Name: יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: למד כיצד להשתמש בטומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית לאבחון רטינופתיה במודל עכבר. שיטה זו מאפשרת הדמיה לא פולשנית ברזולוציה גבוהה של מבני הרשתית ומדידה כמותית של עובי הרשתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מקור הפרויקט: הקרן למדעי הטבע של מחוז גואנגדונג (2018A0303130306). המחברים רוצים להודות למעבדה לחקר העיניים, למרכז העיניים הבינלאומי המשותף של שנטאו באוניברסיטת שנטאו ולאוניברסיטה הסינית של הונג קונג על המימון והחומרים.

הניתוחים בוצעו בעקבות ההצהרה על השימוש בבעלי חיים במחקרי עיניים וראייה של האגודה לחקר הראייה והעיניים. תכנון הניסוי אושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית לבעלי חיים (ועדת האתיקה הרפואית של JSIEC, EC 20171213(4)-P01). במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6J בני חודשיים ובעכברי נוקאאוט Vldler. בכל קבוצה היו 7 עכברים, כולם נקבות ושקלו 20 גרם עד 24 גרם.
1. תנאי ניסוי
<ol><li>הקצה את העכברים לשתי קבוצות: קבוצת ניסוי המורכבת מעכברי נוקאאוט Vldlr וקבוצת ביקורת המורכבת מעכברי C57BL/6J.</li>
	<li>האכילו את העכברים במזון ובמים באופן קונבנציונלי.</li>
	<li>הגדילו את העכברים במעבדת החיות בתנאים יציבים של טמפרטורת החדר (22 מעלות צלזיוס), לחות (50-60%), מחזור אור-חושך (12 שעות עד 12 שעות) ועוצמת האור בחדר (350-400 לוקס).</li>
	<li>הכן את ציוד הניסוי: טומוגרפיה קוהרנטית אופטית עם אופתלמוסקופ לייזר סריקה קונפוקלית (cSLO) עבור חיות קטנות (איור 1A).</li>
	<li>הכינו את כל החומרים הדרושים לניסוי (איור 1B) ושקלו את העכברים (איור 1C).</li>
</ol>2. רשומות מידע
<ol><li>תעד את המידע: קבוצה, קוד, תאריך לידה, גיל, מין, משקל ומינון הרדמה.</li>
</ol>3. הפעלה ובדיקה של מכשירים
<ol><li>הפעל את המחשב והפעל את התוכנה.</li>
	<li>לחץ על לחצן בדוק תוכנית כדי להשלים את תוכנית הבדיקה.</li>
	<li>מפעילים את התרמוסטט ומחממים אותו לטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>התחל את הליך מודול OCT לאחר בדיקת התוכנית.</li>
	<li>צור נושא חדש ומלא את פרטי העכבר.</li>
	<li>מחממים מראש את השמיכה החשמלית ומכסים אותה במגבות כירורגיות.</li>
</ol>4. הרדמה
<ol><li>השתמש אבקת הרדמה lyophilized המכיל Tiletamine ו Zolazepam כדי להכין את תערובת ההרדמה. הערה: עקוב אחר המלצות ועדת האתיקה המקומית לבעלי חיים לבחירה, מינון ומסלול מתן הרדמה. להרדים את החיה עם הרדמה שתספק חוסר תנועה ואובדן תפיסת כאב במשך שעה לפחות, ולאחר מכן החיה מתאוששת במהירות. המינון צריך להתבסס על משך זמן הניסוי, משקל בעלי החיים וגורמים אחרים.</li>
	<li>הרדימו את החיה באמצעות תערובת ההרדמה המוכנה. הקפד לשמור על החיה חמה במהלך כל ההליך עד ההתאוששות.</li>
</ol>5. יישום של טיפות mydriatic
<ol><li>השג ריסון ידני של העכבר על ידי השפשוף, הפוך את גלגל העין לבלוט מעט, וסובב את ראש העכבר כשעין אחת פונה כלפי מעלה.</li>
	<li>מרחו את הטיפות המידריאטיות כדי להרחיב את האישונים (איור 2A).</li>
	<li>בדוק את התרחבות האישון לאחר 10 דקות.</li>
</ol>6. מיקום העכבר
