Name: הדמיה של מיטופגיה עם צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: למד הדמיה חיה של מיטופגיה בתאי פיברובלסט עובריים של עכבר באמצעות צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום. שיטה זו מאפשרת מחקר של בקרת איכות מיטוכונדריה ומחלות קשורות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה בחלקה על ידי תוכנית המחקר והפיתוח הלאומית של סין (2017YFA0105601, 2018YFA0107102), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81970333,31901044,), והתוכנית לפרופסור למינוי מיוחד במוסדות להשכלה גבוהה בשנחאי (GZ2020008).

1. תרבית תאים ומעבר
הערה: הפרוטוקול מתואר באמצעות פיברובלסטים עובריים (MEFs) של עכברים בתרבית שגרתית כדוגמה.
<ol><li>תרבית תאי MEF במנות תרבית תאים בקוטר 10 ס"מ עם 10 מ"ל של מדיום הנשר המתוקן (DMEM) של דולבקו. דגירה ב-37°C ו-5% CO2 וניטור התאים תחת מיקרוסקופ בהגדלה של פי 100.</li>
	<li>בצע העברת תאים שגרתית.<ol><li>כאשר התאים מגיעים למפגש של 80%-90% (כל 3 ימים), שטפו את התאים עם 2 מ"ל של תמיסת מלח עם מאגר פוספטים (DPBS) של דולבקו. לאחר מכן להוסיף 2 מ"ל של 0.05% טריפסין-EDTA במשך דקה אחת כדי לנתק את התאים, ואחריו 2 מ"ל של DMEM כדי לעצור את הפעולה של טריפסין-EDTA. צנטריפוגה של מתלה התא ב 100 x g במשך 3 דקות להשעות את גלולת התא ב 1 מ"ל של DMEM.</li>
		<li>ספרו את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי ושקופיות תא ספירת תאים (ראו טבלת חומרים), ולאחר מכן חסן 1.5 x 106 תאים לתוך צלחת תרבית תאים חדשה בגודל 10 ס"מ המכילה 10 מ"ל של DMEM.</li>
	</ol></li>
	<li>עבור הבדיקה mitophagy, להכין השעיה התא כמו בשלב 1.2.1. דלל את מתלה התא ל-1 x 105 תאים למ"ל ב-DMEM טרי.</li>
	<li>הוסיפו 2 מ"ל מתלי התאים המדוללים לצלחת קונפוקלית בקוטר 20 מ"מ (ראו טבלת חומרים) ונערו את צלחת התרבית ב"צלב". לדגום את צלחת תרבית התאים באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 במשך 24 שעות.</li>
</ol>2. כתמים במיטוכונדריה
<ol><li>הסר את תמיסת המניות של הצבע המיטוכונדריאלי הירוק-פלואורסצנטי וצבע ליזוזום פלואורסצנטי אדום (ראו טבלת חומרים) מהמקפיא בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>הכן פתרונות עבודה של הצבעים על ידי דילול פתרונות המלאי 1:1,000 ב- DMEM וערבב היטב. לדוגמה, הוסף 2 μL כל אחד של 1 mM צבע מיטוכונדריאלי וצבע ליזוזום ל 2 מ"ל של DMEM כדי לקבל ריכוז עבודה של 1 μM עבור שני הצבעים.</li>
	<li>מוציאים את המדיום מצלחת התרבית הקונפוקלית (שלב 1.4). הוסף 1 מ"ל של תמיסת צביעה (מוכן בשלב 2.2) כדי לכסות את התאים. מניחים את צלחת תרבית התאים באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 למשך 20-30 דקות.</li>
</ol>3. הדמיה קונפוקלית
<ol><li>הכינו 1 ליטר של חיץ קרבס-הנסלייט (KH) (138.2 mM NaCl, 3.7 mM KCl, 0.25 mM CaCl 2, 1.2 mM KH 2 PO 4, 1.2 mM MgSO 4.7H2O, 15 mM גלוקוז ו-21.85 mM HEPES; pH סופי 7.4) ואחסנוב-4 °C (עד חודש אחד).</li>
