Name: תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: למד ליצור רקמת שומן תרמוגנית תלת-ממדית מקטעים מיקרו-וסקולריים. שיטה זו מפשטת הנדסת רקמת שומן בז' ומסייעת בחקר מחלות מטבוליות ושמנות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ד"ר אקוסטה נתמך על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות CA148724 ו- TL1TR002647. ד"ר גונזלס פוראס נתמך על ידי המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות של המכונים הלאומיים לבריאות, תחת פרס מספר F32-0DK122754. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (5SC1DK122578) ואוניברסיטת טקסס במחלקה להנדסה ביו-רפואית בסן אנטוניו. התוכן הוא באחריותם הבלעדית של המחברים ואינו מייצג בהכרח את הדעות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות. הדמויות נוצרו חלקית עם Biorender.com.

<ol><li>Cohen, P., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+beige+fat%3A+molecular+parts+of+a+thermogenic+machine%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Brown and beige fat: molecular parts of a thermogenic machine.</a> Diabetes. 64 (7), 2346-2351 (2015).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue+transplantation+reverses+obesity+in+Ob%2FOb+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue transplantation reverses obesity in Ob/Ob mice.</a> Endocrinology. 156 (7), 2461-2469 (2015).</li>
<li>Tharp, K. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+beige+adipose+tissue+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bioengineering beige adipose tissue therapeutics.</a> Frontiers in Endocrinology. 6, 164(2015).</li>
<li>Barquissau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White-to-brite+conversion+in+human+adipocytes+promotes+metabolic+reprogramming+towards+fatty+acid+anabolic+and+catabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">White-to-brite conversion in human adipocytes promotes metabolic reprogramming towards fatty acid anabolic and catabolic pathways.</a> Molecular Metabolism. 5 (5), 352-365 (2016).</li>
<li>Kim, S. H., Plutzky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+fat+and+browning+for+the+treatment+of+obesity+and+related+metabolic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+%26+Metabolism+Journal%22%5BJournal%5D)">Brown fat and browning for the treatment of obesity and related metabolic disorders.</a> Diabetes & Metabolism Journal. 40 (1), 12-21 (2016).</li>
<li>Lizcano, F., Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+beige+adipocyte+and+possible+therapy+for+type+2+diabetes+and+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Biology of beige adipocyte and possible therapy for type 2 diabetes and obesity.</a> International Journal of Endocrinology. 2016, 9542061(2016).</li>
<li>Mulya, A., Kirwan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+beige+adipose+tissue%3A+therapy+for+obesity+and+its+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology+and+Metabolism+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Brown and beige adipose tissue: therapy for obesity and its comorbidities.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 45 (3), 605-621 (2016).</li>
<li>Murphy, C. S., Liaw, L., Reagan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+tissue-engineered+adipose+constructs+for+modeling+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">In vitro tissue-engineered adipose constructs for modeling disease.</a> BMC Biomedical Engineering. 1, 27(2019).</li>
<li>Srivastava, S., Veech, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+and+brite%3A+The+fat+soldiers+in+the+anti-obesity+fight%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Brown and brite: The fat soldiers in the anti-obesity fight.</a> Frontiers in Physiology. 10, 38(2019).</li>
<li>Samuelson, I., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+brown+adipose+tissue+in+a+human+in+vitro+context%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Studying brown adipose tissue in a human in vitro context.</a> Frontiers in Endocrinology. 11, 629(2020).</li>
<li>Wang, C. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-engineered+human+brown-like+adipocytes+prevent+diet-induced+obesity+and+ameliorate+metabolic+syndrome+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">CRISPR-engineered human brown-like adipocytes prevent diet-induced obesity and ameliorate metabolic syndrome in mice.</a> Science Translational Medicine. 12 (558), (2020).</li>
<li>Kaisanlahti, A., Glumoff, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Browning+of+white+fat%3A+agents+and+implications+for+beige+adipose+tissue+to+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Browning of white fat: agents and implications for beige adipose tissue to type 2 diabetes.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 75 (1), 1-10 (2019).</li>
<li>Sato, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+capillary+networks+from+rat+microvascular+fragments+in+vitro%3A+the+role+of+myofibroblastic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Development of capillary networks from rat microvascular fragments in vitro: the role of myofibroblastic cells.</a> Microvascular Research. 33 (2), 194-210 (1987).</li>
<li>Laschke, M. W., Später, T., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+fragments%3A+More+than+just+natural+vascularization+units%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Microvascular fragments: More than just natural vascularization units.</a> Trends in Biotechnology. 39 (1), 24-33 (2021).</li>
<li>Hoying, J. B., Boswell, C. A., Williams, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+potential+of+microvessel+fragments+established+in+three-dimensional+collagen+gels%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology-Animal%22%5BJournal%5D)">Angiogenic potential of microvessel fragments established in three-dimensional collagen gels.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 32 (7), 409-419 (1996).</li>
<li>Acosta, F. M., Stojkova, K., Brey, E. M., Rathbone, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+straightforward+approach+to+engineer+vascularized+adipose+tissue+using+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">A straightforward approach to engineer vascularized adipose tissue using microvascular fragments.</a> Tissue Engineering. Part A. 26 (15-16), 905-914 (2020).</li>
<li>Acosta, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+differentiation+alters+properties+of+vascularized+tissue-engineered+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Adipogenic differentiation alters properties of vascularized tissue-engineered skeletal muscle.</a> Tissue Engineering. Part A. 28 (1-2), 54-68 (2021).</li>
<li>Strobel, H. A., Gerton, T., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+adipocyte+organoid+model+using+isolated+human+microvessel+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Vascularized adipocyte organoid model using isolated human microvessel fragments.</a> Biofabrication. 13 (3), 035022(2021).</li>
<li>Acosta, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+functional+vascularized+beige+adipose+tissue+from+microvascular+fragments+of+models+of+healthy+and+type+II+diabetes+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Engineering functional vascularized beige adipose tissue from microvascular fragments of models of healthy and type II diabetes conditions.</a> Journal of Tissue Engineering. 13, 20417314221109337(2022).</li>
<li>Gonzalez Porras, M. A., Stojkova, K., Acosta, F. M., Rathbone, C. R., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+human+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Engineering human beige adipose tissue.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 906395(2022).</li>
<li>Herold, J., Kalucka, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+adipose+tissue%3A+The+interplay+between+adipose+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in adipose tissue: The interplay between adipose and endothelial cells.</a> Frontiers in Physiology. 11, 1861(2021).</li>
<li>McCarthy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat-On-A-Chip+models+for+research+and+discovery+in+obesity+and+its+metabolic+comorbidities%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">Fat-On-A-Chip models for research and discovery in obesity and its metabolic comorbidities.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (6), 586-595 (2020).</li>
