Name: טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: למד שיטה פשוטה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים באמצעות מפסק עצמי. טכניקה זו מפחיתה טראומה כירורגית ומאפשרת חקר היפרטרופיה לבבית ואי-ספיקת לב ללא צורך בהנשמה מכנית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו ממומנת על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC 81822002). אנו מודים לכל החברים שלקחו חלק בעבודה זו.

הפרוטוקול הנוכחי מאושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים טונג'י, המכללה הרפואית טונג'י, אוניברסיטת חואז'ונג למדע וטכנולוגיה, ווהאן, סין. הליך זה מבוצע על עכברים בוגרים זכרים C57 / BL6 (>10 שבועות של גיל). כל כלי הניתוח עוקרו על ידי autoclaving לפני הניתוח.
1. הכנת כלי ניתוח
<ol><li>הכינו מזרק 5 מ"ל וצבטו את קצה המחט עם מחזיק מחט כדי להקהות אותו.</li>
	<li>הכינו מחט 27 גרם והקהו אותה עם מחזיק מחט. חיתוך קצה המחט עם מספריים אופתלמיים היא דרך חלופית להקהות את המחט.</li>
	<li>כופפו את קצה המחט 27 G ב-90°. הערה: מחט זו תשמש כספייסר לקשירה עם אבי העורקים לצורך כיווץ כלי דם.</li>
	<li>השתמשו בחוט ברזל מסחרי (דרגה רפואית, קוטר 0.5 מ"מ, ראו טבלת חומרים) וקשרו חוט סביב המחט (איור 1A). יוצרים חוטם קטן או לולאה בקצה הקהה של המחט (איור 1B). הערה: מכשיר רב פעמי זה פועל כמשחזר מיוחד מתוצרת עצמית ומאפשר להעביר תפר משי מתחת לאבי העורקים בשלבים האחרונים.</li>
	<li>Autoclave כל הכלים הכירורגיים לפני הניתוח (כולל retractor מיוחד עשה לעיל) כדי לעקר אותם.</li>
</ol>2. הכנת בעלי חיים
<ol><li>להרדים את העכבר באמצעות הזרקה תוך צפקית של תמיסת נתרן pentobarbital (50 מ"ג / ק"ג, ראה טבלה של חומרים) בהתאם למשקל הגוף. תת עורית להזריק 100 μL של 0.5% לידוקאין באופן מקומי לאזור הניתוח.</li>
	<li>ודא שהעכבר מורדם לחלוטין על ידי צביטת בוהן העכבר עם קצה המלקחיים.</li>
	<li>יש למרוח משחה אופתלמית על שתי העיניים כדי למנוע יובש בזמן הרדמה.</li>
	<li>הסר את השיער מהגרון והחזה העליון עם קרם depilatory או קוצץ.</li>
	<li>יש לחטא את האזור ללא שיער בשלושה קרצוף יוד ואתנול 70% לסירוגין במעגלים קונצנטריים הנעים כלפי חוץ.</li>
	<li>הניחו את העכבר במצב שכיבה על כרית חימום מכוסה בוילון סטרילי כשראשו מצביע על המפעיל. תקנו את הגפיים בעזרת סרט הדבקה וחותכות בתפר 4-0 (איור 2A).</li>
	<li>הכנס בדיקה רקטלית (ראה טבלת חומרים) כדי לפקח על טמפרטורת הגוף במהלך הניתוח. שמור על טמפרטורת הגוף ב 37 °C במהלך כל הפעולה.</li>
	<li>לבשו זוג כפפות סטריליות. הערה: לאחר לבישת הכפפות הסטריליות, אין לגעת באזורים או חפצים לא מעוקרים אחרים.</li>
	<li>חותכים חור (בקוטר 1-1.5 ס"מ) בוילון סטרילי חד פעמי חדש עם מספריים אופתלמיים מעוקרים. הניחו את הווילון הסטרילי מעל העכבר וודאו ששדה ההפעלה ללא שיער נראה דרך החור. הערה: שלב זה מאפשר למפעיל להימנע מלגעת באזורים לא מעוקרים אחרים, מה שעוזר לשמור על תנאים סטריליים במהלך הניתוח.</li>
</ol>3. התכווצות של אבי העורקים הרוחבי
<ol><li>בצעו חתך עור אנכי בקוטר 1.5 ס"מ ברמת החריץ העל-סטרנלי (איור 2B) עם להב אזמל. יש להרחיב את חתך העור עד לגובה זווית עצם החזה. הערה: החריץ העל-סטרנלי הוא חריץ הממוקם בקצה העליון של החריץ המנובריום. זהו סמל משטח שניתן לזהות כשמסירים שיער עכבר (איור 2B). זווית עצם החזה היא המפרק בין manubrium sterni ו corpora sterni. כאשר עצם החזה נחשפת, היא מופיעה כקו לבן אופקי על עצם החזה באותה רמה של קוסטה סקונדה (איור 2C).</li>
	<li>מפרידים בזהירות את העור ואת הפאשיה השטחית וחושפים את קנה הנשימה ואת עצם החזה הפרוקסימלית. בצעו בזהירות חתך קו אמצע אורכי בקוטר 3-4 מ"מ עד עצם החזה החל מהקצה העליון ועד לזווית עצם החזה (איור 2D). הערה: אסור שהחתך יחרוג מזווית עצם החזה, שכן קיים סיכון לגרימת דלקת ריאות חריפה בעכבר.</li>
