Name: מודל השתלת כליה אורתוטופית של חולדה לדחיית כליאה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: למד את מודל השתלת הכליה האורתוטופית בחולדה לחקר דחיית שתל כליה. שיטה זו משתמשת באנסטומוזה מקצה לקצה של כלי הדם ובשיטת מנהרה צדית לשופכן, מה שמונע איסכמיה ודליפת שתן לאחר הניתוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81870304) לג'ון לי ועל ידי קרן אלזה קרנר-פרסניוס-ספניוס (מס ' 2017_A28) למרכוס גרוטרופ.

זכרים גזעיים בני 8-10 שבועות F344 וחולדות לואיס (200 גרם עד 250 גרם) הושגו באופן מסחרי. השתלת כליה שמאלית אלוגנית בוצעה בין זכרי F344 לחולדות לואיס. חולדות F344 שימשו כתורמים וכנמענים סינגניים, וחולדות לואיס שימשו כמושתלים אלוגניים. כל נהלי הטיפול בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות לטיפול בחיות מעבדה ולשימוש בהן שפורסמו על ידי NIH, וכל פרוטוקולי הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ולשימוש בהם של בית החולים לסרטן של אוניברסיטת צ'ונגצ'ינג. כל הציוד המשמש במהלך הניתוח, כולל כלי ניתוח ופתרונות, הם סטריליים. סכימה של הפרוטוקול מוצגת באיור 1.
1. הליך התורם
<ol><li>לגרום להרדמה כללית בחולדה על ידי שאיפת איזופלורן של 5% באמצעות תא אינדוקציה. לאחר מכן, מזריקים באופן תת עורי בופרנורפין במינון של 0.1 מ"ג/ק"ג כדי לבצע משכך כאבים מונע בו-זמני.</li>
	<li>הניחו את החולדה על גבה ושמרו על הרדמה עם שאיפת איזופלורן של 2% באמצעות מסכת פנים מעל האף והפה. יש למרוח חומר סיכה לעיניים על העיניים כדי למנוע ייבוש של הקרנית. קצב וקצב נשימה איטיים, היעלמות רפלקס הקרנית וחוסר תגובה לצביטת הבוהן מצביעים על יעילות ההרדמה.</li>
	<li>לגלח את שיער הבטן באמצעות סכין גילוח חשמלי ולעקר את העור באמצעות 0.5% יוד ו-70% אלכוהול.</li>
	<li>מזריקים באופן תת עורי 0.5% לידוקאין לאורך קו האמצע מהסימפיזיס פוביס ועד תת-אקסיפואיד למשככי כאבים מקומיים, ואז מסובבים את הבטן ופותחים את החתך באמצעות נסוג.</li>
	<li>מוציאים את המעיים מהצד הימני של החתך ועוטפים אותם בגאזה לחה כדי למנוע מהם להתייבש. לאחר מכן, חשוף את הכליה השמאלית.</li>
	<li>הפרד את רקמות השומן מהכליה השמאלית ואת השופכן באמצעות צמר גפן, ולאחר מכן נתק את עורק הכליה השמאלי ואת הווריד באמצעות המיקרו-מלקחיים תחת מיקרוסקופ הפעלה עם הגדלה של פי 20. Coagulate כל דימום באמצעות קרישה חשמלית, במידת הצורך.</li>
	<li>בצע קשירת אבי העורקים כ -5 מ"מ מעל עורק הכליה השמאלי עם תפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0. לאחר מכן, להעביר את וריד הכליה השמאלית דיסטלית לשילוב של וריד איברי המין השמאלי ווריד יותרת הכליה.</li>
	<li>יש לשטוף את הכליה בתמיסת UW קרה כקרח בתוספת הפרין (100 U/mL) באמצעות מחט קרקפת של 24 גרם מאבי העורקים שמתחת לעורק הכליה השמאלי עד שהדם דועך בצבעו. זמן איסכמיה חם הוא 5 דקות בממוצע.</li>
	<li>לאחר כריתת עורק הכליה השמאלי כ -2 מ"מ ליד אבי העורקים, נתק את הכליה ואת השופכן בעזרת מיקרו מלקחיים (לשמר את רקמות החיבור ההיקפיות כדי להבטיח אספקת דם לשופכן). לאחר מכן, העבירו את השופכן שליד שלפוחית השתן ושמרו על הכליה השמאלית של התורם בתמיסת UW קרה כקרח.</li>
	<li>להקריב את החולדה התורמת עם אובדן דם על ידי מעבר לאבי העורקים ולאחר מכן הכנסתה לתוך תיבת CO2 כדי להבטיח מוות.</li>
</ol>2. הליך הנמען
<ol><li>חזור על ההליך המתואר בשלבים 1.1-1.5 עבור החולדה המקבלת.</li>
	<li>נתקו את הכליה והשופכן השמאליים, כמו גם את עורק הכליה השמאלי ואת וריד הכליה של החולדה המושתלת באמצעות צמר גפן מטושים ומיקרו-מלקחיים תחת מיקרוסקופ הפעלה עם הגדלה של פי 20.</li>