<ol><li>הניחו עכבר על משטח שמיכה חשמלית.</li>
	<li>מצפים את שתי העיניים בג'ל נתרן היאלורונאט רפואי (איור 2B).</li>
	<li>הברג עדשה כדורית כפולה 60 D (עדשה מוגדרת מראש) בהתקן cSLO (איור 1A-5, 6).</li>
	<li>הניחו עדשת מגע 100 D על קרנית העכבר כשהצד הקעור נוגע בג'ל נתרן היאלורונאט על פני הקרנית (איור 2C, D ואיור 3A-II).</li>
	<li>הניחו את העכבר על פלטפורמת בעלי החיים הקטנה בטמפרטורה קבועה והרחיקו את העין 1-2 מ"מ מהעדשה של מכשיר ה-cSLO (איור 3A).</li>
	<li>התאם את זווית עדשת המגע באמצעות מלקחיים כדי לשמור על האישון במרכז העדשה.</li>
	<li>כוונן את ההתאמות לראש כדי לגרום לעין לפנות ישר קדימה.</li>
</ol>7. סריקה קונפוקלית לייזר אופתלמוסקופ (cSLO)
<ol><li>לחץ על לחצן OCT , בחר את מודול העכבר והפעל את תוכנית cSLO (איור 4B).</li>
	<li>בחר את מצב IR (מקור אור: אור אדום), והתאם את הפרמטר (טווח: 2047, איור 4D).</li>
	<li>בחר את העין לבדיקה (עין ימין: איור 4C-1; עין שמאל: איור 4C-2). </li>
	<li>שלטו בידית והזיזו את העדשה המוגדרת מראש לכיוון עדשת המגע באיטיות.</li>
	<li>התאימו את ערך הדיופטר עד שהדמיית הקוטב האחורי תהיה ברורה (איור 4E).</li>
	<li>בצע התאמות נוספות כדי ליישר את התמונה של הקוטב האחורי של הרשתית, ומרכזו בראש עצב הראייה.</li>
</ol>8. טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT)
<ol><li>הפעל את תוכנית OCT (איור 4G).</li>
	<li>לחץ על מד ההתקדמות למעלה ולמטה עד שתמונת ה-OCT תופיע (איור 4H).</li>
	<li>התאמת פרמטרים: טווח מינימום (איור 4I) = 0-20, טווח מרבי (איור 4J) = 40-60.</li>
	<li>התאם את המרחק וכיוון המיקום המוגדרים מראש של העדשה עד לקבלת תמונת OCT אידיאלית.</li>
	<li>בחר את מיקום הסריקה על-ידי הזזת הקו הרגיל ב-cSLO (איור 4M).</li>
	<li>התחל לסרוק מראש עצב הראייה.</li>
	<li>אסוף תמונות באותו סדר עבור כל עין: קו אופקי: ראש עצב הראייה → מעולה → נחות; קו אנכי: ראש עצב הראייה → האף → טמפורלי.</li>
	<li>אסוף תמונות מארבעה כיוונים.</li>
	<li>לחצו על ' ממוצע' כדי לכסות את אותות התמונה cSLO ו-OCT (איור 4F ואיור 4O).</li>
	<li>לחץ על לחצן הצילום כדי להשיג את תמונת SLO-OCT (איור 4P).</li>
	<li>שמור וייצא את כל התמונות (איור 4Q, R).</li>
</ol>9. סוף הניסוי (לאחר בדיקת OCT)
<ol><li>הניחו את העכבר על השמיכה החשמלית כדי לשמור על חום גופה עד שיתעורר. הערה: יש לעקוב אחר העכבר עד שהוא חוזר להכרה מספקת כדי לשמור על יציבות החזה. יש למזער את החשיפה לאחר הניתוח לאור בהיר.</li>
	<li>הסר את עדשת המגע 100 D.</li>
	<li>יש למרוח את ג'ל העיניים levofloxacin כדי להגן על הקרנית.</li>
	<li>החזירו את העכבר לכלוב לאחר שהוא מתעורר. הערה: ודא שהעכבר הנבדק אינו מוחזר לחברתם של עכברים אחרים עד להחלמה מלאה.</li>
	<li>כבה את התוכנה וכבה את המחשב.</li>
	<li>נקה את עדשת המגע 100 D עם מים; לייבש את העדשה.</li>
	<li>לנקות ולחטא את הסביבה.</li>
</ol>10. ניתוח תמונות
<ol><li>השווה את תמונות ה-OCT של עכברי הנוקאאוט של Vldlr לאלה של עכברי C57BL/6J.</li>
	<li>שימו לב למספר מיקומים: סריקות אנכיות ואופקיות העוברות דרך הפפילה האופטית; סריקות עליונות, נחותות, אף וטמפורליות; וסריקות אתר השתקפות חריגות.</li>
