Name: שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית למחקר פגיעה חריפה בכליות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-03T14:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: למד שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית לחקר פגיעה חריפה בכליות. פרוטוקול זה מספק גישה עקבית לחקר אסטרטגיות טיפוליות חדשות בכליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מודל זה פותח בתמיכה כספית ממשרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן (MOST 109-2320-B-030-006-MY3). כתב יד זה נערך על ידי Wallace Academic Editing.

כל הניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות בארה"ב (פרסום NIH מס' 85-23, מתוקן 1996). פרוטוקול המחקר אושר על ידי ובהתאם להנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטה הקתולית פו-ג'ן. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים על כל החומרים והמכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הכנת העכברים
<ol><li>בחר עכברים זכרים C57BL/6 בני 8 שבועות במשקל של 21-23 גרם.</li>
	<li>אכסנו ותחזקו את העכברים תחת מחזור אור וחושך של 12 שעות בטמפרטורה מבוקרת (21 ± 2 מעלות צלזיוס) עם גישה חופשית למזון, כדורי מזון סטנדרטיים לעכברים ומי ברז.</li>
</ol>2. הרדמה
<ol><li>שימו מסכה כירורגית וכפפות סטריליות.</li>
	<li>הכניסו את העכברים להרדמה עם 2% איזופלורן מעורבב עם חמצן ב-1 ליטר/דקה בתא הזירוז.</li>
	<li>להעריך את רמת ההרדמה על ידי רפלקס הדוושה. הערה: רפלקס הדוושה הוא נסיגה של הכף האחורית בתגובה לצביטת בוהן יציבה. ההרדמה מושלמת כאשר רפלקס הדוושה נעלם.</li>
	<li>הזיזו והניחו כל עכבר במצב נוטה על משטח ניתוח עם שמיכה חשמלית כדי לשמור על חום גופו לאחר סיום ההרדמה. לייצב את טמפרטורת הגוף לפני הניתוח ולפקח באמצעות בדיקות טמפרטורה רקטלית. יש למרוח משחה אופתלמית על שתי העיניים למניעת יובש.</li>
	<li>הדביקו את כפות העכברים ללוח.</li>
	<li>הצמידו מסכה לפנים של העכברים כדי לספק אספקה קבועה של 1% איזופלורן ו-1 ליטר/דקה חמצן</li>
	<li>להעריך את רמת ההרדמה על ידי רפלקס הדוושה באופן קבוע ולהתאים את מתן ההרדמה בהתאם במהלך הניתוח.</li>
</ol>3. ניתוח IR-AKI כלייתי דו-צדדי
<ol><li>גע בגב ומצא את עמוד השדרה המותני של העכברים באופן ידני. לנוע לאורך עמוד השדרה cephally ולחפש זוויות costovertebral כי הם מתחת לשני הצדדים של הצלע האחרונה של העכברים.</li>
	<li>יש למרוח תחליב להסרת שיער על שני צידי אזור הזווית הקוסטאוברטברלית למשך כ-30 שניות ולאחר מכן להסיר את הפרווה במי מלח.</li>
	<li>יש לחטא את העור המגולח בשלושה סבבים של תמיסת בטאדין ו-75% אלכוהול באמצעות כדורי צמר גפן. הערה: שמירה על שדה סטרילי לניתוח לאורך כל ההליך היא המפתח. יש למרוח וילון כירורגי ולהשתמש במכשירים סטריליים.</li>
	<li>השתמשו במלקחיים עדינים כדי להרים בעדינות את העור מתחת לזווית הקוסטאוברטברלית השמאלית, ולאחר מכן השתמשו במספריים כדי ליצור חתך דורסולטרלי אלכסוני בקוטר 1 ס"מ לאורך קווי מתח העור מקו האמצע המותני בצד שמאל. Transect את קיר השרירים של האגף השמאלי באמצעות מספריים כדי לדמיין את הכליה השמאלית.</li>
	<li>חזור על ההליכים הכירורגיים הנ"ל כדי לדמיין את הכליה הימנית. הסר את כמויות הדם הקטנות המיוצרות במהלך ההליך עם צמר גפן סטרילי.</li>
	<li>לדחוף ולהפריד את הכליה השמאלית בזהירות מן הרקמה שמסביב עם מלקחיים. זהה את פדיקור הכליה לאחר חשיפת הכליה השמאלית. הערה: יש להיזהר שלא לפגוע בבלוטת יותרת הכליה ובכלי הדם הסובבים אותה.</li>
	<li>מהדק מעל פדיקור הכליה השמאלי עם קליפס microvascular במשך 25 דקות. לאשר איסכמיה על ידי שינוי נראה לעין בצבע הכליה מוורוד לאדום כהה.</li>
	<li>כסו את הכליה המהודקת בכדורי צמר גפן רטובים מלוחים סטריליים כדי למנוע התייבשות במהלך הידוק פדיקור כליות שמאלי.</li>
	<li>חזור על ההליכים הכירורגיים הנ"ל כדי להדק את פדיקור הכליה הימני עם קליפ כלי דם במשך 25 דקות.</li>
	<li>כסו את הכליה המהודקת בכדורי צמר גפן רטובים מלוחים סטריליים כדי למנוע התייבשות במהלך הידוק פדיקור כליות ימני.</li>
	<li>יש לעקוב מעת לעת אחר עומק ההרדמה והלחות של כדורי הצמר גפן הרטובים והמלוחים הסטריליים.</li>
	<li>פתח את קליפ כלי הדם השמאלי כדי להתחיל reperfusion של הכליה השמאלית. אשר רפרפוזיה על ידי שינוי צבע נראה לעין של הכליה השמאלית מאדום כהה לוורוד.</li>
	<li>פתח את קליפ כלי הדם הימני כדי להתחיל reperfusion של הכליה הימנית.</li>
	<li>לאחר אימות שינוי צבע הכליה, להחזיר את הכליה לחלל הבטן.</li>
	<li>סגור את חלל הבטן והעור עם 6-0 חומרי תפר נספגים.</li>
	<li>לשפשף כדי לחטא את הפצע עם תמיסת betadine ו 75% אלכוהול באמצעות כדורי צמר גפן.</li>
	<li>התבונן בחיה בזהירות עד שהיא מתחילה לנוע בחופשיות ולהאכיל. הערה: שימו לב לבעלי החיים עד שהם חזרו להכרה מספקת כדי לשמור על עצם החזה.</li>
	<li>יש לתת קרפרופן (5 מ"ג/ק"ג ב-0.2 מ"ל, מנוהל תת עורית) למשך 2-3 ימים כדי למנוע כאב לאחר הניתוח.</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים בנוגע לפרסום מאמר זה.