	<li>קצצו את עורק הכליה השמאלי ואת וריד הכליה בשורש על ידי מלחציים מיקרו-וסקולריים לא פולשניים. ליגט את השופכן השמאלי בערך 2-3 ס"מ מתחת לכליה עם 8-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד ומתעלה אותו בקשירתו.</li>
	<li>נתחו את הכליה השמאלית המקורית של הנמען על ידי מעבר עורק הכליה השמאלי במרחק של 2 מ"מ מהדק המיקרו-וסקולרי, והעתקת וריד הכליה הפרוקסימלי לשילוב של וריד איברי המין השמאלי ווריד יותרת הכליה. Coagulate את וריד יותרת הכליה באמצעות electrocoagulation, במידת הצורך.</li>
	<li>שתלו את הכליה התורמת בפוסה הכליתית השמאלית של החולדה המקבלת והניחו קרח סביב הכליה התורמת המושתלת. Anastomose העורק הכליתי של התורם ואת הווריד הכליתי לעורק הכליות של המקבל ואת וריד הכליה בתבנית מקצה לקצה באמצעות 10-0 תפרים מונופילמנט פוליאמיד תחת מיקרוסקופ הפעלה עם הגדלה של פי 45, כדלקמן.</li>
	<li>Anastomose עורק הכליה עם תפרים מופרעים.<ol>
<li>מקם את תפרי השהייה בשעה 12 ו -6 עמדות של אנסטומוזיס, בהתאמה. תפר באופן שווה צד אחד של האנסטומוזה בין שני תפרי השהייה עם 2-3 תפרים באמצעות תפר מונופילמנט פוליאמיד 10-0.</li>
		<li>הופכים את תפרי השהייה ובאופן דומה תופרים את הצד השני של האנסטומוזה בין שני תפרים להישאר עם 2-3 תפרים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anastomose את וריד הכליה עם תפרים מתמשכים.<ol>
<li>מקם את תפרי השהייה בשעה 6 ו -12 בעמדות של אנסטומוזיס, בהתאמה. לתפור צד אחד של האנסטומוזיס ממצב השעה 12 עם 4-5 תפרים באמצעות התפרים הפועלים, ולאחר מכן לקשור את תפר הריצה לתפר השהייה במצב השעה 6 עם תפר מונופילמנט פוליאמיד 10-0.</li>
		<li>הופכים את תפרי השהייה ותופרים באופן דומה את הצד השני של האנסטומוזיס ממצב השעה 6, ולבסוף קושרים את תפר הריצה לתפר השהייה בתנוחת השעה 12.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להחדיר מחדש את הכליה התורמת על ידי שחרור המהדק המיקרו-וסקולרי הלא פולשני של וריד הכליה תחילה; לאחר מכן, זהה את אתרי הדימום ובצע תפרים נוספים.</li>
	<li>שחררו את המהדק המיקרו-וסקולרי הלא פולשני של עורק הכליה, זיהו את אתרי הדימום ועשו תפרים נוספים. זמן איסכמיה קרה הוא 45 דקות בממוצע.</li>
	<li>תפר את קצה השופכן התורם בתפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0 כגרירה כדי לגרור את הקצה דרך "המנהרה" של שלפוחית השתן של המקבל תחת מיקרוסקופ הפעלה עם הגדלה של פי 20. לאחר מכן, העבירו את קצה השופכן התורם עם התפר מחוץ לשלפוחית השתן של המקבל. תנו לשופכן התורם להתכווץ בחזרה לשלפוחית השתן של המקבל.</li>
	<li>לתקן את השופכן התורם עם שלפוחית השתן של המקבל על ידי תפירת האדוונטיציה של השופכן התורם עם שכבת השרירים של שלפוחית השתן של המקבל בחוץ בארבע תנוחות שוות באמצעות 8-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד תחת מיקרוסקופ הפעלה עם הגדלה של פי 45.</li>
	<li>מחזירים את המעיים לחלל הבטן וסוגרים את חתך הבטן עם תפרים רציפים בשכבת השריר תחילה ולאחר מכן בשכבת העור עם תפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0.</li>
	<li>מניחים את החולדה המקבלת על כרית חימום של 37 מעלות צלזיוס בכלוב יבש ונקי. המתן עד שהחולדה תתאושש מהרדמה.</li>
	<li>תת עורית מזריקה בופרנורפין (0.05 מ"ג/ק"ג) לחולדה המקבלת כל 6 שעות למשך 48 שעות לשיכוך כאבים לאחר הניתוח. תוך שרירית מזריקים לפניצילין (50,000 U/kg) לחולדה המקבלת פעם ביום למשך 3 ימים למניעת זיהום. החולדה המקבלת מוקרבת על ידי הכנסתה לתוך תיבת CO2 כדי לבחון את הדחייה הכרונית של allograft הכליה לאחר 10 שבועות של השתלה.</li>
</ol>