	<li>שימו לב לעובי, לצורה, לשכבות ולנגעי ההשתקפות החריגים של הרשתית בכל תמונה, כמו גם לממשק הזגוגי של הרשתית והגוף הזגוגי.</li>
	<li>תעד את המיקומים, המאפיינים והמספרים של הנגעים.</li>
</ol>11. תיקון ריבוד הרשתית
<ol><li>לחץ על בדיקת עומס בממשק OCT (איור 5A).</li>
	<li>קרא את תמונות ה- OCT של עכבר מחלון מוקפץ.</li>
	<li>בחר תמונות: סריקת תמונת OCT דרך הפפילה האופטית, אופקית או אנכית.</li>
	<li>לחץ פעמיים על התמונה בגורם המכיל של המדיה כדי להציג אותה על המסך (איור 5C).</li>
	<li>לחצו על ' זיהוי שכבות' כדי להשלים את השכבות האוטומטיות על הרשתית (איור 5D).</li>
	<li>בחרו את הקווים המפרידים משני צידי השכבה שהוכנה לניתוח (איור 6D-10).</li>
	<li>בחרו קו מפריד נפרד (איור 6B-6) ולחצו על 'ערוך שכבה' (איור 6A-1) כדי להפעיל את הקו כשמופיע עיגול אדום (איור 6B-7).</li>
	<li>התאם את המרווח (איור 6A-4, לדוגמה, 50) ואת טווח הגבולות (איור 6A-5, לדוגמה, 50).</li>
	<li>שנה את הקו המפריד על-ידי הזזת העיגול האדום (השווה את הקו המפריד הירוק באיור 6B ובאיור 6C; איור 6C מציג את התוצאה שהשתנתה).</li>
</ol>12. עובי למינציה רשתית
<ol><li>לחצו על הלחצן 'סמן מדידה' (איור 6D-9).</li>
	<li>בחרו את הקו המפריד של השכבה לניתוח (לדוגמה, בשכבה הגרעינית החיצונית, בחרו את הקו המפרידה-4 וה-5 ברשימה) כדי להציג את גבול השכבה בתמונת OCT (איור 6D-10).</li>
	<li>בחרו 'התחבר לשכבה' (איור 6D-11) ו'הישאר מחובר תוך כדי תנועה' (איור 6D-12).</li>
	<li>בחר את האזור כדי להציג את התוצאות (העמודה שנבחרה צבועה, איור 6D-13).</li>
	<li>לחצו על המיקום שיש לנתח בתמונת OCT כדי לגרום לקו המדידה להיראות (בניצב לציר האופקי ועקבי לצבע האזור המתקבל) (איור 6D-14).</li>
	<li>לחץ על העמודה הבאה למדידה הבאה וגלה את הנתונים הקודמים (איור 6E-15).</li>
	<li>קרא את הערך Vert (עובי המיקום הנמדד) בשורה אורך במיקרומטר (רקמה) (איור 6E, מלבן אדום).</li>
	<li>לחצו על 'מחק סמן' (איור 6E-16) ועל 'סמן חדש' (איור 6E-17) כדי לבדוק שוב כך שהתוצאות יכסו את הנתונים המקוריים (אם יש צורך במדידה מחדש).</li>
	<li>לחץ על Print Scr בלוח המקשים כדי לשמור צילומי מסך, או לחץ על שמור בדיקה כדי לשמור ישירות (איור 5H).</li>
	<li>הזן את הנתונים לגיליון אלקטרוני או לתוכנה סטטיסטית לצורך ניתוח סטטיסטי.</li>
</ol>13. מדידת עובי רשתית מלא
<ol><li>בחר קו 1 (ILM, קרום מגביל פנימי, איור 7B) וקו 7 (OS-RPE, OS: מקטעי פוטורצפטור חיצוניים; RPE: שכבת אפיתל פיגמנט רשתית, איור 7C) ברשימה בפינה הימנית העליונה. הערה: עובי הרשתית המלא פירושו עובי שכבת הנויריפיתליום ברשתית, שהיא הרשתית בין ILM ל-OS-RPE ב-OCT).</li>
	<li>מדוד את עובי הרשתית משני צידי הפפילה האופטית במרווח מסוים.<ol><li>לדוגמה: ממראה מבנה הרשתית בקצה הפפילה האופטית, מדוד 4 ערכים עם מרווח של 200 מיקרומטר של הסרגל האופקי (איור 7G, H).</li>
	</ol></li>
	<li>הקלט את כל הערכים הנמדדים בגיליון אלקטרוני.</li>
	<li>השתמש במספר מבחני t (אחד בכל שורה) כדי להשוות את הערכים הנמדדים של כל מיקום מתאים בשתי הקבוצות.</li>
</ol>

