Name: עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: למד פרוטוקול כירורגי סטנדרטי להשראת פרצת אבי העורקים הבטנית בעכברים באמצעות אלסטאז. שיטה זו מבטיחה שכפוליות גבוהה ועלויות נמוכות לחקר מחלות לב וכלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ליחידה לרפואת בעלי חיים במעבדה של אוניברסיטת מישיגן על עזרתם בהאכלת בעלי חיים ורבייה. מחקר זה נתמך על ידי NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 לג'יי ג'אנג, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 ל- Y.E. Chen, ואיגוד הלב האמריקאי מעניק 20POST35110064 ל- G. Zhao.

פרוטוקולי בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת מישיגן (PRO00010092). עכברי C57BL/6J מסוג בר (WT) זכרים ונקבות, כ-7 שבועות, שימשו לניסויים.
1. הכנת בעלי חיים
<ol><li>האכילו את העכברים בדיאטת האוכל הסטנדרטית (ראו טבלת חומרים) לפני ואחרי הניתוח. הערה: ניתן להשתמש בזנים ובגילאים שונים של עכברים. עם זאת, גיל הנע בין 5.5-12 שבועות מומלץ להשיג שיעור שכיחות מקסימלית.</li>
	<li>עבור כל עכבר, לנהל 5 מ"ג /ק"ג של Carprofen תת עורית 30 דקות לפני אינדוקציה של הרדמה.</li>
	<li>לאחר 30 דקות, לנהל 100 מ"ג/ק"ג של קטמין ו 5 מ"ג/ק"ג של Xylazine באמצעות הזרקה תוך-אפריטונית כדי לגרום להרדמה.</li>
</ol>2. הכנה לניתוח
<ol><li>הכן את החומר הכירורגי.<ol>
<li>חותכים את כפפות הניטריל לרצועות של 4 ס"מ x 4 מ"מ. חותכים את רפידות הכותנה לחתיכות של 3 ס"מ x 2 מ"מ. Autoclave אלה עם מכשירים כירורגיים אחרים, כולל מספריים כירורגיות, מלקחיים רקמות, ו Hemostats Halsted-יתוש (ראה טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>מניחים את העכבר בתנוחה העליונה על כרית הלבשה סופגת סטרילית. לשתק את כפות הרגליים הקדמיות והאחוריות עם סרט ניתוחי.</li>
	<li>השתמש אפליקטורים עם קצה כותנה (ראה טבלת חומרים) כדי להבריש קרם להסרת שיער על אזור הבטן האמצעי והתחתון, ולאחר מכן ספוגית את האזור עם גזה כירורגית כדי להסיר את השיער.</li>
	<li>לחטא את האזור הכירורגי לפחות שלוש פעמים בתנועה מעגלית עם יישומים לסירוגין של 70% אלכוהול וקרצוף מבוסס יוד או כלורהקסידין. אפשר להתייבש.</li>
</ol>3. הליך כירורגי
<ol><li>בצע את השלבים הבאים כדי לגשת לחלל הבטן.<ol>
<li>בדוק את העכבר עבור חוסר תגובה לצבוט בוהן לפני חתך בעור.</li>
		<li>בצע חתך אורך 2.5 ס"מ על העור לאורך קו האמצע של הבטן האמצעית והתחתונה באמצעות מספריים כירורגיים.</li>
		<li>משכו בעדינות את השריר שמתחת ובצעו חתך אורך של 2.5 ס"מ לאורך לינאה אלבה כדי לגשת לחלל הבטן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לחשוף את אבי העורקים בבטן.<ol>
<li>השתמש אפליקטורים רטובים כותנה קצה כדי להזיז את המעיים ואת הקיבה לצד ימין של העכבר. הערה: באופן אידיאלי, זה יחשוף את קטע אינפרא-רנאלי של אבי העורקים. אם קשה לאתר את אבי העורקים, הכליה הימנית ועורק הכליה הימני יכולים לזהות את אבי העורקים (שכן לכליה הימנית יש מיקום אנטומי מעט נמוך יותר מאשר הכליה השמאלית).</li>
		<li>השתמשו במלקחיים כדי להסיר בעדינות את רקמת החיבור המכסה את אבי העורקים בבטן ואת הווריד התחתון (IVC). הערה: אבי העורקים בבטן ו- IVC כלולים בתוך אותו נדן כלי. אין צורך להסיר את כל רקמת החיבור כמו הסרה מלאה תגדיל את הסיכון של פגיעה בשני כלי אלה.</li>
		<li>השתמשו במלקחיים כדי לנתח בעדינות את החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ואת IVC מהשרירים שמתחת. הערה: קצות המלקחיים צריכים להיכנס לחלק האחורי של הנדן באופן רוחבי וליצור חור בפאסיה המחבר את הנדן לשרירים הבסיסיים. ברגע שהחור נוצר, להרחיב את גודלו על ידי שחרור איטי של מלקחיים.</li>
		<li>מניחים חתיכה מפס הכפפות בגודל 4 ס"מ x 4 מ"מ (כאמור, שלב 2.1.1) דרך החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ו- IVC, ולאחר מכן ליישר את הפס. מניחים את הפס ~ 0.5 ס"מ מן העורק הכלייתי הימני. הערה: ודא שהחור גדול מספיק כדי שהפאסיה שמסביב לא תסובב את הפס.</li>