	<li>הרימו בעדינות את עצם החזה בעזרת מלקחיים ואת בלוטת התימוס ואבי העורקים מתחתיה. בזהירות להשתמש מלקחיים ישר לנתח בבוטות את כלי המטרה ואת הרקמות סביבו.</li>
	<li>החזק את המשענת הקודמת מתוצרת עצמית (שלב 1.4) שהכילה חוט חוט בקצה ידו הימנית של המשתמש.</li>
	<li>העבירו בזהירות את החוטם של המחזיר מתוצרת עצמית מתחת לאבי העורקים בין עורק התרדמה המשותף השמאלי לבין המקור של העורק הנומיננטי הימני (איור 2E).</li>
	<li>העבירו את המשענת מתוצרת עצמית ליד שמאל כדי לחסוך את יד ימין למכשירים אחרים.</li>
	<li>עם פינצטה מיקרוסקופית ביד ימין, מעבירים תפר משי 7-0 דרך הלולאה של החוטם בסוף ומוציאים את המשליפה. זה יאפשר להשאיר את תפר המשי סביב העורק לקשירה נוספת (איור 2F). הערה: היו עדינים ואל תגררו את קשת אבי העורקים יותר מדי ממקומה המקורי.</li>
	<li>הניחו מחט 27G במקביל לאבי העורקים וקשרו את התפר סביב המחט ואבי העורקים (איור 2G,H). הערה: הליך הדמה צריך להיות זהה, אלא שאין קשירת אבי העורקים.</li>
	<li>אחזו במחט 27 G עם מלקחיים אופתלמיים ומלקחיים נוספים המחזיקים את הקשר קשור למחט 27 G ולאבי העורקים. שלפו במהירות אך בעדינות את מחט 27 גרם מהקשירה (איור 2H). הערה: אסור שהקשר יהיה הדוק מדי, אחרת לא יהיה קל לשלוף את המחט. היזהר בעת משיכת המחט במקרה של קרע אבי העורקים.</li>
	<li>תפרו את העור בתפר מונופילמנט סינתטי 4-0 בתבנית תפר קטוע (איור 2I).</li>
</ol>4. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>הניחו את העכבר על משטח חם (ראו טבלת חומרים) והמתינו להחייאתו. בדרך כלל, העכבר מתעורר לחיים תוך כ -60 דקות. הערה: אין להשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חוזר להכרה מספקת לשכיבה העיקרית של עצם החזה.</li>
	<li>תת עורית להזריק 0.5 מ"ל של מלח חם לפקח על הומאוסטזיס נוזל של בעלי חיים. הערה: שלב זה מונע התייבשות של בעלי חיים ומצב של זרימת דם היפו-וולמית.</li>
	<li>החל משחה אריתרומיצין על פני השטח הפצע כל יום במשך 3 ימים.</li>
	<li>לטיפול בכאב לאחר הניתוח, יש לתת 1 מ"ג/ליטר של בופרנורפין בהרדמה מקומית באופן פרנטרלי לאתר החתך (ראה טבלת חומרים).</li>
	<li>לאחר הניתוח, לפקח על העכבר עבור סימנים של זיהום וליקוי (תת תזונה, יציבה כפופה, פרווה פרועה). הערה: בעלי חיים שעברו ניתוח אינם מוחזרים לחברתם של בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה.</li>
</ol>5. הדמיית אולטרסאונד
<ol><li>יש לאשר קשירה מוצלחת של אבי העורקים הרוחבי על ידי חישוב מהירות זרימת הדם באמצעות מערכת הדמיה אולטרסאונד12,13 (24 MHz, ראה טבלת חומרים) 28 ימים לאחר הניתוח.<ol><li>יש להרדים את בעל החיים עם 4.5% איזופלורן ב-20% אוויר מועשר בחמצן ולשמור עם 0.5% איזופלורן ב-20% אוויר מועשר בחמצן.</li>
		<li>הניחו את העכבר במצב שכיבה וקיבעו את הגפיים שלו לאלקטרודה בעזרת סרט הדבקה.</li>
		<li>באמצעות קרם depilatory, להסיר את שיער החזה ולהחיל סוכן צימוד קולי על החזה.</li>
		<li>הטה את הפלטפורמה שמאלה ככל האפשר. תוך שמירה על הגשושית במצב אנכי, הורידו אותה בהדרגה לאורך קו החזה הימני על החזה כאשר החריץ מצביע על סנטר החיה.</li>
		<li>במצב B של המכשיר, כוונן את ציר X ו- Y עד שקשת אבי העורקים ואתר ההתכווצות נראים בבירור.</li>
		<li>לחץ על כפתור דופלר גל הדופק כדי לעבור למצב גל דופק .</li>
		<li>התאם את תיבת נפח הדגימה של הסמן המקווקו דיסטלית לאתר המכווץ ומצא את הסילון הסטנוטי במהירות הגבוהה ביותר.</li>
		<li>לחץ שוב על כפתור דופלר גל הדופק כדי לקבל את צורת הגל של זרימת אבי העורקים ולמדוד את מהירות השיא. חשבו את מהירות זרימת הדם בהתאם לשיא דפוסי הגלים (איור 3A,B).</li>