פרוטוקול IR-AKI הדו-צדדי המוצע מתאים לחקירת מנגנון הפגיעה בהיפופרפוזיה ורפרפוזיה של שתי הכליות. הפרוטוקול מציע כי עכברים קלי משקל, הרדמה כללית עם איזופלורן, גישה גבית-צדית לניתוח ושמירה על טמפרטורת הגוף במהלך הניתוח מקלים על הקשיים הטכניים הקשורים, מקצרים את משך הניתוח ומגבירים את עקביות ההליך למחקר IR-AKI כלייתי דו-צדדי חריף.
קשיים טכניים משפיעים על חומרת הנזק הכליתי בניתוח IR-AKI כלייתי דו-צדדי33. בנוסף למאמץ עכבר, מין, גיל ומערכות חימום 36,40,41,42,43,44<...

דום לב מתרחש יותר מ 80,000 פעמים בשנה בארצות הברית 1,2. שיעור התמותה מדום לב הוא גבוה ביותר 3,4,5,6. AKI הוא גורם סיכון מרכזי הקשור לתמותה גבוהה ולתוצאות נוירולוגיות ירודות בחולים עם דום לב לאחר ROSC 7,8,9,10,11,12,13. החלמה מ- AKI היא מנבא טוב לתוצאות נוירולוגיות חיוביות ושחרור מבית החולים14,15,16. עם זאת, טיפולים יעילים עבור IR-AKI עדיין חסרים 15,16,17,18,19. אסטרטגיות טיפוליות נוספות נדרשות כדי לשפר עוד יותר את התוצאות הקליניות של המחלה.
IR-AKI עם גישת איסכמיה כלייתית דו-צדדית הוא אחד המודלים של בעלי חיים המשמשים למחקר AKI 20,21,22,23,24,25,26. מודלים של בעלי חיים מסוג IR-AKI של כליות הם פחות מסובכים ממודל פגיעת IR בכל הגוף לחקר AKI בחולים עם דום לב פתאומי לאחר ROSC 6,27,28,29,30. משמעות הדבר היא כי תוצאות עקביות ממודל בעלי חיים IR-AKI כליות קל יותר להשיג בגלל נוכחותם של פחות גורמים מבלבלים בניסויים. יתר על כן, פרוטוקולי IR-AKI כלייתי כוללים בדרך כלל חסימת פדיקל כליות חד צדדי או דו צדדי. התנאים בניסויים על IR-AKI כלייתי דו-צדדי דומים לתנאים קליניים עבור AKI לאחר ROSC בחולים עם דום לב פתאומי לאחר החייאה לב-ריאה מוצלחת. למרות שהמאפיינים הפתולוגיים של הכליות בשני המודלים משקפים את המאפיינים הפתולוגיים של פגיעה ב- IR הכליתי האנושי 31,32,33, גישת איסכמיה כלייתית דו-צדדית רלוונטית יותר ל- AKI בתנאים פתולוגיים אנושיים, כגון אי ספיקת לב, התכווצות כלי דם והלם ספטי 35. מודלים דו-צדדיים של בעלי חיים מסוג IR-AKI מתאימים למחקרים המתמקדים בפגיעות IR כלייתי בדום לב לאחר ROSC.
מודלים דו-צדדיים של IR-AKI כלייתי קשורים לקשיים טכניים, מורכבות ניסויית ומשך ניתוח ארוך 23,26,32,33,35,36. כדי להתגבר על קשיים טכניים אלה, המחקר הנוכחי ביסס פרוטוקול מחקר IR-AKI דו-צדדי אמין בעכברים על ידי ביצוע כמה שינויים טכניים. הפרוטוקול המוצע הביא לפחות סיבוכים ניתוחיים, פחות נזק לרקמות וסבירות נמוכה יותר לתמותה במהלך הניתוח. לכן, ניתן להשתמש בו כדי לחקור את התהליכים הפתופיזיולוגיים של AKI לאחר ROSC כדי לפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשות נגד hypoperfusion הכליות נזק זילוח 37,38,39.