<ol><li>Cooper, J. E., Wiseman, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+immunosuppressive+agents+in+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Novel immunosuppressive agents in kidney transplantation.</a> Clinical Nephrology. 73 (5), 333-343 (2010).</li>
<li>Colaneri, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+transplant+immunosuppression--history%2C+principles%2C+and+current+practices+in+kidney+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Nursing+Journal%22%5BJournal%5D)">An overview of transplant immunosuppression--history, principles, and current practices in kidney transplantation.</a> Nephrology Nursing Journal. 41 (6), 549-560 (2014).</li>
<li>Colvin, R. B., Smith, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-mediated+organ-allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antibody-mediated organ-allograft rejection.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (10), 807-817 (2005).</li>
<li>Joosten, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+response+against+perlecan+and+collagen+types+IV+and+VI+in+chronic+renal+allograft+rejection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Antibody response against perlecan and collagen types IV and VI in chronic renal allograft rejection in the rat.</a> American Journal of Pathology. 160 (4), 1301-1310 (2002).</li>
<li>Joosten, S. A., van Ham, V., Borrias, M. C., van Kooten, C., Paul, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+mesangial+cells+in+a+rat+model+of+chronic+renal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Antibodies against mesangial cells in a rat model of chronic renal allograft rejection.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 20 (4), 692-698 (2005).</li>
<li>Yamanaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depression+of+complement+regulatory+factors+in+rat+and+human+renal+grafts+is+associated+with+the+progress+of+acute+T-cell+mediated+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Depression of complement regulatory factors in rat and human renal grafts is associated with the progress of acute T-cell mediated rejection.</a> PLoS One. 11 (2), 0148881(2016).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteasome+inhibition+prevents+chronic+antibody-mediated+allograft+rejection+in+renal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Immunoproteasome inhibition prevents chronic antibody-mediated allograft rejection in renal transplantation.</a> Kidney International. 93 (3), 670-680 (2018).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteasome+inhibition+induces+plasma+cell+apoptosis+and+preserves+kidney+allografts+by+activating+the+unfolded+protein+response+and+suppressing+plasma+cell+survival+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Immunoproteasome inhibition induces plasma cell apoptosis and preserves kidney allografts by activating the unfolded protein response and suppressing plasma cell survival factors.</a> Kidney International. 95 (3), 611-623 (2019).</li>
<li>Miller, B. F., Gonzalez, E., Wilchins, L. J., Nathan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Kidney transplantation in the rat.</a> Nature. 194, 309-310 (1962).</li>
<li>Tillou, X., Howden, B. O., Kanellis, J., Nikolic-Paterson, D. J., Ma, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+renal+research%3A+kidney+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%22%5BJournal%5D)">Methods in renal research: kidney transplantation in the rat.</a> Nephrology. 21 (6), 451-456 (2016).</li>
<li>Daniller, A., Buchholz, R., Chase, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+transplantation+in+rats+with+the+use+of+microsurgical+techniques%3A+a+new+method%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Renal transplantation in rats with the use of microsurgical techniques: a new method.</a> Surgery. 63 (6), 956-961 (1968).</li>
<li>Ahmadi, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+rat+kidney+transplantation%3A+A+novel+and+simplified+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic rat kidney transplantation: A novel and simplified surgical approach.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (147), e59403(2019).</li>
<li>Günther, E., Walter, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+major+histocompatibility+complex+of+the+rat+%28Rattus+norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Immunogenetics%22%5BJournal%5D)">The major histocompatibility complex of the rat (Rattus norvegicus).</a> Immunogenetics. 53 (7), 520-542 (2001).</li>
<li>Loupy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Banff+2015+Kidney+Meeting+Report%3A+Current+challenges+in+rejection+classification+and+prospects+for+adopting+molecular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The Banff 2015 Kidney Meeting Report: Current challenges in rejection classification and prospects for adopting molecular pathology.</a> American Journal of Transplantation. 17 (1), 28-41 (2017).</li>
<li>Fisher, B., Sun, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+surgical+techniques+in+research%2C+with+special+reference+to+renal+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Microvascular surgical techniques in research, with special reference to renal transplantation in the rat.</a> Surgery. 58 (5), 904-914 (1965).</li>
<li>Kamada, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+description+of+cuff+techniques+for+renal+transplantation+in+the+rat.+Use+in+studies+of+tolerance+induction+during+combined+liver+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A description of cuff techniques for renal transplantation in the rat. Use in studies of tolerance induction during combined liver grafting.</a> Transplantation. 39 (1), 93-95 (1985).</li>
<li>Grabner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+imaging+of+acute+allograft+rejection+after+rat+renal+transplantation+using+18F-FDG+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Non-invasive imaging of acute allograft rejection after rat renal transplantation using 18F-FDG PET.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (74), e4240(2013).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