		<li>מעל הפס, מניחים חתיכה של 3 ס"מ x 2 מ"מ כרית כותנה דרך החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ו- IVC, ולאחר מכן ליישר את כרית כותנה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>דגור על האלסטאז.<ol>
<li>השתמש פיפטה כדי להפיל 30 μL של אלסטאז הלבלב החזירי (פעילות אנזימטית הכוללת של 1.8 יחידה, ראה טבלת חומרים) על קטע אבי העורקים מעל כרית כותנה, ולאחר מכן לעטוף את כרית כותנה פסים סביב אבי העורקים ו- IVC. לשטוף חתיכה של 10 ס"מ x 10 ס"מ גזה עם סטרילי 0.9% מלוחים ומניחים אותו על הבטן. הערה: הגזה זקוקה לשטיפה חלקית בלבד מכיוון שעשיית יתר תסתכן בדילול האלסטאז שמתחת.</li>
		<li>לאחר 30 דקות, להסיר את הפס ואת כרית כותנה עם מלקחיים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>סגור את חלל הבטן בעקבות השלבים הבאים.<ol>
<li>להשקות את אבי העורקים ואת חלל הבטן עם 500 μL של סטרילי 0.9% מלוחים. השתמש גזה 10 ס"מ x 10 ס"מ כדי לספוג את מלוחים הנותרים.</li>
		<li>להתאים מחדש את שכבות השריר עם תפר מונופילמנט ריצה 6-0 שאינו נספג.</li>
		<li>סגור את העור עם 3-4 תפרים מונופילמנטים מופרעים 6-0 שאינם נספגים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>לנהל 5 מ"ג/ק"ג של Carprofen תת עורית ביום שלאחר הניתוח 1.</li>
	<li>הסר תפרי עור ביום שלאחר הניתוח 10.</li>
</ol>5. מדידה של קוטר מפרצת אבי העורקים בבטן
<ol><li>המתת חסד את העכברים על ידי CO2 מנת יתר ביום שלאחר הניתוח 14. זה מייצג את נקודת הזמן של הרחבה מקסימלית.</li>
	<li>גש לחלל הבטן כמתואר בשלב 3.1.</li>
	<li>בצע זלוף כלי דם על ידי הזרקת 10 מ"ל של 0.9% מלוחים למחזור דרך החדר השמאלי.</li>
	<li>חשוף את מקטע האינפרא-רנאלי של אבי העורקים בבטן כמתואר בשלבים 3.1-3.2. הסר בזהירות את רקמת החיבור שמסביב והפרד את אבי העורקים בבטן מ- IVC.</li>
	<li>מדוד את הקוטר של אבי העורקים בבטן עם קליפר.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+Final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: Final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1(2011).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation.</a> Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).</li>
<li>Quintana, R. A., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation.</a> Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).</li>
<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Senemaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+relevance+and+recent+advances+of+animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).</li>
<li>Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+to+explore+abdominal+aortic+aneurysms%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).</li>
<li>Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Cardiovascular+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental models of abdominal aortic aneurysms.</a> Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).</li>
<li>Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%3A+Fresh+insights+from+a+novel+animal+model+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease.</a> Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מודל AAA המושרה על ידי אלסטאז דווח לראשונה על ידי Anidjar ואח 'באמצעות חולדות בשנת 199017. מגוון גרסאות מותאמות הוצגו בשלושים השנים האחרונות, יחד עם שיפור משמעותי בטכניקות הניתוחיות 19,20,21,22. מאות מכונים משתמשים במודלים של AAA המושרה באלאסטאז כמודל הניסויי השני בשכיחותו עבור מחקרי AAA12. זה רק טבעי כי קבוצות שונות יבצעו את הניתוח עבור מודל זה ק...