	<li>ביום ההדמיה הקונפוקלית, מוציאים מראש את חיץ ה-KH מהמקרר ומחממים אותו מראש לטמפרטורת החדר (20 עד 25 מעלות צלזיוס).</li>
	<li>הגדר את הפרמטרים של תוכנת ההדמיה של מיקרוסקופיה קונפוקלית (ראה טבלת חומרים): עבור תמונות עירור כפולות, השתמש בעירור רציף ב- 488 ננומטר ו- 543 ננומטר, ואסוף פליטה ב- 505-545 ננומטר ו- >560 ננומטר, בהתאמה. הערה: הגדר את הגדרות ההדמיה באופן הבא. מצב סריקה: מסגרת; מהירות: 9; ממוצע: מספר, 1; רווח: 450 עד 600; חור סיכה: 30 עד 200; לייזר: <10%. עדיף להפעיל את תוכנת ההדמיה תחילה ולאחר מכן להפעיל לחלוטין את לייזר 488 ננומטר. יש להפעיל ולייצב את הלייזר בקוטר 543 ננומטר למשך 3-5 דקות לפני השימוש (איור 1A).</li>
	<li>הסר את מדיום התרבית המכיל את הצבע מהאינקובטור (שלב 2.3) והוסף 1 מ"ל של חיץ KH לצלחת.</li>
	<li>כדי לגרום למיטופגיה, טפלו בתאים עם קרבוניל ציאניד-4-(טריפלואורומתוקסי) פנילהידרזון (FCCP) ב-1 מיקרומטר (ריכוז סופי) במאגר KH למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר, ומיד המשיכו לדמות את התאים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי.</li>
	<li>יש למרוח כמות מתאימה של שמן על החלק העליון של עדשת השמן 63x (ראו טבלת חומרים). הניחו את דגימת התא על שלב הדגימה של המיקרוסקופ הקונפוקלי והזיזו אותה ישירות מעל העדשה האובייקטיבית.</li>
	<li>השתמש בתוכנת ההדמיה כדי למצוא את הדוגמה על-ידי לחיצה על הכרטיסיה איתור בפינה השמאלית העליונה של ממשק התוכנה (איור 1B). בחרו ערכת מסננים ירוקה לניסוי.</li>
	<li>השתמש בידית הכוונון הגסה כדי להתמקד במהירות על-ידי הזזת העדשה האובייקטיבית למעלה ולמטה. לאחר שדגימת התא נראית בבירור דרך העינית, חפש ומקד את האזור של תאים בודדים והזז אותו למרכז שדה הראייה.</li>
	<li>לחץ על רכישה הכרטיסייה בפינה השמאלית העליונה בממשק התוכנה כדי לקבל תמונות. בחר רק את ערוץ 488 ננומטר ואת רזולוציית המסגרת 1024 x 1024 לתצוגה מקדימה.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסייה Live בפינה הימנית העליונה כדי להתחיל סריקה בשידור חי. כוונן את שדה הראייה לחד ביותר וכוונן את עוצמת הלייזר על-ידי הזזת המחוון שמאלה או ימינה (איור 1A). שמור על הגדרת הרווח מתחת ל-600 כדי למנוע חשיפת יתר.</li>
	<li>התאם את ערך חור הסיכה ל- 156, ערך ההקזת הערך ל- 545 וערך ההסטה הדיגיטלית ל- 0.</li>
	<li>בחר את שדה הראייה הטוב ביותר, בדוק את שני הערוצים (488 ננומטר ו- 543 ננומטר) ובחר ברזולוציית המסגרת 1024 x 1024. לחץ על הצמד כדי לקבל תמונות דו-ממדיות. שמור את התמונות שנרכשו. הערה: לצבע המיטוכונדריה הירוק יש שיא עירור ב-490 ננומטר ושיא פליטה ב-516 ננומטר; זה יכול להיות נרגש באמצעות לייזר 488 ננומטר. לצבע הליזוזום האדום יש שיא עירור ב-576 ננומטר ושיא פליטה ב-590 ננומטר; זה יכול להיות נרגש באמצעות לייזר 543 ננומטר.</li>
</ol>4. ניתוח תמונות
<ol><li>פתח את התמונה שנשמרה באמצעות ImageJ וייבא לתוכה את התמונה הממוזגת.</li>
	<li>ספרו ידנית את מספר הנקודות הצהובות בכל תא, המציינות כי הליזוזום בולע את המיטוכונדריה.</li>
</ol>