השתלת כליה בחולדה היא עבודה מאתגרת הדורשת רמה גבוהה של טכניקות מיקרו-ניתוח וטכניקות הניתוח עברו אופטימיזציה מספר פעמים. מההתחלה, גונזלס ואחרים השתילו את הכליה התורמת בצווארו של המקבל והעבירו את השופכן התורם לעור9. עם זאת, בגלל השכיחות הגבוהה של זיהום בדרכי השתן והיצרות של השופכן התורם, הניתוח ננטש תוך זמן קצר. לאחר מכן, פעולת השתל של הכליה הימנית של התורם שופרה על ידי אנסטומוזיס של עורק הכליה התורם ווריד הכליה לאבי העורקים המקבל ולווריד הנבוב התחתון15, או על ידי אנסטומוזיס ...

השתלת כליות הפכה לגישה הטיפולית היעילה ביותר עבור חולים עם כשל בתפקוד הכליות בשלב הסופי. עם זאת, דחייה חריפה בתיווך תאי T ודחייה חיסונית הומורלית בתיווך אלואנטיבי גורמות לפגיעה פתולוגית של אלוגרפטים כלייתיים ומגבילות את ההישרדות לטווח הקצר והארוך של חולים לאחר השתלת כליה 1,2,3. למרבה הצער, התרופות היעילות המונעות את הדחייה של allografts הכליות עדיין חסרות, כי המנגנונים המדויקים של דחייה חיסונית ופתולוגית של allografts כליות אינם ברורים. כתוצאה מכך, המחקרים הפרה-קליניים המבהירים את המנגנונים של דחייה חיסונית ופתולוגית של allografts כלייתיים תורמים למציאת מטרות חדשות ולפיתוח תרופות יעילות רלוונטיות כדי למנוע דחייה של allografts כליות ובסופו של דבר להאריך את הישרדותם של חולים.
מנגנונים אימונולוגיים ופתופיזיולוגיים פוטנציאליים רבים של דחיית אלוגרפט כלייתי הוצעו לאחרונה במחקרי מודל חולדות של השתלת כליה אורתוטופית 4,5,6,7,8. ממצאים אלה מציעים מספר מטרות חדשניות וגישות מפריעות רלוונטיות כטיפולים מבטיחים לדיכוי דחיית אלוגרפט כלייתי, כגון גורמים רגולטוריים משלימים ונוגדנים נגד CD596, אימונופרוטאזום ומעכבי אפוקסיקטון 7,8. לפיכך, השתלת כליה אורתוטופית של חולדות היא מודל פרה-קליני אידיאלי לחקור את המנגנונים של דחייה חיסונית ופגיעה פתולוגית של כלביות לאחר השתלת כליה.
השתלת כליה של חולדות עברה בהדרגה מהשתלה הטרוטופית של כליות התורם9 להשתלת כליות אורתוטופית באמצעות אנסטומוזיס מקצה לקצה של כלי הדם או באמצעות אנסטומוזה מקצה לקצה של השופכן בשיטת השרוול 10,11,12. המחקר הנוכחי מתאר פרוטוקולים מפורטים של השתלת כליה אורתוטופית בין חולדות המשתמשות באנסטומוזיס מקצה לקצה לעורק הכליות ולווריד הכליות של המושתלים, ושיטת "מנהרה" מקצה לקצה של אנסטומוזיס שלפוחית השתן בשופכן, אשר מונעת את האיסכמיה של פלג הגוף התחתון ואת הפקקת של ורידים קאווה נחותים ומפחיתה את דליפת השתן לאחר הניתוח ואת הפיתול של השופכן.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 10-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>G0090781</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 4-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>C1048451</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 8-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>C2090880</tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>בארה"ב מדעי החיים הביולוגיים</td><td>352004</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרו-קואגולטור</td><td>אלקטרו-קואגולטור</td><td>ZJ1099</td><td></td></tr><tr><td>F344 ומרכז חולדות לואיס</td><td>לבעלי חיים ניסיוניים (המכללה הרפואית טונג'י, אוניברסיטת הוז'ונג למדע וטכנולוגיה, סין)</td> <td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Henan piaoan Group Co., LTD</td><td>10210402</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>גואנגג'ואו Dewei ביולוגית טכנולוגיה ושות', בע"מ</td><td>DK0032</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>צפון סין פרמצבטיקה ושות', בע"מ</td><td>2101131-2</td><td></td></tr><tr><td>מזרק הזרקה (1 מ"ל ו-10 מ"ל)</td> <td>שאנדונג weigao קבוצה פולימר רפואי ושות', בע"מ</td><td>20211001</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD מדעי החיים ושות', בע"מ</td><td>21070201</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין G נתרן</td><td>ווהאן הונגדה Yuexin pharmatech co., Ltd</td><td>69-57-8</td><td></td></tr><tr><td>מחט קרקפת (24 G)</td> <td>Hongyu Medical Group</td><td>20183150210</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח</td><td>Beyotime</td><td>FS600</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה לבעלי חיים קטנים</td><td>RWD מדעי החיים</td><td>R500</td><td></td></tr><tr><td>ערכת ניתוח בעלי חיים קטנים</td><td>Beyotime</td><td>FS500</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת נתרן כלורי</td><td>Southwest pharmaceutical Co., LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H50021610 מיקרוסקופ פעולה כירורגית</td><td>Tiannuoxiang Scientific Instrument Co., Ltd, בייג'ינג, סין</td><td>SZX-6745</td><td></td></tr><tr><td>ספוגית</td><td>Yubei חומרים רפואיים ושות', בע"מ</td><td>21080274</td><td></td></tr><tr><td>קלטת</td><td>מינסוטה כריית ייצור ציוד רפואי (שנחאי) ושות', בע"מ</td><td>1911N68</td><td></td></tr><tr><td>פתרון UW</td><td>בריסטול-מאיירס סקוויב חברה</td><td>17HB0002</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל השתלת כליה אורתוטופית של חולדה לדחיית כליאה