		<li>הגדר את מכונת הצילום למצב B. הנח את הפלטפורמה במצב אופקי. סובב את הגשושית 30° לקו הפרסטרנלי השמאלי.</li>
		<li>התאימו את ציר X וציר Y לקבלת תצוגת ציר קצר. לחץ על מצב M כדי להציג את קו החיווי ולחץ על Cine Store כדי לשמור את התמונה למדידה מאוחרת יותר של עובי דופן הלב, ממד התא ומקטע ההוצאה. הערה: הנוסחה לחישוב מקטע פליטה: 100% * ((LV Vol;d - LV Vol;s) / LV Vol;d). הנוסחה לחישוב תפוקת הלב: נפח שבץ * דופק (בפריים הראשון שצויר) / 1000. רוב המדדים כגון מקטע פליטה ותפוקת הלב ניתנים למדידה אוטומטית באמצעות תוכנת מערכת ההדמיה העל-קולית. LV Vol;d: נפח דיאסטולי של החדר השמאלי. LV Vol;s: נפח סיסטולי של החדר השמאלי.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Heidenreich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AHA%2FACC%2FHFSA+Guideline+for+the+Management+of+Heart+Failure%3A+A+Report+of+the+American+College+of+Cardiology%2FAmerican+Heart+Association+Joint+Committee+on+Clinical+Practice+Guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">AHA/ACC/HFSA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Joint Committee on Clinical Practice Guidelines.</a> Circulation. 145 (18), 895(2022).</li>
<li>McDonagh, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+Guidelines+for+the+diagnosis+and+treatment+of+acute+and+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure.</a> European Heart Journal. 42 (36), 3599(2021).</li>
<li>Lv, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (179), e63257(2022).</li>
<li>Curaj, A., Simsekyilmaz, S., Staudt, M., Liehn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+invasive+surgical+procedure+of+inducing+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Minimal invasive surgical procedure of inducing myocardial infarction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52197(2015).</li>
<li>Nakamura, M., Sadoshima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+physiological+and+pathological+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of physiological and pathological cardiac hypertrophy.</a> Nature Reviews Cardiology. 15 (7), 387-407 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bibliometric+analysis+on+the+progress+of+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Problems+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Bibliometric analysis on the progress of chronic heart failure.</a> Current Problems in Cardiology. 47 (9), 101213(2022).</li>
<li>Riehle, C., Bauersachs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure.</a> Cardiovascular Research. 115 (13), 1838-1849 (2019).</li>
<li>Melleby, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+high+precision+aortic+constriction+that+allows+for+generation+of+specific+cardiac+phenotypes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">A novel method for high precision aortic constriction that allows for generation of specific cardiac phenotypes in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (12), 1680-1690 (2018).</li>
<li>Rockman, H. A., Wachhorst, S. P., Mao, L., Ross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ANG+II+receptor+blockade+prevents+ventricular+hypertrophy+and+ANF+gene+expression+with+pressure+overload+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">ANG II receptor blockade prevents ventricular hypertrophy and ANF gene expression with pressure overload in mice.</a> The American Journal of Physiology. 266, 2468-2475 (1994).</li>