<ol><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+mitochondria%3A+evolution%2C+function%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal mitochondria: evolution, function, and disease.</a> Current Molecular Medicine. 14 (1), 115-124 (2014).</li>
<li>Henze, K., Martin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+biology%3A+essence+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evolutionary biology: essence of mitochondria.</a> Nature. 426 (6963), 127-128 (2003).</li>
<li>Kiriyama, Y., Nochi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-+and+intercellular+quality+control+mechanisms+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Intra- and intercellular quality control mechanisms of mitochondria.</a> Cells. 7 (1), (2017).</li>
<li>Rossmann, M. P., Dubois, S. M., Agarwal, S., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+function+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial function in development and disease.</a> Disease Models & Mechanisms. 14 (6), 048912(2021).</li>
<li>Suliman, H. B., Piantadosi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+quality+control+as+a+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial quality control as a therapeutic target.</a> Pharmacological Reviews. 68 (1), 20-48 (2016).</li>
<li>Wong, H. S., Dighe, P. A., Mezera, V., Monternier, P. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+superoxide+and+hydrogen+peroxide+from+specific+mitochondrial+sites+under+different+bioenergetic+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Production of superoxide and hydrogen peroxide from specific mitochondrial sites under different bioenergetic conditions.</a> Journal of Biological Chemistry. 292 (41), 16804-16809 (2017).</li>
<li>Zhao, R. Z., Jiang, S., Zhang, L., Yu, Z. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+electron+transport+chain%2C+ROS+generation+and+uncoupling+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial electron transport chain, ROS generation and uncoupling (Review).</a> International Journal of Molecular Medicine. 44 (1), 3-15 (2019).</li>
<li>Murphy, M. P., Hartley, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+therapeutic+target+for+common+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a therapeutic target for common pathologies.</a> Nature Reviews: Drug Discovery. 17 (12), 865-886 (2018).</li>
<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+quality+control+in+cardiomyocytes%3A+a+critical+role+in+the+progression+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial quality control in cardiomyocytes: a critical role in the progression of cardiovascular diseases.</a> Frontiers in Physiology. 11, 252(2020).</li>
<li>Ma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy%2C+mitochondrial+homeostasis%2C+and+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Mitophagy, mitochondrial homeostasis, and cell fate.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 467(2020).</li>
<li>Kraus, F., Roy, K., Pucadyil, T. J., Ryan, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+regulation+of+the+divisome+for+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Function and regulation of the divisome for mitochondrial fission.</a> Nature. 590 (7844), 57-66 (2021).</li>
<li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics%3A+fission+and+fusion+in+fate+determination+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics: fission and fusion in fate determination of mesenchymal stem cells.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 580070(2020).</li>
<li>Onishi, M., Yamano, K., Sato, M., Matsuda, N., Okamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+physiological+functions+of+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and physiological functions of mitophagy.</a> The EMBO Journal. 40 (3), 104705(2021).</li>
<li>Palikaras, K., Lionaki, E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+mitophagy+in+cellular+homeostasis%2C+physiology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of mitophagy in cellular homeostasis, physiology and pathology.</a> Nature Cell Biology. 20 (9), 1013-1022 (2018).</li>
<li>Khaminets, A., Behl, C., Dikic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin-dependent+and+independent+signals+in+selective+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin-dependent and independent signals in selective autophagy.</a> Trends in Cell Biology. 26 (1), 6-16 (2016).</li>
<li>Fritsch, L. E., Moore, M. E., Sarraf, S. A., Pickrell, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin+and+receptor-dependent+mitophagy+pathways+and+their+implication+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin and receptor-dependent mitophagy pathways and their implication in neurodegeneration.</a> Journal of Molecular Biology. 432 (8), 2510-2524 (2020).</li>
<li>Narendra, D., Tanaka, A., Suen, D. F., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkin+is+recruited+selectively+to+impaired+mitochondria+and+promotes+their+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Parkin is recruited selectively to impaired mitochondria and promotes their autophagy.</a> Journal of Cell Biology. 183 (5), 795-803 (2008).</li>
<li>Lazarou, M., Jin, S. M., Kane, L. A., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+PINK1+binding+to+the+TOM+complex+and+alternate+intracellular+membranes+in+recruitment+and+activation+of+the+E3+ligase+Parkin%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Role of PINK1 binding to the TOM complex and alternate intracellular membranes in recruitment and activation of the E3 ligase Parkin.</a> Developmental Cell. 22 (2), 320-333 (2012).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy+receptor+FUNDC1+regulates+mitochondrial+dynamics+and+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Mitophagy receptor FUNDC1 regulates mitochondrial dynamics and mitophagy.</a> Autophagy. 12 (4), 689-702 (2016).</li>
<li>Ding, W. X., Yin, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy%3A+mechanisms%2C+pathophysiological+roles%2C+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mitophagy: mechanisms, pathophysiological roles, and analysis.</a> Biological Chemistry. 393 (7), 547-564 (2012).</li>
<li>Parzych, K. R., Klionsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+autophagy%3A+morphology%2C+mechanism%2C+and+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+and+Redox+Signaling%22%5BJournal%5D)">An overview of autophagy: morphology, mechanism, and regulation.</a> Antioxidants and Redox Signaling. 20 (3), 460-473 (2014).</li>
<li>Hasegawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagosome-lysosome+fusion+in+neurons+requires+INPP5E%2C+a+protein+associated+with+Joubert+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Autophagosome-lysosome fusion in neurons requires INPP5E, a protein associated with Joubert syndrome.</a> The EMBO Journal. 35 (17), 1853-1867 (2016).</li>
<li>Presley, A. D., Fuller, K. M., Arriaga, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MitoTracker+Green+labeling+of+mitochondrial+proteins+and+their+subsequent+analysis+by+capillary+electrophoresis+with+laser-induced+fluorescence+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B.+Analytical+Technologies+in+the+Biomedical+and+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">MitoTracker Green labeling of mitochondrial proteins and their subsequent analysis by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection.</a> Journal of Chromatography B. Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 793 (1), 141-150 (2003).</li>
<li>Chazotte, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+lysosomes+in+live+cells+with+LysoTracker%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Labeling lysosomes in live cells with LysoTracker.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (2), 5571(2011).</li>
<li>Pickles, S., Vigie, P., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy+and+quality+control+mechanisms+in+mitochondrial+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Mitophagy and quality control mechanisms in mitochondrial maintenance.</a> Current Biology. 28 (4), 170-185 (2018).</li>
<li>Ashrafi, G., Schwarz, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathways+of+mitophagy+for+quality+control+and+clearance+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">The pathways of mitophagy for quality control and clearance of mitochondria.</a> Cell Death and Differentiation. 20 (1), 31-42 (2013).</li>
<li>Berezhnov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+pH+modulates+autophagy+and+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Intracellular pH modulates autophagy and mitophagy.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (16), 8701-8708 (2016).</li>
<li>Takemori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+mitophagy+using+LysoKK%2C+a+7-nitro-2%2C1%2C3-benzoxadiazole-%28arylpropyl%29benzylamine+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Mitochondrion%22%5BJournal%5D)">Visualization of mitophagy using LysoKK, a 7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole-(arylpropyl)benzylamine derivative.</a> Mitochondrion. 62, 176-180 (2022).</li>
<li>Maeda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+new+live+imagers+MitoMM1%2F2+for+mitochondrial+visualization%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">The new live imagers MitoMM1/2 for mitochondrial visualization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 562, 50-54 (2021).</li>
<li>Feng, X. R., Yin, W., Wang, J. L., Feng, L., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy+promotes+the+stemness+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mitophagy promotes the stemness of bone marrow-derived mesenchymal stem cells.</a> Experimental Biology and Medicine. 246 (1), 97-105 (2021).</li>
<li>Chu, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiolipin+externalization+to+the+outer+mitochondrial+membrane+acts+as+an+elimination+signal+for+mitophagy+in+neuronal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cardiolipin externalization to the outer mitochondrial membrane acts as an elimination signal for mitophagy in neuronal cells.</a> Nature Cell Biology. 15 (10), 1197-1205 (2013).</li>
<li>Sentelle, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ceramide+targets+autophagosomes+to+mitochondria+and+induces+lethal+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Ceramide targets autophagosomes to mitochondria and induces lethal mitophagy.</a> Nature Chemical Biology. 8 (10), 831-838 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

