Name: מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: למדו את מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על ידי סידן פוספט בעכברים C57BL6J. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים ואסטרטגיות טיפוליות במהירות ובעלות נמוכה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מימון מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 ו- 91529203) ותוכנית המו"פ הלאומית של סין (2019YFA 0801600).

מחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של מרכז מדעי הבריאות של אוניברסיטת פקין ואושרו על ידי ועדת האתיקה הביו-רפואית של אוניברסיטת פקין (LA2015142). כל העכברים שנותחו הורדו באיזופלוראן (1.5%-2%), וההרדמה נותקה בקפידה כדי למנוע כאב או אי נוחות לעכברים.
1. הכנה
<ol><li>חותכים רצועות ברוחב 0.3 ס"מ של כפפות גומי וגזה ללא אבקה.</li>
	<li>רכשו עכברים זכרים C57BL/6J בני 8-10 שבועות. שכנו את בעלי החיים בסביבה ממוזגת עם מחזור אור-חושך של 12 שעות וגישה חופשית למזון ולמים.</li>
	<li>אוטוקלאב את הגזה, מקלוני הכותנה, המספריים והמלקחיים לפני הניתוח.</li>
	<li>יש להשיג בטאדין, 70% אתנול ושטיפת ידיים אנטיספטית.</li>
	<li>לבשו מסכה, חלוק וכפפות סטריליות.</li>
</ol>2. הליך כירורגי
<ol><li>יש להזין טבליות קרפרופן לעיסות (מינון של 5 מ"ג/ק"ג) לעכבר C57BL/6J בן 8-10 שבועות 2-4 שעות לפני הניתוח. לאחר מכן, הנח את העכבר בתא אינדוקציה (206 מ"מ x 210 מ"מ x 140 מ"מ) עם איזופלוראן בקצב זרימה של 1.5%-2%.<ol><li>נטר את העכבר במשך כ-5 דקות עד להאטת הנשימה באופן ניכר. ודא שלעכבר אין תגובה לגירוי כאב לפני הניתוח.</li>
	</ol></li>
	<li>החל משחה אופטלמית על העיניים ולספק תמיכה תרמית עם כרית חימום או שמיכה. אשר את עומק ההרדמה עם צביטה בבוהן כל 15 דקות במהלך ההליך הכירורגי.</li>
	<li>לגלח את שיער הבטן של העכבר באמצעות קוצץ חשמלי או קרם להסרת שיער. מטושים ומנגבים את האזור המגולח עם בטאדין, ואחריו 70% אתנול, מספר פעמים בתנועה מעגלית. החלף כפפות כדי לשמור על סטריליות.</li>
	<li>השתמש במספריים כדי לבצע חתך של ~ 1.5 ס"מ בבטן התחתונה לאורך קו האמצע של הבטן.</li>
	<li>השתמש צמר גפן סטרילי רטוב עם מלח רגיל כדי להסיר בזהירות את המעי עד אבי העורקים infrarenal גלוי.</li>
	<li>נתחו את רקמת החיבור והשומן מאבי העורקים התת-קרקעי למשך כ-0.5 ס"מ. שימו לב לכלים הקטנים לצד הגבי והימנעו מקריעתם. אין צורך להפריד את אבי העורקים הבטני מווריד הבטן הראשי.</li>
	<li>ארזו חתיכה מרצועת כפפת הגומי הספוגה במי מלח מתחת לאבי העורקים הבטני והווריד הראשי של הבטן. השתמשו בצמר גפן כדי לנגב את עודפי הנוזלים.</li>
	<li>לארוז חתיכת גזה ספוג עם 0.5 M CaCl2 על אדוונטיציה של כלי הדם בטן infrarenal במשך 10 דקות. עבור קבוצת עכברי הבושה, החלף את 0.5 M CaCl2 בתמיסת מלח רגילה.</li>
	<li>הסר את הגזה וארוז חתיכה נוספת של גזה ספוגה בתמיסת PBS למשך 5 דקות כדי ליצור גבישי CaPO4 באתרם באדוונטיטיה של אבי העורקים.</li>
	<li>הסר בזהירות את רצועת כפפת הגומי ואת גזה. אפס את מערכת העיכול של העכבר.</li>
	<li>לתפור את החתך בבטן ואת העור עם תפר 5-0.</li>
	<li>הניחו את העכבר על כרית חימום עד שהעכבר יחזור להכרה. לספק דיור התאוששות כאב לאחר הניתוח ושיכוך כאבים, על פי ועדת האתיקה המקומית לבעלי חיים.</li>
	<li>הבית את העכבר במשך 14 ימים נוספים. עקוב אחר העכבר מקרוב לאחר הניתוח והתבונן לפחות 1x בכל יום לאחר מכן. בצע נמק מיד אם עכברים מתים במהלך תקופה זו.</li>
</ol>3. קציר להדמיית אאורטות
<ol><li>14 יום לאחר הניתוח, הקריבו את העכברים באמצעות CO2.</li>