<table><tbody><tr><td>תפר נספג, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>J510G-BX</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת בטדין</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>סיגמא</td><td>PHR1452</td><td></td></tr><tr><td>כדורי כותנה</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graefe מלקחיים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11051-10</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>פיראמל טיפול קריטי בע"מ</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Moria Vessel Clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>18320-11</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Olsen-Hegar</td><td>Fine Science</td><td>Tools 12002 - 12</td><td></td></tr> להבי אזמל <tr><td>מלח</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Shinva</td><td>s2646</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה לבעלי חיים קטנים</td><td>Sheng-Cing Instruments Co.</td><td>STEP AS-01</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לרקמות</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14072 - 10</td><td></td></tr></tbody></table>

שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית למחקר פגיעה חריפה בכליות

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

דום לב מהווה נטל גדול על בריאות הציבור. פגיעה חריפה בכליות (AKI) היא סמן שלילי בקרב מחלימים מדום לב לאחר חזרת מחזור הדם הספונטני (ROSC) לאחר החייאה מוצלחת של לב ריאה. לעומת זאת, התאוששות של תפקוד הכליות מ- AKI היא מנבא לתוצאות נוירולוגיות חיוביות ושחרור מבית החולים. עם זאת, התערבות יעילה למניעת נזק לכליות שנגרם על ידי דום לב לאחר ROSC חסר, דבר המצביע על כך שנדרשות אסטרטגיות טיפוליות נוספות. היפופרפוזיה כלייתית ורפרפוזיה הם שני מנגנונים פתופיזיולוגיים הגורמים ל- AKI לאחר דום לב. מודלים של בעלי חיים של AKI (IR-AKI) המושרה על ידי איסכמיה-רפרפוזיה של שתי הכליות דומים לחולים עם AKI בעקבות ROSC בסביבה קלינית. עם זאת, IR-AKI של שתי הכליות מאתגר מבחינה טכנית לנתח מכיוון שהמודל קשור לתמותה גבוהה ושונות רחבה בנזק לכליות, מה שעשוי להשפיע על הניתוח. עכברים קלי משקל נבחרו, הושמו בהרדמה כללית עם איזופלורן, עברו ניתוח בגישה גבית, וטמפרטורת גופם נשמרה במהלך הניתוח, ובכך הפחיתו את הנזק לרקמות וביססו פרוטוקול מחקר IR-AKI כלייתי חריף הניתן לשחזור.

יש להעריך את איכות ניתוח IR-AKI הכליתי הדו-צדדי לפני ניתוח מיקרוסקופי או מולקולרי נוסף. במהלך הניתוח, איסכמיה כלייתית צריכה להיות מאושרת על-ידי בדיקה אם הכליה שינתה את צבעה מוורוד לאדום כהה זמן קצר לאחר שהפדיקור הכליתי מהודק באמצעות קליפס מיקרו-וסקולרי (איור 1). לאחר הניתוח, נזק לכליות שנגרם על-ידי ניתוח IR-AKI יכול להיות מאומת עוד יותר עם כמה מיקרוליטרים של סרום באמצעות איסוף דם תת-לסתי לצורך ניתוח ביוכימי, כאשר התוצאות מצביעות על עלייה ברמת השתן, החנקן והקריאטינין בדם מנקודת ההתחלה (<stron...

מחקר זה ביסס פרוטוקול המתמקד בשכלול טכני של מודל עכברי של איסכמיה כלייתית דו-צדדית - רפרפוזיה לחקר פגיעה חריפה בכליות.

