Name: צינור לאפיון מומי לב מבניים בעכבר העוברי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-16T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: למד שיטות אבחון מתקדמות למומי לב מבניים בעכבר העוברי באמצעות אקוקרדיוגרפיה עוברית לא פולשנית, נקרופסיה ומיקרוסקופיה קונפוקלית אפיסקופית ליצירת תלת-ממד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wu, W., He, J., Shao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+trend+of+congenital+heart+disease+at+the+global%2C+regional%2C+and+national+level%2C+1990-2017%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality trend of congenital heart disease at the global, regional, and national level, 1990-2017.</a> Medicine. 99 (23), Baltimore. e20593(2020).</li>
<li>vander Linde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+prevalence+of+congenital+heart+disease+worldwide%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Birth prevalence of congenital heart disease worldwide: a systematic review and meta-analysis).</a> Journal of the American College of Cardiology. 58 (21), 2241-2247 (2011).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Racial+differences+in+infant+mortality+attributable+to+birth+defects+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research.+Part+A%2C+Clinical+and+Molecular+Teratology%22%5BJournal%5D)">Racial differences in infant mortality attributable to birth defects in the United States.</a> Birth Defects Research. Part A, Clinical and Molecular Teratology. 76 (10), 706-713 (1989).</li>
<li>Patel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+noncardiac+and+genetic+abnormalities+in+neonates+undergoing+cardiac+operations%3A+Analysis+of+the+society+of+thoracic+surgeons+congenital+heart+surgery+database%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Prevalence of noncardiac and genetic abnormalities in neonates undergoing cardiac operations: Analysis of the society of thoracic surgeons congenital heart surgery database.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 102 (5), 1607-1614 (2016).</li>
<li>Pierpont, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+basis+for+congenital+heart+disease%3A+Revisited%3A+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Genetic basis for congenital heart disease: Revisited: A scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation. 138 (21), e653-e711 (2018).</li>
<li>Krishnan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+detailed+comparison+of+mouse+and+human+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">A detailed comparison of mouse and human cardiac development.</a> Pediatric Research. 76 (6), 500-507 (2014).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrogating+congenital+heart+defects+with+noninvasive+fetal+echocardiography+in+a+mouse+forward+genetic+screen%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation.+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Interrogating congenital heart defects with noninvasive fetal echocardiography in a mouse forward genetic screen.</a> Circulation. Cardiovascular Imaging. 7 (1), 31-42 (2014).</li>
<li>Liu, X., Tobita, K., Francis, R. J., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+techniques+for+visualizing+and+phenotyping+congenital+heart+defects+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research.+Part+C%2C+Embryo+Today%3A+Review%22%5BJournal%5D)">Imaging techniques for visualizing and phenotyping congenital heart defects in murine models.</a> Birth Defects Research. Part C, Embryo Today: Review. 99 (2), 93-105 (2013).</li>
<li>Tsuchiya, M., Yamada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+histological+3D-imaging%3A+episcopic+fluorescence+image+capture+is+widely+applied+for+experimental+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Anomalies+%28Kyoto%22%5BJournal%5D)">High-resolution histological 3D-imaging: episcopic fluorescence image capture is widely applied for experimental animals.</a> Congenital Anomalies (Kyoto. 54 (4), 250-251 (2014).</li>
<li>Yu, Q., Tian Leatherbury,, Lo, X., W, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+assessment+of+fetal+mice+by+in+utero+echocardiography%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular assessment of fetal mice by in utero echocardiography).</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 34, 741-752 (2008).</li>
<li>Rosenthal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+high+resolution+three-dimensional+reconstruction+of+embryos+with+episcopic+fluorescence+image+capture%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research.+Part+C%2C+Embryo+Today%3A+Review%22%5BJournal%5D)">Rapid high resolution three-dimensional reconstruction of embryos with episcopic fluorescence image capture.</a> Birth Defects Research. Part C, Embryo Today: Review. 72 (3), 213-223 (2004).</li>
<li>Weninger, W. J., Mohun, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotyping+transgenic+embryos%3A+a+rapid+3-D+screening+method+based+on+episcopic+fluorescence+image+capturing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Phenotyping transgenic embryos: a rapid 3-D screening method based on episcopic fluorescence image capturing.</a> Nature Genetics. 30 (1), 59-65 (2002).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים בכתב יד זה.