הפרוטוקול המתואר כאן מספק שיטה להערכה ולניטור התהליך הדינמי של מיטופגיה בתאים חיים, הכולל אוטופגוזומים, ליזוזומים וביקוע מיטוכונדריאלי, באמצעות צביעה משותפת עם מיטוכונדריה וצבעי ליזוזום המיועדים לתאים. השיטה יכולה לשמש גם לזיהוי מיטוכונדריה ולהערכת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית. שני הצבעים ששימשו במחקר זה צריכים להיות מוגנים מפני אור, יש להימנע ממחזורי הפשרה מרובים בהקפאה, ויש לאחסן את הצבעים באליקות חד-פעמיות ככל האפשר. מומלץ להכין תמיסות עבודה של הצבעים כדי להימנע מהוספתם ישירות למדיום תרבית התאים, מה שעלול לגרום לריכוזים ...

מיטוכונדריה הם תחנות הכוח של כמעט כל התאים האאוקריוטים 1,2. בנוסף לייצור ATP באמצעות פוספורילציה חמצונית, המיטוכונדריה ממלאת תפקיד חיוני בתהליכים אחרים כגון ביו-אנרגיה, הומאוסטזיס סידן, יצירת רדיקלים חופשיים, אפופטוזיס והומאוסטזיס תאי 3,4,5. כאשר המיטוכונדריה מייצרת מיני חמצן תגובתי (ROS) ממספר קומפלקסים בשרשרת הובלת האלקטרונים, הם מגורה כל הזמן על ידי עקה חמצונית פוטנציאלית, מה שעלול להוביל בסופו של דבר לנזק מבני ולתפקוד לקוי כאשר מערכת ההגנה נוגדת החמצון קורסת 6,7. נמצא כי תפקוד לקוי של המיטוכונדריה תורם למחלות רבות, כולל הפרעות מטבוליות, ניוון עצבי ומחלות לב וכלי דם8. לכן, חיוני לשמור על אוכלוסיות מיטוכונדריאליות בריאות ועל תפקודן התקין. מיטוכונדריה הם אברונים פלסטיים ודינמיים מאוד; המורפולוגיה והתפקוד שלהם נשלטים על ידי מנגנוני בקרת איכות מיטוכונדריאליים, כולל שינויים לאחר תרגום (PTM) של חלבונים מיטוכונדריאליים, ביוגנזה מיטוכונדריאלית, איחוי, ביקוע ומיטופגיה 9,10. ביקוע מיטוכונדריאלי בתיווך חלבון 1 הקשור לדינמין (DRP1), GTPase של משפחת-העל של הדינמין של חלבונים, יוצר מיטוכונדריה קטנה ועגולה ומבודד את המיטוכונדריה הלא מתפקדת, אשר ניתנת לניקוי ולפירוק על ידי מיטופגיה11,12.
מיטופגיה היא תהליך תאי המפרק באופן סלקטיבי את המיטוכונדריה על ידי אוטופגיה, המתרחשת בדרך כלל במיטוכונדריה פגומה בעקבות פציעה, הזדקנות או סטרס. לאחר מכן, מיטוכונדריה אלה מועברים לליזוזומים לצורך פירוק10. לפיכך, מיטופגיה היא תהליך קטבולי המסייע בשמירה על כמות ואיכות המיטוכונדריה במצב בריא במגוון רחב של סוגי תאים. הוא ממלא תפקיד מכריע בשיקום הומאוסטזיס תאי בתנאי פיזיולוגיה ועקה רגילים13,14. התאים מאופיינים במנגנון מיטופגיה מורכב, המושרה על ידי אותות שונים של לחץ תאי ושינויים התפתחותיים. מסלולי ויסות מיטופגיים מסווגים כתלויי יוביקוויטין או תלויי קולטן15,16; האוטופגיה התלויה באוביקוויטין מתווכת על ידי קינאז PINK1 וגיוס של אוביקוויטין ליגאז פרקין E3 למיטוכונדריה 17,18, בעוד שאוטופגיה תלוית קולטן כרוכה בקשירת קולטני אוטופגיה לשרשרת האור החלבונית הקשורה למיקרוטובול LC3 המתווכת מיטופגיה בתגובה לנזק למיטוכונדריה19.
מיקרוסקופיית אלקטרונים (TEM) היא השיטה הנפוצה ביותר, ועדיין אחת השיטות הטובות ביותר, כדי לבחון ולזהות mitophagy20. המאפיינים המורפולוגיים של מיטופגיה הם אוטופגוזומים או אוטוליזוזומים הנוצרים על ידי היתוך של אוטופגוזומים עם ליזוזומים, אשר ניתן לצפות בהם מתמונות מיקרוסקופיית אלקטרונים21. החולשה של מיקרוסקופיית אלקטרונים (EM), לעומת זאת, היא חוסר היכולת לנטר את התהליכים הדינמיים של מיטופגיה, כגון דה-פולריזציה של המיטוכונדריה, ביקוע מיטוכונדריאלי ואיחוי של אוטופגוזומים וליזוזומים, בתא החי20. לפיכך, הערכת מיטופגיה באמצעות הדמיה של אברונים חיים היא שיטה חלופית אטרקטיבית למחקר מיטוכונדריאלי. טכניקת הדמיית התאים החיים המתוארת כאן משתמשת בשני צבעים פלואורסצנטיים כדי להכתים את המיטוכונדריה ואת הליזוזומים. כאשר מתרחשת מיטופגיה, מיטוכונדריה פגומה או מיותרת שנבלעת על ידי אוטופגוזומים מוכתמת בירוק על ידי הצבע המיטוכונדריאלי, בעוד שהצבע האדום מכתים את הליזוזומים. ההיתוך של אוטופגוזומים וליזוזומים אלה, המכונים אוטוליזוזומים, גורם לפלואורסצנציה הירוקה והאדומה לחפוף ולהתבטא כנקודות צהובות, ובכך מצביע על התרחשות של מיטופגיה22. צבע המיטוכונדריה בעל התכולה (MitoTracker Green) מכיל מואטי כלורומתיל בעל תגובת קלה של תיול כדי לסמן את המיטוכונדריה23. כדי לתייג את המיטוכונדריה, התאים פשוט דוגרים עם הצבע, אשר מתפזר באופן פסיבי על פני קרום הפלזמה ומצטבר במיטוכונדריה פעילה. צבע מיטוכונדריה זה יכול בקלות להכתים תאים חיים, והוא פחות יעיל בהכתמת תאים קבועים או מתים של אלדהיד. צבע ליזוזום (LysoTracker Red) הוא גשושית פלואורסצנטית חומצית המשמשת לתיוג ומעקב אחר אברונים חומציים בתאים חיים. צבע זה מפגין סלקטיביות גבוהה עבור אברונים חומציים ויכול לסמן ביעילות תאים חיים בריכוזים ננומולריים24.
ההליכים לשימוש בצבעים פלואורסצנטיים אלה בתאים חיים, כולל טעינת הצבעים והדמיה של מיטוכונדריה וליזוזומים, מוצגים כאן. שיטה זו יכולה לסייע לחוקרים לצפות במיטופגיה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של תאים חיים. ניתן להשתמש בו גם לכימות מיטוכונדריה וליזוזומים, ולהערכת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית.