<li>Eichhorn, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closed-chest+model+to+induce+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57397(2018).</li>
<li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice+for+induction+of+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56231(2017).</li>
<li>Lang, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+cardiac+chamber+quantification+by+echocardiography+in+adults%3A+an+update+from+the+American+Society+of+Echocardiography+and+the+European+Association+of+Cardiovascular+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 28 (1), 1-39 (2015).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+morphological+and+functional+changes+in+mouse+model+of+transverse+aortic+constriction+by+echocardiographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54101(2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF4+protects+the+heart+from+failure+by+antagonizing+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">ATF4 protects the heart from failure by antagonizing oxidative stress.</a> Circulation Research. 131 (1), 91-105 (2022).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GCN5-mediated+regulation+of+pathological+cardiac+hypertrophy+via+activation+of+the+TAK1-JNK%2Fp38+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">GCN5-mediated regulation of pathological cardiac hypertrophy via activation of the TAK1-JNK/p38 signaling pathway.</a> Cell Death & Disease. 13 (4), 421(2022).</li>
<li>Syed, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-regulation+of+Nrf2%2FHO-1+and+inhibition+of+TGF-beta1%2FSmad2%2F3+signaling+axis+by+daphnetin+alleviates+transverse+aortic+constriction-induced+cardiac+remodeling+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Up-regulation of Nrf2/HO-1 and inhibition of TGF-beta1/Smad2/3 signaling axis by daphnetin alleviates transverse aortic constriction-induced cardiac remodeling in mice.</a> Free Radical Biology and Medicine. 186, 17-30 (2022).</li>
<li>Zaw, A. M., Williams, C. M., Law, H. K., Chow, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55293(2017).</li>
<li>Lao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operating+transverse+aortic+constriction+with+absorbable+suture+to+obtain+transient+myocardial+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Operating transverse aortic constriction with absorbable suture to obtain transient myocardial hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (163), e61686(2020).</li>
<li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> European Respiratory Journal. 17 (3), 488-494 (2001).</li>
<li>Withaar, C., Lam, C. S. P., Schiattarella, G. G., de Boer, R. A., Meems, L. M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+with+preserved+ejection+fraction+in+humans+and+mice%3A+embracing+clinical+complexity+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Heart failure with preserved ejection fraction in humans and mice: embracing clinical complexity in mouse models.</a> European Heart Journal. 42 (43), 4420-4430 (2021).</li>
</ol>

