מקור ומסלול של זיהום אלקלואיד Pyrrolizidine בדגימות תה

פיתוח שיטת זיהוי של 15 אלקלואידים pyrrolizidine עשבים, אדמה, עלי תה טריים דגימת תה יבש יכול לספק תמיכה טכנית לחקר המקור של זיהום אלקלואידים pyrrolizidine בתה. בהשוואה למיצוי השלב המוצק, שיטת הספיגה לדגימת קרקע יכולה לחסוך זמן, עלות נמוכה יותר והתאוששות טובה יותר לניתוח אלקלואידים פירוליזידין. כדי להתחיל את המיצוי על מוצרי תה מיובשים שחוממו מראש, עלי תה טריים או עשבים שוטים, לשקול גרם אחד של מדגם בצינור צנטריפוגה 50 מיליליטר, ולהוסיף 10 מיליליטר של 0.1 שומות לליטר תמיסת חומצה גופרתית לתוך הצינור.

לאחר מכן, מערבל את המדגם במשך שתי דקות אם זה להיות מנותח באמצעות מיצוי פאזה מוצק, ואילו במשך דקה אחת אם אותו הדבר הוא להיות מנותח באמצעות ניקוי סופג. לאחר מכן נושא את הדגימה למיצוי קולי במשך 15 דקות, ואחריו צנטריפוגה ב 9, 390 גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן באמצעות טפטפת פלסטיק, להעביר את הפתרון supernatant לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר.

לאחר ביצוע המיצוי פעמיים, מערבבים את הסופרנאטנטים בצינור. כדי להתחיל את המיצוי על הקרקע המוכנה, לשקול גרם אחד של מדגם בצינור צנטריפוגה 50 מיליליטר. הוסף 0.1 מיליליטר של 0.1 שומות לליטר תמיסת טריסודיום ציטראט כדי להתאים את רמת החומציות של הקרקע ל -6.0, ולאפשר לדגימה לעמוד במשך שתי דקות.

לאחר מכן להוסיף 10 מיליליטר של 0.1 שומות לליטר חומצה גופרתית מתנול פתרון לתוך הצינור, מערבל את המדגם במשך שתי דקות, ולאחר מכן רועד במשך 30 דקות. לאחר מכן, בצע מיצוי קולי במשך 30 דקות כפי שהודגם קודם. ואז צנטריפוגה את הדגימה ב 9, 390 G במשך 10 דקות.

ובאמצעות טפטפת פלסטיק, להעביר את supernatant לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר. לאחר ביצוע המיצוי פעמיים, ערבבו את הסופרנאטנטים. הפעל את מיצוי הפאזה המוצקה או מחסנית SPE עם חמישה מיליליטר מתנול ואחריו חמישה מיליליטר מים נטולי יונים.

לאחר ההפעלה, הוסף 10 מיליליטר של supernatant מחילוץ הדגימה למחסנית מופעלת מראש. לאחר שרמת תמיסת הדגימה מגיעה לשכבה העליונה של המחסניות, יש לנטרל את מטריצת הדגימה עם חמישה מיליליטר של תמיסת חומצה פורמית 1%, ואחריה חמישה מיליליטר מתנול, ולהשליך את האלונטים. לאחר מכן, delute את analytes עם חמישה מיליליטר של מתנול המכיל 0.5% אמוניה מים.

סנן את ה- eluent דרך מסנן קרום 0.22 מיקרון לניתוח על ידי UPLC-MS/MS. כדי לבצע ניקוי דגימה באמצעות adsorbent, להכין צינור צנטריפוגה 10 מיליליטר עם adsorbent מתפשר GCB, PSA ו C18 ביחס 10 עד 20 עד 15 מיליגרם. לאחר מכן להוסיף שני מיליליטר של supernatant המתקבל לאחר הטיפול דגימה.

לאחר מכן, מערבלים את תערובת הדגימה ואת adsorbent במשך דקה אחת צנטריפוגה ב 9, 390 G במשך שמונה דקות בטמפרטורת החדר. סנן מיליליטר אחד של supernatant שנוצר דרך מסנן קרום 0.22 מיקרון לתוך בקבוקון דגימה לפני ניתוח אותו על ידי UPLC-MS/MS. במחקר, אחוז התאוששות גבוה יותר של 15 אלקלואידים pyrrolizidine מעלי תה טריים, דגימות תה מיובש ועשבים התקבלו באמצעות טכניקת טיהור ספיגה בהשוואה לשיטת מחסנית SPE.

ההתאוששות של אלקלואידים באדמה באמצעות טיהור סופג היו 79 עד 111% בעלי תה טריים שנאספו מחמשת אתרי הדגימה, תוכן גבוה יותר של תחמוצת N intermedine זוהה מאשר senecionine. Senecionine לא זוהה בעלים בוגרים מאתרי דגימה אחת ושתיים. בין 11 אלקלואידים pyrrolizidine, רק תחמוצת N intermedine זוהה באדמה, בעוד senecionine ו intermedine N-oxide זוהו בחלקים שונים של צמחי התה.

בנוסף, התוכן של תחמוצת N Intermedine בניצן אחד עם שני עלים נמצא הגבוה ביותר. בעת ניסיון זה הראשון, הדבר החשוב ביותר הוא להוסיף 0.1 מיליליטר של 0.1 שומות לליטר תמיסת טריסודיום ציטראט כדי להתאים את pH הקרקע שלך ל 6.0. שיטה זו יכולה להיות מיושמת על ניתוח של אלקלואידים בצמחי מאכל אחרים, והוא גם מספק טכניקה טבעית לחקר המקור של אלקלואידים בהם.