<ol><li>Frombach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease-mediated+cutaneous+inflammation%3A+characterization+of+an+ex+vivo+skin+model+for+the+assessment+of+dexamethasone-loaded+core+multishell-nanocarriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Serine protease-mediated cutaneous inflammation: characterization of an ex vivo skin model for the assessment of dexamethasone-loaded core multishell-nanocarriers.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 862(2020).</li>
<li>Osiac, E., Săftoiu, A., Gheonea, D. I., Mandrila, I., Angelescu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+and+Doppler+optical+coherence+tomography+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography and Doppler optical coherence tomography in the gastrointestinal tract.</a> Journal of Gastroenterology. 17 (1), 15-20 (2011).</li>
<li>Xiong, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+accuracy+of+optical+coherence+tomography+for+bladder+cancer%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Photodiagnosis+and+Photodynamic+Therapy%22%5BJournal%5D)">Diagnostic accuracy of optical coherence tomography for bladder cancer: A systematic review and meta-analysis.</a> Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 27, 298-304 (2019).</li>
<li>Andrews, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+of+the+aging+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22%26+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography of the aging kidney.</a> & Clinical Transplantation. 14 (6), 617-622 (2016).</li>
<li>Terashima, M., Kaneda, H., Suzuki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+optical+coherence+tomography+in+coronary+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22The+Korean+Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of optical coherence tomography in coronary intervention.</a> The Korean Journal of Internal Medicine. 27 (1), 1-12 (2012).</li>
<li>Avital, Y., Madar, A., Arnon, S., Koifman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+coronary+calcifications+in+optical+coherence+tomography+imaging+using+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Identification of coronary calcifications in optical coherence tomography imaging using deep learning.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11269(2021).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li>
<li>Tsai, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+in+gastroenterology%3A+a+review+and+future+outlook%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography in gastroenterology: a review and future outlook.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (12), 1-17 (2017).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+optical+intensity+on+optical+coherence+tomography+and+retinal+ischemia+in+branch+retinal+vein+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Relationship between optical intensity on optical coherence tomography and retinal ischemia in branch retinal vein occlusion.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9626(2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+layer+optical+intensities+on+three-dimensional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal layer optical intensities on three-dimensional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 54 (10), 6846-6851 (2013).</li>
<li>Cruz-Herranz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+retinal+changes+with+optical+coherence+tomography+predicts+neuronal+loss+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Monitoring retinal changes with optical coherence tomography predicts neuronal loss in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 203(2019).</li>
<li>Podoleanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography.</a> Journal of Microscopy. 247 (3), 209-219 (2012).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+findings+in+the+retinas+of+SOD1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography findings in the retinas of SOD1 knockout mice.</a> Translational Vision Science & Technology. 9 (4), 15(2020).</li>
<li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye%3A+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494(2014).</li>
<li>Burns, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+murine+imaging+for+assessing+photoreceptor+degeneration+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+%26+Biology%22%5BJournal%5D)">New developments in murine imaging for assessing photoreceptor degeneration in vivo.</a> Advances in Experimental Medicine & Biology. 854, 269-275 (2016).</li>
<li>Jagodzinska, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography%3A+imaging+mouse+retinal+ganglion+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+Jove%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo.</a> Journal of Visualized Experiments: Jove. (127), e55865(2017).</li>
<li>Kocaoglu, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+fundus+imaging+and+optical+coherence+tomography+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Simultaneous fundus imaging and optical coherence tomography of the mouse retina.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 48 (3), 1283-1289 (2007).</li>
<li>Tode, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+stimulation+of+the+retina+reduces+Bruch%27s+membrane+thickness+in+age+related+macular+degeneration+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Thermal stimulation of the retina reduces Bruch's membrane thickness in age related macular degeneration mouse models.</a> Translational Vision Science & Technology. 7 (3), 2(2018).</li>
<li>Wang, R., Jiang, C., Ma, J., Young, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+morphological+changes+in+the+retina+of+rhodopsin-%2F-+mice+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Monitoring morphological changes in the retina of rhodopsin-/- mice with spectral domain optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 3967-3972 (2012).</li>
<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spectral-domain+optical+coherence+tomographic+analysis+of+Rdh5-%2F-+mice+retina%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A spectral-domain optical coherence tomographic analysis of Rdh5-/- mice retina.</a> PLoS ONE. 15 (4), 0231220(2020).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+imaging+by+optical+coherence+tomography+to+monitor+retinal+degeneration+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Noninvasive imaging by optical coherence tomography to monitor retinal degeneration in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 42 (12), 2981-2989 (2001).</li>
<li>Horio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+change+of+optical+coherence+tomography+scans+in+retinal+degeneration+slow+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Progressive change of optical coherence tomography scans in retinal degeneration slow mice.</a> Archives of Ophthalmology. 119 (9), 1329-1332 (2001).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+VLDLR+in+the+retina+and+evolution+of+subretinal+neovascularization+in+the+knockout+mouse+model%27s+retinal+angiomatous+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Expression of VLDLR in the retina and evolution of subretinal neovascularization in the knockout mouse model's retinal angiomatous proliferation.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 49 (1), 407-415 (2008).</li>
<li>Wyne, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+VLDL+receptor+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Expression of the VLDL receptor in endothelial cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 16 (3), 407-415 (1996).</li>
<li>Augustin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+spontaneous+retinal+neovascularization+in+the+mouse+eye+by+multifunctional+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of spontaneous retinal neovascularization in the mouse eye by multifunctional optical coherence tomography.</a> Investigative Opthalmology & Visual Science. 59 (5), 2054-2068 (2018).</li>
<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence%2C+spectral-domain+optical+coherence+tomography%2C+and+histology+correlations+in+a+Stargardt+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence, spectral-domain optical coherence tomography, and histology correlations in a Stargardt disease mouse model.</a> The FASEB Journal. 34 (3), 3693-3714 (2020).</li>
</ol>

המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים פוטנציאלי.

במחקר זה, הדמיית OCT באמצעות מערכת הדמיית רשתית של בעלי חיים קטנים יושמה כדי להעריך שינויים ברשתית בעכברי Vldlr knockout, אשר מדגימים ניתוק זגוגית אחורית לא שלם, ניאו-וסקולריזציה תת-רשתית והידלדלות עובי הרשתית. OCT היא שיטת הדמיה לא פולשנית לבחינת מצב הרשתית in vivo. רוב מכשירי OCT מיועדים לבדיקת עיניים אנושיות. גודל ציוד החומרה, הגדרת אורך המוקד, הגדרת הפרמטרים של המערכת ודרישות המיקום של הנבחן מבוססים כולם על העין האנושית. שינויים של העדשה והגדרות המערכת נדרשים כדי לבחון בעלי חיים קטנים עם ציוד OCT ספ...

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) היא טכניקת הדמיה שיכולה לספק ברזולוציה גבוהה in vivo והדמיית חתך עבור רקמות 1,2,3,4,5,6,7,8, במיוחד עבור בדיקה לא פולשנית ברשתית 9,10,11,12 . זה יכול לשמש גם כדי לכמת כמה סמנים ביולוגיים חשובים, כגון עובי הרשתית ועובי שכבת סיבי עצב הרשתית. העיקרון של OCT הוא רפלקטומטריית קוהרנטיות אופטית, המקבלת מידע על רקמת חתך מקוהרנטיות האור המוחזרת מדגימה וממירה אותו לצורה גרפית או דיגיטלית באמצעות מערכת מחשב7. OCT נמצא בשימוש נרחב במרפאות עיניים ככלי חיוני לאבחון, מעקב וניהול עבור מטופלים עם הפרעות ברשתית. זה יכול גם לספק תובנה לגבי הפתוגנזה של מחלות רשתית.
בנוסף ליישומים קליניים, OCT שימש גם במחקרים בבעלי חיים. למרות שפתולוגיה היא תקן הזהב של אפיון מורפולוגי, ל- OCT יש את היתרון של הדמיית in vivo לא פולשנית ומעקב אורכי. יתר על כן, הוכח כי OCT מתואם היטב עם היסטופתולוגיה במודלים של חיות רטינופתיה 11,13,14,15,16,17,18,19,20. העכבר הוא החיה הנפוצה ביותר במחקרים ביו-רפואיים. עם זאת, גלגלי העיניים הקטנים שלו מהווים אתגר טכני לביצוע הדמיית OCT בעכברים.
בהשוואה ל-OCT ששימש לראשונה להדמיית רשתית בעכברים21,22, OCT בבעלי חיים קטנים עבר כעת אופטימיזציה ביחס למערכות חומרה ותוכנה. לדוגמה, OCT, בשילוב עם הגשש, מקטין באופן משמעותי את יחס האות לרעש; שדרוגי מערכת תוכנת OCT מאפשרים לזהות שכבות רשתית רבות יותר באופן אוטומטי; וקרן DLP המשולבת מסייעת להפחית את תוצרי התנועה.
קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (Vldlr) הוא חלבון טרנס-ממברנה בתאי אנדותל. הוא מתבטא על תאי אנדותל של כלי הדם ברשתית, תאי אפיתל פיגמנט רשתית, וסביב הממברנה המגבילה החיצונית23,24. ניאו-וסקולריזציה תת-קרקעית היא הפנוטיפ של עכברי הנוקאאוט של Vldlr 23. לכן, עכברי נוקאאוט Vldlr משמשים לחקור את הפתוגנזה ואת הטיפול הפוטנציאלי של neovascularization subretinal. מאמר זה מדגים את היישום של הדמיית OCT לזיהוי נגעים ברשתית בעכברי נוקאאוט Vvldler, בתקווה לספק התייחסות טכנית למחקר רטינופתיה במודלים של בעלי חיים קטנים.

<table><tbody><tr><td>עדשת מגע 100-Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>אביזר השייך ל-RETImap</td></tr><tr><td>עדשת זכוכית אספרית כפולה 60-Dpt</td><td>Volk Optical,Inc, Mentor, OH</td><td></td><td>אביזר השייך לשמיכת החימום החשמלית RETImap</td></tr><tr><td></td><td>POPOCOLA</td><td>CW-DRT-01</td><td>50 x 35 ס"מ</td></tr><tr><td>מזרק הזרקה (1 מ"ל)</td><td>Kaile</td><td></td><td>0.45 x 16RWLB</td></tr><tr><td>ג'ל עיניים Levofloxacin הידרוכלוריד</td><td>EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD</td><td></td><td>5 גרם: 0.015 גרם</td></tr><tr><td>ג'ל נתרן היאלורונאט רפואי</td><td>אלקון</td><td>16H01E</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי מיקרוליטר</td><td>שנחאי תעשיית יונים גבוהה ומסחר ושות', בע"מ</td><td>Q31 / 0113000236C001-2017</td><td>50 ומיקרו; L</td></tr><tr><td>Povidone יוד פתרון</td><td>גואנגדונג medihealth פרמצבטיקה ושות', בע"מ</td><td></td><td>100 מ"ל</td></tr><tr><td>RETImap</td><td>ROLAND CONSULT</td><td>19-99_50-2.1_1.2E</td><td>cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP</td></tr><tr><td>חתיכי אוזניים קטנים לבעלי חיים</td><td>OSMO POCKET OT110</td><td>INS1005-1S</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Phenylephrine טיפות עיניים</td><td>Santen Pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td>5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Sigma</td><td>X1251-5G</td><td>5 גרם</td></tr><tr><td>Zoletil 50</td><td>Virbac.S.A</td><td>7FRPA</td><td>טילטמין 125 מ"ג + Zolazepam 125 מ"ג</td></tr></tbody></table>