עכברים מהונדסים גנטית שימשו להבנת הפתומנגנונים של מומי לב מולדים. הפרוטוקולים שאנו מספקים במחקר זה מנסים לייעל ולתקנן את תהליך הערכת מומי הלב של העובר. עם זאת, ישנם שלבים קריטיים שיש לציין במהלך הפרוטוקול. עוברי עכבר גדלים באופן משמעותי במהלך כל יום של הריון, ואת הזמן הנכון לקצור עכבר ניתן לקבוע על ידי ביצוע אקו לב עוברי במדויק. ניתן להשתמש באקו לב עוברי כדי לסנן את הפתולוגיה הקרדיווסקולרית של העובר. תמונה דו-ממדית מאפשרת זיהוי אנטומיה ותפקוד לב לא תקינים, בעזרת דופלר צבע לבדיקת זרימת הדם ואיתור תקשורת בין חדרי הלב או יצ...

מחלות לב מולדות (CHDs) הן המומים המולדים הנפוצים ביותר בילוד 1,2, המשפיעות על כ-0.8%-1.7% מהיילודים וגורמות לתמותה ותחלואה משמעותית בילוד3. אטיולוגיה גנטית מסומנת בחוזקה עם CHDs 4,5. מודלים של עכברים מהונדסים גנטית שימשו באופן נרחב כדי להבין את המורכבות של CHDs ואת המנגנונים הגורמים להם עקב עכברים בעלי לבבות בעלי ארבעה חדרים ורצפי DNA התפתחותיים לבביים דומים בעכברים ובעוברים אנושיים6. זיהוי הפנוטיפ של מוטציות העכבר הוא הצעד הראשון הבסיסי באפיון תפקודו של גן היעד. מודלים עכבריים המבטאים השפעות מינון גנים, שבהם מוטציה גנטית אחת יכולה לגרום לספקטרום של פגמים לבביים המחקים CHDs אנושיים, חשובים להבנת המורכבות של CHDs והמנגנונים הגורמים להם.
מאמר זה מתאר צינור לאפיון פנוטיפים לבביים במודלים של עכברים. השיטות המיושמות משתמשות באקו לב עוברי 7, ואחריו נקרופסי והיסטופתולוגיה ECM7,8, שיכולים להציג את האנטומיה המפורטת של התפתחות פנוטיפים לבביים. אקו לב עוברי הוא שיטה לא פולשנית המאפשרת הדמיה ישירה של עוברים מרובים ברזולוציית הדמיה סבירה. בנוסף, אקו לב עוברי מספק קביעה מהירה של המספר הכולל של עוברים בהמלטה, שלבי התפתחותם, ואת הכיוון והמיקום היחסי בקרן הרחם. באמצעות זרימת דופלר/צבע ספקטרלית, ניתן לזהות עוברים חריגים על סמך המבנה, ההפרעה ההמודינמית, הגבלת הגדילה או התפתחות ההידרופים. מכיוון שמחקר אקו לב עוברי הוא טכניקה לא פולשנית, ניתן להשתמש בו כדי לסרוק מספר ימים ולצפות בשינויים בהמודינמיקה או במורפולוגיה של הלב. השגת הדמיה איכותית של אקו לב עוברי דורשת תרגול ומיומנות, שכן מומי לב ספציפיים עלולים להחמיץ בשל חוסר ניסיון וידע. בגלל זה, ניתוח סופי יותר של מורפולוגיה הלב ניתן להשיג באמצעות שילוב של נקרופסי היסטופתולוגיה ECM. נקרופסי מספק הדמיה ישירה של מבנה הקשת, היחסים היחסיים של אבי העורקים ועורק הריאה, גודל החדרים והאטריה, מיקום הלב ביחס לחזה והמבנים הברונכופולמונריים. עם זאת, תכונות פנים כגון שסתומי הלב ועובי הדופן עשויים להיות קשים להערכה באמצעות נקרופסי בלבד. לכן, היסטופתולוגיה ECM מומלץ לאבחנה חד משמעית. היסטופתולוגיה ECM היא טכניקת הדמיה ברזולוציה גבוהה המאפשרת שחזור דו-ממדי ותלת-ממדי של מחסנית התמונות9. תמונות אלה מתקבלות באמצעות הדמיה פלואורסצנטית אפיסקופית סדרתית של דגימה משובצת פרפין כפי שהיא חתך דק במרווח קבוע על ידי מיקרוטום אוטומטי. שלא כמו היסטולוגיה קלאסית, תמונות נלכדות כמקטע לפני שהוא נחתך מהבלוק כך שכל התמונות נלכדות באותה מסגרת התייחסות. מסיבה זו, מחסנית התמונות הדו-ממדית המיוצרת על ידי היסטופתולוגיה ECM עשויה להיות משוחזרת בקלות ובאמינות בשלושה ממדים. הדבר נעשה באמצעות מציג DICOM, המאפשר הדמיה תלת ממדית של התמונות בשלושת המישורים האנטומיים: קורונלי, קשת ורוחבי. משחזורים תלת-ממדיים ברזולוציה גבוהה אלה, ניתן לבצע אבחנה לבבית סופית. היישום של שלוש שיטות הדמיה שונות אלה, בנפרד או בשילוב, יכול לספק אפיון מדויק של מומי לב מבניים בעוברי עכברים.

