אינדוקציה ומדדי הערכה מגוונים של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

כיום אין תרופה מלאה לטרשת נפוצה. הפרוטוקול שלנו מאפשר בנייה יעילה של מודל ניסיוני של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית כדי לסייע בחקר טיפולים במחלות טרשת נפוצה. היתרון העיקרי של הפרוטוקול שלנו הוא הערכה מקיפה יותר של הטיפול באנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית מנקודות מבט מרובות.

ראשית הכינו תחליב פפטיד גליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים על ידי המסת פפטיד ליופילי ו-PBS סטרילי מקורר מראש ללא יוני סידן ומגנזיום ב-pH 7.4. הוסף כדור פלדה אחד מעוקר של חמישה מילימטרים לצינור מיקרו-צנטריפוגה נקי של שני מיליליטר. לאחר מכן להוסיף 500 מיקרוליטר של אדג'ובנט שלם של פרויד המכיל חמישה מיליגרם למיליליטר של שחפת מיקרובקטריום lyophilized ו 500 microliters של מיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין פפטיד תחליב לצינור.

עכשיו תנודה את הצינור על lyser רקמות במשך 10 דקות. ואז לקרר את הצינורות על הקרח במשך 10 דקות. חזור על התהליך ארבע פעמים עד פתרון צמיג לבן נוצר.

לאחר מכן, דלל את תמיסת גבעול רעלן השעלת 50 פעמים ב- PBS סטרילי של pH 7.4 ללא יוני סידן ומגנזיום כדי להשיג ריכוז סופי של 200 ננוגרם לכל 100 מיקרוליטר. כדי לזרז את כל תחליב הפפטיד של המיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין שהוכן בתחילה בתחתית הצינור, צנטריפוגה של הצינור בארבע מעלות צלזיוס למשך שתיים עד שלוש שניות, על ידי לחיצה על כפתור הדופק בציוד. שאפו את תחליב הפפטיד של המיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין עם מזרק מיליליטר אחד המצויד במחט 22 מדים והעבירו את התחליב לחבית מזרק חדשה של 1 מיליליטר.

חברו מחט 26 מד לחבית והדקו את החיבור עם סרט איטום. להזריק 100 מיקרוליטרים של המיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין פפטיד תחליב תת עורית בכל צד של עמוד השדרה הגבי של עכבר. לאחר ההזרקה, לבחון את היווצרות אוטומטית של המוני bulbous מתחת לעור ואת dorsum.

לאחר מכן intraperitoneally, להזריק 100 microliters של רעלן שעלת לתוך אותו עכבר. הכן תא תגובה בשדה פתוח והקים מערכת ניתוח וידאו להקלטת תנועת עכבר. כדי לנקות את תא התגובה לפני הניסוי, יש לרסס 70% אתנול על כל האזור ולנגב במגבת נייר נקייה.

לאחר מכן מניחים עכבר בפינה של תא תגובה. כדי להתחיל לצלם, לחץ על כפתור התחל ללכוד בשורת התפריטים של מערכת הקלטת הווידאו והקלט את הזמן. שמירה על שתיקה בחדר הבדיקה, תן לעכבר לנוע בחופשיות במשך חמש דקות.

לאחר מכן עצור את ההקלטה ושמור את הסרטון. החזירו את העכבר לכלוב שלו. לאחר מכן נקה את אזור הבדיקה עם 70% אתנול והמשך לעכבר הבא.

שמור את העכבר המורד שטוח על מגש ניתוח ותקן את הגפיים. החזק את עור הגפיים האחוריות בעכבר עם מלקחיים ופתח את העור והשרירים עם מספריים. לאחר מכן, להפריד את עצם הירך מן השוקה ואת עצם הירך על ידי שימוש זהיר במספריים.

הסר את השרירים דבק עצם הירך עם מספריים. לאחר מכן מניחים את עצם הירך ב-70% אתנול בטמפרטורת החדר. במחקר זה נבדקה יכולתו של פפטיד שמקורו במיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין לגרום ל-EAE.

עכברים שהוזרק להם הפפטיד חוו ירידה הדרגתית במשקל. לאחר שישה עד תשעה ימים של הזרקה, הם פיתחו תסמיני EAE שהגיעו לשיאם לאחר 14 עד 16 ימים. עלילות מעקב ממבחן השדה הפתוח הראו כי EAE משנה את התנהגות החקר הרגילה של עכברים.

בהשוואה לעכברים רגילים, העכברים עם EAE עברו מרחק קטן יותר באופן משמעותי בשלבי ההתחלה, השיא וההפוגה המוקדמים. עכברים עם EAE גם הפחיתו משמעותית את משך הפעילות בשלבי השיא וההפוגה של המחלה. יתר על כן, בכל שלושת השלבים עכברי EAE היו בעלי מרחק נסיעה קטן יותר באופן משמעותי וזמן שהייה במרכז.

סריקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת של עצם הירך מעכברי EAE חשפו ארכיטקטורה טרבקולרית שונה מעכברים רגילים. עצם הירך מעכברי EAE הייתה משמעותית פחות צפיפות מינרלים בעצם ויחס נפח עצם לנפח רקמה מאשר אלה של עכברים רגילים. יתר על כן, עצם הירך מעכברים עם EAE הייתה פחות צפיפות חיבור טרבקולרית, מספר טרבקולרי ועובי טרבקולרי מאשר אלה של עכברים רגילים.

בהשוואה לעכברים רגילים, המרווח הטרבקולרי השתפר ועובי עצם קליפת המוח הופחת בעכברי EAE. אנו יכולים גם לבודד את המוח ואת קוד עמוד השדרה של עכברי EAE בשיא המחלה ולנתח את הייצור של תאים חיסוניים וציטוקינים על ידי ציטומטריה של שפעת.