מודל לאפילפסיה של אטיולוגיה זיהומית באמצעות וירוס Murine Encephalomyelitis של Theiler

מודל TMEV הוא אחת הפלטפורמות הניסיוניות הראשונות המאפשרות לחקור את מנגנוני התפתחות ההתקפים כתוצאה מזיהום במערכת העצבים המרכזית. זיהומים במערכת העצבים המרכזית מגדילים באופן משמעותי את הסיכון לאפילפסיה. מודלים אלה מסייעים לזהות מטרות טיפוליות פוטנציאליות ותרכובות עבור חולים בסיכון.

יש להכשיר נסיינים בעבודה עם עכברים. הזרקת הנגיף יכולה להיות מיושמת היטב על ידי הזרקת צבע לבעלי חיים מתים כדי להשיג דיוק ושגרה מספיקים. מי שתדגים את ההליך תהיה לורה בל, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי.

כדי להתחיל, להסיר את המכסה של מזרק אינסולין ולהוסיף צינורות פוליאתילן כמו קולר סביב המחט כדי להבטיח עומק הזרקה נאות של 2.5 מ"מ. לאחר מכן לטבול את המזרק אתנול במשך 30 דקות ומניחים את המזרק תחת אור UV במשך 30 דקות. לאחר מכן, להחזיר את הכובע על המחט ולעטוף את המזרק בשקיק חיטוי.

הדביקו את השקית כדי לסגור אותה ותייגו עם תאריך ההכנה. כדי לבצע הזרקת וירוס, קבל aliquots של זן דניאלס של TMEV ממקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס. הפשירו את הנגיף ושמרו אותו על קרח.

לאחר מכן לטעון את המזרק עם השעיית הנגיף. לאחר מכן, נקו את הספסל בחומר חיטוי ועבדו תחת סופג אדים. העבר את העכבר המרדים מקופסת ההרדמה מתחת למכסה המנוע ובדוק את הסבילות הניתוחית על ידי ביצוע צביטת בוהן.

לאחר מכן נקו את ראש החיה עם כרית אלכוהול והטו מעט את ראש העכבר שמאלה, כך שאתר ההזרקה יצביע כלפי מעלה. משוך את העור מעט אחורה והכנס את המחט לראש. לאחר מכן, להזריק 20 microliters intracordically לעומק של 2.5 מ"מ באזור הטמפורלי של חצי הכדור הימני.

השאירו את המזרק במקומו למשך חמש עד 15 שניות ובדקו אם יש דליפה מההזרקה או אם רואים בועות אוויר, ואז הכינו מזרק חדש. כאשר בזהירות מושך את המזרק החוצה, לסובב אותו מעט. לאחר מכן להעביר את החיה לכלוב חדש, אשר ממוקם חצי על, חצי כרית חימום במהלך ההתאוששות מן ההרדמה.

ואל תשאירו את בעלי החיים ללא השגחה עד שהם חזרו להכרה מספקת כדי לשמור על עצם החזה. ראשית, הביאו את כל הכלובים לספסל והשגיחו על בעלי החיים להתקפים פעמיים ביום בשלב האור. דרג את פעילות ההתקפים לפי סולם מרוץ שונה ודווח על מספר ההתקפים ועוצמתם.

לאחר מכן, החליקו עט על פני הכלוב כדי לעשות קצת רעש והעבירו כל חיה לקופסה אחרת ובחזרה. עבור בעלי חיים שלא תפסו באופן ספונטני או לאחר טלטול עדין בכלוב, הפעילו התקפים על ידי טיפול אינטנסיבי יותר תוך התהפכות זהירה של העכבר על ידי היפוכו על זנבו משמאל לימין. התבונן שוב בכל חיה להתנהגות התקפים וחזור על התהליך עבור הכלובים הבאים.

התקפים התנהגותיים נרשמו אם הם התרחשו במהלך זריקות סמים או במהלך מפגשי ניטור הטיפול בהתקפים שלאחר מכן. הנתונים שנצפו הוצגו כמפת חום שנוצרה על ידי צילום שלבי ההתקפים בצבעים שונים. על ידי רישום EEG, ניתן לזהות אירועים אפילפטיים שונים בשלב הכרוני, חודשים לאחר ההדבקה ב- TMEV.

כימות של ניוון ההיפוקמפוס ועכברים נגועים ב-TMEV אפילפטי מראה ירידה משמעותית באזור ההיפוקמפוס ועלייה מקבילה באזור החדר של עכברי TMEV בהשוואה לקבוצת הביקורת. ניתוח אימונוהיסטולוגי יכול לספק מידע על פרמטרים שונים כגון נוכחות של תאים דלקתיים. במקרה זה, חלקים המכילים את ההיפוקמפוס הוכתמו בנוגדנים כדי לסמן לימפוציטים מסוג T.

בעלי חיים נגועים בדמה לא הראו חדירה של תאי T, בעוד שהסננה מתונה נצפתה ברוב העכברים הנגועים ב-TMEV. חלק מהעכברים הנגועים מראים חדירה חמורה של לימפוציטים מסוג T. לא לכל בעלי החיים יש התקפים בכל תקופת תצפית.

כמו כן, השכיחות הגבוהה ביותר של התקפים מתרחשת בימים החמישי והשישי לאחר החיסון. אנו משתמשים במודל TMEV כדי לבדוק יעילות של תרופות חדשניות נגד פרכוסים נגד התקפים הנגרמים על ידי זיהום. ניתן להעריך גם בדיקות החוקרות שינויים התנהגותיים נלווים ושינויים אלקטרופיזיולוגיים.

מודל TMEV סיפק לקהילת חוקרי האפילפסיה את המודל הראשון של אפילפסיה באונה הרקתית הנגרמת על ידי זיהום במערכת העצבים המרכזית, המאפשר לחקור את המנגנונים הבסיסיים של אפילפטוגנזה לאחר זיהום.