A Rat Orthotopic Renal Transplantation Model for Renal Allograft Rejection

דחיית כליות מגבילה את ההישרדות ארוכת הטווח של חולים לאחר השתלת כליה. השתלת כליה אורתוטופית של חולדות היא מודל חיוני לחקר המנגנון של דחיית אלוגרפט כלייתי במחקרים פרה-קליניים, ועשויה לסייע בפיתוח גישות חדשניות לשיפור ההישרדות ארוכת הטווח של אלוגרפטים כלייתיים. השתלת כליה של תורמים בהשתלת כליה אורתוטופית של חולדה מבוצעת בדרך כלל על ידי אנסטומוזיס מקצה לקצה לאבי העורקים של המושתלים ולווריד קאווה נחות. במודל זה, הכליה של התורם הושתלה באמצעות אנסטומוזיס מקצה לקצה לעורק הכליות וווריד הכליות של המושתלים. השופכן של התורם הוכנס לשלפוחית השתן של המקבל בשיטת 'מנהרה' מקצה לקצה. מודל זה תורם לריפוי טוב יותר של אנסטומוזיס בשלפוחית השתן ומגביר את הישרדותם של המושתלים על ידי הימנעות מהפרעה לאספקת הדם ולרפלוקס ורידי של פלג הגוף התחתון. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את המנגנונים של דחייה חיסונית ופתולוגית חריפה וכרונית של allografts הכליות. כאן, המחקר מתאר את הפרוטוקולים המפורטים של השתלת כליה אורתוטופית זו בין חולדות.

במודל השתלת כליה אורתוטופית זו של חולדה, החולדות המושתלות נעות כרגיל לאחר הניתוח. כדי לבחון את הדחייה הכרונית של אלוגרפט הכליות, החולדות המקבלות גדלות במשך 10 שבועות לאחר ההשתלה, ושיעור ההישרדות הכולל של החולדות המקבלות בנקודת זמן זו הוא כ -90%. סיבות המוות העיקריות הן דימום ודליפה של שתן לאחר הניתוח. הסיבוכים העיקריים האחרים כוללים דימום במהלך הניתוח, פקקת בכלי כליות והידרונפרוזה, שהשכיחות שלה בהתאמה היא כ -15%, 25% ו -20%. ניתן לעצור את רוב הדימום במהלך הניתוח ואינו משפיע על הישרדותן של החולדות המקבלות. השתלות כליות עם...

מודל השתלת הכליה האורתטופית של חולדה תורם לחקר המנגנון של דחיית כליות. המודל הנוכחי מגביר את הישרדותם של המושתלים ללא הפרעה לאספקת הדם ולרפלוקס ורידי של פלג הגוף התחתון באמצעות אנסטומוזיס מקצה לקצה של השתלת כליות ושיטת "מנהרה" מקצה לקצה של אנסטומוזיס בשלפוחית השתן של השופכן.

Renal allograft rejection limits the long-term survival of patients after renal transplantation. Rat orthotopic renal transplantation is an essential ...