<table><tbody><tr><td>מונה תאים אוטומטי</td><td>Countstar</td><td>IC1000</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות תא ספירת תאים</td><td>Countstar</td><td>12-0005-50</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הנשר השונה של Dulbecco (DMEM)</td> <td>קורנינג</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח עם חוצץ פוספט (DPBS) של Dulbecco</td> <td>קורנינג</td><td>21-031-CVC</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים תחתונה מזכוכית (צלחת קונפוקלית)</td><td>NEST</td><td>801002</td><td></td></tr><tr><td>תמונה J (Rasband, NIH)</td><td>NIH</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>Krebs&ndash; Henseleit (KHB) מאגר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LysoTracker בהכנה עצמית אדום</td><td>Invitrogen</td><td>1818430</td><td>100 ומיקרו; mol/L, צבע ליזוזום אדום-פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>MitoTracker Green</td><td>Invitrogen</td><td>1842298</td><td>200 ומיקרו; מלאי mol/L, צבע מיטוכונדריה ירוק-פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>עכבר פיברובלסטים עובריים</td><td></td><td></td><td>הכנה עצמית</td></tr><tr><td>אובייקט (עדשת שמן 63x)</td> <td>ZEISS</td><td>ZEISS LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.25%</td> <td>Gibico</td><td>Cat# 25200056</td><td></td></tr><tr><td>ZEISS LSM 880 מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי</td><td>ZEISS ZEISS</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>ZEN Microscopy Software 2.1 (קונפוקלי תוכנת הדמיית מיקרוסקופ)</td><td>ZEISS</td><td>ZEN 2.1</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה של מיטופגיה עם צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום

Visualizing Mitophagy with Fluorescent Dyes for Mitochondria and Lysosome

מיטוכונדריה, בהיותה תחנות הכוח של התא, ממלאת תפקידים חשובים בביו-אנרגיה, יצירת רדיקלים חופשיים, הומאוסטזיס סידן ואפופטוזיס. מיטופגיה היא המנגנון העיקרי של בקרת איכות מיטוכונדריאלית והיא נחקרת בדרך כלל באמצעות תצפית מיקרוסקופית, אולם מבחני מיטופגיה in vivo קשים לביצוע. הערכת מיטופגיה על ידי הדמיית אברונים חיים היא שיטה חלופית והכרחית למחקר מיטוכונדריאלי. פרוטוקול זה מתאר את ההליכים לשימוש בצבע המיטוכונדריה הירוק-פלואורסצנטי של התאים MitoTracker Green ובצבע הליזוזום האדום-פלואורסצנטי LysoTracker Red בתאים חיים, כולל העמסת הצבעים, הדמיה של המיטוכונדריה והליזוזום, והתוצאות הצפויות. שלבים מפורטים להערכת mitophagy בתאים חיים, כמו גם הערות טכניות על הגדרות תוכנה מיקרוסקופ, מסופקים גם. שיטה זו יכולה לסייע לחוקרים לצפות במיטופגיה באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של תאים חיים. בנוסף, ניתן להשתמש בו כדי לכמת מיטוכונדריה וליזוזומים ולהעריך מורפולוגיה מיטוכונדריאלית.

MitoTracker Green הוא כתם מיטוכונדריאלי ירוק-פלואורסצנטי המסוגל למקם במדויק את המיטוכונדריה. הצבע יכול בקלות להכתים תאים חיים והוא פחות יעיל בהכתמת תאים קבועים או מתים של אלדהיד (איור 2). צבע הליזוזום האדום-פלואורסצנטי LysoTracker Red מסוגל לסמן ולעקוב אחר אברונים ליזוזומליים חומציים ויכול רק להכתים תאים חיים (איור 2). הדמיית מיקרוסקופ קונפוקלי מאפשרת הדמיה של מיטוכונדריה וליזוזומים המוכתמים בצבעים המתאימים (איור 1 <strong class="xf...

מיטופגיה היא המנגנון העיקרי של בקרת איכות מיטוכונדריאלית. עם זאת, ההערכה של mitophagy in vivo הוא הפריע על ידי היעדר בדיקות כמותיות אמין. מוצג כאן פרוטוקול לתצפית על מיטופגיה בתאים חיים באמצעות צבע מיטוכונדריה ירוק-פלואורסצנטי המיועד לתאים וצבע ליזוזום אדום-פלואורסצנטי.

Mitochondria, being the powerhouses of the cell, play important roles in bioenergetics, free radical generation, calcium homeostasis, and apoptosis. ...

