מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

פרוטוקול זה מתאר את הסידן פוספט המושרה מפרצת אבי העורקים הבטני משולש מודל עכבר כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות במנגנונים המולקולריים של מפרצת אבי העורקים הבטני. מודל מפרצת אבי העורקים המושרה בסידן פוספט הוא מודל מהיר וחסכוני בהשוואה לצינור האנגיוטנסין ולמודלים של מפרצת אבי העורקים הבטני המושרה על ידי אלסטאז. מי שידגים את ההליך יהיה זייו קאי, פוסט-דוקטור כאן, עמית מהמעבדה שלנו.

כדי להתחיל לחתוך רצועות ברוחב 0.3 ס"מ של כפפות גומי ללא אבקה וגזה. לאחר מכן רכשו עכברי C57BL6J Mayo בני שמונה עד עשרה שבועות, ואכלסו את בעלי החיים בסביבה ממוזגת עם מחזור חושך בהיר של 12 שעות וגישה חופשית למזון ומים. לאחר מכן, autoclave את גזה, צמר גפן, מספריים, ומלקחיים, לפני הניתוח, ולקבל Betadine, 70%, ושטיפת ידיים חיטוי.

לגלח את שיער הבטן של העכבר המרדים באמצעות קוצץ חשמלי או קרם להסרת שיער. לאחר מכן מקלפים ומנגבים את האזור המגולח עם בטאדין, ואחריו 70% אתנול מספר פעמים בתנועה מעגלית. לאחר מכן לבצע חתך של כ-1.5 ס"מ בבטן התחתונה לאורך קו האמצע של הבטן באמצעות מספריים.

באמצעות צמר גפן סטרילי רטוב במי מלח רגילים, הסר בזהירות את המעי עד שאבי העורקים התת-קרקעי נראה לעין. לאחר מכן, נתחו את רקמת החיבור והשומן מאבי העורקים התת-קרקעי למשך כ-0.5 ס"מ תוך הימנעות מכל קרע בכלי הדם הקטנים לצד הגבי. לאחר מכן ארזו חתיכה מרצועת כפפת הגומי הספוגה במי מלח מתחת לאבי העורקים הבטני ולווריד הראשי של הבטן תוך ניגוב עודפי נוזלים באמצעות צמר גפן.

לאחר מכן, לארוז חתיכת גזה ספוג 0.5 טוחן סידן כלורי על adventitia של כלי הדם בטן infrarenal במשך 10 דקות. הסר את הגזה וארוז חתיכה נוספת של גזה ספוגה בתמיסת PBS במשך חמש דקות כדי ליצור גבישי סידן אורתו פוספט ב- C2 באדוונטיטיה של אבי העורקים. לאחר מכן הסר בזהירות את רצועת כפפת הגומי ואת גזה.

לאחר איפוס מערכת העיכול של העכבר, לתפור את החתך בבטן ואת העור עם תפר חמש אפס. לאחר מכן, הנח את העכבר על כרית חימום עד שהעכבר יחזור להכרה. הבית את העכבר במשך 14 ימים נוספים לפקח על העכבר מקרוב לאחר הניתוח ולצפות לפחות כל יום לאחר מכן.

לאחר 14 יום של הניתוח, לחתוך לפתוח את עכבר המתת החזה ואת חללי הבטן הגחון לחתוך לפתוח את אטריום ימין. פזרו את העכברים עם חיץ PBS דרך החדר השמאלי של הלב כדי להסיר דם באבי העורקים ולאחר מכן פרפוז עם 4% paraformaldehyde כפי שמתואר בכתב היד. הסר רקמת הרפתקנות ושומן בזהירות תחת מיקרוסקופ סטריאו.

לאחר מכן לקצור את אבי העורקים ומניחים אותו בצינור המכיל חמישה מיליליטר של 4% paraformaldehyde במשך 48 שעות. לאחר מכן להצמיד את אבי העורקים על צלחת שעווה שחורה עם מחטי חרקים ולהמשיך לרכוש תמונות אבי העורקים. לאחר 14 יום של יישום סידן אורתופוספט המורפולוגיה של aortas היה תמונה כדי לדמיין היווצרות מפרצת אבי העורקים הבטן.

זה נצפה כי סידן אורתופוספט הוביל להתרחבות של אבי העורקים הבטני infrarenal והביא השפלה דרמטית של סיבים אלסטיים כפי שמודגם על ידי הפסקות אלסטין. שימוש בצמר גפן סטרילי רטוב במי מלח רגילים כדי להסיר את המעי עד להופעת אבי העורקים האינפרנלי ולאחר מכן מיצוי רקמת החיבור והשומן מאבי העורקים האינפרנלי. באופן כללי, מודל מפרצת אבי העורקים המושרה על ידי סידן זרחן הוא גישה מהירה וחסכונית לחקר מנגנונים מולקולריים והאסטרטגיות הטיפוליות של מפרצת אבי העורקים הבטני, וניתן ליישם אותה במקביל למודלים האחרים כדי לחקות באופן מלא את התכונות של מפרצת אבי העורקים הבטני האנושי.