	<li>חותכים לפתוח את עכבר החזה ואת חללי הבטן הגחון לחתוך לפתוח את אטריום ימין.</li>
	<li>Perfuse העכברים עם חיץ PBS דרך החדר השמאלי של הלב כדי להסיר דם באבי העורקים, ולאחר מכן perfuse עם 4% paraformaldehyde כפי שתואר קודםלכן 8.</li>
	<li>קוצרים את אבי העורקים תחת הסטריאוסקופ.</li>
	<li>מניחים את האאורטות שנקטפו בצינורות המכילים 5 מ"ל של 4% פרפורמלדהיד למשך 48 שעות.</li>
	<li>הסר רקמת הרפתקנות ושומן בזהירות מתחת לסטריאוסקופ והצמד את אבי העורקים על צלחת שעווה שחורה עם מחטי חרקים.</li>
	<li>לרכוש תמונות אבי העורקים.</li>
</ol>4. הערכת השפלה של הסיבים האלסטיים
<ol><li>חותכים את רקמות המפרצת של אבי העורקים לקריותרציות סדרתיות (בעובי 7 מיקרומטר).</li>
	<li>נתחו את הסיבים האלסטיים באמצעות ערכת צביעה מסחרית של ואן גייסון (EVG) על פי פרוטוקול היצרן.</li>
	<li>ציון השפלת האלסטין. דרגה 1: השפלה של <25%; דרגה 2: השפלה של 25% עד 50%; ציון 3: 50% עד 75% השפלה; או כיתה ד': השפלה של >75%.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li>
<li>Yamanouchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+aneurysmal+dilation+associated+with+apoptosis+and+inflammation+in+a+newly+developed+calcium+phosphate+rodent+abdominal+aortic+aneurysm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).</li>
<li>Wang, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+apolipoprotein+E%2C+age+and+aortic+site+on+calcium+phosphate+induced+abdominal+aortic+aneurysm+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice.</a> Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).</li>
<li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unspliced+xbp1+confers+VSMC+homeostasis+and+prevents+aortic+aneurysm+formation+via+foxo4+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction.</a> Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+macrophage+TFEB-14-3-3+epsilon+interface+by+naringenin+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm.</a> Cell Discovery. 8 (1), 21(2022).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYLD+deubiquitinates+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+4+contributing+to+adventitial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).</li>
<li>Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+abdominal+aortic+aneurysm+in+population-based+studies%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805(2018).</li>
<li>Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+and+aortic+aneurysm+rupture%3A+A+favorable+association%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).</li>
<li>Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+suppresses+calcium+phosphate-induced+aneurysm+formation+through+inhibition+of+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062(2016).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53191(2015).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutral+sites+for+calcium+ion+binding+to+elastin+and+collagen%3A+A+charge+neutralization+theory+for+calcification+and+its+relationship+to+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).</li>
<li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Runx2+%28runt-related+transcription+factor+2%29-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li>
<li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689(2019).</li>
</ol>