השתלת כליה אורתוטופית של חולדות היא מודל חשוב לחקר המנגנון של דחיית אלוגרפט כלייתי במחקרים פרה-קליניים ועשויה לסייע בפיתוח גישה חדשנית לשיפור ההישרדות ארוכת הטווח של אלוגרפטים כלייתיים. אנסטומוזיס מקצה לקצה של כליות בניתוח זה מונע איסכמיה של פלג הגוף התחתון ואת הפקקת של ורידים נחותים, בעוד שאנסטומוזיס של השופכן בשיטת מנהרה מקצה לקצה מפחיתה את דליפת השתן לאחר הניתוח ואת הפיתול של השופכן. שיטה זו מספקת תובנה לגבי חקירת המנגנונים של דחייה חיסונית ופציעה של אלוגרפטים כלייתיים לאחר השתלת כליה.התחילו על ידי חתך הבטן באמצעות מספריים כירורגיים לאורך קו האמצע מהסימפיזה פוביס ועד התת-אקסיפואיד. לאחר מכן פתח את החתך באמצעות נסוג. מוציאים את המעיים מהצד הימני של החתך ועוטפים אותם בגאזה לחה כדי למנוע מהם להתייבש.ואז לחשוף את הכליה השמאלית. נתקו את עורק הכליה השמאלי ואת הווריד באמצעות מיקרו-מלקחיים ומטושים מכותנה בהגדלה של פי 20. Ligate ולעבור את וריד יותרת הכליה ואת וריד איברי המין במידת הצורך.נתקו את השופכן בעזרת מיקרו-מלקחיים, תוך שמירה על רקמות החיבור ההיקפיות כדי להבטיח אספקת דם לשופכן. דיסוציאציה וקוצץ או ליגייט את אבי העורקים כחמישה מילימטרים מעל עורק הכליה השמאלי עם מהדק כלי דם או תפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0. לאחר מכן להעביר את וריד הכליה השמאלי דיסטלי לשילוב של וריד איברי המין השמאלי ווריד יותרת הכליה.באמצעות מחט אזמל של 24 מדים, שטפו את הכליה מאבי העורקים שמתחת לעורק הכליה השמאלי עם תמיסת UW קרה כקרח בתוספת 100 יחידות למיליליטר הפרין עד שהדם דוהה בצבעו. טרנסקט את עורק הכליה השמאלי ליד אבי העורקים, ואז תעביר את השופכן ליד שלפוחית השתן ונתק את הכליה בעזרת מיקרו-מלקחיים ומספריים. שמור על הכליה השמאלית של התורם בתמיסת UW קרה כקרח.פחות מהגדלה של פי 20, נתקו את עורק הכליה השמאלי ואת וריד הכליה של החולדה המקבלת באמצעות צמר גפן מטושים ומיקרו-מלקחיים. ליגט את וריד יותרת הכליה ואת וריד איברי המין במידת הצורך. חותכים את עורק הכליה השמאלי ואת וריד הכליה בשורש באמצעות מלחציים מיקרו-וסקולריים, ואז מעבירים את עורק הכליה ואת וריד הכליה במרחק שלושה מילימטרים מהמהדק המיקרו-וסקולרי.נתקו וליקטו את השופכן השמאלי בערך שניים עד שלושה סנטימטרים מתחת לכליה עם 8-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד ומתעלה עליו בקשירת קשר. נתחו את מקבלי הכליה השמאלית המקומית על ידי ניתוק הכליה בעזרת מיקרו-מלקחיים ומספריים. שתלו את הכליה התורמת בפוסה הכליתית השמאלית של החולדה המקבלת והניחו קרח סביב הכליה התורמת המושתלת.