<li>Klingelhutz, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+generation+of+uniform+adipose+spheroids+for+metabolism+research+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free generation of uniform adipose spheroids for metabolism research and drug discovery.</a> Scientific Reports. 8 (1), 523(2018).</li>
<li>Yang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolically+active+three-dimensional+brown+adipose+tissue+engineered+from+white+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Metabolically active three-dimensional brown adipose tissue engineered from white adipose-derived stem cells.</a> Tissue Engineering. Part A. 23 (7-8), 253-262 (2017).</li>
<li>Vaicik, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel-based+engineering+of+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Hydrogel-based engineering of beige adipose tissue.</a> Journal of Materials Chemistry B. 3 (40), 7903-7911 (2015).</li>
<li>Tharp, K. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+beige+adipose+tissue+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bioengineering beige adipose tissue therapeutics.</a> Frontiers in Endocrinology. 6, 164(2015).</li>
<li>Tharp, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+transplantation+of+functional+beige+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted transplantation of functional beige adipose tissue.</a> Diabetes. 64 (11), 3713-3724 (2015).</li>
<li>Harms, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+human+white+adipocytes+cultured+under+membranes+maintain+identity%2C+function%2C+and+can+transdifferentiate+into+brown-like+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mature human white adipocytes cultured under membranes maintain identity, function, and can transdifferentiate into brown-like adipocytes.</a> Cell Reports. 27 (1), 213-225 (2019).</li>
<li>Frueh, F. S., Später, T., Scheuer, C., Menger, M. D., Laschke, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+as+vascularization+units+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine adipose tissue-derived microvascular fragments as vascularization units for tissue engineering.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55721(2017).</li>
<li>Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue%3A+Function+and+physiological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue: Function and physiological significance.</a> Physiological Reviews. 84 (1), 277-359 (2004).</li>
<li>Unser, A. M., Tian, Y., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+and+challenges+in+three-dimensional+brown+adipogenesis+of+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">Opportunities and challenges in three-dimensional brown adipogenesis of stem cells.</a> Biotechnology Advances. 33, 962-979 (2015).</li>
<li>Dani, V., Yao, X., Dani, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+fat+tissues+and+iPSC-derived+energy+expenditure+adipocytes+to+counteract+obesity-driven+metabolic+disorders%3A+Current+strategies+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Reviews+in+Endocrine+%26+Metabolic+Disorders%22%5BJournal%5D)">Transplantation of fat tissues and iPSC-derived energy expenditure adipocytes to counteract obesity-driven metabolic disorders: Current strategies and future perspectives.</a> Reviews in Endocrine & Metabolic Disorders. 23 (1), 103-110 (2022).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+as+vascularization+units+for+dental+pulp+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endodontics%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments as vascularization units for dental pulp regeneration.</a> Journal of Endodontics. 47 (7), 1092-1100 (2021).</li>
<li>McDaniel, J. S., Pilia, M., Ward, C. L., Pollot, B. E., Rathbone, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+multilineage+potential+of+cells+derived+from+isolated+microvascular+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization and multilineage potential of cells derived from isolated microvascular fragments.</a> Journal of Surgical Research. 192 (1), 214-222 (2014).</li>
<li>Gealekman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depot-specific+differences+and+insufficient+subcutaneous+adipose+tissue+angiogenesis+in+human+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Depot-specific differences and insufficient subcutaneous adipose tissue angiogenesis in human obesity.</a> Circulation. 123 (2), 186-194 (2011).</li>
<li>Altalhi, W., Hatkar, R., Hoying, J. B., Aghazadeh, Y., Nunes, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+I+diabetes+delays+perfusion+and+engraftment+of+3D+constructs+by+impinging+on+angiogenesis%3B+which+can+be+rescued+by+hepatocyte+growth+factor+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Type I diabetes delays perfusion and engraftment of 3D constructs by impinging on angiogenesis; which can be rescued by hepatocyte growth factor supplementation.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 12 (5), 443-454 (2019).</li>
<li>Altalhi, W., Sun, X., Sivak, J. M., Husain, M., Nunes, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+impairs+arterio-venous+specification+in+engineered+vascular+tissues+in+a+perivascular+cell+recruitment-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Diabetes impairs arterio-venous specification in engineered vascular tissues in a perivascular cell recruitment-dependent manner.</a> Biomaterials. 119, 23-32 (2017).</li>
<li>Laschke, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+from+aged+donors+exhibit+an+impaired+vascularisation+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments from aged donors exhibit an impaired vascularisation capacity.</a> European Cells & Materials. 28, 287-298 (2014).</li>
<li>Später, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+of+microvascular+fragment+isolates+from+visceral+and+subcutaneous+adipose+tissue+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Vascularization of microvascular fragment isolates from visceral and subcutaneous adipose tissue of mice.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (1), 161-175 (2021).</li>
<li>Später, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+microvascular+fragments+from+male+and+female+fat+donors+exhibit+a+comparable+vascularization+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived microvascular fragments from male and female fat donors exhibit a comparable vascularization capacity.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 9, 777687(2021).</li>
<li>Laschke, M. W., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+simpler%2C+the+better%3A+tissue+vascularization+using+the+body%27s+own+resources%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">The simpler, the better: tissue vascularization using the body's own resources.</a> Trends in Biotechnology. 40 (3), 281-290 (2022).</li>
<li>Yang, F., Cohen, R. N., Brey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+co-culture+conditions+for+a+human+vascularized+adipose+tissue+model%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Optimization of co-culture conditions for a human vascularized adipose tissue model.</a> Bioengineering. 7 (3), 114(2020).</li>
<li>Pilkington, A. -C., Paz, H. A., Wankhade, U. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipose+tissue+identification+and+marker+specificity-Overview%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Beige adipose tissue identification and marker specificity-Overview.</a> Frontiers in Endocrinology. 12, 599134(2021).</li>
<li>Chiou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold+architecture+and+matrix+strain+modulate+mesenchymal+cell+and+microvascular+growth+and+development+in+a+time+dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Scaffold architecture and matrix strain modulate mesenchymal cell and microvascular growth and development in a time dependent manner.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 13 (5), 507-526 (2020).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי המחקר נערך בהיעדר קשרים מסחריים או פיננסיים שיכולים להתפרש כניגוד עניינים פוטנציאלי.