מפרצת אבי העורקים בבטן (AAA) מוגדרת כהרחבה מגזרית של אבי העורקים בבטן עם לפחות 50% עלייה של קוטר כלי1. AAA הוא קטלני, כמו הקרע יכול לגרום לשיעור תמותה גבוה מאוד, אפילו עם התערבות 2,3,4. דווח כי AAA אחראי לכ -13,000 מקרי מוות בשנה בארה"ב, מה שהופך אותו לסיבת המוותהמובילה ה -10 1,5.
הפתוגנזה של AAA עדיין לא מובנת לחלוטין 6,7,8. כדי לחקור את המנגנון המולקולרי של AAA ולבדוק מטרות טיפוליות פוטנציאליות, הוקמו מספר מודלים AAA ניסיוניים 9,10. דגמי מכרסמים של AAA כוללים אלסטאז, סידן כלוריד, אנגיוטנסין II ודגמי קסנוגרפט, ביניהם מודל AAA המושרה על ידי אלסטאז הוא הדגם השני הנפוץ ביותר 10,11,12,13,14,15,16,17. מודל זה כרוך עירוי ישיר או יישום של אלסטאז הלבלב החזירי (PPE) לחלק אינפרא-גולגולתי של אבי העורקים. חדירת אלסטאז לשכבה המדיאלית של אבי העורקים תגרום להשפלה של lamellae אלסטי וחדירה של תאים דלקתיים, מה שיוביל לאובדן שלמות דופן אבי העורקים והתרחבות הבאה של אבי העורקים 7,18. מודל AAA המושרה אלסטאז דווח לראשונה על ידי Anidjar ואח 'בשנת 1990 באמצעות חולדות, שבו קטע מבודד של אבי העורקים היה perfused עם אלסטאז17. מאוחר יותר בשנת 2012, מודל שונה באמצעות יישום periadventitial של PPE דווח על ידי Bhamidipati et al.19. כיום, רוב הניתוחים עבור מודל AAA המושרה אלסטאז בהשראת הקבוצה של Bhamidipati ומבוצעים עם היישום החיצוני ולא זלוף תוך אלומיניום של PPE. למרות היישום החיצוני יש פחות דרישה על מיומנויות כירורגיות בסדר, שיעור השכיחות של AAA הוא נמוך יחסית וגודל קצת יותר קטן מזה של זלוף intraluminal11,19.
למרות שנעשה שימוש נרחב במחקרי AAA, מודל AAA המושרה אלסטאז יש מגבלות מסוימות. אזהרה אחת של מודל זה היא הווריאציות הבלתי נמנעות של אופן ביצוע הניתוח, אשר יכול להוביל לנושא הרבייה. לדוגמה, ההבדל עשוי להתקיים בהליך הכירורגי לגבי האופן שבו מקטע האינפרא-רנאלי של אבי העורקים מבודד ואיזה חלק של המגזר נבחר ליישום PPE בין מעבדות שונות. הפעילות אנזימטית של PPE ומשך הזמן של דגירה PPE יכול גם להשתנות. אלה, עם זאת, הם כל דטרמיננטים חיוניים המשפיעים על שיעור היווצרות AAA בסופו של דבר וקוטר מפרצת. השונות של דטרמיננטים קריטיים אלה מקשה מאוד על השוואת נתונים של מחקרי AAA מקבוצות שונות המשתמשות במודל זה. לכן, הליך כירורגי מתוקנן נדרש ככלי כדי לקבל תוצאות דומות ממוסדות שונים.
מאמר זה מתאר פרוטוקול כירורגי מתוקנן עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של PPE להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן אינפרא-יותרת בעכברים. פרטים על חומר כירורגי ונהלים חיוניים לדור מוצלח וחזק של AAA בעכברים באמצעות מודל זה יידונו גם.

