שימוש בזריקת מעקב אחר תאים כדי לחקור את מקורם של תאים יוצרי ניאו-אינטימה במודל דופן צד סקולרית של חולדה

על ידי שימוש ביישום ישיר של מעקב אחר תאים תוך-אבי העורקים, אנו יכולים לנתח את תפקידם של תאי אנדותל שמקורם בעורק האב בהיווצרות ניאו-אינטימה בשתי נקודות זמן שונות. יתרון גדול של טכניקה זו הוא הזרקת in-vivo פרשנית ישירה, חד-פעמית, שהופכת את המודל הזה לטכניקה חזקה וניתנת לשחזור. לפני הניתוח, דגירה של שקיות העורקים מחולדות תורמות ב-0.1% נתרן דודציל סולפט למשך 10 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי לקבל מפרצות שעברו דה-תאיזציה.

אספו את השקיות האלה מבעלי חיים תורמים כמה ימים לפני הניתוח. ראשית, נתחו את התנהגות החיה ובדקו את קרומי הריר והטורגור כחלק מהבדיקה הקלינית שלפני הניתוח. רשום את משקלו של כל בעל חיים.

להשראת הרדמה, הניחו את כל החולדות בקופסה נקייה עם חמצן עד לאובדן הכרה לאחר חמש עד עשר דקות. בדוק את עומק ההרדמה על ידי היעדר רפלקס הגמילה מהדוושה. מניחים את החולדות בתנוחת שכיבה ומגלחים את אזור בית החזה באמצעות מכונת גילוח חשמלית.

באמצעות סרט הדבקה, יש לקבע את כפותיה של החולדה על לוח המכוסה על ידי כרית חימום המחוברת לבדיקה רקטלית המווסתת אוטומטית. הכנס את הבדיקה הרקטלית לפי הטבעת של החולדה כדי לשמור על הטמפרטורה הרצויה של 37 מעלות צלזיוס בעזרת כרית חימום. לאחר מכן התקינו חיישן על הרגל האחורית הימנית המחוברת למערכת ממוחשבת לבדיקת סימנים חיוניים תוך ניתוחית.

לטיפול פריאנסתטי, יש למרוח חומר סיכה אופתלמי סטרילי על העיניים, ולכסות אותן במסכת נייר כסף אטומה כדי למנוע ייבוש ונזק מהמנורה הכירורגית. יש לחטא את שדה הניתוח ביוד פובידון, ולעטוף את שדה הניתוח בצורה סטרילית. שים מיקרו ספוגית עם ריפוד סגול מתחת לחלקים הפרוקסימליים והדיסטליים של אבי העורקים כדי לדמיין טוב יותר את העורק ברגע שהוא מופרד מהווריד הפרשי.

לאחר מכן הגן על הבטן עם גזה לבנה. ביום הפעולה, להמיס שני מיקרוליטרים של עוקב התאים על ידי צנרת במיליליטר אחד של PBS. מעבירים את התערובת למזרק של מיליליטר אחד המצויד בצינורית.

כבו את האור בחדר הניתוח. באמצעות מיקרוסקופ, בצע את ההזרקה החד-נקודתית בחלק הגחוני האמצעי של אבי העורקים עם מיקרו מלקחיים, והזריק בזהירות מיליליטר אחד של תמיסת מלח 0.9% הפריניזציה. הזריקו את עוקב התאים בזהירות, ומיד כבו גם את המיקרוסקופ הפועל.

הגן על הבטן עם גזה רטובה שוב. תנו לצבע לדגום לפחות 15 דקות. לאחר מכן הפעל את אורות המיקרוסקופ וחדר הניתוח.

השתמש במיקרו מלקחיים ובמיקרו מספריים כדי לבצע את העורק האורכי כך שאורכו ממוצע את קוטר המפרצת שנקטפה. מניחים את המפרצת ליד אבי העורקים לפני ביצוע טרשת עורקים כדי להבטיח את האורך הנכון. לתפור את המפרצת עם שמונה עד 10 תפרים בודדים באמצעות תפר 10-0 שאינו נספג.

לפני התפירה הסופית, ספקו את הסליל בצפיפות אריזה של סנטימטר אחד. ניתן לבצע טיפול בסליל או בסטנטים במודל זה. לאחר מכן להסיר בזהירות את המהדקים הזמניים, החל באופן דיסטלי, תחת השקיה מתמשכת עם מלוחים heparinized.

סגרו את הפצע בצורה מרובדת. בסוף הניתוח, להפוך את ההרדמה עם זריקה תת עורית. תנו לכל בעל חיים המופעל להתאושש בכלוב נקי עד שהוא ער לחלוטין וחם לפי הצורך עם מנורת חימום.

נפחי המפרצת הבסיסית שנמשכו ליום השביעי וליום ה-21 לא היו שונים באופן משמעותי עבור מפרצות שעברו דה-תאיזציה או חיוניות בין קבוצות הטיפול בסליל או בסטנטים. נפחי FU משוכים עבור מפרצות שעברו דה-תאיזציה הראו צמיחה לא משמעותית במפרצת מפותלת בהשוואה למפרצות הסטנטליות. נפח FU משוך היה גדול משמעותית בסלילים החיוניים מאשר בקבוצת הסטנטים.

כמויות התאים החיוביים למעקב אחר תאים בניאו-אינטימה של מפרצות דה-תאיות לא היו שונות באופן משמעותי בין הקבוצות שטופלו בסטנטים או בסלילים ביום השביעי ל-FU, אך היו גבוהות משמעותית בחולדות סטנטות ביום ה-21 FU.No נצפו הבדלים משמעותיים בחולדות תפורות מפרצות בעלות מפרצת חיונית במשך שבעה ימים או 21 ימים FU.In מפרצות שעברו דה-תאיזציה בשבעה ימי FU, באופן משמעותי יותר תאים חיוביים למעקב אחר תאים נותרו בפקק של הסטנט שטופל בהשוואה לקבוצה שטופלה בסליל. הבדל זה לא נצפה במפרצות חיוניות בשבעה ימים FU. זכרו לכבות תמיד את האורות בחדר הניתוח לפני הזרקת עוקב התאים כדי למנוע דהייה. כמו כן, תן הדגירה של הצבע במשך 15 דקות לפחות.