תחום הנדסת רקמת השומן החומה/בז' אינו בשל ברובו 22,23,24,25,26,27,28, כאשר רוב דגמי השומן מפותחים עבור רקמת שומן לבנה 8,22,31. מיקרו-רקמות מהונדסות/בז' מורכבות בדרך כלל ממקורות תאים מרובים או שינויים...

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר גישה לפיתוח רקמת שומן בז' וסקולרית ממקור יחיד, שעשוי להיות אוטולוגי, מקטע מיקרו-וסקולרי (MVF). רקמות שומן חומות ובז' הוכחו כבעלות תכונות מועילות הקשורות לוויסות מטבולי; עם זאת, הנפח הקטן של מחסני רקמת שומן אלה במבוגרים מגביל את ההשפעה הפוטנציאלית על חילוף החומרים המערכתי, במיוחד במצבים חולים כגון השמנת יתר או סוכרת מסוג 2 1,2,3,4,5,6,7. קיים עניין משמעותי בשומן חום/בז' כיעד טיפולי למניעת ההשפעות המטבוליות המזיקות הקשורות להשמנת יתר ותחלואה נלווית 8,9,10,11,12.
MVFs הם מבני כלי דם שניתן לבודד ישירות מרקמת השומן, לגדל בתרבית ולתחזק אותם בתצורה תלת ממדית לפרקי זמן ממושכים 13,14,15. עבודות קודמות של הקבוצה שלנו, ואחרות, החלו לנצל את היכולת הרב-תאית והרב-פוטנטית של MVFs, במיוחד בכל הנוגע להיווצרות רקמת שומן16,17,18. כהצטברות של עבודה זו, הדגמנו לאחרונה כי MVFs שמקורם במודלים של מכרסמים של סוכרת בריאה ומסוג 219 ומנבדקים אנושיים (מבוגרים מעל גיל 50)20 הכילו תאים המסוגלים לקבל השראה ליצירת רקמת שומן תרמוגנית, או בז'.
זוהי גישה חדשנית שממנה נעשה שימוש ב-MVF ממקור יחיד, המסוגל לא רק ליצור רקמת שומן בצבע בז' אלא גם את מרכיב כלי הדם הקשור והקריטי שלה21. השימוש בטכניקה זו יכול להיות בעל ערך רב עבור מחקרים המחפשים גישה פשוטה מהונדסת רקמות להיווצרות רקמת שומן תרמוגנית. בניגוד לשיטות אחרות השואפות להנדס רקמת שומן בצבע בז' 22,23,24,25,26,27,28, התהליך המתואר במחקר זה אינו דורש שימוש במספר סוגי תאים או משטרי אינדוקציה מורכבים. ניתן ליצור מודלים של שומן ובז' ולבן עם MVFs שמקורם במכרסמים ובמקורות אנושיים, מה שמדגים פוטנציאל תרגום גדול. התוצר הסופי של פרוטוקול זה הוא רקמת שומן תרמוגנית בצבע בז' מהונדס, בעלת מבנה ותפקוד מטבולי הדומים לרקמת שומן חומה. בסך הכל, פרוטוקול זה מציג את הרעיון כי MVF מקור נגיש ואולי אוטולוגי עשוי להיות התערבות טיפולית ראויה וכלי לחקר הפרעות מטבוליות.