המחברים הצהירו כי אין ניגודי עניינים.

השראת עומס לחץ מתמשך עלולה לגרום בהדרגה להיפרטרופיה לבבית ואי ספיקת לב. מודל זה שימש במעבדות רבות ברחבי העולם14,15,16. הפרוטוקול סיפק שיטת TAC משופרת שאינה דורשת מיומנויות מיקרוכירורגיות או אוורור מכני.
השלב החשוב ביותר בפרוטוקול זה הוא העברת תפר משי מתחת לקשת אבי העורקים. כאשר החוטם חיבר את קשת אבי העורקים, כל התנועות חייבות להיות עדינות כדי להפחית מתיחה מיותרת לעורק. כמו כן, התפר סביב אבי העורקים לא...

אי ספיקת לב היא סימפטום קליני מורכב הנובע מפגיעה במבנה ובתפקוד של מילוי או פליטת דם1. שלב המחלה מוגדר בעיקר באמצעות סיווג תפקודי איגוד הלב של ניו יורק בהתבסס על חומרת הסימפטומים ופעילות גופנית2. עבור חולים עם מקטע פליטה של מעל 50%, הפרעות מבניות ו / או תפקודיות העלו פפטידים נטריאורטיים כדי לתמוך באבחנה של אי ספיקת לב עם מקטע פליטה שמור (HFpEF)2. מחלת לב איסכמית היא גורם מוביל בקרב אטיולוגיות מרובות של אי ספיקת לב. לפיכך, מודל אוטם שריר הלב (כגון קשירה כלילית קבועה) משמש לעתים קרובות לחקר פתופיזיולוגיה לאחר היפופרפוזיה לבבית או פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה 3,4. מלבד פגיעה חריפה בשריר הלב, גורמי סיכון אחרים כגון יתר לחץ דם, סוכרת, השמנת יתר והיסטוריה משפחתית של קרדיומיופתיה תורמים גם הם להתפתחות אי ספיקת לב. לאחר שהחולים עוברים את שלב A (בסיכון לאי ספיקת לב) ונכנסים לשלב B (טרום אי ספיקת לב), מתרחש שינוי מבני1. לדוגמה, חולים עם יתר לחץ דם עוברים תחילה היפרטרופיה אדפטיבית של החדר השמאלי, ולאחר מכן מתפתחים בהדרגה להיפרטרופיה לבבית לא אדפטיבית ועוברים לאי ספיקת לב באמצעות שיפוץ פתולוגי5.
כשלב הסופני של מחלות לב וכלי דם שונות, אי ספיקת לב כרונית נחקרה במשך עשרות שנים6. מודלים עכבריים מרובים נמצאים בשימוש נרחב במחקר אי ספיקת לב, כולל עירוי תרופות (אנגיוטנסין II), הפרעות מטבוליות (סוכרת או תזונה עתירת קלוריות), והתכווצות אבי העורקים7. בין מודלים אלה, זילוח אנגיוטנסין II מלווה בתופעות לוואי שונות של איברים, כגון כליה7. גרימת הפרעות מטבוליות בדרך כלל דורשים תקופה ארוכה למדי של זמן. התכווצות אבי העורקים העולה נחשבת כבעלת רלוונטיות מוגבלת למחלה אנושית7.
TAC הוא מודל אמין המגדיל עומס לאחר מכן וגורם להיפרטרופיה לבבית, כמו גם אי ספיקת לב8. מודל TAC פתוח חזה תואר לראשונה על ידי Rockman et al. והיה בשימוש במעבדות רבות ברחבי העולם9. עם זאת, הליך TAC קלאסי זה גורם טראומה גדולה למדי לעכברים ומשנה את התנהגותם הרגילה, אשר עשויה לקחת זמן התאוששות ארוך להפריע לטיפול נוסף10. הליכי TAC אחרים עם חזה סגור אכן הפחיתו כמה צעדים פולשניים, אך דרשו מיומנויות מיקרוכירורגיות או הנשמה מכנית10,11.
הפרוטוקול הנוכחי מפרט שיטה שלב אחר שלב עם גישה זעיר פולשנית לקשת אבי העורקים באמצעות retractor מתוצרת עצמית דרך חתך קו אמצע 3 מ"מ של הקצה העליון של עצם החזה. מודל זה אינו זקוק למיומנות מיקרוכירורגית, אוורור מכני או חיתוך דרך הצלעות, ובכך מספק דרך מהירה, מוגבלת טראומה כירורגית, לא מסובכת וזולה לביצוע ניתוח TAC.