יישום פריאורטי של CaPO4 הוא גישה חזקה להשראת AAA בעכברים. מספר מחקרים השתמשו במודל CaPO4 ודיווחו בעקביות כי זוהי שיטה מהירה וניתנת לשחזור לחקר AAA בעכברים 7,9. מודל זה נחשב לספיג חלק מהתכונות של מפרצת אבי העורקים האנושית ולספק תובנות מכניסטיות על פתוגנזה של AAA, כולל דלקת והשפלת מטריצה חוץ-תאית.
גורמי הסיכון של AAA אנושי כוללים בעיקר הזדקנות, מין זכר, עישון, היפרליפידמיה, יתר לחץ דם וטרשת עורקים1...

מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) היא מחלה קרדיווסקולרית קטלנית המאופיינת בהתרחבות קבועה של אבי העורקים הבטני, עם שיעורי תמותה גבוהים לאחר התרחשות הקרע. AAA קשור להזדקנות, עישון, מין הגבר, יתר לחץ דם והיפרליפידמיה1. מספר תהליכים פתולוגיים הוכחו כתורמים ליצירת AAA, כולל פרוטאוליזה של סיבי מטריצה חוץ-תאית, חדירת תאי מערכת החיסון ואובדן תאי שריר חלק של כלי הדם. נכון לעכשיו, המנגנונים הפתולוגיים של AAA נשארים חמקמקים, ואין תרופות מוכחות לטיפול ב- AAA1. המחקר על AAA אנושי מוגבל בשל קיומן של דגימות אבי העורקים האנושיות המעטות; לפיכך, מספר מודלים של AAA בעלי חיים המושרים על ידי שינוי כימי הוקמו ואומצו באופן נרחב, כולל אינפוזיה תת-עורית אנגיוטנסין II (AngII), דגירה של אלסטאז פריווסקולרי או תוך-לומינלי, ויישום סידן פוספט פריווסקולרי2. מודל עכבר נפוץ הוא יישום של סידן פוספט (CaPO4) על אדוונטיטיה של אבי העורקים הבטני infrarenal, שהוא חסכוני ואינו דורש שינוי גנטי.
יישום פריאורטי ישיר של CaCl2 לעורק הצוואר של ארנבות כדי לגרום לשינוי מפרצת דווח בתחילה על ידי Gertz et al.3 ומאוחר יותר הוחל על aortas הבטן של עכברים. המודל פותח על ידי Yamanouchi et al. כדי להאיץ התרחבות אבי העורקים על ידי שימוש בגבישי CaPO 4 בעכברים4. חדירה של CaPO4 לעכברים משחזרת תכונות פתולוגיות רבות שנצפו ב-AAAs אנושיים, כולל חדירת מקרופאגים עמוקה, פירוק מטריצה חוץ-תאית ותצהיר סידן. גורמי הסיכון של AAA אנושי, כגון היפרליפידמיה, גם להגדיל את AAA המושרה על ידי CaPO4 בעכברים5. בניגוד ל-AAA המושרה על-ידי AngII בעכברי ApoE-/- או LDLR-/- , AAA המושרה על-ידי CaPO4 מתרחש באזור אבי העורקים התת-קרקעי, המחקה את ה-AAA האנושי. נכון לעכשיו, שיטה זו יושמה באופן נרחב כדי להעריך רגישות להתפתחות AAA בעכברים מהונדסים גנטית ולהעריך את ההשפעות האנטי-AAA של תרופות 6,7.

<table><tbody><tr><td>CaCl2</td><td>MECKLIN</td><td>C805225</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Biomed</td><td>SH5001-01</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>HARVEYBIO</td><td>MB5051</td><td></td></tr><tr><td>מאוורר לבעלי חיים</td><td>קטנים RWD</td><td>H1550501-012</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) היא מחלה קרדיווסקולרית מסכנת חיים המתרחשת ברחבי העולם ומאופיינת בהתרחבות בלתי הפיכה של אבי העורקים הבטני. נכון לעכשיו, נעשה שימוש במספר מודלים של מורין AAA המושרים כימית, שכל אחד מהם מדמה היבט אחר של הפתוגנזה של AAA. מודל AAA המושרה על-ידי סידן פוספט הוא מודל מהיר וחסכוני בהשוואה למודלים של אנגיוטנסין II ואלסטאז המושרה על-ידי AAA. היישום של גבישי CaPO4 על אבי העורקים של העכבר גורם לפירוק סיבים אלסטיים, אובדן תאי שריר חלק, דלקת ותצהיר סידן הקשור להתרחבות אבי העורקים. מאמר זה מציג פרוטוקול סטנדרטי עבור מודל AAA המושרהעל-ידי CaPO 4. הפרוטוקול כולל הכנה חומרית, היישום הכירורגי של CaPO4 לאדוונטיטיה של אבי העורקים הבטני התת-קרקעי, קצירת אאורטות כדי לדמיין מפרצות אבי העורקים, וניתוחים היסטולוגיים בעכברים.

14 יום לאחר מריחת CaPO4, העכברים הזכרים C57BL/6J הומתו, והאורטות שלהם נקטפו ונוקו. המורפולוגיה של האאורטות צולמה כדי להמחיש את היווצרות AAA. כפי שניתן לראות באיור 1A-B, היישום של CaPO4 הוביל להתרחבות של אבי העורקים הבטני התת-קרקעי. מבחינה היסטולוגית, CaPO4 גרם להתפרקות דרמטית של סיבים אלסטיים, כפי שמודגם על-ידי שברי אלסטין (איור 1C).
<i...