<table><tbody><tr><td>חומצה אמינוקפרואית</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>A2504-100G</td><td>נוסף ב-DMEM בריכוז של 1 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>מספריים קהות קצה</td><td>פישר מדעי</td><td>12-000-172</td><td>עיקור בחיטוי</td></tr><tr><td>אלבומין סרום בובין (BSA)</td><td>Millipore</td><td>126575-10GM</td><td>מדולל ב-PBS ל-4 מ"ג/מ"ל ו-1 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>קולגנאז סוג 1</td><td>פישר מדעי</td><td>NC9633623</td><td>מדולל ל-6 מ"ג/מ"ל ב-BSA 4 מ"ג/מ"ל, עיכול שומן טחון</td></tr><tr><td>דקסמתזון</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>AC230302500</td><td>מדולל באתנול בריכוז מלאי של 2 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>רפידות תחתונות חד פעמיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23-666-062</td><td>לספיגת נוזלים במהלך ניתוח</td></tr><tr><td>ניתוח מספריים</td><td>פישר מדעי</td><td>08-951-5</td><td>עיקור בחיטוי</td></tr><tr><td>דולבקו&פריים; s Modified Eagle &prime; s Medium (DMEM)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11885092</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Modified Eagle &prime; s תערובת בינונית/תזונתית F-12 חזיר (DMEM/F12)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8062</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי&nbsp;</td><td>16140089 מדעי של פישר</td><td></td><td>נוספה ב-DMEM ל-20% v/v.</td></tr><tr><td>פיברינוגן&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F8630-25G</td><td>מסיס ב-DMEM בריכוז של 20 מ"ג/מ"ל, חלבון המצוי בפלסמת הדם והמרכיב העיקרי של בקבוק הידרוג'ל</td></tr><tr><td>, 250 מ"ל</td><td>פישר מדעי</td><td>FB500250</td><td>מאפשר עיכול שומן באמצעות שטח פנים גדול</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>פישר מדעי</td><td>50-264-21</td><td>עיקור בחיטוי, לטיפול ברקמות ומסננים</td></tr><tr><td>פורסקולין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>F6886</td><td>מדולל באתנול בריכוז מלאי של 10 מ"מ</td></tr><tr>Human<td>MVF</td><td>Advanced Solutions Life Scienes, LLC</td><td>https://www.advancedsolutions.com/microvessels</td><td>MVFs אנושיים (hMVFs) שבודדו משלושה חולים שונים (נשים בנות 52, 54 ו-56) שימשו במחקר הנוכחי.</td></tr><tr><td>אינדומתצין&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I7378</td><td>מדולל באתנול בריכוז מלאי של 12.5 מ"מ</td></tr><tr><td>אינסולין מלבלב חזיר</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5523</td><td>מדולל ב-0.01 N HCl בריכוז מלאי של 5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>MycoZap</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9023832</td><td>נוסף ב-DMEM ל-0.2% w/v, Mycoplasma Prophylactic&nbsp;</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (10,000 יח'/מ"ל)</td><td>פישר 15140122 מדעי</td><td></td><td>נוסף ב-DMEM ל-1% v/v.</td></tr><tr><td>צלחות פטרי, פוליסטירן (100 מ"מ על 15 מ"מ).</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>351029</td><td>3 להסרת כלי דם וטחינה, 8 (מכסה) להשרייה מוקדמת של מסכים ו-8 (צלחת) לשימוש בעת סינון עם 500 או 37 ומיקרו; M מסנן</td></tr><tr><td>צלחות פטרי, פוליסטירן (35 מ"מ על 10 מ"מ).</td><td>פישר מדעי</td><td>50-202-036</td><td>לספירת שברים</td></tr><tr><td>מאגר פוספט מלח (PBS)</td><td>פישר מדעי</td><td>14-190-250</td><td>מדולל ל-1x במים סטריליים נטולי יונים.</td></tr><tr><td>קוצץ חולדות (Andwin Mini Arco Pet Trimmer)</td><td>פישר NC0854141</td><td></td><td></td>מדעי</tr><tr><td>Rosiglitazone</td><td>פישר R0106200MG מדעי</td><td></td><td>מדולל ב-DMSO בריכוז מלאי של 10 מ"מ</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14059-11</td><td>1 לחתך ראשוני, 1 לחתך אפידידימלי, 1 לחיתוך קצה</td></tr><tr><td>מסך&nbsp; 37 &micro; M&nbsp;</td><td>חברת האספקה הביולוגית של קרולינה</td><td>652222R</td><td>חתוך לריבועים מעוגלים בגודל 3 אינץ' ומעוקר בתחמוצת אתילן, לכידת שברים והסרה של שברים קטנים מאוד/תאים בודדים ופסולת</td></tr><tr><td>מסך 500 ומיקרו; M&nbsp;</td><td>חברת האספקה הביולוגית של קרולינה</td><td>652222F</td><td>חתוך לריבועים מעוגלים בגודל 3 אינץ' ומעוקר בתחמוצת אתילן, מסיר שברים/פסולת גדולים יותר</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Fisher scientific</td><td>12-000-171</td><td>לעקר בחיטוי, להידוק העור לפני חתך</td></tr><tr><td>מסנן Steriflip 0.22 &mu; מ&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SE1M179M6</td><td></td></tr><tr><td>Thrombin</td><td>Fisher Scientific</td><td>6051601KU</td><td>מדולל במים נטולי יונים ל-10 U/mL, משמש כחומר קרישה שהופך פיברינוגן לפיברין</td></tr><tr><td>הורמון בלוטת התריס (T3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T2877</td><td>מדולל ב-1N NaOH בריכוז מלאי של 0.02 מ"מ</td></tr><tr><td>חולדות שמנות סוכרתיות (ZDF) - שמנות (FA/FA) או רזות (FA/+) זכר&nbsp;</td><td>נהר צ'ארלס</td><td>https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-lean-fa?region=3611 https://www.criver.com/products-services/find-model/zdf-rat-obese?region=3611</td><td>הושג מנהר צ'ארלס (ווילמינגטון, מסצ'וסטס). החולדות נרכשו בגיל 4 שבועות והוזנו בפורינה 5008 עד להמתת חסד (גיל 15-19 שבועות). רמות הגלוקוז (דם מהווריד הספנוס הצדדי) היו גבוהות מ-300 מ"ג/ד"ל בכל חולדות FA/FA ששימשו במחקר. כל בעלי החיים שוכנו בסביבה מבוקרת טמפרטורה עם מחזור אור-חושך של 12 שעות והוזנו אד ליביטום.</td></tr></tbody></table>

תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

רקמת שומן תרמוגנית הנדסית (למשל, רקמות שומן בצבע בז' או חום) נחקרה כטיפול פוטנציאלי למחלות מטבוליות או לתכנון מיקרו-רקמות מותאמות אישית לבדיקת בריאות ובדיקות סמים. האסטרטגיות הנוכחיות הן לעתים קרובות מורכבות למדי ואינן מצליחות לתאר במדויק את התכונות הרב-תאיות והתפקודיות של רקמת השומן התרמוגנית. שברים מיקרו-וסקולריים, מיקרו-כלים קטנים ושלמים המורכבים מעורקים, ורידים ונימים שבודדו מרקמת השומן, משמשים כמקור אוטולוגי יחיד של תאים המאפשרים וסקולריזציה ויצירת רקמת שומן. מאמר זה מתאר שיטות לאופטימיזציה של תנאי תרבית כדי לאפשר יצירה של רקמות שומן תרמוגניות תלת-ממדיות, וסקולריות ומתפקדות ממקטעים מיקרו-וסקולריים, כולל פרוטוקולים לבידוד מקטעים מיקרו-וסקולריים מרקמת השומן ומתנאי תרבית. בנוסף, נדונות שיטות עבודה מומלצות, כמו גם טכניקות לאפיון הרקמות המהונדסות, ותוצאות דגימה הן ממכרסמים והן מקטעים מיקרו-וסקולריים אנושיים מסופקות. לגישה זו יש פוטנציאל לשמש להבנה ופיתוח של טיפולים להשמנת יתר ומחלות מטבוליות.

ישנם מספר מאפיינים מורפולוגיים פנוטיפיים עיקריים של רקמת שומן בצבע בז'/חום: הוא רב-לוקולרי/מכיל טיפות שומנים קטנות, בעל מספר רב של מיטוכונדריה (הסיבה להופעתו ה"חומה" האופיינית in vivo), יש לו בהתאמה קצב צריכת חמצן גבוה/ביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית, הוא מאוד וסקולרי, יש לו ספיגת גלוקוז מוגברת בליפוליזה/אינסולין, והכי ידוע לשמצה, מבטא רמות גבוהות של חלבון uncoupling protein 1 (UCP1), חלבון מיטוכונדריאלי המעורב בנשימה תרמוגנית19,30.
<p class="jove_conte...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט המתאר את השימוש בשברים מיקרו-וסקולריים שבודדו מרקמת מכרסם או מרקמת שומן אנושית כגישה פשוטה להנדסת רקמת שומן פונקציונלית בצבע בז' וסקולרית.