<table><tbody><tr><td>4-0 תפר בלתי נספג</td><td>Jinhuan</td><td>HM403</td><td>משמש לתפירת העור</td></tr><tr><td>5 מ"ל מזרק</td><td>Haifuda Technology Co., Ltd.</td><td>BD-309628</td><td>משמש להכנת מלכודת המכילה מפסק</td></tr><tr><td>7-0 תפר שאינו נספג</td><td>Jinhuan</td><td>HM701</td><td>משמש לקשירת אבי העורקים</td></tr><tr><td>מוניטור טמפרטורת בעלי חיים</td><td>Kaerwen</td><td>FT3400</td><td>משמש לניטור טמפרטורת הגוף</td></tr><tr><td>בופרנורפין&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>B-044</td><td>משמש לטיפול בכאבים לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>קרם אפילציה&nbsp;</td><td>Veet</td><td>N / A</td><td>משמש להסרת שיער גוף מאזור הניתוח</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Xiaochuangxin</td><td>N / A</td><td>משמש לשמירה על טמפרטורת הגוף</td></tr><tr><td>איבופרופן</td><td>MCE</td><td>HY-78131</td><td>משמש לטיפול בכאב לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>חוט ברזל (0.5 מ"מ)</td> <td>חוט ברזל צ'ינג יואן</td><td>#26</td><td>משמש להכנת מלכודת המכילה מפסק</td></tr><tr><td>פינצטה מיקרוסקופית</td><td>RWD</td><td>F12006-10</td><td>משמש לחדירה והפרדה של הרקמה לפתיחת חלל פעולה</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>RWD</td><td>F12005-10</td><td>משמש לצביטה של קצה מחט המד ולהקהות אותה</td></tr><tr><td>מלקחיים עיניים</td><td>RWD</td><td>F14012-10&nbsp;</td><td>משמש להחזקת עור ורקמות אחרות</td></tr><tr><td>מספריים עיניים</td><td>RWD</td><td>S11001-08</td><td>משמש לביצוע חתך החלקה של עכבר</td></tr><tr><td>Pentobarbital נתרן</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>משמש להרדמת עכבר</td></tr><tr><td>מחצלת ניתוח סטרילית</td><td>Hale & Hearty</td><td>211002</td><td>משמש להצבת בעלי חיים במהלך ניתוח</td></tr><tr><td>מערכת הדמיה אולטרה-סאונד</td><td>Fujifilm visualsonics</td><td>vevo1100</td><td>משמש למדידת מהירות זרימת הדם, עובי דופן החדר השמאלי ושבר הפליטה, https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-1100</td></tr></tbody></table>

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

התכווצות אבי העורקים הרוחבית (TAC) הוא ניתוח נפוץ במחקר על אי ספיקת לב והיפרטרופיה לבבית המבוסס על היווצרות עומס יתר במודלים של עכברים. האתגר העיקרי של הליך זה הוא לדמיין בבירור את קשת אבי העורקים הרוחבית ואת להקה מדויקת את כלי המטרה. גישות קלאסיות מבצעות ניתוח חלקי של בית החזה כדי לחשוף את קשת אבי העורקים הרוחבית. עם זאת, זהו מודל חזה פתוח שגורם לטראומה כירורגית גדולה למדי ודורש מכונת הנשמה במהלך הניתוח. כדי למנוע טראומה מיותרת ולפשט את הליך הניתוח, קשת אבי העורקים מתקרבת דרך החלק הפרוקסימלי של עצם החזה, להגיע ולקשור את כלי המטרה באמצעות retractor קטן מתוצרת עצמית המכיל snare. הליך זה יכול להתבצע מבלי להיכנס לחלל הצדר ואינו זקוק למכונת הנשמה או ניתוח מיקרוכירורגי, מה שמשאיר את העכברים עם דפוסי נשימה פיזיולוגיים, מפשט את ההליך ומקצר משמעותית את זמן הניתוח. בשל הגישה הפחות פולשנית ופחות זמן ניתוח, עכברים יכולים לחוות פחות תגובות לחץ ולהתאושש במהירות.