<table><tbody><tr><td>1x תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), PH7.4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינורות אפנדורף (או בקבוקון מועדף לאחסון רקמות)</td> <td>SealRite</td><td>1615-5599</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פורמלין פוספט 10% חוצץ</td><td>פישר כימיקל</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>100% אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>16% פרפורמלדהיד (PFA) מקבע&nbsp;</td><td>ThermoScientific</td><td>28908</td><td>4% ריכוז עבודה מוכן טרי ב-1x PBS ב-4 מעלות; C</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>6&ndash; צלחת 12 באר או בקבוקון 20 מ"ל&nbsp; לאחסון עוברים</td><td>פלקון</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ניתוח&nbsp;</td><td>Leica</td><td>MDG36</td><td></td></tr><tr><td>סיכות חיתוך (דרגה A1 או A2)</td><td>FST</td><td>26002-15</td><td></td></tr><tr><td>צלחת חיתוך&nbsp;</td><td>צלחת פטרי FB0875713 FST</td><td></td><td>עם בסיס פרפין</td></tr><tr><td>תבניות הטבעה</td><td>Sakura</td><td>4133</td><td></td></tr><tr><td>מספריים צרות במיוחד (10.5 ס"מ)</td> <td>FST</td><td>14088-10</td><td>1&ndash; 2 זוגות&nbsp;</td></tr><tr><td>יישום פיג'י/תמונה J</td><td>NIH</td><td></td><td>Fiji.sc</td></tr><tr><td>קצה עדין (0.05 מ"מ x 0.01 מ"מ) מלקחיים לניתוח (11 ס"מ)</td> <td>FST</td><td>11252-00</td><td>2 זוגות</td></tr><tr><td>מלקחיים חמים&nbsp;</td><td>FST</td><td>11252-00</td><td>לכיוון עוברים</td></tr><tr><td>סמן תעשייתי לבלוקי שעווה&nbsp;</td><td>Sharpie</td><td>2003898</td><td>מעוצב לשימוש במעבדה</td></tr><tr><td>Jenoptik ProgRes C14plus מיקרוסקופ מצלמה&nbsp;</td><td>Jenoptik</td><td>017953-650-26</td><td></td></tr><tr><td>Jenoptik ProgRess CapturePro רכש תוכנה</td><td>Jenoptik</td><td></td><td>jenoptik.com</td></tr><tr><td>זכוכית גדולה&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S111053</td><td>להמסת פרפין</td></tr><tr><td>Leica M165 FC מיקרוסקופ דו-עיני (אופטיקה זום 16.5:1)</td><td>Leica</td><td>M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>OsiriX MD גרסה 12.0</td><td>OsiriX</td><td></td><td>osirix-viewer.com&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraplast הטמעת שעוות פרפין</td><td>Millipore Sigma</td><td>1003230215</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית קטנה</td><td>Fisher Scientific</td><td>S111045</td><td></td></tr><tr><td>כף קטנה ומחוררת (14.5 ס"מ)</td> <td>FST</td><td>10370-17</td><td></td></tr><tr><td>מספריים ישרים Vannas (4&ndash; 8 מ"מ)</td> <td>FST</td><td>15018-10</td><td>זוג</td></tr><tr><td>ביומיקרוסקופ אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד Vevo2100</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc.</td><td>Vevo2100</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>פישר כימיקל</td><td>UN1307</td><td></td></tr></tbody></table>