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של שומן תרמוגני תלת-ממדי ופונקציונלי ממקטעים מיקרו-וסקולריים, או MVFs. האסטרטגיות הנוכחיות להנדסת רקמת שומן תרמוגנית הן מורכבות ואינן מתארות במלואן את תכונותיה הרב-תאיות והתפקודיות. MVFs הם מקור יחיד של תאים המאפשרים וסקולריזציה ויצירת רקמת שומן.בהיותה שיטה פשוטה ליצירת חיקויים ביולוגיים של שומן בז', MVFs טומנים בחובם פוטנציאל משמעותי לקידום הבנה או פיתוח של טיפולים להשמנת יתר ומחלות מטבוליות. הניחו את בעל החיים המגולח והמורדם כראוי שטופל באתנול 70% במצב שכיבה והתחילו לבודד את השומן המפשעה. הרימו את העור מתחת לפין בעזרת זוג מספריים ובצעו את החתך, החל במרכז וחיתוך לרוחב, תוך יצירת צורת V, לפני הלולאה לישבן החיה כדי לגשת לכל מאגר השומן.בזמן החיתוך, הקפידו על הפרדת העור מהשומן על ידי חיתוך רקמת הפאשיה המחוברת. ברגע שהפאשיה נחתכת כראוי, יש לוודא שהשומן המפשעתי משני הצדדים, המשתרע מהמפשעה לכיוון הגב, גלוי. לאחר מכן, הסר את השומן משני הצדדים בצינורות חרוטיים נפרדים המכילים 10 מיליליטר של BSA ב- PBS, בעל ריכוז של מיליגרם אחד למיליליטר.כדי לקצור את השומן האפידידימלי, לחתוך דרך עור הבטן, ואחריו לחתוך בזהירות דרך השכבה הדקה המקיפה את האשכים. משכו בעדינות את רקמת השומן באמצעות מלקחיים וגזרו אותה באמצעות מספריים, תוך הימנעות מדיסקציה של כלי דם גדולים הנראים לעין. כעת, הניחו את השומן שהוסר לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS.כדי לבודד את השומן התת עורי האחורי, הפכו את החולדה לנוטה והשתמשו במספריים גדולים כדי לחתוך את העור העבה של הגב עד הקרקפת, תוך הקפדה לא לחתוך עמוק מדי מתחת לעור. חותכים את הפאשיה המחברת את העור לרקמה. להבדיל את השומן התת עורי, הממוקם באזור intrascapular, מן השומן החום הממוקם קרוב יותר לעמוד השדרה לפני בידוד והנחת השומן תת עורי בצינור חרוטי 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב PBS.תוך כדי עבודה בתוך ביוהוד, השתמשו במלקחיים כדי להכניס את השומן שנכרת לצלחת פטרי סטנדרטית של 100 מיליליטר המכילה 0.5 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS. הסר כל כלי דם גלויים, שרירים או רקמה חיצונית מן השומן. בעזרת מספריים, לטחון את השומן במשך 10 דקות ולבדוק גושים על ידי הוספת עוד קצת BSA.ממשיכים לטחון, במידת הצורך, לפני העברת תרחיף השומן הטחון לבקבוק סטרילי של 250 מיליליטר עם פיפטה של 10 מיליליטר. הפוך את נפח הבקבוק עד 20 מיליליטר על ידי הוספת מספיק BSA PBS. כעת הוסיפו BSA ב-PBS לקולגנאז, והפכו את התמיסה להומוגנית על ידי ניעור עדין לפני שתסננו אותה סטרילית דרך מסנן ניילון נטו של 0.22 מיקרון.מיד להוסיף את הכמות הנדרשת של תמיסת collagenase לתרחיף שומן טחון, ולעכל את השומן על ידי ניעור הבקבוק בתנועה סיבובית באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן המתאים. מעבירים את השומן המעוכל לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המסומן כשומן מעוכל או שומן טחון. צנטריפוגה את הצינור ב 400 G במשך ארבע דקות כדי לסובב את שברי כלי הדם, או MVFs, לתוך גלולה אדומה.מרוקנים בעדינות את הסופרנאטנט לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר המסומן כפסולת מבלי להפריע לכדורית. לאחר מכן, הוסף 10 מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS לצינור המכיל את הכדור, וערבב את מתלה הגלולה על ידי פיפטציה עדינה למעלה ולמטה פעמיים מבלי להפריע לשברים. כעת, קחו את המסך בגודל 500 מיקרון שהושרה מראש בצלחת פטרי סטרילית המכילה חמישה מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS והניחו אותו מעל מחזיק מסך הפלסטיק שנשמר על צלחת פטרי חדשה.