<table><tbody><tr><td>6-0 תפר מונופילמנט שאינו נספג</td><td>Pro Advantage</td><td>P420697</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC: 54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>צ'או דיאט</td><td>מעבדהדיאטה</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>מוליך כותנה</td><td>Dynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>כרית כותנה</td><td>Rael</td><td>UPC: 810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td></td><td>גרסה 8.4.3</td></tr><tr><td>מלקחיים Grarfe</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Halsted Mosquito Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NDC: 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>כפפות ניטריל</td><td>Fisherbrand</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>תרמו פישר</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>חזיר לבלב אלסטאז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח סטרילית 0.9%</td><td>בקסטר</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>אקורן</td><td>NDC: 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

מפרצת אבי העורקים בבטן (AAA), אם כי בעיקר אסימפטומטי, הוא פוטנציאל סכנת חיים כמו קרע של AAA בדרך כלל יש תוצאה הרסנית. נכון לעכשיו, ישנם מספר מודלים ניסיוניים ברורים של AAA, כל אחד מדגיש היבט אחר בפתוגנזה של AAA. דגם AAA המושרה על ידי אלסטאז הוא דגם המכרסמים השני בשכיחותו AAA. מודל זה כרוך עירוי ישיר או יישום של אלסטאז הלבלב החזירי (PPE) לחלק אינפרא-גולגולתי של אבי העורקים. בשל אתגרים טכניים, רוב מודל AAA המושרה אלסטאז בימינו מבוצע עם היישום החיצוני ולא עירוי תוך אלומיניום של PPE. החדירה של אלסטאז תגרום השפלה של lamellae אלסטי בשכבות המדיאליות, וכתוצאה מכך אובדן שלמות דופן אבי העורקים והתרחבות לאחר מכן של אבי העורקים של אבי העורקים הבטן. עם זאת, חיסרון אחד של מודל AAA המושרה אלסטאז הוא וריאציה בלתי נמנעת של אופן ביצוע הניתוח. באופן ספציפי, הטכניקה הכירורגית של בידוד קטע אינפרא-רנאלי של אבי העורקים של אבי העורקים, החומר המשמש לעטיפת אבי העורקים ודגרת PPE, הפעילות אנזימטית של PPE, ומשך הזמן של יישום PPE יכולים להיות כל דטרמיננטים חשובים המשפיעים על קצב היווצרות AAA בסופו של דבר וקוטר מפרצת. ראוי לציין, ההבדל בגורמים אלה ממחקרים שונים על AAA יכול להוביל לבעיות רבייה. מאמר זה מתאר תהליך כירורגי מפורט של מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של PPE להרונטיטיה של אבי העורקים הבטן אינפרא-יותרת בעכבר. בעקבות הליך זה, שיעור היווצרות AAA יציב של כ -80% בעכברים זכריים ונקביים הוא בר השגה. העקביות והשחזור של מחקרי AAA באמצעות מודל AAA המושרה אלסטאז ניתן לשפר באופן משמעותי על ידי קביעת הליך כירורגי סטנדרטי.