צינור לאפיון מומי לב מבניים בעכבר העוברי

A Pipeline to Characterize Structural Heart Defects in the Fetal Mouse

מחלות לב מולדות (CHDs) הן הגורמים העיקריים למוות תינוקות בארצות הברית. בשנות השמונים ולפני כן, רוב החולים עם CHD בינוני או חמור מתו לפני הבגרות, עם התמותה המקסימלית בשבוע הראשון לחיים. התקדמות יוצאת דופן בטכניקות כירורגיות, גישות אבחון וניהול רפואי הובילו לשיפור ניכר בתוצאות. כדי לענות על הצרכים המחקריים הקריטיים של הבנת מומי לב מולדים, מודלים של מורין סיפקו פלטפורמת מחקר אידיאלית, מכיוון שיש להם אנטומיה דומה מאוד לבני אדם ושיעורי הריון קצרים. השילוב של הנדסה גנטית עם כלי פנוטיפ בעלי תפוקה גבוהה איפשר שכפול ואבחון של מומי לב מבניים כדי להבהיר עוד יותר את המסלולים המולקולריים שמאחורי CHDs. השימוש באקוקרדיוגרפיה עוברית לא פולשנית כדי לסנן את הפנוטיפים הלבביים במודלים של עכברים יחד עם הנאמנות הגבוהה של לכידת תמונה פלואורסצנטית אפיסקופית (EFIC) באמצעות היסטופתולוגיה של מיקרוסקופ קונפוקלי אפיסקופי (ECM) עם שחזורים תלת ממדיים (3D) מאפשרים מבט מפורט על האנטומיה של מומי לב מולדים שונים. פרוטוקול זה מתאר זרימת עבודה מלאה של שיטות אלה כדי לקבל אבחנה מדויקת של מומי לב מולדים. יישום פרוטוקול פנוטיפ זה על אורגניזמים מודל יאפשר אבחון מדויק של CHD, ויניב תובנות לגבי המנגנונים של CHD. זיהוי המנגנונים הבסיסיים של CHD מספק הזדמנויות לטיפולים והתערבויות פוטנציאליים.

עוברי עכברים עם פגמים המודינמיים משמעותיים נמצאו קטלניים עובריים. ניתן לזהות מגוון רחב של CHDs באמצעות אקו לב עוברי בעל תפוקה גבוהה ולא פולשנית באמצעות תצוגות שונות (איור 1).
מומים מחיצתיים: ה- CHDs הנפוצים ביותר הם פגמים מחיצתיים כגון פגם מחיצה חדרית (VSD), פגם מחיצה אטריובנטריקולרי (AVSD), ופגם מחיצה פרוזדורי (ASD)1. ניתן להמחיש בקלות VSD או AVSD באמצעות תמונות דו-ממדיות ותמונות זרימת צבע. ניתן לזהות בקלות זרימת דם דרך הח...

מאמר זה מפרט את שיטות האבחון של מחלת לב מולדת (CHD) באמצעות אקוקרדיוגרפיה עוברית, נקרופסיה, ולכידת תמונה פלואורסצנטית אפיסקופית (EFIC) באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי אפיסקופי (ECM) ואחריו שחזור תלת ממדי (3D).

Congenital heart diseases (CHDs) are major causes of infant death in the United States. In the 1980s and earlier, most patients with moderate or severe ...