שיטה זו מסייעת לצפות במיטופגיה בתאים חיים באמצעות צבע מיטוכונדריה ירוק-פלואורסצנטי וצבע ליזוזום אדום-פלואורסצנטי. מיטופגיה ממלאת תפקיד חשוב בשמירה על הומאוסטזיס של המיטוכונדריה ועל היבטים שונים של תפקוד התא. טכניקה זו עשויה לספק גישה חדשה לטיפול במחלות הקשורות למיטוכונדריה.הליך זה אינו מסובך מאוד. לכידת תמונות ברורות חשובה מאוד לספירת שכבת העל של המיטוכונדריה והליזוזומים. כדי להתחיל, עכבר תרבית פיברובלסט עוברי או תאי MEF בצלחת תרבית תאים בגודל 10 ס"מ עם 10 מיליליטר של מדיום הנשר המתוקן של דולבקו או DMEM.לדגום ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני ולנטר את התאים תחת מיקרוסקופ בהגדלה של פי 100. כאשר התאים מגיעים למפגש של 80 עד 90%, שטפו אותם עם שני מיליליטרים של מלח זרחן של דולבקו. לאחר מכן להוסיף שני מיליליטר של 0.05% טריפסין EDTA במשך דקה אחת כדי לנתק את התאים, ואחריו שני מיליליטר של DMEM כדי לעצור את התגובה.צנטריפוגה של מתלה התא ב 100 G במשך שלוש דקות ולהניח את הכדור במיליליטר אחד DMEM. לספור את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי ותא ספירת תאים שקופיות ולחסן 1.5 כפול 10 עד התאים השישי לתוך צלחת תרבית תאים חדשה של 10 ס"מ המכילה 10 מיליליטר של DMEM. עבור בדיקת המיטופגיה, הכינו תרחיף תאים כמתואר ודללו את תרחיף התאים לפעם אחת 10 לתאים החמישים למיליליטר של DMEM טרי.מוסיפים שני מיליליטר של תרחיף התאים המדולל לצלחת קונפוקלית של 20 מילימטר ומנערים את התבשיל בצלב. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך 24 שעות. הכן פתרונות עבודה של הצבעים על ידי דילול פתרונות המלאי.הוסף שני מיקרוליטרים כל אחד של צבע מיטוכונדריאלי 0.2 מילימולרי ו-50 צבע ליזוזום מיקרומולרי לשני מיליליטר של DMEM כדי להשיג ריכוז עבודה של 0.2 צבע מיטוכונדריאלי מיקרומולרי ו-50 צבע ליזוזום ננומולרי. מוציאים את המדיום מצלחת התרבית הקונפוקלית ומוסיפים מיליליטר אחד מתמיסת ההכתמה כדי לכסות את התאים. הניחו את צלחת תרבית התאים על 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך 20 עד 30 דקות.הגדר את הפרמטרים של תוכנת הדמיית המיקרוסקופיה הקונפוקלית. עבור תמונות עירור כפולות, השתמש בעירור רציף ב- 488 ננומטר ו- 543 ננומטר ואסוף פליטה ב- 505 עד 545 ננומטר ויותר מ- 560 ננומטר בהתאמה. מוציאים את צלחת התרבית הבינונית המכילה את הצבע מהאינקובטור ומוסיפים מיליליטר אחד של קרבס-הנסלייט או חיץ KH לתבשיל.כדי לגרום למיטופגיה, טפלו בתאים עם FCCP במיקרומולר אחד במאגר KH במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר ומיד המשיכו לדמות את התאים באמצעות המיקרוסקופ הקונפוקלי. יש למרוח כמות מתאימה של שמן על החלק העליון של עדשת השמן 63X. מניחים את הדגימה על שלב הדגימה של המיקרוסקופ הקונפוקלי ומזיזים אותה ישירות מעל העדשה האובייקטיבית.השתמש בתוכנת ההדמיה כדי למצוא את הדוגמה על ידי לחיצה על איתור הכרטיסייה בפינה השמאלית העליונה של ממשק התוכנה. בחרו ערכת מסננים ירוקה לניסוי. השתמש בידית הכוונון הגסה כדי להתמקד במהירות על-ידי הזזת העדשה האובייקטיבית למעלה ולמטה.לאחר שדגימת התא נראית בבירור דרך העינית, חפש ומקד את האזור של תאים בודדים והזז אותו למרכז שדה הראייה. לחץ על רכישה הכרטיסייה בפינה השמאלית העליונה של ממשק התוכנה כדי לרכוש תמונות. בחר רק את תעלת הננומטר של 488 ואת רזולוציית המסגרת 1024 על 1024 לתצוגה מקדימה.לחץ על הכרטיסייה Live בפינה הימנית העליונה כדי להתחיל סריקה בשידור חי. התאם את שדה הראייה לחד ביותר וכוונן את עוצמת הלייזר על-ידי הזזת המחוון שמאלה או ימינה. שמור על הגדרת הרווח מתחת ל-600 כדי להימנע מחשיפת יתר.התאם את ערך חור הסיכה ל- 156, ערך הרווח ל- 545 וערך ההסטה הדיגיטלית לאפס. בחר את שדה הראייה הטוב ביותר, בדוק את שני הערוצים ובחר את רזולוציית המסגרת 1024 על 1024. לחצו על 'הצמד' כדי לקבל תמונות דו-ממדיות ולשמור את התמונות שנרכשו.במחקר זה, FFCP שימש להפעלת מיטופגיה בתאי MEF לצורך הדמיה קונפוקלית. תמונות מייצגות של תאים המוכתמים בצבע המיטוכונדריה הירוק-פלואורסצנטי המציג מיטוכונדריה ומוכתמים בצבע ליזוזום אדום-פלואורסצנטי המציג ליזוזום מוצגות כאן. כאשר מיטוכונדריה מוכתמת בירוק נבלעים בליזוזומים המוכתמים באדום, הפלואורסצנטיות הירוקה והאדומה חופפות וחושפות ליזוזומים מיטוכונדריה צהובים.הנקודות הצהובות מתאימות לליזוזומים מיטוכונדריה מקומיים אלה המייצגים מיטופגיה מתמשכת, ולכן ניתן לספור אותן כדי להעריך את היקף המיטופגיה. הכנת תמיסה עובדת של צבעים למיטוכונדריה ולהכתמת ליזוזום ושמירה על מפגש תאים מתאים בעת הדמיה עם מיקרוסקופיה קונפוקלית הם שלבים מרכזיים שיש לזכור. הליך זה יכול לשמש גם לניתוח מספר המיטוכונדריה והמורפולוגיה החשובה להערכת הדינמיקה המיטוכונדריאלית.מיטופגיה קשורה קשר הדוק למגוון מחלות אנושיות וניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לחקור את הקשר בין מיטופגיה למחלות אנושיות.