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

פגיעה חריפה בכליות היא גורם סיכון מרכזי הקשור לתמותה גבוהה בחולים עם דום לב לאחר חזרת מחזור הדם. הליך זה יכול להתבצע כדי לגרום לפגיעה חריפה בכליות. פרוטוקול זה נועד לגרום לזילוח איסכמיה כלייתית בצורה מדויקת, בטוחה ועקבית.מי שידגים את ההליך יהיה הואנג צ'נג-ווי, עוזר מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, הניחו עכבר זכר C57BL/6 מורדם בן שמונה שבועות במצב נוטה על משטח ניתוח עם שמיכה חשמלית כדי לשמור על חום הגוף. לאחר מכן, גע בגב, מצא את עמוד השדרה המותני, וחפש זוויות קוסטאוברטברליות מתחת לשני צידי הצלע האחרונה.יש למרוח תחליב להסרת שיער כדי לגלח ולקרצף את השיער קרוב לשני צידי אזור הזווית הקוסטאוברטלית. יש לחטא את אזור הניתוח באמצעות תמיסת בטאדין ו-75% אלכוהול באמצעות כדורי צמר גפן. השתמשו במלקחיים עדינים כדי להרים בעדינות את העור מתחת לזווית הקוסטאוברטברלית השמאלית.לאחר מכן, באמצעות מספריים, ליצור חתך אלכסוני אלכסוני של סנטימטר אחד לאורך קווי מתח העור מקו האמצע המותני בצד שמאל. לאחר מכן, transect את קיר השרירים של האגף השמאלי כדי לדמיין את הכליה השמאלית. לדחוף ולהפריד את הכליה השמאלית בזהירות מן הרקמה שמסביב עם מלקחיים.לאחר מכן, לזהות את pedicle כליות. מהדקים את פדיקור הכליה השמאלי עם קליפ כלי דם. לאשר את האיסכמיה על ידי שינוי גלוי בצבע הכליה מוורוד לאדום כהה.כדי למנוע התייבשות במהלך הידוק יש לכסות

technical-refinement-bilateral-renal-ischemia-reperfusion-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה כלייתית קשורה לתחלואה ותמותה גבוהה בחולים מאושפזים. כאן אנו מציגים מודל עכבר פשוט ויעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה ומספקים סקירה רציפה של שינויים פתולוגיים מייצגים שנצפו בכליה.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

מאמר זה מציג מודל CKD איסכמי המשתמש ב-IRI כלייתי חד-צדדי עם נפרקטומיה נגדית שבוצעה יום לפני איסוף הדגימה; פרוטוקול זה מאפשר הערכה פונקציונלית מבוססת סרום, הישרדות גבוהה ופתולוגיה של CKD ניתנת לשחזור ב-28 ו-42 ימים, ומספק פלטפורמה גמישה למחקרים מכניים והתערבותיים.

מודל העכבר של מעבר ממחלת כליות חריפה לכרונית שנגרם מאיסכמיה כליתית/פגיעה ברפרפוזיה

מודל רב עוצמה עבור perioperative וביקורתית טיפול הקשור לפגיעה כליות חריפה מוצגת. שימוש hypoperfusion כל הגוף הנגרמת על ידי דום לב אפשר כמעט לשחזר את השינויים היסטולוגית ופונקציונלי של AKI קליניים.

דום לב Normothermic ו החייאה: במודל עכבר של פגיעה איסכמיה reperfusion

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

מאמר זה מתאר הליך גרימת פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה הרשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר בעכברים. פציעת איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר משמשת מודל פתולוגיות אנושי מתאפיין חמצן שנפרץ משלוח מזין ברשתית, המאפשר לחוקרים לבחון מנגנונים הסלולר פוטנציאל וטיפולים למחל אדם של היחידה העצבה וכלי דם ברשתית.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

פרוטוקול זה מתאר את האינדוקציה של מודל איסכמיה-רה-פרפוזיה (IR) על עור אוזן עכבר באמצעות הידוק מגנט. באמצעות מודל הדמיה intravital שהותקן, אנחנו לומדים בתגובות דלקתיות vivo-רה-פרפוזיה פוסט. הרציונל מאחורי הפיתוח של טכניקה זו היא להרחיב את ההבנה של איך לויקוציטים להגיב פגיעה בעור IR.

פגיעה איסכמיה reperfusion התרמה בעור האוזן עכבר Intravital multiphoton הדמיה של המערכת החיסונית

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

למד שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית לחקר פגיעה חריפה בכליות. פרוטוקול זה מספק גישה עקבית לחקר אסטרטגיות טיפוליות חדשות בכליות.

שכלול טכני של מודל עכבר איסכמיה כלייתית דו-צדדית למחקר פגיעה חריפה בכליות

גלה סרטונים נוספים