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) מציעה שיטה לא פולשנית לאבחון רטינופתיה. מכונת OCT יכולה ללכוד תמונות חתך רשתית שמהן ניתן לחשב את עובי הרשתית. למרות OCT נמצא בשימוש נרחב בפועל קליני, היישום שלה במחקר בסיסי אינו נפוץ כמו, במיוחד בבעלי חיים קטנים כגון עכברים. בגלל גודלם הקטן של גלגלי העיניים שלהם, מאתגר לערוך בדיקות הדמיית פונדוס בעכברים. לכן, נדרשת מערכת הדמיית רשתית מיוחדת כדי להתאים להדמיית OCT על בעלי חיים קטנים. מאמר זה מדגים מערכת ספציפית לבעלי חיים קטנים עבור הליכי בדיקת OCT ושיטה מפורטת לניתוח תמונה. מוצגות התוצאות של בדיקת OCT ברשתית של עכברי קולטן ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (Vldlr) ועכברי C57BL/6J. תמונות ה-OCT של עכברי C57BL/6J הראו שכבות רשתית, ואילו אלה של עכברי Vldlr נוקאאוט הראו ניאו-וסקולריזציה תת-רשתית ודילול רשתית. לסיכום, בדיקת OCT יכולה להקל על זיהוי ומדידה לא פולשניים של רטינופתיה במודלים של עכברים.

הודות לסריקות ברזולוציה גבוהה של OCT, ניתן לראות את שכבות רשתית העכבר, וניתן לזהות השתקפויות חריגות ומיקומן המדויק. תמונות ה-OCT של הרשתית של עכברי נוקאאוט Vldlr ועכברי C57BL/6J הושוו במחקר זה. תמונות ה-OCT של כל עכברי C57BL/6J הראו שכבות רשתית שונות עם רפלקטיביות שונה, והתיחום היה ברור (איור 8D). לעומת זאת, כל עכברי הנוקאאוט של Vldlr הראו נגעים חריגים והיפר-רפלקטיביים בתמונות ה-OCT (איור 8B).
ניתוק זגוגית לא...

כאן אנו מתארים טכניקת הדמיה in vivo באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית כדי להקל על האבחון והמדידה הכמותית של רטינופתיה בעכברים.

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...