23 עכברי בר (WT) בני 7 שבועות, בהם 12 נקבות ו-11 זכרים, הופעלו בהתאם לפרוטוקול שהוצג. שיעור ההישרדות היה 100% (תמותה כירורגית לא נכללה). קוטר אב העורקים המקסימלי של הבטן נמדד על ידי קליפר.
AAA הוגדר כהרחבת אבי העורקים בבטן עם עלייה של 50% בקוטר הכלי. לכן, עלייה של 50% בקוטר אב העורקים המקסימלי בבטן נבחרה כנקודת הניתוק עבור אינדוקציה AAA מוצלחת. על סמך קריטריון זה, שיעור השכיחות של AAA ביום 14 שלאחר הניתוח היה 91.7% עבור בעלי חיים נשיים, כאשר 11 מתוך 12 שעברו ניתוח פיתחו AAA; בעוד ששיעור השכיחו...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית מתוקננת עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של אלסטאז להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן האינפרא-יותרת בעכברים.

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

זהו פרוטוקול מתוקנן עבור מפרצת אבי העורקים בבטן המושרה אלסטאז, אשר ישפר מאוד את רבייה ואת העקביות של מחקרים באמצעות מודל זה. טכניקה זו יש קצב אינדוקציה עקבי של מפרצת אבי העורקים בבטן. הוא גם הבעלים של היתרון של הוצאות נמוכות וזמן פעולה קצר, אשר יביא כוח סטטיסטי חזק יותר ואת רבייה.אתה צריך להבטיח את רקמות החיבור המכסות את אבי העורקים הוסרו, כך elastase יהיה סיכוי טוב יותר של חדירה, אבל להיזהר לא לפגוע בכלי הדם. כדי להתחיל, לנהל חמישה מיליגרם לכל קילוגרמים של carprofen תת עורית, 30 דקות לפני אינדוקציה של הרדמה. בדוק את העכבר המרדים לחוסר תגובת צביטת בוהן לפני חתך בעור.בצע חתך אורך 2.5 ס"מ על העור, לאורך קו האמצע של הבטן האמצעית והתחתונה. משכו בעדינות את השריר שמתחתיו ובצעו חתך אורך של 2.5 ס"מ לאורך לינאה אלבה. השתמש אפליקטורים כותנה רטובה הטה כדי להזיז את המעיים ואת הבטן לצד ימין של העכבר, ולגשת לחלל הבטן.השתמש מלקחיים כדי להסיר בעדינות את רקמת החיבור המכסה את אבי העורקים בבטן ואת הווריד התחתון. השתמשו במלקחיים כדי לנתח בעדינות את החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ואת הווריד התחתון מהשרירים שמתחת. מניחים חתיכה של ארבעה סנטימטרים על ארבעה מילימטרים כפפה פס דרך החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ו vena cava נחות, וליישר את הפס.מניחים את הפס במרחק של כ-0.5 ס"מ מעורק הכליה הימני. מעל הפס, מניחים חתיכה של שלושה סנטימטרים על שני מילימטרים כרית כותנה דרך החלק האחורי של אבי העורקים בבטן ו vena cava נחות. לאחר מכן, ליישר את כרית כותנה.כדי לדגור על האלסטאז, השתמש בפיפטה כדי להפיל 30 מיקרוליטרים של אלסטאז לבלב חזירי על קטע אבי העורקים מעל כרית הכותנה. עוטפים את כרית הכותנה ומפשיטים סביב אבי העורקים והווריד התחתון. לשטוף חתיכה של 10 ס"מ על 10 ס"מ גזה עם סטרילי 0.9% מלוחים ומניחים אותו על הבטן.לאחר 30 דקות, להסיר את הפס ואת כרית כותנה עם מלקחיים. להשקות את אבי העורקים ואת חלל הבטן עם 500 microliters של סטרילי 0.9% מלוחים. השתמש גזה לספוג את תמיסת המלח הנותרת.משוער מחדש את שכבות השריר עם תפר מונופילמנט ריצה 6-0 שאינו נספג. לאחר מכן, סגור את העור עם שלושה עד ארבעה מופרעים ב 6-0 תפרים מונופילמנט לא נספג. שיעור השכיחות של פיתוח מפרצת אבי העורקים בבטן ביום שלאחר הניתוח 14 היה 91.7% עבור בעלי חיים נקבות, בעוד שיעור השכיחות של בעלי חיים זכרים היה 72.7% בין 19 בעלי החיים שבהם פותחה מפרצת אבי העורקים בבטן, נצפתה עלייה של פי 1.7 ופי 1.6 בקוטר אבי העורקים המקסימלי בבטן, אצל נקבות וזכרים בהתאמה, בהשוואה לבקרות שאינן ניתוחיות.תמונות מייצגות של אבי העורקים מקבוצות שאינן ניתוח וניתוחים ביום 14 לאחר הניתוח מוצגות. טכניקה זו שימשה ככלי פוטנציאלי כדי לעזור לנתח את הפתופיזיולוגיה של טריפל A ולעזור בגילוי מטרות טיפוליות פוטנציאליות חדשות.

mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model-induced-perivascular

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מראה כיצד לגרום מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) בעכברים באמצעות עירוי intraluminal חולף של elastase הלבלב חזירי לתוך מגזר infrarenal של אבי העורקים בבטן. המודל יש את היכולת להוסיף תובנות לתוך pathobiology רחב של AAA בשל הופעתה של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים.

יצירת ניסויית מפרצת אבי העורקים הבטני Murine עם Elastase

אנו מתארים פרוטוקול כירורגי כדי לגרום בעקביות בירידה חזקה בבית החזה של אבי העורקים בעכברים. ההליך כולל כריתת האונה השמאלית, החשיפה של אבי העורקים החזה, ומיקום של ספוג ספוגה הלבלב לבלב חזירי על הקיר של אבי העורקים.

המודל הכירורגי של מורנה של Elastase אקטואלי המושרה מפרצת אבי העורקים החזי

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר של מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) המושרה על-ידי סידן פוספט, כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות והמנגנונים המולקולריים של AAAs.

מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

כתב יד זה מציג פרוטוקול לביסוס מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר באמצעות סידן כלורי ואלסטאז, המשלב את היתרונות של שיטות מידול קודמות. מודל זה יכול לשמש לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס מפרצת אבי העורקים הבטני.

מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר על ידי Periadventitial סידן כלורי והסננת אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר גישה כירורגית שיטתית למידול מפרצות מתקדמות באבי העורקים הבטני בעכברים על ידי שילוב של יישום אלסטאז ישירות על אבי העורקים האינפרא-כלייתי ומתן ß-aminopropionitrile דרך מי שתייה.

מידול מפרצת אבי העורקים הבטני מתקדם בעכברים על ידי שילוב של אלסטאז מקומי ו-ß-aminopropionitrile פומי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית סטנדרטית לאינדוקציה של מפרצת צוואר במודל עכברי באמצעות ניתוח כירורגי יחיד.

מודל עכברי של היווצרות מפרצת קרוטיד

פרוטוקול זה מספק שיטה ניתנת לחזרה ואמינה להשראת מפרצות אאורטה בטנית (AAAs) בעכברים C57BL/6 באמצעות רגישות לאלסטין ויישום אלסטאז פריוסקולרי, כמודל AAA הכולל רכיב רגישות חיסונית.

יצירת מודל אמין של אנוריזמה באאורטה בטנית בעכבר באמצעות רגישות לאלסטין ואלסטאז פריוסקולרי

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

תאי גזע pluripotent מושרה קווים מניבים (iPSC) מייצרים שורות של פוטנציאל ההתפתחותי שונים גם כאשר הם עוברים בדיקות תקן לpluripotency. כאן אנו מתארים פרוטוקול לייצר עכברים נגזרים לחלוטין מiPSCs, המגדיר את קווי iPSC כבעל pluripotency...

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

למד פרוטוקול כירורגי סטנדרטי להשראת פרצת אבי העורקים הבטנית בעכברים באמצעות אלסטאז. שיטה זו מבטיחה שכפוליות גבוהה ועלויות נמוכות לחקר מחלות לב וכלי דם.

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

גלה סרטונים נוספים