פרוטוקול זה מתאר שיטות חדשניות להפקת נתוני הדמיה ברזולוציה גבוהה לאבחון מומי לב מולדים. אנו מבצעים הערכות תפקודיות עם אקוקרדיוגרפיה עוברית לא פולשנית בשילוב עם נקרופסיה, ולאחר מכן היסטופתולוגיה אפיסקופלית של מיקרוסקופ קונפוקלי כדי ליצור ערימות תמונה דו-ממדיות סדרתיות ושחזורים תלת-ממדיים לאבחון CHD מקיף. שיטה זו יכולה להבהיר את השינויים האנטומיים המפורטים לא רק במחלות לב מולדות, אלא גם יכולה לשמש לחקר מומים מולדים מבניים באיברים אחרים, כולל מומים בפנים גולגולתיים, אנומליות בגפיים ובשלד, כמו גם פגמים במוח ובאיברים קרביים אחרים.מי שידגימו את הנהלים האלה יהיו מייגן הולברוק, קרלה גוזמן, פייז'או ז'אנג ובנג'מין גלנון, כולם חוקרים מהמעבדה שלנו. לאחר הכנת העכבר להליך, חממו את ג'ל האולטרסאונד לטמפרטורת הגוף ומרחו אותו בנדיבות על אזור ההדמיה. לאחר מכן הניחו את המתמר על הבטן בכיוון מישור אופקי וזהו את שלפוחית השתן על המסך.לאחר זיהוי שלפוחית השתן, סרקו גולגולת משלפוחית השתן, חפשו את העובר וקבעו את גיל ההריון על ידי מדידת הכתר לאורך העכוז. לאחר מכן, השתמש בדופלר הצבע כדי לנתח את זרימת הדם מהלב. כדי לאפשר חדירה מקובעת לאיברים הפנימיים, יש לבצע חתכים בבית החזה ובבטן הצידיים באמצעות מלקחיים או מספריים מנתחים ולאפשר לדגימה להתקבע לפחות 24 שעות בחדר קר.לאחר מכן הגדר את התוכנה כדי לשמור את התמונות עם שם, כולל זיהוי הדגימה, הגדלת המיקרוסקופ ותוכן התמונה. הצמידו את הדגימה דרך פרקי הידיים והקרסוליים. לפני חיתוך העור לאורך הציר החציוני לכיוון הזנב, הרימו את העור באמצע הצוואר באמצעות מלקחיים וחתכו את העור לכיוון שני בתי השחי בעזרת המספריים.ואז לחתוך את העור מן הטבור אל הרגליים. לאחר הטמעת הדגימות, התאם את מיקום הקרנת הלייזר למרכז הדגימה על המסך וכוונן את ידית הזום ל- 20x. כדי לייעל את הרזולוציה, הגדר את הרווח ל- 1, 250V.הגדל את האזור הכחול באמצעות ידית המיקוד, ולאחר מכן אפס את הרווח לכ- 750 וולט לצורך הדמיה. לאחר מכן, החלף את שיטת החיתוך לאוטומטית. הגדר את העובי לסביבות 50 מיקרומטר והפעל את המגלשות.הפסיקו לחתוך כאשר הריאות ודרכי הנשימה גלויות. בחר עובי חיתוך בין שמונה ל -10 מיקרומטר ועצור את התצוגה החיה פתוחה. פתח את Microtome Communicator כדי להתחיל בהדמיה.ודא שתיקיית האחסון הזמני ריקה לפני איסוף תמונות. עצור את אוסף התמונות כאשר לא נראה מבנה קשיח. הפק פלט של הקבצים המאוחסנים הזמניים בסדרת תמונות TIFF אחת.לשחזור תמונה תלת-ממדית, גרור ושחרר את קובצי התמונה לתוך תוכנת עיבוד התמונה. לאחר הופעת החלון המוקפץ, בחר את הקישורים או הקבצים שברצונך להעתיק למסד הנתונים. לאחר פתיחת הקובץ, לחץ על תפריט כלי שחזור תלת מימד 2D מסרגל הכלים ובחר 3D MPR.