לאחר ניתוח TAC מוצלח, זוהה עומס לחץ באמצעות מערכת הדמיה אולטרסאונד. ארבעה שבועות לאחר הניתוח, עכברים מפתחים ירידה בתפקוד הלב. במחקר הנוכחי, היעילות של ניתוח TAC אומתה באמצעות מקטע פליטה (EF), קיצור שבר (FS), מסת חדר שמאל (מסת LV) וקוטר פנימי של החדר השמאלי (LVID) של עכברים שעברו ניתוח TAC לאחר 4 שבועות. EF הופחת באופן משמעותי בעכברי TAC לאחר 4 שבועות בהשוואה לעכברי דמה (47% ± 10% לעומת 78% ± 4%, p &lt; 0.0001) (איור 4A). מסת LV הייתה גבוהה משמעותית בעכברי TAC (158.1 ± 50.5 ...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה שונה ופשוטה עם הליך היצרות אבי העורקים הרוחבי (TAC) זעיר פולשני באמצעות retractor מתוצרת עצמית. הליך זה יכול להתבצע ללא מכונת הנשמה או מיקרוסקופ ומציג עומס לחץ, המוביל בסופו של דבר היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...

פרוטוקול זה מספק טראומה כירורגית מהירה מוגבלת, לא מסובכת וזולה לביצוע ניתוח TAC. מודל זה מתקרב לקשת אבי העורקים באמצעות משחזר מתוצרת עצמית ואינו זקוק לסולם מיקרוכירורגי או הנשמה מכנית, ובכך מגביל משמעותית את הטראומה הניתוחית. כדי להתחיל, להכין מזרק חמישה מיליליטר.לאחר מכן הפוך את המחט לקהה על ידי צביטת קצהו עם מחזיק מחט. הכינו מחט 27 מד קהה עם מחזיק מחט וכופפו את קצהו ב 90 מעלות. השתמש בחוט ברזל שהושג מסחרית וקשר אותו סביב המחט.יוצרים חוטם קטן או לולאה בקצה הקהה של המחט. לעקר את כל הכלים הכירורגיים לפני הניתוח על ידי autoclaving. יש לוודא את עומק ההרדמה עם צביטת בוהן כדי למנוע יובש בזמן ההרדמה.יש למרוח משחה אופתלמית על שתי העיניים. לאחר מכן הניחו את העכבר במצב שכיבה על כרית חימום מכוסה בוילון סטרילי כשראשו מצביע על המפעיל. לתקן את הגפיים שלה עם סרט דבק חותכות עם תפר 4-0.כעת, הכנס בדיקה רקטלית כדי לפקח על טמפרטורת הגוף במהלך הניתוח. בעזרת מספריים עיניים מעוקרות, חותכים חור בשפריץ סטרילי חדש וחד פעמי. הניחו את הווילון הסטרילי מעל העכבר וודאו ששדה הניתוח נטול השיער נראה דרך החור.לאחר ביצוע חתך להפריד את העור ואת fascia שטחי ולחשוף את קנה הנשימה ואת עצם החזה הפרוקסימלי. לאחר מכן בצע בזהירות חתך קו אמצע אורכי של שלושה עד ארבעה מילימטרים עד עצם החזה מהקצה העליון לזווית החזה והרים בעדינות את עצם החזה בעזרת מלקחיים. באמצעות מלקחיים ישרים לנתח בבוטות את כלי המטרה ואת הרקמות סביבו.עכשיו, להחזיק את retractor תוצרת עצמית בעבר עם חוט חוט ביד ימין. בזהירות להעביר את החוטם של retractor מתחת אבי העורקים בין עורק התרדמה המשותף השמאלי לבין המקור של עורק המלים הימני. העבר את המשחזר ליד שמאל.החזיקו את הפינצטה המיקרוסקופית ביד ימין והעבירו תפר משי 7-0 דרך לולאת הסנר בקצה. משוך את המשחזר. מניחים מחט 27 מד במקביל לאבי העורקים וקושרים את התפר סביב המחט ואבי העורקים.לאחר מכן החזיקו את מחט מד 27 עם מלקחיים אופתלמיים ואת הקשר קשור למחט מד 27 ואבי העורקים עם מלקחיים נוספים. משוך במהירות אך בעדינות את מחט מד 27 מהקשירה. תפרו את העור בתפר מונופילמנט סינתטי 4-0 בתבנית תפר קטוע.הניחו את העכבר על כרית חמה וחכו שהוא יתחדש. בדרך כלל, העכבר מתעורר לחיים תוך כ -60 דקות. לאחר ארבעה שבועות של ניתוח.מקטע פליטה וקיצור שברים הופחתו באופן משמעותי בעכברי התכווצות אבי העורקים הרוחבית בהשוואה לעכברי דמה. עם זאת, מסת החדר השמאלי והקוטר הפנימי של החדר השמאלי היו גבוהים באופן משמעותי בעכברי התכווצות אבי העורקים הרוחבית. השלב החשוב ביותר בחלקיק זה הוא מעבר תפר מתחת לקשת אבי העורקים.כל הסרטים חייבים להיות עדינים כדי להפחית מתיחה מיותרת לעורק. בעקבות הליך זה, החוקרים יכולים ליישם טיפול רפואי במודל החייתי על מנת לחקור מטרות טיפוליות פוטנציאליות לחולים עם היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