טומוגרפיה קוהרנטית אופטית נמצאת בשימוש נרחב באבחון קליני של מחלות רשתית שונות, אך עדיין מאתגר ליישם אותה במודלים של עכברים. פרוטוקול זה מתאר כיצד לנהל את טכניקת OCT בבעלי חיים. טכנולוגיה זו יכולה להיות מיושמת על בעלי חיים עם גדלים שונים של גלגלי עיניים.הוא מאפשר הדמיית חתך רשתית לא פולשנית, ברזולוציות גבוהות ובזמן אמת, יחד עם מדידות כמותיות של עובי הרשתית. OCT מסייע באבחון רטינופתיה על ידי זיהוי תכונות הנגע כגון מיקום, טווח, צורה וגודל של הנגעים, כמו גם כל ההפרעות החשודות ברשתית כגון neovascularization הרשתית. פרוטוקול זה חל על מחקרים בבעלי חיים או מחלות פונדוס, כולל מחלות רשתית.לפני תחילת ההליך, להיות מוכן ופעל לפי הפרוטוקול צעד אחר צעד. בצע את הניסוי כאשר החיה מורדמת. אחד צריך להיות מסוגל להשיג תמונות OCT באיכות טובה לאחר תרגול כלשהו.כדי להתחיל, הפעל את המחשב והפעל את התוכנה. לחץ על לחצן תוכנית הבדיקה כדי להשלים את תוכנית הבדיקה. לאחר מכן, הפעל את התרמוסטט וחמם אותו ל -37 מעלות צלזיוס.לאחר בדיקת התוכנית, התחל את הליך מודול OCT. צור נושא חדש ומלא את פרטי העכבר. לאחר מכן, מחממים מראש את השמיכה החשמלית ומכסים אותה במגבות כירורגיות.הניחו את העכבר המרדים על משטח השמיכה החשמלית ומיד צפו את שתי העיניים בג'ל נתרן היאלורונאט רפואי. לאחר מכן, הניחו עדשת מגע 100D על קרנית העכבר כשהצד הקעור נוגע בג'ל הנתרן היאלורונאט על משטח הקרנית. לאחר מכן, הנח את העכבר על פלטפורמת בעלי החיים הקטנה בטמפרטורה קבועה של התקן cSLO.התאם את זווית עדשת המגע באמצעות מלקחיים כדי לשמור על האישון במרכז העדשה. כוונן את ההתאמות לראש כדי לגרום לעין לפנות ישר קדימה. לחץ על לחצן OCT, בחר את מודול העכבר והפעל את תוכנית cSLO.לאחר מכן, השתמש בידית ההפעלה כדי להזיז באיטיות את העדשה המוגדרת מראש לכיוון עדשת המגע. בצע התאמות נוספות כדי ליישר את התמונה של הקוטב הקדמי-אחורי, ומרכזו בראש עצב הראייה. לאחר מכן, הפעל את תוכנית OCT ולחץ על מד ההתקדמות למעלה ולמטה עד להופעת תמונת ה- OCT.התאם את הטווח המינימלי בין 0 ל- 20 ואת הטווח המרבי בין 40 ל- 60. לאחר מכן, כוונן את המרחק וכיוון המיקום המוגדרים מראש של העדשה עד לקבלת תמונת OCT אידיאלית. בחר את מיקום הסריקה על-ידי הזזת הקו הרגיל ב- cSLO.לאחר מכן, לחץ על ממוצע כדי לכסות את אות התמונה cSLO ו- OCT ולחץ על לחצן הצילום כדי להשיג את תמונת ה- OCT של SLO. לאחר הניסוי, הסר את עדשת המגע 100D ומרוח את ג'ל העיניים levofloxacin כדי להגן על הקרנית. לתיקון ריבוד הרשתית, לחצו על 'טען בדיקה' בממשק OCT וקראו את תמונות ה-OCT מחלון נפתח.לאחר מכן, לחץ פעמיים על התמונה בגורם המכיל של המדיה כדי להציג אותה על המסך. לאחר מכן, לחץ על זיהוי שכבה כדי להשלים שכבות אוטומטיות על הרשתית. לאחר בחירת הקו המפריד משני צידי השכבה שהוכנה לניתוח, לחצו על 'ערוך שכבה' להתאמת הריווח ולהגבלת הטווח.לאחר מכן, שנה את הקו על-ידי הזזת העיגול האדום. למדידת עובי למינציה ברשתית, לחצו על הלחצן 'סמן מדידה' ובחרו בקו המפריד של השכבה שיש לנתח כדי להציג את גבול השכבה בתמונת OCT. לאחר מכן, בחר התחבר לשכבה והישאר מחובר תוך כדי תנועה.לאחר מכן, בחר את האזור להצגת התוצאות ולחץ על המיקום שיש לנתח בתמונת OCT כדי לגרום לקו המדידה להופיע. לחץ על העמודה הבאה לקבלת מדידות עוקבות וכדי לחשוף את הנתונים הקודמים. כדי למדוד את עובי הרשתית המלא, בחר שורה אחת וקו שבע ברשימה בפינה השמאלית העליונה.לאחר מכן, מהופעת מבנה הרשתית בקצה הפפילה האופטית, מדוד ארבעה ערכים במרווחים של 200 מיקרומטר על הסרגל האופקי. תמונות OCT של עכברי C57BL/6 הראו שכבות רשתית שונות עם תיחום ברור. לעומת זאת, עכברי נוקאאוט של Vldlr הראו נגעים היפר-רפלקטיביים חריגים.תמונות ה-OCT הראו כמה פסים מחזירי אור אמצעיים על משטחי הרשתית של עכברי הנוקאאוט Vldlr. רצועות אלה דבקו בכלי הרשתית, בהיותן עקביות עם מאפייני OCT של ניתוק זגוגית לא שלם. נגע היפר-רפלקטיבי אחד הופיע בחלל התת-קרקעי והתפשט לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא פרץ את שכבת הפרספקס החיצונית.הופעת ה-OCT של נגע זה עלתה בקנה אחד עם ממצאים פתולוגיים. החלק הפתולוגי הראה כי ניאו-וסקולריזציה פרצה דרך שכבת האפיתל של פיגמנט הרשתית, מקטעים פנימיים-חיצוניים של פוטורצפטור והממברנה המגבילה החיצונית, ופלשה לשכבה הגרעינית החיצונית, אך לא לשכבת הפרספקס החיצונית. רצועה נוספת של נגע היפר-רפלקטיבי, הממוקם בחלל התת-קרקעי, לא כללה את השכבה הגרעינית החיצונית.בהתאם לממצאים הפתולוגיים, ניאו-וסקולריזציה תת-קרקעית זו לא פרצה את הממברנה המגבילה החיצונית. השוואת עובי הרשתית של עין ימין בכיוונים הטמפורליים, האף, העליונים והנחותים של הקוטב האחורי בין שתי הקבוצות גילתה כי עובי הרשתית של עכברי Vldlr נוקאאוט היה נמוך משמעותית מזה של עכברי C57BL/6J. בעת ביצוע הפרוטוקול, הניחו כראוי עדשת מגע 100D על הקרנית, ולאחר מכן התאימו את מיקום התמונה.בחר את מיקום הסריקה ושכב את התמונה לפני הצילום. לאחר הליך זה, OCT מקטע קדמי אפשרי, הדורש שינוי המרחק בין העדשה המוגדרת מראש לבין הקרנית. זה יכול להראות את הקרנית, החדר הקדמי, הקשתית, הגוף הציליארי, והעדשה.טכניקה זו מספקת כלי חשוב לחקר רטינופתיה במודלים של בעלי חיים קטנים, ומקדמת זיהוי ומדידה לא פולשניים של רטינופתיה במחקר בסיסי.