לרזולוציית פיקסל X ורזולוציית פיקסל Y, הזן את רזולוציית התמונה על-ידי מתן הזום המשמש במהלך הדמיית ECM. עבור מרווח הזמן של הפרוסה, הזן את עובי הפרוסה המשמש לחיתוך במהלך הדמיית ECM. לאחר מכן, השתמש בכלי WWWL כדי להתאים את רוחב החלון ואת רמת החלון.לחצו וגררו את הכלי בתמונה כלפי מעלה כדי להקטין את בהירות התמונה וכלפי מטה כדי להגדיל אותה. לחצו וגררו את הכלי בתמונה ימינה כדי להקטין את ניגודיות התמונה ואת המילה השמאלית כדי להגדיל אותה. גררו את התמונות למיקומים הרצויים בעזרת הכלי גלילה.השתמשו בכלי זום להגדלה או כיווץ של התמונה ובכלי סיבוב כדי לסובב את התמונה כרצונכם. כעת, לחץ וגרור את הציר הצבעוני של החלונית הראשונה. שימו לב כיצד סיבוב ציר זה משנה את הכיוון של שתי החלוניות האחרות.סובבו את שלושת צירי החלונית עד ששלושת הלוחות ייצגו את התצוגה העטרתית, הסגיטלית והרוחבית של הדגימה. לאחר שכל שלושת הלוחות ממוקמים, מכוונים ומובהרים כראוי, לחץ על החלונית המייצגת את תצוגת העטרה. לאחר מכן לחץ על ייצוא סרטים בצד ימין של שורת התפריטים.לחץ על אצווה וגרור את המחוונים מ ואל כדי להקיף את כל אזור העניין. למרווחי זמן, בחר באפשרות זהה לעובי ושמור את הווידאו המציין את כיוון התצוגות. ההד מראה מחיצת חדר שלמה ללא שאנט תוך ורידי ועורקים גדולים קשורים נורמליים בבקרה הרגילה, שאושרה על ידי ECM.התצוגה הקדמית מדגימה תקשורת בין LA, RA, LV ו- RV הן בהד והן ב- ECM, מה שמרמז על פגם מחיצה אטריובנטריקולרי. זרימת הצבע מדגימה את הזרימה על פני LV ו- RV המציינת פגם מחיצה חדרי. אקו ו-ECM הדגימו מוצא כפול של החדר הימני עם פגם מחיצה חדרי בין LV ל-RV עם עורקים גדולים זה לצד זה.אבחון אולטרסאונד של truncus arteriosus מתמשך מדגים תקשורת בין LV ו- RV עם מערכת זרימה אחת העוקפת את שני החדרים, שאושרה גם על ידי ECM בשלב E14.5. החלקים שנאספו מהיסטולוגיה ECM יכולים להיות מעובדים עוד יותר עבור immunostaining, hematoxylin ו eosin צביעה ואפילו מיצוי חומצות גרעין עבור גנוטיפ פרופיל שעתוק או מיצוי חלבונים עבור ניתוח proteomic. התמונות משחזור תלת מימדי יכולות להיות מעובדות עוד יותר להערכות של היקפים כמותיים כגון שטח או נפח.פנוטיפ מדויק לזיהוי פגמים באנטומיה הקרדיווסקולרית חיוני לביסוס מודלים עכבריים מהונדסים גנטית ומוטנטים של מחלות לב מולדות כדי להבהיר את הפתומנגנונים של מחלות לב מולדות. זה יכול להוביל להזדמנויות פוטנציאליות לפתח טיפולים והתערבות כדי לשפר את התוצאה הקלינית בחולים עם מחלת לב מולדת.