עברו להגדלה של פי 45, ולאחר מכן אנסטומוס העורק הכלייתי והווריד הכלייתי של התורמים לעורק הכליות וווריד הכליות של המקבלים בתבנית מקצה לקצה באמצעות 10-0 תפרים מונופילמנט פוליאמידים. כדי לאנסטומוז את עורק הכליה עם תפרים מופרעים, הניחו את תפרי השהייה בשעה 12 ושש תנוחות של אנסטומוזיס. תפר באופן שווה צד אחד של האנסטומוזיס בין שני תפרים להישאר עם שניים עד שלושה תפרים.הופכים את תפרי השהייה ובאופן דומה תופרים את הצד השני של האנסטומוזה בין שני תפרי השהייה עם שניים עד שלושה תפרים. כדי לאנסטומיז את וריד הכליה עם תפרים רציפים, הניחו את תפרי השהייה בעמדות השעה שש ו -12 של האנסטומוזה. תפר צד אחד של האנסטומוזיס ממצב השעה 12 עם ארבעה עד חמישה תפרים באמצעות התפרים הפועלים.הפוך את תפרי השהייה ובאופן דומה, תפר את הצד השני של האנסטומוזה ממצב השעה שש. יש להפיג מחדש את הכליה התורמת על ידי שחרור המהדק המיקרו-וסקולרי הלא פולשני של וריד הכליה, לזהות את אתרי הדימום ולבצע תפרים נוספים במידת הצורך. לאחר מכן, שחררו את המהדק המיקרו-וסקולרי הלא פולשני של עורק הכליות, זיהו את אתרי הדימום ועשו תפרים נוספים במידת הצורך.פחות מפי 20 הגדלה, ליגטה או תפירה של קצה השופכן התורם עם תפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0 כגרירה כדי לגרור את הקצה דרך המנהרה של שלפוחית השתן של המקבלים. לתקן את השופכן התורם עם שלפוחית השתן של המקבלים על ידי תפירת האדוונטיציה של השופכן התורם עם שכבת השרירים של שלפוחית השתן של המושתלים בחוץ בארבע תנוחות שוות ערך באמצעות 8-0 תפר מונופילמנט פוליאמיד. לאחר מכן, העבירו את קצה השופכן התורם עם התפר מחוץ לשלפוחית השתן של המקבלים ואפשרו לשופכן התורם להתכווץ בחזרה לשלפוחית השתן של המקבלים.מכניסים את המעיים בחזרה לחלל הבטן וסוגרים את החתך הבטני עם תפרים רציפים בשכבת השריר ולאחר מכן בשכבת העור עם תפר מונופילמנט פוליאמיד 4-0. בשעה עשרה שבועות לאחר ההשתלה, צביעת המטוקסילין ואאוזין וצביעת הסטת חומצה תקופתית חשפו טרשת גלומרולרית, פיברוזיס אינטרסטיציאלי, ניוון צינורי וטרשת עורקים אינטרסטיציאלית באלוגרפט הכליות בניגוד לכליית האיזוגרפט. צביעת כסף הראתה את העיבוי של קרום המרתף הגלומרולרי בכליית האלוגרפט בהשוואה לכליית האיזוגרפט, מה שמעיד על הצלחת מודל השתלת הכליה האורתוטופית של החולדה.מכיוון שהחור הווסקולרי של הכליה הוא דק מאוד, כדי למנוע את התפירה הלא נכונה, זכור לבצע את האנסטומוזיס בשדה ההגדלה הגבוהה.

a-rat-orthotopic-renal-transplantation-model-for-renal-allograft

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

אנחנו בזאת להציג מודל חולדה להשתלת כליה הלא פולשני להעריך דחיית שתל אקוטית באמצעות טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים עם 18F-fluorodeoxyglucose.

הדמיה לא פולשנית של דחיית שתל חריפה לאחר השתלת כליה באמצעות חולדה<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר האימונולוגיה של דחייה. המודל הכירורגי הציג דוחות על זמן ניתוח קצר וטכניקה תמציתית. בהתאם לשילוב הזן של התורם-מקבל, הכליה המושתלת עלולה לפתח דחייה תאית חריפה או נזק כרוני לאלוגרפט, המוגדר על ידי פיברוזיס אינטרסטיציאלי וניוון צינור.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

מטרת כתב היד והפרוטוקול היא להסביר ולהדגים בפרוטרוט את ההליך הכירורגי של השתלת כליות אורתוגרפית בחולדות. שיטה זו היא פשוטה כדי להשיג את הפרזיה הנכונה של כליה התורם ולקצר את הזמן הreperfusion באמצעות שימוש בטכניקת ורידי השרוול וההשקה.

אורתובנושא חולדה השתלת כליה: מגישת רומן וכירורגית פשוטה

אנו מתארים מודל של הטרוהנושא השתלת לב הבטן בחולדות, רומז שינויים של אסטרטגיות נוכחיות, אשר להוביל גישה כירורגית פשוטה. בנוסף, אנו מתארים מודל דחייה הרומן על-ידי הזרקה באוזן של תאים חיוניים שרירי הלב, המאפשר ניתוח נוסף השתלת אימונולוגיים בחולדות.

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

פרוטוקול השתלת כבד עזר הטרוטופי של חולדות המתואר כאן מציע כלי מחקר מעשי לחקר מנגנונים של דחיית השתלת כבד. מודל זה מסייע להקל על המכשולים הכירורגיים והלחץ של בעלי חיים של השתלת כבד אורתוטופית בחולדות.

מודל השתלת חולדה בכבד שלם עזר הטרוטופי תוך שימוש בכבד כבד למחקרי דחיית אלוגרפט

פרוטוקול זה מתאר מודל השתלת מעיים מבוסס חולדה עם איליאוסטומיה להערכת מהלך הזמן של התערבות תרופתית בדחיית השתל.

מודל דחיית שתל חולדה של השתלת מעיים עם איליאוסטומיה חיצונית להערכת פרוגנוזה אורכית

השתלת הכבד orthotopic בחולדות היא מודל ניסיון הכרחי למחקר ביו. כאן אנו מציגים הניתוחים שלנו להשתלת כבד חולדת orthotopic עם שחזור עורק כבד באמצעות 50% שתל חלקי.

ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

מטרת כתב היד הזה היא לתאר את השלבים הנדרשים לביצוע השתלת כליה בעכבר, תוך שימת לב מיוחדת לפרטי האנסטומוזיס העורקי.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

למד את מודל השתלת הכליה האורתוטופית בחולדה לחקר דחיית שתל כליה. שיטה זו משתמשת באנסטומוזה מקצה לקצה של כלי הדם ובשיטת מנהרה צדית לשופכן, מה שמונע איסכמיה ודליפת שתן לאחר הניתוח.

מודל השתלת כליה אורתוטופית של חולדה לדחיית כליאה

גלה סרטונים נוספים