הערכה של רעילות הקשורה לקולטן אנטיגן כימרי T באמצעות מודל עכבר קסנוגרפט שמקורו בלוקמיה לימפובלסטית חריפה

פרוטוקול זה משתמש בתאי CAR-T אנושיים ובתאי גידול ומדגים במדויק את הרעילות הקשורה למתן CART19. לכן, לשחזר את מה שנצפה במרפאה. היתרון העיקרי בשימוש בפלטפורמה זו הוא שהיא מספקת מודל ניתן לתרגום ורלוונטי קלינית שבו נעשה שימוש בתאי T אנושיים ובתאי גידול.

מודל זה לא רק מאפשר הערכה יעילה של רעילויות הקשורות ל-CART19, אלא גם מאפשר לנו להבין טוב יותר כיצד אנו יכולים להתגבר על רעילויות אלה באמצעות אסטרטגיות טיפול משופרות. כדי להתחיל, עקוב אחר עכברי CART19 שניתנו פעמיים ביום כדי להעריך כל שינוי ברווחתם, כגון חולשה מוטורית, גוף כפוף ואובדן משקל גוף. ברגע שהעכברים מפתחים חולשה מוטורית וירידה במשקל, אספו את הדם ההיקפי שלהם כדי לנתח את נטל הגידול.

ולבצע בידוד בסרום עבור ציטוקינים, כמתואר בכתב היד. לאחר הבידוד, אחסנו את צינורות המיקרו-צנטריפוגות בסרום בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס, והשתמשו בסרה כדי לנתח את הכימוקינים והציטוקינים באמצעות בדיקת המרבבה. להדמיית MRI, ערבבו 120 מיקרוליטר גדוליניום עם 880 מיקרוליטר של תמיסת מלח, והעמיסו לתוך מזרק אינסולין של מיליליטר.

להזריק 100 מיקרוליטר של פתרון מוכן intraperitoneally לתוך כל עכבר. מרדימים את העכבר ומניחים אותו על בדיקת עריסה תואמת מכרסמים. ואז לחבר את שיניו על מוט הנשיכה.

משוך את ראש העכבר לתוך סליל נפח 25 מ"מ, ולהתאים את חרוט האף קשור למערכת הרדמה isoflurane. הדקו את הידית של מוט הנשיכה כדי לשמור על המיקום למשך הסריקה. להערכת נשימה, חברו את הבדיקה של מכשיר ניטור נשימה קרוב לסרעפת, והדקו אותה באמצעות סרט כירורגי.

שמור על קצב הנשימה בין 20 ל 60 נשימות לדקה, כך שמצב העכבר יישאר יציב. הכנס את הגשושית של בעל החיים לתוך הבור הקטן בתוך מערכת MRI של בעלי חיים קטנים אנכיים וכוונן את ראש החיה במרכז הסליל. באמצעות המנעול, אבטח את המכשיר במצב זקוף וחבר את המכשיר למחשב.

לאחר מכן, פתח את תוכנת ParaVision כדי להגדיר את מיקומי הסריקה וסוגי הסריקות. לקבוע את המיקומים האופטימליים של קשת וציר תוך שמירה על עקביות עבור כל קבוצות הניסוי. כדי לאסוף את נתוני ה-MRI המשוקללים של T1, השתמש ברצף רב-פרוסות משוקלל T1 עם זמן חזרה של 300 אלפיות השנייה, זמן הד של 9.5 אלפיות השנייה, שדה ראייה של 4.00 X 2.00 X 2.00 סנטימטרים ומטריצה של 192 X 96 X 96.

לתמונות MRI משוקללות T2, השתמשו ברצף רב-פרוסות ומרובה הדהודים עם פרמטרים דומים. לאחר השלמת הסריקות, הסר את הבדיקה מהבור וחלץ בעדינות את העכבר על ידי הסרת השיניים ממוט הנשיכה. לאחר חילוץ נתונים מהתוכנה, השתמשו בתוכנת ניתוח לכימות ועיבוד נפח תלת-ממדי של אזורי ההיפר-אינטנסיביות CD19+אוכלוסיות תאי גידול הושוו בין עכברים שטופלו ב-CART19, לבין עכברים שלא טופלו באמצעות ציטומטריית זרימה.

ירידה משמעותית במשקל נצפתה בעכברים שטופלו בתאי CART19. ירידה במשקל נחשבת כסימפטום של הופעת CRS, הקשורה לרעילות הקשורה לתאי CART. בדיקת מולטיפלקס חשפה את הביטוי של ציטוקינים וכימוקינים בסרום עכברי NSG לפני ואחרי מתן CART19.

תמונות משוקללות T2 חשפו עדות לבצקת וחדירה דלקתית אפשרית במהלך דלקת עצבית בעכברים שטופלו ב-CART19. בעוד MRI משוקלל T1 הראה שיפור ניגודיות בתוך פרנכימה במוח, דבר המצביע על חדירות מוגברת של כלי הדם. שחזורים תלת-ממדיים של מוח המכרסם הורכבו על בסיס אזורי T1 בעצימות יתר המתאימה לחדירות כלי הדם, מה שהופך את נפח דליפת גדוליניום במוח.

חשוב לזכור כי ניטור פיזי יומי של העכברים לאחר מתן CART19, יחד עם דימום היקפי, יהיה האינדיקטור הטוב ביותר להמשיך עם MRI להערכה מלאה של כל שינוי במוח המעיד על CRS או רעילות עצבית. טכנולוגיה זו ישימה באופן נרחב לטיפולים נוספים בתאי CAR-T, ותאפשר למדענים לבדוק ביעילות רעילות פוטנציאלית הנובעת מתאי CAR-T חדשים. מודל מוצע זה הוא קרש קפיצה בהבנת האופן שבו ניתן לנטר, לטפל ולהשתמש ברעילות הקשורה לתאי CAR-T כדי לאמת מודלים חדשים של תאי CAR-T.