application-optical-coherence-tomography-to-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים טכניקת הדמיה in vivo לזיהוי וכימות דלקת עיניים במודל עכברי של אובאיטיס פוסט-זיהומית. הטכניקה, המכונה טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT), מייצרת תמונות חתך ברזולוציה גבוהה של העין להערכת התקדמות המחלה.

הדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית להערכת אובאיטיס במודל עכבר

מקור: Jagodzinska, J., et. al., טומוגרפיה קוהרנטית אופטית: הדמיית תאי גנגליון רשתית של עכבר ב-Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  בסרטון זה, אנו מדגימים את השימוש בטומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמות שכבות רשתית ולהעריך שינויים מבניים במודל עכבר מהונדס גנטית עם נוירופתיה אופטית.

הדמיה in vivo של רשתית העכבר באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור ויוו ההדמיה של הרשתית עכבר עם טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (SD-אוקטובר). הוא מתמקד תאי גנגליון (מהרשות לשיקום האסיר) באזור peripapillary, עם מספר סריקה וכימות הגישות שתוארו.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית: הדמיה העכבר גנגליון תאים In Vivo

כאן אנחנו מדגימים גישה מוזרה לשימוש טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (HR-SD-אוקטובר) כדי לסייע משלוח של סוכנים טיפול גנטי לחלל subretinal להעריך את פעולתה אמיתיות, לאפיין את קולט אור חיוניות.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

פרוטוקול זה מתאר איך ברזולוציה גבוהה טכניקות הדמיה כגון טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי, סריקת לייזר ophthalmoscopy יכול להיות מנוצל מכרסמים קטנים, באמצעות מערכת פלטפורמה אופטלמולוגיות הדמיה, כדי לקבל מידע על עובי רשתית, microglial תא הפצה, בהתאמה.

אין ויוו הדמיה של עכברים כתב Cx3cr1gfp/gfp עם תחומים הספקטרום טומוגרפיה אופטית קוהרנטית, סריקת לייזר Ophthalmoscopy

פרוטוקול מפורט להערכה של המפרט מבנית וחזותית בחולדות על ידי תגובת טומוגרפיה ו optokinetic אופטית קוהרנטית מוצג. התוצאות מספקים תובנות בעלות ערך מחקר ophthalmologic, כמו גם רגשיות ונוירולוגיות.

באמצעות טומוגרפיה אופטית קוהרנטית ותגובה Optokinetic כמו המפרט מבנית ופונקציונליים מערכת הראייה של עכברים וחולדות

כאן, אנו מתארים את השימוש בטומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמיין מבנים ברשתית ובעין in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

כאן, אנו מתארים דגם עכבר של איסכמיה רשתית על ידי חסימת עורקים דו-צדדית נפוצה חולפת באמצעות תפרים פשוטים ומהדק. מודל זה יכול להיות שימושי להבנת המנגנונים הפתולוגיים של איסכמיה ברשתית הנגרמת על ידי מומים קרדיווסקולריים.

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

כאן, אנו מתארים פרוטוקול אופטימלי לחסימת ורידים ברשתית באמצעות ורד בנגלי ומערכת מיקרוסקופ הדמיית רשתית מונחה לייזר עם המלצות למקסם את יכולת השחזור שלה בזנים מהונדסים גנטית.

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים ליישור תמונות טומוגרפיה של טומוגרפיה קוהרנטית אופטית באור נראה (vis-OCTF) עם תמונות קונפוקליות ex vivo של אותה רשתית עכבר לצורך אימות המורפולוגיה של צרור האקסון של תאי גנגליון הרשתית שנצפו בתמונות in vivo .

יישור של טומוגרפיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית של אור נראה עם תמונות קונפוקליות של אותה רשתית עכבר

למד כיצד להשתמש בטומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית לאבחון רטינופתיה במודל עכבר. שיטה זו מאפשרת הדמיה לא פולשנית ברזולוציה גבוהה של מבני הרשתית ומדידה כמותית של עובי הרשתית.

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

גלה סרטונים נוספים