a-modified-technique-for-transverse-aortic-constriction-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

בסרטון זה אנו מדגימים פרוטוקול ניסיוני להתכווצות זעיר פולשנית של אבי העורקים הרוחבי בעכברים כדי לבחון אי ספיקת לב הנגרמת כתוצאה מעומס יתר.

פסים רוחביים של קשת אבי העורקים במודל עכבר: טכניקה זעיר פולשנית בעכברים להשראת לחץ גבוה בחדר השמאלי

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

כאן אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד של פירוק אבי העורקים הכירורגי במודל העכברים המבוסס היטב של התכווצות אבי העורקים. הליך זה לא רק מאפשר ללמוד את המנגנונים שבבסיס שיפוץ הפוך החדר השמאלי ורגרסיה של היפרטרופיה, אלא גם כדי לבדוק אפשרויות טיפוליות חדשניות שעשויות להאיץ את ההתאוששות שריר הלב.

לימוד שיפוץ הפוך חדרי שמאלי על ידי ניתוק האבניים במכרסמים

פרוטוקול זה מציג שיטה משופרת להשגת היפרטרופיה שריר הלב חולפת עם תפר נספג, המדמה ירידה היפרטרופיה חדרית שמאל לאחר הסרת עומס לחץ. זה יכול להיות בעל ערך עבור המחקרים על תנאי היפרטרופי שריר הלב.

הפעלת התכווצות אבי העורקים רוחבית עם תפר נספג להשגת היפרטרופיה שריר הלב ארעית

Pyrosequencing (R) היא אחת מהשיטות יסודית ביותר עד כה פשוט עד כה נעשה שימוש כדי לנתח פולימורפיזמים. שיטה זו הובילה הערכה נוקלאוטיד יחיד מהיר ויעיל פולימורפיזם כולל פולימורפיזמים רלוונטיות קלינית רבים. הטכניקה והמתודולוגיה של Pyrosequencing הוא הסביר.

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

אנגיוגנזה, מצמיח כלי דם בכלי הדם קיימים, קשור גם בתהליכים טבעיים פתולוגי. כאן אנו מדגימים assay טבעת אבי העורקים המאפשר potentiators angiogenic ומעכבי להתווסף ישירות טבעות אבי העורקים בתרבות. להנבטה ו תולדה neovessel ניתן לקבוע באמצעות בדיקת מצלצל אבי העורקים על פני תקופה של 6-12 ימים.

אבי העורקים Assay טבעת

למד שיטה פשוטה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים באמצעות מפסק עצמי. טכניקה זו מפחיתה טראומה כירורגית ומאפשרת חקר היפרטרופיה לבבית ואי-ספיקת לב ללא צורך בהנשמה מכנית.

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

גלה סרטונים נוספים