a-pipeline-to-characterize-structural-heart-defects-in-the-fetal-mouse

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מוות עובר ולידה הוא תכונה נפוצה כאשר לומדים שינויים גנטיים המשפיעים על התפתחות לב. הדמית אולטרסאונד בתדר גבוה השתפרה רזולוצית 2-D ויכולה לספק מידע מצוין על התפתחות מוקדמת ולב היא שיטה אידיאלית כדי לזהות את ההשפעה על מבנה ותפקוד לב לפני המוות.

אקו העוברי Murine

אולטרסאונד בתדירות גבוה במיוחד הוא כלי הדמיה חיה רב עוצמה כדי לבחון מומים לב בבעלי חיים קטנים. noninvasiveness שלו מאפשר שמירה על המצב הפיזיולוגי של עוברים. בזאת, אנו מציגים את השימוש באולטרסאונד M-mode כדי למדוד את קצב הלב של עוברים בE18.5 ברחם.

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית

אנו מתארים סדרה של שיטות להזריק צבעים, וקטורי DNA, וירוסים, ותאים במטרה לעקוב אחר שני גורל התא והפנוטיפ של תאי אנדוגני והמורכבים שמקורם בתאים עובריים או pluripotent בעוברי עכברים ביום עוברי (E) 9.5 ושלבים מאוחרים יותר של פיתוח.

תיוג תא והזרקה בפיתוח לבבות עכבר עוברי

מוטציות המובילות למומי לב מולדים מפיקות תועלת מחקירה in vivo של מבנה הלב במהלך ההתפתחות, אך מחקרים מבניים ברזולוציה גבוהה בלב העוברי של העכבר הם מאתגרים מבחינה טכנית. כאן אנו מציגים שיטת אימונופלואורסצנציה וניתוח תמונה חזקה להערכת מבנים ספציפיים לקרדיומיוציטים בלב העכבר המתפתח.

ניתוח של Cardiomyocyte פיתוח באמצעות Immunofluorescence בלב העכבר עוברי

אולטראסאונד בתדירות גבוהה הדמיה של העכבר עוברית השתפרה דימות ברזולוציה, יכול לספק אפיון פולשני מדויק של התפתחות הלב, פגמים מבניים. פרוטוקול המתוארים במסמך זה מיועדת לביצוע בזמן אמת עוברי עכברים אקוקרדיוגרפיה ויוו.

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

מחקר זה משתמש בטכניקה מיקרוסקופ (LSFM) אור גיליונות פלורסצנטיות דו-צדדית תאורה בשילוב עם קרחת אופטי ללמוד את הלב מאתר.

מיקרוסקופ אור גיליונות פלורסצנטיות לחקר הלב מאתר

אנו מציגים את הפרוטוקולים לבחון התפתחות הלב העכבר באמצעות מיקרוסקופ פלורסנטי הר שלם על העכבר עוברי גזור מן חדרית ספציפי MLC-2v-tdTomato כתב טוק-אין עכברים. שיטה זו מאפשרת לנו לבצע בכל שלב של היווצרות חדרית במהלך התפתחות הלב העכבר מבלי מהגידולים שיטות מעבדה הומנית.

ניתוח התפתחות קאמרית הלב במהלך מופרה העכבר באמצעות כל הר Epifluorescence

בפרוטוקול זה, אנו מתארים הליכים באיכות ובכמת לנתח פנוטיפים התפתחותיים בעכברים הקשורים למומים מולדים לב.

ניתוח של פגמים לב מולדים בעוברי עכבר באמצעות שיטות היסטולוגית איכותית וכמותית

כאן, אנו מתארים זרימת עבודה מתאם עבור כריתה, לחץ, קיבעון, והדמיה של שסתום הריאות מורין כדי לקבוע את הקונפורמציה ברוטו ומבני מטריצה חוץ תאיים מקומיים.

ניתוח ועיבוד מדגם להדמיה קורלטיבית של שסתום הריאות מורין

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הערכה אקוקרדיוגרפית של מורפולוגיה של חדר שמאל, תפקוד וזרימת דם כלילית בעכברים בני 7 ימים.

אפיון אקוקרדיוגרפי של מבנה החדר השמאלי, תפקודו וזרימה כלילית בעכברים ילודים

למד שיטות אבחון מתקדמות למומי לב מבניים בעכבר העוברי באמצעות אקוקרדיוגרפיה עוברית לא פולשנית, נקרופסיה ומיקרוסקופיה קונפוקלית אפיסקופית ליצירת תלת-ממד.

צינור לאפיון מומי לב מבניים בעכבר העוברי

גלה סרטונים נוספים