פיפטה 10 מיליליטר של השעיה מצינור הגלולה המעוכל אל המסך במעגלים קונצנטריים. שטפו את הפילטר עם חמישה מיליליטר נוספים של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב-PBS והשליכו אותו, תוך שמירה על התסנין בתוך צלחת הפטרי. לאחר מכן הניחו את המסך הספוג מראש בגודל 37 מיקרון מעל מחזיק מסך הפלסטיק על צלחת פטרי חדשה.בעזרת פיפטה טרייה, מעבירים את התסנין מהסינון הראשון אל המסך במעגלים קונצנטריים. כפי שתואר קודם לכן, שטפו את המסך עם BSA ב-PBS, והפעם, השליכו את התסנין תוך שמירה על מסך 37 מיקרון. החלק את המסך בגודל 37 מיקרון לתוך צלחת פטרי חדשה המכילה חמישה מיליליטר של מיליגרם אחד למיליליטר BSA ב- PBS.עקרו את השברים על ידי הקשה עדינה של הכלי על מחזיק חרוט, מבלי לשפוך נוזל. שטוף את המסנן עם חמישה מיליליטר נוספים של BSA ב- PBS. לאחר מכן, להעביר את הנוזל מן צלחת פטרי לתוך צינור חרוטי סטרילי 50 מיליליטר.שטפו את המסך בגודל 37 מיקרון מספר פעמים נוספות, והוסיפו את השטיפה לצינור החרוטי עד שהנפח הכולל שנאסף הוא 15 עד 20 מיליליטר. יש להשליך את המסך לאחר השטיפה הסופית. חותכים קצה של קצה פיפטה 20 מיקרוליטר באמצעות מספריים.נערו בעדינות את הצינור המכיל את הנוזל לפני שתוציאו שני אליציטוטים של 20 מיקרוליטר באמצעות קצה הפיפטה החתוך, ופיפטה כל אחד מהאליציטוטים לצלחת פטרי נקייה בקוטר 35 מ"מ. ספרו את מספר השברים בדגימה בכל צלחת פטרי באמצעות מיקרוסקופ אור סטנדרטי, ובאמצעות הנוסחה המוזכרת בכתב היד, קבלו את המספר הכולל של שברי כלי דם מבודדים. סובבו את הנוזל שנותר בצינור החרוטי של 50 מיליליטר ב-400 גרם במשך ארבע דקות כדי לאסוף את ה-MVF.לאחר הסיבוב, מרוקנים את רוב הסופרנאטנט מהצינור החרוטי ומשתמשים בפיפטה כדי להסיר את נפח הנוזל הקטן שנותר על שפת הצינור. לאחר מכן, להוסיף טרומבין לתוך בארות המיועדות יציקת ג'לים. חתכו את קצהו של קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, והשתמשו בו השהה מחדש בעדינות את ה-MVFs בפיברינוגן כדי להשיג את הצפיפות הסופית הרצויה.פיפטה את התרחיף לתוך תמיסת תרומבין בבאר במהירות הומוגנית את התערובת על ידי pipeting למעלה ולמטה. לאחר יציקת כל הג'לים, הניחו את צלחת הבאר באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ופחמן דו חמצני של 5% למשך כ-15 דקות כדי לאפשר הצלבת ג'ל. השומנים והאדיפוציטים המובחנים נצפו על ידי הדמיה במיקרוסקופ קונפוקלי של ההידרוג'לים באמצעות BODIPY ככתם השומנים.תרבית של רקמת שומן לא וסקולרית באמצעות מדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית הביאה להיווצרות רקמת שומן לבנה או בז' לא וסקולרית, בהתאמה, הן מ- MVF רזים והן ממכרסמים סוכרתיים. באופן דומה, תרבית של רקמת שומן וסקולרית באמצעות מדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית הביאה להיווצרות רקמת שומן לבנה או בז' וסקולרית, בהתאמה, מ- MVF שמקורם במכרסמים. רקמת שומן לבנה ובז' לא וסקולרית שהושגה מ- MVF אנושיים נצפתה גם על ידי מיקרוסקופ קונפוקלי.היכולת של MVFs להתמיין לרקמת שומן בצבע בז' אושרה גנטית באמצעות RT-qPCR. MVF של מכרסמים רזים וסוכרתיים שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה ישירה או בז' הוערכו עבור אדיפוגנזה, תרמוגנזה ואנגיוגנזה. הביטוי של חלבון 1 כצפוי, היה גבוה משמעותית ברקמה אדיפוגנית בצבע בז'.מגמה דומה נצפתה במכרסמים MVF שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה או בז' אדיפוגנית עקיפה, כמו גם בMVF אנושיים שנחשפו למדיה אדיפוגנית לבנה ישירה או בז'. לבסוף, מביו-אנרגטיקה מיטוכונדריאלית, היה ברור כי מבחינה תפקודית, רקמת השומן בצבע בז' הייתה בעלת קצב צריכת חמצן גבוה יותר, או OCR, בכל המקרים. העיכול האנזימטי של רקמת השומן צריך להיות אופטימלי כדי לשחזר באופן עקבי MVF בגודל ובאיכות דומים.לאחר העיכול, MVFs צריך להיות מטופל בעדינות, עם תשומת לב מיוחדת כדי למנוע פירוק נוסף של שברים. טכניקה זו סייעה לקדם את האיזון של צמיחת כלי הדם והתמיינות אדיפוציטים, הוכח להיות תלוי בגורמים שהוכנסו.