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר של מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) המושרה על-ידי סידן פוספט, כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות והמנגנונים המולקולריים של AAAs.

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

פרוטוקול זה מתאר את הסידן פוספט המושרה מפרצת אבי העורקים הבטני משולש מודל עכבר כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות במנגנונים המולקולריים של מפרצת אבי העורקים הבטני. מודל מפרצת אבי העורקים המושרה בסידן פוספט הוא מודל מהיר וחסכוני בהשוואה לצינור האנגיוטנסין ולמודלים של מפרצת אבי העורקים הבטני המושרה על ידי אלסטאז. מי שידגים את ההליך יהיה זייו קאי, פוסט-דוקטור כאן, עמית מהמעבדה שלנו.כדי להתחיל לחתוך רצועות ברוחב 0.3 ס"מ של כפפות גומי ללא אבקה וגזה. לאחר מכן רכשו עכברי C57BL6J Mayo בני שמונה עד עשרה שבועות, ואכלסו את בעלי החיים בסביבה ממוזגת עם מחזור חושך בהיר של 12 שעות וגישה חופשית למזון ומים. לאחר מכן, autoclave את גזה, צמר גפן, מספריים, ומלקחיים, לפני הניתוח, ולקבל Betadine, 70%, ושטיפת ידיים חיטוי.לגלח את שיער הבטן של העכבר המרדים באמצעות קוצץ חשמלי או קרם להסרת שיער. לאחר מכן מקלפים ומנגבים את האזור המגולח עם בטאדין, ואחריו 70% אתנול מספר פעמים בתנועה מעגלית. לאחר מכן לבצע חתך של כ-1.5 ס"מ בבטן התחתונה לאורך קו האמצע של הבטן באמצעות מספריים.באמצעות צמר גפן סטרילי רטוב במי מלח רגילים, הסר בזהירות את המעי עד שאבי העורקים התת-קרקעי נראה לעין. לאחר מכן, נתחו את רקמת החיבור והשומן מאבי העורקים התת-קרקעי למשך כ-0.5 ס"מ תוך הימנעות מכל קרע בכלי הדם הקטנים לצד הגבי. לאחר מכן ארזו חתיכה מרצועת כפפת הגומי הספוגה במי מלח מתחת לאבי העורקים הבטני ולווריד הראשי של הבטן תוך ניגוב עודפי נוזלים באמצעות צמר גפן.לאחר מכן, לארוז חתיכת גזה ספוג 0.5 טוחן סידן כלורי על adventitia של כלי הדם בטן infrarenal במשך 10 דקות. הסר את הגזה וארוז חתיכה נוספת של גזה ספוגה בתמיסת PBS במשך חמש דקות כדי ליצור גבישי סידן אורתו פוספט ב- C2 באדוונטיטיה של אבי העורקים. לאחר מכן הסר בזהירות את רצועת כפפת הגומי ואת גזה.לאחר איפוס מערכת העיכול של העכבר, לתפור את החתך בבטן ואת העור עם תפר חמש אפס. לאחר מכן, הנח את העכבר על כרית חימום עד שהעכבר יחזור להכרה. הבית את העכבר במשך 14 ימים נוספים לפקח על העכבר מקרוב לאחר הניתוח ולצפות לפחות כל יום לאחר מכן.לאחר 14 יום של הניתוח, לחתוך לפתוח את עכבר המתת החזה ואת חללי הבטן הגחון לחתוך לפתוח את אטריום ימין. פזרו את העכברים עם חיץ PBS דרך החדר השמאלי של הלב כדי להסיר דם באבי העורקים ולאחר מכן פרפוז עם 4% paraformaldehyde כפי שמתואר בכתב היד. הסר רקמת הרפתקנות ושומן בזהירות תחת מיקרוסקופ סטריאו.לאחר מכן לקצור את אבי העורקים ומניחים אותו בצינור המכיל חמישה מיליליטר של 4% paraformaldehyde במשך 48 שעות. לאחר מכן להצמיד את אבי העורקים על צלחת שעווה שחורה עם מחטי חרקים ולהמשיך לרכוש תמונות אבי העורקים. לאחר 14 יום של יישום סידן אורתופוספט המורפולוגיה של aortas היה תמונה כדי לדמיין היווצרות מפרצת אבי העורקים הבטן.זה נצפה כי סידן אורתופוספט הוביל להתרחבות של אבי העורקים הבטני infrarenal והביא השפלה דרמטית של סיבים אלסטיים כפי שמודגם על ידי הפסקות אלסטין. שימוש בצמר גפן סטרילי רטוב במי מלח רגילים כדי להסיר את המעי עד להופעת אבי העורקים האינפרנלי ולאחר מכן מיצוי רקמת החיבור והשומן מאבי העורקים האינפרנלי. באופן כללי, מודל מפרצת אבי העורקים המושרה על ידי סידן זרחן הוא גישה מהירה וחסכונית לחקר מנגנונים מולקולריים והאסטרטגיות הטיפוליות של מפרצת אבי העורקים הבטני, וניתן ליישם אותה במקביל למודלים האחרים כדי לחקות באופן מלא את התכונות של מפרצת אבי העורקים הבטני האנושי.