visualizing-mitophagy-with-fluorescent-dyes-for-mitochondria

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

גישה חזקים כדי לפקח על משלוח של האברונים את לומן חומצי של vacuole את השמרים במשך השפלה ומיחזור מתואר. השיטה מסתמכת על תיוג הספציפי של האברונים היעד עם פלואורסצנטי כפול פליטת מקודדים גנטית pH-biosensor, ויזואליזציה של תאים בודדים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

Assay מיקרוסקופ פלואורסצנטי עבור Mitophagy ניטור השמרים Saccharomyces cerevisiae

כאן, אנו מתארים בפירוט גישת מיקרוסקופ וידאו זמן-lapse למדידת הגיוס הזמני של EYFP-Parkin במהלך הסרה סלקטיבית של מיטוכונדריה פגומה. תהליך דינמי זה של הסרה תלויה ב-EYFP-Parkin של מיטוכונדריה פגומה יכול לשמש כאינדיקטור לבריאות התא בתנאי ניסוי שונים.

זמן לשגות מיקרוסקופית וידאו עבור הערכת EYFP-פרקין Aggregation כסמן לסלולאריות Mitophagy

Mitophagy, התהליך של פינוי נפגע המיטוכונדריה, הוא הכרחי עבור תחזוקה מיטוכונדריאלי הומאוסטזיס ובריאות. מאמר זה מציג חלק mitophagy האחרונה שיטות זיהוי תאים אנושיים, Caenorhabditis elegansועכברים.

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitophagy, השפלה סלקטיבי של המיטוכונדריה, היה מעורב הומאוסטזיס מיטוכונדריאלי, הוא deregulated למחלות אנושיות שונות. עם זאת, שיטות נסיוניות נוח למדידת פעילות mitophagy מוגבלים מאוד. כאן, אנו מספקים וזמינותו רגיש למדידת פעילות mitophagy באמצעות cytometry זרימה.

מדידה רגיש של Mitophagy מאת Flow Cytometry באמצעות תלויי-pH הכתב פלורסנט mt-Keima

מאמר זה מדגים שיטה חזקה לכמת המיטוכונדריה או lysosomes בתאים חיים. השילוב של צבעי ספציפיים ליזוזום או המיטוכונדריה עם נוגדנים fluorescently מצומדת סמני פני השטח מאפשר כימות של אלה organelles אוכלוסיות מעורבות לתאים, כמו ראשי תאים שנקטפו דגימות רקמה, באמצעות cytometry זרימה ססגוניות.

כימות מבוססי Cytometry זרימה ססגוניות של המיטוכונדריה, Lysosomes בתאי T

חקר מיטופגיה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים, חיישנים גנטיים ואימונופלואורסנציה דורש ציוד יקר, כוח אדם מיומן והשקעת זמן משמעותית. כאן, אנו מדגימים את היעילות של ערכת צבע פלואורסצנטית מסחרית בכימות תהליך המיטופגיה הן ב- Caenorhabditis elegans והן בקו תאים לסרטן הכבד.

איתור מיטופגיה בתאי Caenorhabditis elegans ובתאי יונקים באמצעות צבעים ספציפיים לאברונים

פרוטוקול זה מתאר שתי שיטות לניתוח כמותי של מיטופגיה בתאי β של הלבלב: הראשונה, שילוב של צבעים ספציפיים למיטוכונדריה החדירים, ושנית, כתב מיטופגיה מקודד גנטית. שתי טכניקות אלה משלימות זו את זו וניתנות לפריסה על בסיס צרכים ספציפיים, ומאפשרות גמישות ודיוק בטיפול כמותי בבקרת איכות מיטוכונדריאלית.

גישות משלימות לחקירת שטף מיטופגיה בתאי β הלבלב

פרוטוקול זה מתאר מנגנון לשימוש במיקרוסקופ אור ואלקטרונים בקורלציה כדי להמחיש את האינטראקציה של מיטוכונדריה וליזוזומים המסומנים ב-mEosEM ו-APEX2, בהתאמה.

מיקרוסקופ אור ואלקטרונים בקורלציה דו-צבעונית להדמיית אינטראקציות בין מיטוכונדריה לליזוזומים

פרוטוקול זה מאפשר ויזואליזציה שחזורית של טיפות שומן ודינמיקת האברונים במהלך מיטוזה באמצעות תאי הפטומה מסונכרנים.

שיטה מבוססת פלואורסצנציה להמחשת דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה

וידאו זה מציג טכניקות תיוג של אדם בתאי גזע עובריים ותאי גזע mesenchymal עם צבעי ניאון. טכניקה זו יכולה לשמש in vivo מעקב בתאי גזע המושתלים עם הדמיה אופטית עבור מתאמים histopathological עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

תיוג בתאי גזע עם צבעי ניאון על איתור פולשני עם דימות אופטי

למד הדמיה חיה של מיטופגיה בתאי פיברובלסט עובריים של עכבר באמצעות צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום. שיטה זו מאפשרת מחקר של בקרת איכות מיטוכונדריה ומחלות קשורות.

הדמיה של מיטופגיה עם צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום

גלה סרטונים נוספים