three-dimensional-culture-vascularized-thermogenic-adipose-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאנקפסולציה של תאים קטבוליים, הצורכים שומנים לייצור חום ברקמת השומן התוך-בטנית ומגבירים את פיזור האנרגיה בעכברים שמנים.

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

אנו מציגים פרוטוקול לבודד שברי כלי דם ברקמה שומני נגזרות המייצגים יחידות כלי דם הבטיח. הם יכולים להיות מבודדים במהירות, אינו דורש עיבוד במבחנה, ובכך, ניתן להשתמש prevascularization צעד אחד בתחומים שונים של הנדסת רקמות.

בידוד של נגזרות רקמה שומנית Murine כלי דם שבר כיחידות כלי דם של הנדסת רקמות

שומן לבן (וואט) יש ליקויים קריטי הדגמים תרבות הראשי הנוכחי שלה, הפרעה מטבולית מחקרים ופיתוח תרופתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר מערכת microphysiological אדיפוז מאת וואט sandwiching בין גליונות של תאי סטרומה. מבנה זה מספק פלטפורמה יציבה וניתנת להתאמה לתרבות וואט העיקרי.

פלטפורמה Microphysiologic שומן אנושי: דחוקה שומן לבן

בשל התכנים שומנים גבוהה בדם, מאתגרת רקמת שומן להמחיש היסטולוגית בשיטות מסורתיות. Adipo-ברור הוא רקמה פינוי טכניקה המאפשרת תיוג חזקים, דימות ברזולוציה של פלורסנט הנפחי של רקמת שומן. כאן, אנו מתארים את שיטות הכנת הדוגמא, רעלני, מכתים, ניקוי של הרכבה עבור הדמיה.

Adipo-ברור: רקמה ניקוי שיטה עבור הדמיה תלת-ממדית של רקמת שומן

המוקד של המחקר הנוכחי הוא להמחיש את כולה-הר immunostaining והדמיה הטכניקה כשיטת אידיאלי עבור הדמיה תלת-ממדית של רכיב סלולרי ואדריכלות רקמת שומן.

הדמיה של מבנה שומן לבן תלת-ממד באמצעות צביעת כולה-הר

. בעזרת מכשיר מערכת סגור שיטה חדשה זו מאפשרת בידור של אשכולות תת-מילימטר של רקמת האדיפוז המתאימים להשתלה vivo, בתרבות החוץ-גופית ובבידוד תאים נוסף ואפיון.

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

אנו מתארים האדם 3D מטריקס-adipocyte מערכת תרבות מבחנה המאפשרת ניתוח של התפקידים של מטריקס ואדיפוציטים בתרומה לפנוטיפ רקמה מטבולית של רקמת השומן.

שלושה תלת-ממד של מטריקס-Adipocyte מודל תרבות המודל ללימוד תא מטריקס-מטבולית הסלולר

כאן, אנו מתארים שיטת סליקה פשוטה, זולה ומהירה כדי לפתור את המבנה 3D של רקמת שומן לבנה עכבר ואדם באמצעות שילוב של סמנים כדי לדמיין כלי דם, גרעין, תאים חיסוניים, נוירונים, וחלבונים מעיל שומנים-טיפות על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

חקר מבנה רקמת שומן על ידי ניקוי מתילסיילאט והדמיה תלת-ממדית

במאמר זה אנו מתארים את הבידוד, התרבית והאינדוקציה האידיפוגנית של קדם-אדיפוציטים שמקורם בשברי כלי דם סטרומה מרקמת השומן הפריאו-אורטית של עכבר, מה שמאפשר לחקור את תפקוד רקמת השומן הפריווסקולרית ואת הקשר שלה עם תאי כלי הדם.

בידוד, תרבית ואינדוקציה אדיפוגנית של פרדיפוציטים שמקורם בשבר כלי דם סטרומה מרקמת שומן פריאורטית של עכבר

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול לבידוד, תרבית ופנוטיפ של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים מרקמת שומן תת-עורית אנושית (hSATMVECs). בנוסף, אנו מתארים מודל ניסיוני של hSATMVEC-adipocyte cross-talk.

חקר שיחות צולבות של תאי אנדותל שומן/אדיפוציטים ברקמת שומן תת-עורית אנושית

למד ליצור רקמת שומן תרמוגנית תלת-ממדית מקטעים מיקרו-וסקולריים. שיטה זו מפשטת הנדסת רקמת שומן בז' ומסייעת בחקר מחלות מטבוליות ושמנות.

תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים

גלה סרטונים נוספים