a-calcium-phosphate-induced-mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מראה כיצד לגרום מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) בעכברים באמצעות עירוי intraluminal חולף של elastase הלבלב חזירי לתוך מגזר infrarenal של אבי העורקים בבטן. המודל יש את היכולת להוסיף תובנות לתוך pathobiology רחב של AAA בשל הופעתה של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים.

יצירת ניסויית מפרצת אבי העורקים הבטני Murine עם Elastase

מאמר זה מתאר מתודולוגיה מפורט של שימוש של גומי סיליקון עופרת ריתוך perfuse את להערכת מאתר על קוטר אבי העורקים כימות במודל של עכברים של מפרצת אבי העורקים, לנתיחה.

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

זה מודל הרומן יוצר מאוד חזק הבטן התחתית בבית האבי העורקים בתוך החזיר באמצעות שילוב של אנגיופלסטיקה בלון, elastase/קוליזיה perfusion, יישום מקומי elastase, ומתחם אוראלי β-aminopropionitrile המינהל, אשר מפריעה עם קולגן חוצה קישור.

המודל הפורצין של מפרצת אבי העורקים הבטני

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית מתוקננת עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של אלסטאז להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן האינפרא-יותרת בעכברים.

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

כתב יד זה מציג פרוטוקול לביסוס מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר באמצעות סידן כלורי ואלסטאז, המשלב את היתרונות של שיטות מידול קודמות. מודל זה יכול לשמש לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס מפרצת אבי העורקים הבטני.

מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר על ידי Periadventitial סידן כלורי והסננת אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר גישה כירורגית שיטתית למידול מפרצות מתקדמות באבי העורקים הבטני בעכברים על ידי שילוב של יישום אלסטאז ישירות על אבי העורקים האינפרא-כלייתי ומתן ß-aminopropionitrile דרך מי שתייה.

מידול מפרצת אבי העורקים הבטני מתקדם בעכברים על ידי שילוב של אלסטאז מקומי ו-ß-aminopropionitrile פומי

פרוטוקול זה מספק שיטה ניתנת לחזרה ואמינה להשראת מפרצות אאורטה בטנית (AAAs) בעכברים C57BL/6 באמצעות רגישות לאלסטין ויישום אלסטאז פריוסקולרי, כמודל AAA הכולל רכיב רגישות חיסונית.

יצירת מודל אמין של אנוריזמה באאורטה בטנית בעכבר באמצעות רגישות לאלסטין ואלסטאז פריוסקולרי

אנגיוגנזה, מצמיח כלי דם בכלי הדם קיימים, קשור גם בתהליכים טבעיים פתולוגי. כאן אנו מדגימים assay טבעת אבי העורקים המאפשר potentiators angiogenic ומעכבי להתווסף ישירות טבעות אבי העורקים בתרבות. להנבטה ו תולדה neovessel ניתן לקבוע באמצעות בדיקת מצלצל אבי העורקים על פני תקופה של 6-12 ימים.

אבי העורקים Assay טבעת

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

תאי האנדותל של כלי הדם ממלאים תפקיד משמעותי בהפרעות לב וכלי דם חשובות רבות. מאמר זה מתאר שיטה פשוטה לבידוד והרחבה של תאי אנדותל מאבי העורקים של העכבר ללא שימוש בציוד מיוחד. הפרוטוקול שלנו מספק אמצעי יעיל לזיהוי מנגנונים בפיזיופתולוגיה של תאי אנדותל.

בידוד והתרבות ראשית של לתאי אנדותל עכבר אב העורקים

למדו את מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על ידי סידן פוספט בעכברים C57BL6J. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים ואסטרטגיות טיפוליות במהירות ובעלות נמוכה.

מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

גלה סרטונים נוספים