ככל האפשר על תחתית המנה. לאחר מכן, החלף את ההזנה כל יומיים.השליכו את ההזנה הישנה במיכל הפסולת הניתן להפרדה אוטומטית. עקוב אחר צמיחת עובש בהזנה. ואם ההזנה מתחילה להיראות לבנה או ירקרקה, השליכו את צלחת הפטרי והאכילו מיד.לאחר 14 יום, השתמשו במכחול באורך 2.54 ס"מ כדי להסיר צרצרים הנצמדים למצע הקויר המולד על ידי הברשה של כל הצרצרים ממשטח הקויר והצדדים של צלחת הפטרי לתוך הכלוב. לאחר מכן, מניחים את מצע הפסולת שהוסר לתוך כלי הקיבול של הפסולת האוטוקלבית, ומאחסנים אותו במקפיא עד לעיסוק באוטוטלביזציה. לאחר מכן, החליפו את מצע הלידה בצלחת קויר טרייה להידרציה.באמצעות בקבוק שטיפת מים שעבר דה-יוניזציה, מוסיפים מים עד שפני השטח של הקויר מנצנצים, אך אינם מתמזגים. צרצרים היו מלאים מאוכלוסייה עם מסה ממוצעת של 21 מיליגרם. בסוף הניסוי, המסה הממוצעת של כל הצרצרים הצעירים והבוגרים המשולבים הייתה 0.724 גרם.בגיל 65 ימים, כאשר הניסוי הסתיים, נכחו 30 זכרים בוגרים, והמסה הממוצעת הייתה 0.721 גרם, בעוד שעבור 58 הנקבות הבוגרות, המסה הממוצעת הייתה 0.841 גרם. שיעור הניצולים בין המלאי לקציר היה 89% ונמדד מדי שבוע על ידי הספירה הכוללת של כל הצרצרים הבודדים בכל הכלובים. ביום ה-65, כ-68% מכלל הצרצרים הגיעו לכוכב הבוגר.הימנע היווצרות של טיפות מים על קרקעית המתחם בעת השקיה או ערפל. הנחת מגבת נייר על רפוגיה מאפשרת שיפוע לחות וסופגת טיפות מים מערפל. הליך זה משמש כתבנית לחוקרים בתחומים רבים של מדעי החיים כדי לגדל את Gryllus bimaculatus כאורגניזם מודל.עד כה פורסמו פרוטוקולים רשמיים מעטים לגידול Gryllus bimaculatus או כל אורגניזם אחר במודל פאורומטבולי. קודיפיקציה וסטנדרטיזציה של שיטות גידול לחרקים המשמשים בחקלאות חרקים יאפשרו טוב יותר להשוות תוצאות בין קבוצות מחקר.

maintaining-laboratory-cultures-gryllus-bimaculatus-versatile

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

זיהום haemocolic אוראלי ותוך של זחלים של עש השעווה הגדולה...

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

סרטון זה מדגים שיטה לביסוס מודל זיהום Mycobacterium bovis בזחלים של עש השעווה הגדול, Galleria mellonella. זן ביולומינסנטי של Mycobacterium bovis BCG מוזרק לתוך המולימפה של הזחל כדי ליצור זיהום, והביולומינסנציה נמדדת במרווחי זמן מוגדרים מראש כדי לחקור את התקדמות הזיהום.

טכניקה לביסוס מודל זיהום חיידקי בזחלי חרקים

הליך לגידול יציב זבובים (Stomoxys calcitrans) מוצג. ההליך משתמשת בחומרים זמינים באופן מקומי עבור רכיבי תזונה, ציוד ואספקה.

מעבדה לגידול של אחרים Muscoid Diptera והזבובים יציב

המטרה הכוללת של הליכים אלה היא ליצור, לשמור ולרענן אוכלוסיה בשבי של רקבן הבוץ באווירה מחקר.

לגידול ואחזקה ארוך טווח של רקבן הבוץ Hoverflies למטרות מחקר

מימדיה Aphis nerii והצנרות על הגן מאוד צמחים ממשפחת dogbane (Apocyanaceae), ומספק הזדמנויות רבות ללמוד אינטראקציות צמח-חרקים. כאן, אנו מציגים סדרת פרוטוקולים עבור שמירה על צמח, כנימות עלה תרבויות, ואת הדור ניתוח של מולקולרית ונתונים - omic עבור nerii א.

שמירה על תרבויות ביולוגי מדידה ביטוי גנים ב Aphis nerii: מערכת Non-מודל עבור אינטראקציות צמח-חרק

כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור מודל הניהול אוראלי בעזרת הזחלים mellonella גלריה (galleria) , כיצד לאפיין המושרה תגובות מערכת החיסון המולדת. באמצעות פרוטוקול זה, חוקרים ללא ניסיון מעשי תהיה אפשרות להשתמש mellonella ג שיטת פיטום.

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

כאן אנו מציגים פרוטוקול להזריק ביצי קריקט, טכניקה המשמשת כשיטה היסוד בניסויים רבים בקריקט, כולל, אך לא מוגבל, הפרעה RNA ומניפולציה גנומית.

הזרקת גרללוס ביצי ביצה

פרוטוקול זה משמש להקמה ותחזוקה של מקקים אמריקאים גנוטוביוטיים(Periplaneta americana)על ידי חיטוי פני השטח של ארגזי הביצים (oothecae) לפני הבקיעה. חרקים גנוטוביוטיים אלה מכילים את האנדוסימביונים של בלטבקטריום המועברים אנכית, אך יש להם מעיים גרזניים.

הקמה ותחזוקה של מקקים אמריקאים גנוטוביוטיים (Periplaneta americana)

כדי להשיג חרק אקסני, משטח הביצה שלו מעוקר, והזחל הבוקע גדל לאחר מכן באמצעות עלים אקסניים. שיטה זו מספקת דרך יעילה להכנת חרקים אקסניים מבלי לתת אנטיביוטיקה או לפתח תזונה מלאכותית, אשר ניתן ליישם גם על חרקים אוכלי עלים אחרים.

הכנה וגידול של חרקים אקסניים עם שתילים מתרבית רקמה למחקרי אינטראקציה של מיקרוביוטה של המעי המארח של חיפושית העלים

מאמר זה מתאר את תחזוקת המעבדה (כולל הזדווגות והאכלה) של זבוב הדיפטרן התחתון Bradysia (Sciara) coprophila.

תחזוקת מעבדה של זבוב הדיפטרן התחתון Bradysia (Sciara) coprophila: אורגניזם מודל מתפתח חדש/ישן

למד שיטות גידול מעבדה ל-Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ומחקר פיזיולוגי. הפרוטוקולים הסטנדרטיים מבטיחים תוצאות עקביות בגידול חרקים למזון ולמחקר מדעי.

שמירה על תרביות מעבדה של Gryllus bimaculatus, מודל אורתופטרני רב-תכליתי לחקלאות חרקים ופיזיולוגיה של חסרי חוליות

גלה סרטונים נוספים