Gene Digital Circuits Based on CRISPR-Cas Systems and Anti-CRISPR Proteins

Lifang Yu; Yadan Zhang; Mario  Andrea Marchisio

doi:10.3791/64539

מעגלים דיגיטליים גנטיים המבוססים על מערכות CRISPR-Cas וחלבונים אנטי-קריספר

JoVE Journal
Bioengineering

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Bioengineering

Gene Digital Circuits Based on CRISPR-Cas Systems and Anti-CRISPR Proteins

מעגלים דיגיטליים גנטיים המבוססים על מערכות CRISPR-Cas וחלבונים אנטי-קריספר

Full Text

2,325 Views

10:46 min

October 18, 2022

DOI: 10.3791/64539-v

Lifang Yu*¹, Yadan Zhang*¹, Mario Andrea Marchisio¹

¹School of Pharmaceutical Science and Technology,Tianjin University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

מערכות CRISPR-Cas וחלבונים אנטי-קריספר שולבו בתוכנית של שערים בוליאניים בשמרי אפייה (Saccharomyces cerevisiae). המעגלים הלוגיים הקטנים החדשים הראו ביצועים טובים והעמיקו את ההבנה של גורמי שעתוק מבוססי dCas9/dCas12a והתכונות של חלבונים אנטי-קריספר.

הפרוטוקול שלנו מסביר כיצד לתכנן, לבנות ולנתח מעגלים דיגיטליים של גנים של שמרים המשתמשים במערכות CRISPR dCas מסוג שתיים וחמש ובחלבוני האנטי-קריספר המתאימים. זה הרכבה להישאר כי זה אוסף אפס נהלים סטנדרטיים כדי להרכיב ולבדוק רשתות תמלול סינתטי בשירותים. כדי להתחיל, הכינו תערובת תגובה המכילה 20 עד 40 ננוגרם של תבנית DNA, מיקרוליטר אחד של פריימר קדמי, מיקרוליטר אחד של פריימר הפוך, חמישה מיקרוליטרים של תערובת DNTP, 0.5 מיקרוליטר של DNA פולימראז, 10 מיקרוליטרים של חיץ תגובת DNA פולימראז 5x, ומים מזוקקים פעמיים עד לנפח כולל של 50 מיקרוליטר.

להגביר את רצפי ה- DNA באמצעות תוכנית ה- PCR touchdown על thermocycler כמתואר בכתב היד. בודדו את מוצרי ה-PCR באמצעות אלקטרופורזה בג'ל ודללו את רצפי ה-DNA מג'ל האגרוז באמצעות ערכת מיצוי ג'ל DNA. באמצעות שיטת ההרכבה של גיבסון, הכניסו את מוצרי ה-PCR המטוהרים לווקטור המעבורת החתוך-פתוח על ידי הכנסת תערובת הדנ"א השקולה בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos